E. A. P.

INGENIERÍA AMBIENTAL

CINÉTICA ENZIMÁTICA

Prof. MARCO SALAZAR CASTILLO

DEPARTAMENTO QUÍMICA BIOLÓGICA y FISIOLOGÍA ANIMAL

UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

 ENZIMAS
 Maquinas moleculares muy eficientes.

 Su enorme potencial catalítico requiere un control

eficaz, para:
◦ evitar que la actividad que se realiza se exceda de los
límites.
◦ hacer flexible y permitir adaptarse a situaciones de
rápidos cambios metabólicos

 Su naturaleza ha desarrollado un interesante

sistema de control que supervisa y coordina las
actividades catalíticas a diversos niveles.
Control de la actividad enzimática

 Propiedades de las enzimas:

◦ Velocidad, concentración y tiempo de reacción
◦ Sustrato
◦ pH
◦ Temperatura
◦ Cofactores, vitaminas y hormonas
◦ Inhibidores
Control de la actividad enzimática:
propiedades de las enzimas

 Velocidad de la reacción: rapidez con la que

procede una reacción. Cambio en concentración
de producto (aparece) o reactivo ( desaparece)
por unidad de tiempo.

 Concentración: hipérbola; mayor concentración

de sustrato la enzima se satura y la velocidad de
reacción es máxima.

 Tiempo de reacción: la velocidad disminuye con

el tiempo.
Efecto de la[E] sobre la actividad enzimática

Elementos de la actividad enzimática

[E] VARÍA

[S] constante

pH constante

Temperatura constante

Tiempo constante

Cofactores

Inhibidores
 Las constantes de velocidad
caracterizan las reacciones químicas

 La termodinámica permite hacer afirmaciones

sobre la DIRECCIÓN en que transcurren las
reacciones, pero no sobre la VELOCIDAD con se
éstas se realizan.
 VELOCIDAD DE REACCIÓN (V).- consumo de
sustrato o formación de producto por unidad de
tiempo.
S P
V = -d(S) / dt = d(P) / dt
La velocidad de cada reacción depende de la
concentración de la sustancia que se modifica.
Si se varía la (S): V = k (S)
V aumenta proporcionalmente a la (S)
Efecto de la[E] sobre la actividad
enzimática

Elementos de la actividad enzimática

[E] constante

[S] VARÍA

pH constante

Temperatura constante

Tiempo constante

Cofactores

Inhibidores
 EFECTO DE LAS CONCENTRACIONES DE
SUSTRATO SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA

 La velocidad de una reacción enzimática depende de la

concentración de sustrato. La Figura 1 muestra la
velocidad de una reacción enzimática a 6 concentraciones
distintas de sustrato.

 Además, la presencia de los productos finales puede

hacer que la reacción sea más lenta, o incluso invertir su
sentido (Figura 2 ).

Fig. 1 Fig. 2
 MODELO CINÉTICO DE
MICHAELIS-MENTEN

Leonor Michaelis Maud Menten

 K1 K2
E + S [ES] E + P
K3
K1y K3 son constantes de formación y desaparición del complejo ES.
K2 es constante de formación de P y E libre.
La velocidad de formación de producto depende de [ES]

Vo = K2 [ES]

[ES] no es una magnitud accesible experimentalmente; se mide en forma

aproximada a partir de [E] y de [S]

Formación ES:V = K1 [E][S] Degradación ES:V = K2 [ES] + K3 [ES]

Si K2 << K3 ; KM ~ K3 / K1 = KD

NUMERO DE RECAMBIO “Turnover

number”.-
KM alto, baja afinidad enzimática número de moléculas de sustrato
KM bajo, alta afinidad enzimática transformadas por una molécula de
enzima por unidad de tiempo
 La constante de Michaelis-Menten (KM) es un parámetro
cinético importante por múltiples razones:

 KM es la concentración de sustrato para la cual la velocidad de reacción es la mitad

de la velocidad máxima. En efecto, si KM = [S], la ecuación de Michaelis-Menten se
reduce a: Vo = Vmax/2
 El valor de KM da idea de la afinidad del enzima por el sustrato: A menor KM, mayor
afinidad del enzima por el sustrato, y a mayor KM, menor afinidad. Este hecho tiene
fácil explicación si tenemos en cuenta que KM se define como (k2+k3/k1), donde las
reacciones 2 y 3 destruyen el complejo ES, mientras que la reacción 1 lo forma. Así, si KM
es grande, el complejo ES es inestable pues predomina la tendencia a destruirlo (poca
afinidad hacia el sustrato), y si KM es pequeña, el complejo ES es estable, ya que
predomina la tendencia a formarlo (gran afinidad hacia el sustrato).
 La KM del sustrato natural es menor que la de los sustratos análogos. Si dos sustratos
del mismo enzima tienen distinta KM, el que presente mayor KM tiene menor afinidad por el
enzima, y la reacción transcurre siempre a menor velocidad que con el sustrato de menor
KM, salvo a concentraciones saturantes de sustrato, donde la v = Vmax.
 Los valores de KM de muchos enzimas son próximos a los de la concentración
fisiológica de sus sustratos, de forma que pequeñas variaciones en la [S] pueden
suponer grandes cambios en la velocidad de toda una ruta metabólica.
 Parámetros Cinéticos
 Ejemplo:

[S] (g/L) Vo (g/L.h) 3,0

0,25 0,78
2,0
0,51 1,25

Vo (g/L.h)
1,03 1,66 1,0

2,52 2,19
0,0
4,33 2,35 0 2 4 6 8

7,25 2,57 [S] (g/L)

 Parámetros Cinéticos
 Ejemplo: Lineweaver-Burk
1 K 1 1
 m  
V0 Vmáx S  Vmáx
1 1
 0,228   0,3668
V0 S 
Portanto,
1 g
 0,3668  Vmáx  2,73
Vmáx Lh
1,6 Km g
 0,228  K m  0,622
Vmáx L
1,2
1/Vo (L.h/g)

0,8
y = 0,228x + 0,3668
0,4 R2 = 0,9991

0,0
0 1 2 3 4 5
1/[S] (L/g)
 Estructura
globular

 Hervir con HCl

 Tripsina
 Temperatura elevada
 pH extremo
Funcionalidad Inactiva
Efecto del pH sobre la actividad enzimática

Elementos de la actividad enzimática

[E] constante

[S] constante

pH VARÍA

Temperatura constante

Tiempo constante

Cofactores

Inhibidores
 EFECTO DEL pH SOBRE LA
ACTIVIDAD ENZIMÁTICA

 Los enzimas poseen grupos químicos ionizables

(carboxilos -COOH; amino -NH2; tiol -SH; imidazol,
etc.) en las cadenas laterales de sus aminoácidos.
 Según el pH del medio, estos grupos pueden tener
carga eléctrica positiva, negativa o neutra.
 Como la conformación de las proteínas depende,
en parte, de sus cargas eléctricas, habrá un pH en
el cual la conformación será la más adecuada para
la actividad catalítica. Este es el llamado pH
óptimo.
 La mayoría de los enzimas son muy sensibles a los
cambios de pH.

 Desviaciones de pocas décimas por encima o por debajo

del pH óptimo pueden afectar drásticamente su actividad.

 Ej, la pepsina gástrica tiene un pH óptimo de 2, la ureasa

lo tiene a pH 7 y la arginasa lo tiene a pH 10. Como
ligeros cambios del pH pueden provocar la
desnaturalización de la proteína, los seres vivos han
desarrollado sistemas más o menos complejos para
mantener estable el pH intracelular: Los amortiguadores
fisiológicos.
 Enzima pH óptimo
Pepsina 1.5

Tripsina 7.7

Catalasa 7.6

Arginasa 9.7

Fumarasa 7.8

Ribonucleasa 7.8
Efecto de la TEMPERATURA sobre la
actividad enzimática

Elementos de la actividad enzimática

[E] constante

[S] constante

pH constante

Temperatura VARÍA

Tiempo constante

Cofactores

Inhibidores
 EFECTO DE LA TEMPERATURA
SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA

 En general, los aumentos de temperatura aceleran las

reacciones químicas: por cada 10ºC de incremento, la
velocidad de reacción se duplica.

 Las reacciones catalizadas por enzimas siguen esta ley

general. Sin embargo, al ser proteínas, a partir de cierta
temperatura, se empiezan a desnaturalizar por el calor.

 La temperatura a la cual la actividad catalítica es máxima se

llama temperatura óptima. Por encima de esta temperatura,
el aumento de velocidad de la reacción debido a la
temperatura es contrarrestado por la pérdida de actividad
catalítica debida a la desnaturalización térmica, y la
actividad enzimática decrece rápidamente hasta anularse.
 Enzima Temp. Ópt.
(oC)
Mamíferos 37

Bacterias y algas aprox. 100

Bacterias Árticas aprox. 0

Bacterias en muestra de hielo antigua

 S: PM 250, 0.8 nm Ø

Cofactor
E: PM 100000, 7 nm Ø
Inorgánico:
Fe2+, Mn2+, Zn2+,etc.

Orgánico:
Coenzimas
NAD,
FAD,
CoASH.
Grupo Prostético
ACTIVIDAD ENZIMÁTICA
 Se define la unidad de actividad enzimática (U) como la cantidad
de enzima que cataliza la conversión de 1 µmol de sustrato en un
minuto.
 La actividad específica es el número de unidades de enzima por
miligramo de proteína (U/mg proteína) o por mililitro de disolución
(U/mL).
 Recientemente, el Sistema Internacional de unidades (SI) ha
definido la unidad de actividad enzimática como la cantidad de
enzima que transforma 1 mol de sustrato por segundo. Esta
unidad se llama katal (kat). Como 1 mol son 106 µmoles y 1 minuto
son 60 segundos, resulta que 1 katal equivale a 60 x 106 U. Esta
unidad es muy grande, de forma que se utilizan frecuentemente los
submúltiplos como el microkatal (µkat, 10-6 kat) o el nanokatal
(nkat, 10-9 kat).
 Cuando se conoce el peso molecular del enzima puro y el número
de centros activos por molécula de enzima, las medidas de
actividad enzimática permiten calcular el número de recambio del
enzima, o sea, el número de reacciones elementales que realiza
el enzima por cada centro activo y por unidad de tiempo.