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DETERMINACIÓN DE TARTRAZINA EN UNA BEBIDA COMERCIAL EMPLEANDO

DIFERENTES TIPOS DE CURVAS DE CALIBRACIÓN


1
Gabriela Lopez, 2Mateo Pava
Galoarb@hotmail.com, pava.mateo@gmail.com,

1y2
Universidad Icesi, Facultad de Ciencias Naturales, Laboratorio de instrumental
23 de marzo de 2019

Resumen

El objetivo de la práctica fue el de determinar el contenido de tartrazina en una bebida comercial, para
ello, se utilizó como bebida comercial la gaseosa Sprite que contiene este tipo de colorante, al igual que
se evaluó 3 diferentes métodos de curvas de calibración (Calibración Sencilla, por adición estándar y
por patrón interno).Los resultados obtenidos en la concentración de Tartrazina para cada una de las
curvas fueron 584,21 ppm para calibración Sencilla, 197,36 ppm en calibración por adición estándar y
574,20 ppm en la calibración por patrón interno para un valor teorico de 558 pppm.

Introducción

Para la realización de esta práctica se hizo uso parte se encuentra la curva de calibración por
de un método espectrofotométrico. Los adición estándar la cual consiste en la adición
métodos espectrofotométricos son los métodos de un volumen fijo de la muestra, a las
de análisis más utilizados, y se basan en la soluciones estándares diluyendo a un volumen
relación que existe entre la absorción de luz por final constante, para finalizar se tiene la curva
parte de un compuesto y su concentración1. Uno de calibración por estándar interno la cual se
de los mayores principios de este método se utiliza para compensar errores aleatorios y
basa en la ley de Beer-Lambert, la cual sistemáticos como interferencias no espectrales
establece que la disminución de la intensidad de componentes de la matriz 3. Las curvas de
del haz de luz incidente es proporcional al calibración no solo consisten en la
espesor del medio. Un espectrofotómetro es determinación de un analito, a su vez sirven
capaz de determinar, qué sustancias están para observar la estabilidad de compuestos
presentes en una muestra y cuantificarlas esto presentes en una muestra ,como se observa en
lo hace mediante cálculos de longitudes de onda el artículo “Sustitución de tartrazina por
observadas o en otras palabras la realización de betacaroteno en la elaboración de bebidas no
curvas de calibración. alcohólicas” el cual busca evaluar la viabilidad
Entre las curvas de calibración realizadas a de la sustitución de la tartrazina un aditivo
partir de los resultados se tienen: curva de artificial que genera efectos adversos en la
calibración sencilla la cual consiste en la salud por betacaroteno un colorante natural a
determinación de un analito, en donde sus partir del uso del espectrofotómetro UV-visible
reactivos no interfieren con el análisis, por otra y la realización de curvas de calibración.
Metodología
Se realizo una muestra de solución patrón de Calibración Sencilla
Tartrazina la cual se realizo con un peso de 0,05 Concentración
g. Posteriormente, se inició con la curva de Absorbancia
de Tartrazina
calibración sencilla en la que se usaron 6 (431 nm)
(mg/L)
balones de 25 mL y se adicionaron volúmenes 12 -0,0065
de la solución patrón en las concentraciones de 16 0,0005
12,16,20,24,28,32 mg/L respectivamente, 20 0,0095
además de esto se tomaron sus absorbancias a 24 0,0135
431 nm. Cabe agregar la preparación de la 28 0,024
muestra para una calibración sencilla en la cual 32 0,0325
se tomó un 1mL de la muestra problema y se
transfirió a un matraz de 25 mL, completando
Tabla 2. Absorbancia de la muestra en la
el volumen con agua destilada hasta el aforo,
posteriormente se midió su absorbancia a 431 curva de calibración sencilla.
nm. Para la curva de calibración por adición Absorbancia
estándar, se prepararon 6 soluciones de 25 mL, (431 nm)
cada una iniciando con 1 mL de muesra
problema. La primera sin adición de solución Muestra 0,014
de patrón de tartrazina y las demás con
concentraciones de tartrazina conocida de:
12mg/L, 16 mg/L, 20 mg/L, 24 mg/L, 28 mg/L. Calibración Sencilla
Por otra parte se midieron sus absorbancias a
431 nm. 0.04
y = 0.0019x - 0.0304
0.03 R² = 0.9964
Absorbancia a 431 nm

Por último, se realizó la curva de calibración 0.02


por patrón interno, para lo cual se utilizaron 6
0.01
balones de 25 ml y se agregó 450 microlitros de
solución de azul de metileno al 0,01. % y 0
0 10 20 30 40
concentraciones de tartrazina de 12mg/L, 16 -0.01
mg/L, 20 mg/L, 24 mg/L, 28 mg/L, 32mg/L. -0.02
Además de esto, se tomaron las absorbancias a
-0.03
431 nm y 664 nm.
Por otro lado, para la preparación de la solución -0.04
Concentracion de Tartrazina en ppm
problema por patrón interno, se transfirió 1 mL
de la muestra problema y 450µL de azul de
metileno al 0,01% a un matraz de 25 mL Grafica 1. Calibración Sencilla,
posteriormente se midió su absorbancia a 431 Concentración vs Absorbancia.
nm y 664 nm.
Este tipo de curva de calibración tiene un
Cálculos y Resultados comportamiento lineal por lo que al graficar se
utiliza la ecuación lineal de la forma de la
En la práctica se obtuvo los siguientes Ecuación 1, la ecuación obtenida es la
resultados para los diferentes tipos de curvas de Ecuación 2.
calibración.
𝑦 = 𝑚𝑥 + 𝑏 (1)

𝑦 = 0,0019𝑥 − 0,0304 (2)

Siendo y la absorbancia, m y b se son


Tabla 1. Absorbancia de la muestra a
constantes determinadas al graficar (0,0019 y
diferentes concentraciones de tartrazina
0,0304, respectivamente) y x es la
concentración de Tartrazina. Para obtener la
concentración de analito se despeja la x y se Calibración por Adición Estandar
obtiene la Ecuación 3. 0.08 y = 0.0019x + 0.015
0.07 R² = 0.9983

Absorbancia a 431 nm
𝑦−0,0304
𝑥= (3) 0.06
0,0019
0.05
De esta forma al reemplazar la absorbancia 0.04
obtenida de la muestra (Tabla 2), se obtiene la 0.03
concentración a determinada absorbancia que
0.02
se multiplica por el factor de dilucion
utilizado. (Ecuación 4). 0.01
0
0,014 − 0,0304 0 10 20 30 40
𝑥= = 23,36 𝑝𝑝𝑚25𝑚𝑙 Concentracion de Tartrazina en ppm
0,0019
= 584.21 𝑝𝑝𝑚
Grafica 2. Calibración por Adición Estándar,
Curva de calibración por Adición Estándar Absorbancia vs concentración.
Se obtuvo las absorbancias de las
concentraciones evaluadas en la Tabla 3. Para la determinación de la concentración del
Además, se evaluó la solución patrón 1. analito por este método se utiliza la Ecuación
6.
Tabla 3. Absorbancia de la muestra a
diferentes concentraciones de tartrazina y 𝑏
𝐶𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 = (6)
Solución patrón 1. 𝑚

Donde, se reemplazan las variables b y m por


Calibración por Adición los valores obtenidos de la ecuación de la recta
Estándar
de la Grafica 2, como se observa a
Concentración continuación y se multiplica por el factor de
Absorbancia
de Tartrazina dilución.
(431 nm)
(mg/L)
0,015
(Solución 𝐶𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 = 0,0019 = 7,89 𝑝𝑝𝑚25𝑚𝑙 =
Patrón 1) 0,0375
12 197,36 𝑝𝑝𝑚 (4)

16 0,044 Curva de Calibración Estándar por Patrón


Interno
20 0,052
Para este método se tomó la absorbancia a dos
24 0,0605 longitudes de ondas diferentes 431 nm y 661
nm. Además, se utilizó azul de metileno al
28 0,067 0,01 %. Los resultados se muestran en la Tabla
4.
32 0,074

Se graficaron los datos anteriores obteniendo


la Grafica 2.
Tabla 4. Absorbancia a diferentes longitudes
de onda de la muestra a diferentes (0,0671+0,0776)
𝑥𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 = =
0,0063
concentraciones de tartrazina.
22,96 𝑝𝑝𝑚25𝑚𝑙 = 574,20 𝑝𝑝𝑚 (6)
Calibración estándar por patrón interno
Concentració Absorbanci
n de Absorbanci a 431 nm Para la obtención de los porcentajes de error se
Tartrazina a /664 nm usó la siguiente ecuación.
(mg/L)
431 664 𝑉. 𝑡𝑒𝑜𝑟𝑖𝑐𝑜 − 𝑉. 𝑒𝑥𝑝
nm nm % 𝑑𝑒 𝑒𝑟𝑟𝑜𝑟 =   100
𝑉. 𝑡𝑒𝑜𝑟𝑖𝑐𝑜
- -0,113 -0,252
0 0,0285
Obteniendo el siguiente valor para la curva de
12 0,0035 0,264 0,0132 calibración sencilla.
16 0,003 0,3045 0,009 588 𝑛𝑚 − 584.21 𝑛𝑚
0,012 0,278 0,043   100 = 0,64%
20 588 𝑛𝑚
24 0,021 0,2995 0,070
28 0,028 0,287 0,097
Posteriormente se realizo una prueba T-student
32 0,0375 0,285 0,131
para observar si hay diferencias significativas
0,020 0,305 0,0671
Muestra 5 5 entre las diferentes calibraciones.
Los datos de la Tabla 4 se graficaron
obteniendo la Grafica 3.

Calibración por Estandar


Interno
0.15
y = 0.0063x - 0.0776
Absorbancia a 431 nm/ 661 nm

R² = 0.9561
0.1

0.05

0
0 10 20 30 40
-0.05

-0.1
Concentracion de Tartrazina en ppm
R=(0.0019)/(0.0032)
Grafica 3. Calibración Estándar por Patrón
R= 0,59375
Interno, Absorbancia vs concentración.

S2R=(0.59375)2[(0,000435562/0.00192)+(
En este tipo de calibración se relaciona la
0,0013012862/0.00322)
señal del analito con la señal de estándar
interno, como se representa la Ecuación 5.
S2R= 0,07682
𝑦 𝑎𝑛𝑎𝑙𝑖𝑡𝑜 𝑓
= 𝑥 t= -5,288
𝑦 𝑃𝑎𝑡𝑟𝑜𝑛 𝐼𝑛𝑡𝑒𝑟𝑛𝑜 𝐶𝑃𝑎𝑡𝑟𝑜𝑛 𝐼𝑛𝑡𝑒𝑟𝑛𝑜 𝑎𝑛𝑎𝑙𝑖𝑡𝑜
Dando el valor t menor a cero, conluyendo que
= 𝑚𝑥𝑎𝑛𝑎𝑙𝑖𝑡𝑜 (5)
los valores se pueden tomar con una diferencia
significativa.
Se despeja la variable que de concentración
del analito y se reemplaza y se multiplica por
el factor de dilución (Ecuación 6).
Análisis de los resultados medición de una muestra que estaba menos
Se determinó la concentración de tartrazina por concentrada, a pesar de que la celda fue purgada
tres diferentes métodos de curva de calibración se pudo observar como este proceso afecto la
los cuales fueron calibración sencilla, medición, esto se vio reflejado en el margen de
calibración por adición estándar y calibración error.
por estándar interno. Los resultados de Conclusiones
porcentaje de error fueron 0,64%, 66,43% y  A pesar de que durante las mediciones
2,34% respectivamente, además de esto los se realice una purga de la celda, esto no
resultados obtenidos en la concentración de significa que se elimine en un cien por
Tartrazina para cada una de las curvas fueron ciento todas las especies químicas que
584,21 ppm para calibración Sencilla, 197,36 se encontraban anteriormente.
ppm en calibración por adición estándar y  Las tres cruvas de calibracion se
574,20 ppm en la calibración por patrón interno. muestran efectivas para la
Las curvas sencilla y de patron interno cuantificacion de una concentracion
mostraron buenos porcentajes de error y esto se problema.
ve relacionado en que se usa una formula Bibliografía
similar para ambas ocasiones. Para las curvas 1. Espectrometría. (s.f.). (G.
de patron estandar y patron interno, se elimaron Pérez, Productor) Recuperado
datos atipicos( 1 dato para estandar y 1 dato el 18 de 03 de 2019, de
para estandar interno) para obtener mejores https://www.espectrometria.c
om
resultados en la linealidad de las ecuaciones.
Tomando como referente el resultado obtenido
1. Palacios, D. M. (2014).
en la calibración por adición estándar, se puede Métodos de Calibrado.
decir que no es un método muy confiable ya que Universidad de Los Andes
dio un valor bastante alejado de los otros dos Venezuela, Departamento de
métodos de calibración. Lo anterior se pudo Química, Mérida
presentar debido a que muy posiblemente hubo 2. Mauricio Restrepo Gallego, E.
interferencia de matriz, sin embargo este tipo de V. (19 de enero de 2007).
calibracion se usan para eliminar ese sesgo Sustitución de tartrazina por
causado por la matriz, por lo que el error betacaroteno en la elaboracion
causado puede ser debido a la imprecision del de bebidas no alcoholicas.
volumen del analito muestreado. Si bien este LASALLISTA DE
método compensa las interferencias de matriz INVESTIGACIÓN, pág. 7.
presentes en la muestra, no las elimina del todo.
A pesar del margen de error alto que se obtuvo
en este método, se pudo evidenciar que las
variables muestran una buena correlacion entre
ellas ya que presenta el R cuadrado mas
cercano a uno dentro de las tres curvas.

Uno de los errores presentes durante la practica


fue durante la realización de la curva de
calibración estándar debido a que se realizó la
primera medición hasta la muestra mas
concentrada y posteriormente se hizo una
segunda medición para las mismas muestras,
por tanto se utilizo una celda que se encontraba
con una muestra muy concentrada para la