––

UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

(Universidad del Perú, DECANA DE AMÉRICA)

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUIMICA

ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUIMICA

DEPARTAMENTO ACADÉMICO DE BIOQUÍMICA

“BIOQUÍMICA II”

TEMA
UROGÉNESIS DE HÍGADO

Profesores:
Mg. Carmen Peña Suasnabar
Dra. Gabriela Solano Canchaya
Q.F. Christopher Cárdenas Hinojosa
Mg. Gloria Gordillo Rocha

Alumno:
14040083 Malpartida Chapoñan, Eduardo

Grupo:

Lunes (10am – 2 pm)

Mesa:

Año:

2017
OBJETIVOS
 Identificar la formación de urea en el hígado.
 Evidenciar la acción de la arginasa con la obtención de urea.
 Cuantificar la cantidad de nitrógeno inorgánico presente en la muestra.

PROCEDIMENTO Y RESULTADOS
EXPERIMENTO Nº1: OBTENCIÓN DE LA ENZIMA ARGINASA A PARTIR
DE HÍGADO DE RES

Pesar 5 g de hígado, enjuagar con Kcl 0,15 M y secar con filtro.

Añadir 1ml de Kcl 0,15M-Mncl2 5Mm.

Homogenizar en frio y centrifugar a 3000rpm por 10 minutos.

El sobrenadante contiene la enzima arginasa y debe conservar a baja

temperatura.

EXPERIMENTO Nº2: ACTIVACIÓN DE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA

Añadir 1ml de buffer glicina 0,2 M pH=9.

Incubar a 37ºC por 30 min.

EXPERIMENTO Nº3: ESTUDIO DE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA

El producto obtenido (arginasa activada) en el experimento 2 es utilizada para el

estudio.

Reactivos 1 2

Arginina 0,1M 0,8ml 0,8ml

Buffer glicina 0,2M (pH=9) 0,5ml 0,5ml

 Solución arginasa 0,5ml -----

Agua destilada ---- 0,5ml

Mezclar completamente y llevar a un baño maría a 37ºC durante 30 minutos.

Luego colocar los tubos en un baño de hielo por 5 minutos.

EXPERIMENTO Nº4: DETERMINACIÓN DE AMONIACO

Reactivos MP1 MP2 St Blanco

Sobrenadante 0,01ml 0,01ml - -

Estándar de nitrógeno - - 0,01ml -

Solución de trabajo 1ml 1ml 1ml 1ml

Llevar a baño maría (incubar) por 5 minutos

Agregar 1mL de reactivo de hipoclorito a cada tubo

Realizar la lectura en el espectrofotómetro a 600nm.

RESULTADOS

ESTUDIO DE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA

Se puede observar en la imagen que el primer tubo presenta una coloración

verdosa debido a la producción de urea que presentaba el hígado extraído
además por tener la arginasa y en el segundo tubo no se produce urea ya que
no presentaba la enzima arginasa. El estándar presenta la coloración verdosa
por la presencia del nitrógeno y el reconocimiento de este mediante el reactivo.

1 2 ST. BLANCO

EN LA DETERMINACIÓN DEL AMONIACO:

Absorbancias obtenidas de cada tubo trabajado. Se leyeron en el

espectrofotómetro a 600nm.

Tubo Absorbancias

Tubo 1 1.240

Tubo 2 0.216

Estándar 0.604

Cálculos para hallar las concentraciones de los tubos

Se calculó mediante la siguiente fórmula:

𝐶𝑜𝑛𝑐. 𝑀𝑃 𝐶𝑜𝑛𝑐. 𝑆𝑡
=
𝐴𝑏𝑠 𝑑𝑒 𝑀𝑃 𝐴𝑏𝑠 𝑑𝑒 𝑆𝑡

TUBO 1:
𝑚𝑔
𝐶𝑜𝑛𝑐. 𝑀𝑃 30 ⁄𝑑𝐿
=
1.240 0.604
𝑚𝑔
𝐶𝑜𝑛𝑐. 𝑀𝑃 = 61.5894 ⁄𝑑𝐿

TUBO 2:
𝑚𝑔
𝐶𝑜𝑛𝑐. 𝑀𝑃 30 ⁄𝑑𝐿
=
0.216 0.604
𝑚𝑔
𝐶𝑜𝑛𝑐. 𝑀𝑃 = 10.7285 ⁄𝑑𝐿
DISCUSIONES
La ureogénesis es un proceso metabólico exclusivamente hepático mediante el
cual el amoníaco es convertido en urea. Visto de forma global el proceso de la
ureogénesis consiste en la conversión de dos moléculas de amoníaco y una de
anhídrido carbónico en una molécula de urea.

El significado biológico de esta vía metabólica consiste en que el amoníaco, de

elevada toxicidad, es convertido en urea que posee una toxicidad mucho más
baja. Una vez formada la urea en el hígado esta alcanza los riñones a través de
la sangre y es excretada por la orina.

En la reacción final de este ciclo la enzima arginasa, presente solo en el

hígado, hidroliza a la arginina liberando el producto final, urea, y regenerando la
ornitina que queda en condiciones de reiniciar el proceso.

En el experimento 3 lo que se desea es observar la actividad de la arginasa

para ello al agregar la enzima activada en el tubo 1 que contiene arginina se
obtendrá la formación de úrea y ornitina, el tubo 2 al no tener la enzima no
producirá la reacción.
Necesitamos la formación de úrea para el experimento 4 ya que mediante la
ureasa catalizará la hidrólisis de la urea, presente en la muestra, en amoniaco y
anhídrido carbónico. Los iones amonio reaccionan con salicilato e hipoclorito,
en presencia del catalizador nitroprusiato, para formar un indofenol verde. La
intensidad del color formado es proporcional a la concentración de urea en la
muestra ensayada. Por ello se observa la gran cantidad de absorbancia
obtenida en el tubo 1 que fue de 1.240 a comparación del tubo 2 el cual solo
presentaba la arginina y en ella también los grupos aminos por el uso del
reactivo también se reconoció obteniéndose una absorbancia de 0.216 cabe
resaltar que el cálculo final en concentraciones fue de 61.58 mg/dl de úrea el
cual actuó la enzima del hígado en la solución de arginina proporcionada.

CONCLUSIONES
 Se identificó la formación de úrea en el hígado mediante el uso de la
solución de arginina.
 Se evidencio la acción de la arginasa con la obtención de úrea utilizando
la reacción de coloración con el reactivo de trabajo que proporciono el
medio y la formación del complejo.
 Se cuantificó la cantidad de nitrógeno inorgánico presente en la muestra
con el uso del espectrofotómetro obteniendo absorbancias diferentes en
cada caso.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
1. Cardellá, R. Biquimica Humana. La Habana: Editorial Ciencias Médicas, 2009.

2. Urea – B. Bioquímica [Internet].(citado el 18 de Oct. Del 2017) actualizado el

4 de diciembre, 2016. Disponible en:
https://jugandoconpipetas.wordpress.com/category/bioquimica/

3. Díaz N. Barcena A. Fernandez E. Galvan A. Jorrin J. Espectrofometría:

Espectros de absorción y cuantificación colorimétrica de biomoléculas. Revista
Rabanales. Ago. 2010:9(7):4-5.