FUNDAMENTO DE LA TINCIÓN DE GRAM (bacterias Gram + y Gram -)

La tinción de Gram es un método de tinción diferencial para el cual se hace uso de dos colorantes
básicos en un orden necesario.
El primero, la violeta de genciana, es un colorante básico de tipo trifenilmetano (tres núcleos
aromáticos) con un grupo cromóforo =N–. Se fija por un extremo de su molécula (grupo auxócromo
acidófilo) a una estructura ácida (basófila); y por el otro extremo, al yodo presente en el lugol
(mordiente). La función del mordiente es facilitar la fijación del colorante sobre la célula. Se forma
así una “laca” o precipitado in situ de complejo componente celular-yodo-colorante, relativamente
insoluble en alcohol. Este complejo quedaría retenido por presentar un mayor tamaño molecular con
el que entró.

COMPLEJO COMPONENTE CELULAR-

COLORANTE-YODO

Existe más de una propuesta para los componentes celulares basófilos; entre ellos tenemos:
lipoproteínas, lípidos, ácidos nucleicos, nucleoproteínas, carbohidratos, glicerofosfatos, poliaminas,
ribonucleatos de magnesio y glicerol. Henry et al. (1945) sugirió que la causa del estado gram-
positivo era la asociación del ribonucleato de magnesio por enlaces sulfhídricos a ciertas proteínas
básicas presentes únicamente en células gram-positivas.
El paso crítico, de la tinción de Gram, es la decoloración por medio de alcohol acetona de las
células teñidas con violeta de genciana. Son denominadas gram-positivas aquellas células que no
pierden el color; y gram-negativas a las que si lo hacen. Ello depende de las características de la
pared celular. La pared celular de las bacterias gram-positivas por su amplio grosor en
peptidoglicanos retiene con mayor facilidad la laca insoluble en alcohol, por lo cual no decoloran.
Sin embargo, las bacterias gram-negativas por poseer una pared celular con escasos peptidoglicanos
no retienen la laca; además, la membrana externa es soluble en soluciones alcohólicas lo que
ocasiona la liberación de la laca colorante.
La safranina, es el segundo colorante utilizado; llamado también de contraste. Es un colorante
básico de tipo acina (dos anillos bencenoides y dos quinoides) y se usa para diferenciar una
estructura celular previamente teñida con otro colorante. Las gram-negativas, al haber perdido su
color son las que se tiñen con este segundo colorante.