BIOLOGÍA MOLECULAR:

GENÓ
GENÓMICA,
PROTEÓ
PROTEÓMICA Y
T-replicación METABOLÓ
METABOLÓNICA

(1)

(2) (3)

Metabolitos y
Proteina macromoléculas
Genoma Transcriptoma Proteoma Metaboloma
La información que contiene el DNA se transmite
 BIOLOGÍA
Estructura 1iªMOLECULAR:
del DNA
toda la informació
información está
está en el DNA
y a partir de ella se sintetizan los RNAs y las
T-replicación
proteinas

(2)
(1) (3)

(1) (2) (3)

T-replicación

Enlaces fosfodiester

Enlaces N-glicosídicos

Puentes de H para la
Doble hélice

Estructura 1iª del DNA

 DNA: DOBLE HÉLICE

T-replicación

Surco
mayor

Surco
menor

Desenrollado Superenrollado
 Apareamiento de bases en el DNA
e influencia en su estructura
C = G 3 puentes de H y
A = T 2 puentes de H
Estos apareamientos son la base de la estructura y de
las funciones de los ácidos nucleicos.

Cara del surco mayor Cara del surco mayor

Enlace Enlace Enlace Enlace

glicosídico glicosídico glicosídico glicosídico

Cara del surco menor Cara del surco menor

Adenina-Timina Citosina-Guanina
 Tipos de DNA

T43-replicación

DNA lineal de doble hebra DNA circular

T43-replicación

Super-enrollamiento
del DNA en eucariotas

El DNA (2 nm)
se encuentra superempaquetado
en los cromosomas (1µµm)
en el nucleo celular

µm = 1000 nm
1µ
 (1) Replicación del DNA

El DNA se duplica,
T43-replicación
Cada una de las
hebras se duplica
mediante la síntesis
de otra hebra
complementaria Molécula padre original

Horquilla de replicación

semiconservadora

Moléculas hijas de 1ª generación

 Replicación del DNA

T43-replicación
FASES y enzimas:

INICIACIÓN: topoisomerasa, helicasa, proteínas unidas

a hebra sencilla (SSB), primasa y cebador

ELONGACIÓN: DNA polimerasa, horquilla de

replicación

TERMINACIÓN: maduración y unión de los fragmentos

de Okazaki
 (1) Replicación del DNA
La replicación del DNA es semiconservadora,
cada cadena se replica, actuando como molde una hebra
se sintetiza otra hebra complementaria.

||||||||||||
||||||||||||
La replicación
molécula semiconservadora
de DNA del DNA es
progenitora coherente con el
modelo de doble
nuevos nucleótidos hélice

hebra 5’ 3’
conservadora dispersante semiconservadora nueva
hebra
||||||||||||

||||||||||||
||||||||||||

||||||||||||

||||||||||||
||||||||||||

||||||||||||

||||||||||||
||||||||||||

||||||||||||
||||||||||||

||||||||||||

nueva

hebra hebra hebra hebra

hija paterna paterna hija
 Replicación del DNA: es semidiscontinua y
asimétrica, una hebra de sintetiza en continuo y la otra en
fragmentos que luego se unen

T43-replicación

DNA progenitor
Hebra conductora

Horquilla de replicación

Fragmentos de Okazaki
Hebra retardada
Replicación
semiconservadora
semidiscontinua y
asimétrica
 Replicación del DNA: elongación
La replicación del DNA o síntesis de nuevo
DNA necesita de sustratos activados, dNTP.

DNA molde,
n1 dATP + n2 dGTP + n3 dCTP + n4 dTTP DNA + (n1+n2+n3+n4) PP
RNA cebador,
Mg2+, DNA polimerasa
hebra molde (DNA)
3’ 5’
P P P P P P P P P P
3’ 3’
5’ 5’

C G A T C C G A T C
...
G C U G C U A
A
OH OH OH OH OH OH
5’ 5’ 3’
3’ 3’
P P P OH 5’
3’ P P P P OH + P P
:

:
OH
P
:

5’ 3’ 5’ 3’ PPi
cebador (RNA) para la P
dNTP hebra de DNA en
hebra de DNA naciente P crecimiento ( 5’ → 3’ )
 Datos de la replicación del DNA
Hebra conductora
Hebras progenitoras

RNA cebador
T43-replicación

Horquilla de replicación
Hebra retardada
Replicación
semiconservadora
asimétrica y Hebra de DNA
semidiscontinua sintetizada de novo

Dirección del
desplazamiento de la
horquilla de replicación
avance de la horquilla
hebra conductora: y de la polimerasa
3’
sentido de síntesis y
de avance coinciden 5’
3’ 5’
5’ 3’
hebra retardada:
3’
sentido de síntesis y
de avance opuestos 5’
 Replicación del DNA

T43-replicación

FASES y enzimas:
Iniciación: topoisomerasa, helicasa, proteínas unidas
a hebra sencilla, primasa y RNA cebador

Elongación: DNA polimerasa, horquilla de replicación

Terminación, maduración y unión de los fragmentos

de Okazaki
Replicación
semiconservadora
asimétrica y
semidiscontinua
 Replicación del DNA: elementos de la
iniciación

topoisomerasa
T43-replicación

RPA, proteína de
unión a hebra
sencilla

Replicación helicasa
semiconservadora
asimétrica y
semidiscontinua

horquilla de
replicación
dirección de avance
 Replicación del DNA: iniciación

DNA molde

T-replicación

Primasa
Elementos
que
intervienen
en la RNA
replicación cebador
DNA polimerasa III
Replicación
semiconservadora
asimétrica y
semidiscontinua

Nuevo DNA
 Replicación del DNA
Topoisomerasa
Helicasa
Proteínas ligadas a
T-replicación
T43-replicación la hebra sencilla Primosoma

Replicación
semiconservadora
asimétrica y
semidiscontinua Primasa

DNA polimerasa
III

DNA polimerasa
I

DNA ligasa
Hebra
conductora Hebra
retardada
 La hebra conductora necesita
un cebador sólo al comenzar,
sintetizado por la actividad
primasa de la DNApol α
hebra La DNApol δ (o la ε) continúa la
conductora doble hebra síntesis de la hebra conductora de
hija nº1 forma continua, en sentido 5’→3’,
molde de recorriendo su hebra molde de 3’ a 5’
T-replicación
la hebra
conductora
La DNApol α inicia la helicasa
elongación, como DNA, doble hebra
progenitora molde de
del RNA cebador de la la hebra
hebra conductora conductora

RPA, proteína de molde de

unión a hebra sencilla
la hebra
aquí comenzó el 1er fragmento de Okazaki, retrasada
y hasta aquí llegará la elongación del 2o
(el que δ está sintetizando ahora) La hebra retardada necesita un
cebador para cada fragmento de
molde de la hebra retardada Okazaki, sintetizado por la
(sentido 5’→3’ indicado actividad primasa de la DNApol α
por las flechas azules)
hebra retardada
(en fragmentos de Okazaki) La hebra retardada se sintetiza de forma
doble hebra discontinua, en fragmentos de Okazaki; cada
hija nº2 fragmento lo inicia (cebador + DNA) la
DNApol α y luego lo continúa la DNApol δ
 Replicación del DNA

Experimento de Meselson y Stahl

T-replicación

•Separación por
centrifugación en

Densidad
CsCl de DNA de
cadenas en doble
hélice sintetizados
en presencia de 15N
(cadena pesada) o
de 14N (cadena
ligera) o de una
mezcla de ambas o
de una doble hélice ambas hebras ligera/ligera
ambas hebras Ligera/pesada
híbrida (hebra ligera ligeras pesadas pesada/pesada

y hebra pesada).
1ª 2ª 3ª
 Replicación del DNA

Experimento de Meselson y Stahl

T-replicación

densidad
•Se crecen E. Coli en Progenitor
presencia de 15N y
después de 14N;
•se toman muestras
de DNA después de
1, 2 y 3
generaciones,
•se mezclan con
CsCl y se
centrifugan.
•Así se separan las
cadenas de
diferentes
densidades.
 Replicación del DNA
143a
Replicación
semiconservadora
asimétrica y
T-replicación semidiscontinua

Alcanzado el equilibrio de
DNA normal sedimentación, las moléculas DNA “pesado” Mezcla de
(“ligero”, 14N) de DNA se concentran (15N) DNA “pesado” y DNA “ligero”
formando una banda,
detectada por su absorción UV

A260 A260 A260

1.69 1.71 1.73 1.75 1.69 1.71 1.73 1.75 1.69 1.71 1.73 1.75
densidad densidad densidad

Gradiente de La densidad del DNA pesado es 0.016 g/cm3 Es posible separar ambos
densidad formado mayor (un 1%) que la del DNA ligero; por tipos de DNA (unos 0.5 mm
con CsCl ello, se sitúa un poco más abajo en el gradiente entre las bandas)
1 Diseño del experimento: 143b 12- Replicación
Se cultivan células de E. coli durante Se analiza por
muchas generaciones en un medio con centrifugación
15NH Cl como única fuente de nitrógeno. Se extrae su DNA
4 (será [15N]DNA) isopícnica
células marcadas

inicial
por completo
(100% de la masa
de DNA)
?
Se transfieren las células a
un medio normal (con 14N).
Se espera a que tenga lugar
una división celular. Tras la primera

1ª generación
división celular,
se extrae el DNA
células
“semimarcadas”
(50% de la masa
de DNA)
?
Continúan en medio
normal (con 14N)
(una división adicional) Tras la segunda

2ª generación
división celular,
se extrae el DNA
células aún
menos marcadas
(25% de la masa
?
de DNA)
 144a 12- Replicación
2 Bajo las hipótesis de replicación conservadora y semiconservadora, los resultados
previsibles serían, comparativamente:

REPLICACIÓN REPLICACIÓN
Banda de CONSERVADORA: SEMICONSERVADORA: Banda de
DNA pesado DNA pesado

DNA pesado
(marcado con 15N)

replicación 14N 14N replicación

Dos bandas de Banda única de

DNA (ligero y 1ª generación DNA (de densidad
pesado, ½ y ½) intermedia)

pesado ligero híbrido híbrido

 144b 12- Replicación

Dos bandas de Banda única de

DNA (ligero y 1ª generación DNA (de densidad
pesado, ½ y ½) intermedia)

pesado ligero híbrido híbrido

replicación replicación
14N 14N

Dos bandas de Dos bandas de

DNA (ligero y DNA (ligero y de
2ª generación densidad
pesado, ¾ y ¼) intermedia, ½ : ½)

pesado ligero ligero ligero híbrido ligero ligero híbrido

Aunque no se presentan los resultados, la REPLICACIÓN DISPERSANTE habría producido moléculas de DNA
con mezcla aleatoria de nucleótidos progenitores y nuevos, es decir, en la 1ª generación una sola banda en
el gradiente (densidad intermedia entre pesado y ligero) y en la 2ª también una sola banda (densidad
intermedia entre la anterior y la del ligero).
 BIOLOGÍA MOLECULAR:
GENÓ
GENÓMICA,
MICA
PROTEÓ
PROTEÓMICA Y
T-transcripción METABOLÓ
METABOLÓNICA

(1)

(2) (3)

Metabolitos y
Proteina macromoléculas
Genoma Transcriptoma Proteoma Metaboloma
 BIOLOGÍA MOLECULAR:
toda la informació
información está
está en el DNA
y a partir de ella se sintetizan los RNAs
T-transcripción

(1) (2) (3)

(1) (2) (3)

 BIOLOGÍA MOLECULAR (2) :
Transcripción o síntesis del RNA

T-transcripción

DNA RNA
transcripción mRNA
rRNA
tRNA

• Mensajero: mRNA
• Ribosomal: rRNA
• Transferente: tRNA
 Tipos y funciones de RNA

•Mensajero: mRNA
T-transcripción •Ribosomal: rRNA
•Transferente: tRNA

•mRNA: es el que lleva el mensaje, es decir

el que codifica la secuencia de los
aminoácidos (AA) en las proteínas.
•rRNA: forma parte de lo ribosomas.
•tRNA: activa a los AA y los transporta
hasta los ribosomas, para la síntesis de las
proteínas.
 (2) Transcripción del DNA:
síntesis del RNA

T-transcripción

RNA:
RNA
Mensajero: mRNA
Ribosomal: rRNA
Transferente: tRNA

Los tres tipos de RNA

van a intervenir en la
síntesis de proteínas
 (2) Transcripción:
síntesis del RNA*
DNA RNA
T-transcripción
RNA polimerasa

DNA

RNA polimerasa

mRNA
 (2) Transcripción:
síntesis del RNA

T-transcripción Burbuja de transcripción

Doble hélice DNA desenrollado

DNA (17 pb abiertos)

RNA polimerasa
 (2) Transcripción:
síntesis del RNA

Avance de la burbuja de
T-transcripción
transcripción
RNA polimerasa

enrollado Hebra molde Hebra desenrollado

codificante

RNA Hélice híbrida Lugar

naciente DNA-RNA elongación

Movimiento de
la polimerasa
 Transcripción: síntesis del RNA *

T-transcripción

Hebra de DNA no molde (codificante)

Hebra de DNA molde

RNA transcrito
 (2) Transcripción: síntesis del RNA

T-transcripción

RNA polimerasa
Proteina
ρ)
Ro (ρ
Final de la
transcripción

Hebra de DNA no molde (codificante)

Hebra de DNA molde

RNA transcrito
 (2) Transcripción:
síntesis del RNA

T-transcripción

molde
 (2) Transcripción:
síntesis del RNA

T-transcripción

La RNA
polimerasa
cataliza la
síntesis del
mRNA como
copia
complementa
ria de la
hebra molde
del DNA
 m- RNA: RNA mensajero

T-transcripción

La RNA
polimerasa
cataliza la
síntesis del
mRNA como
copia
complementaria
de la hebra molde
del DNA
 Tipos y funciones de RNA

•Mensajero: mRNA
T-transcripción •Ribosomal: rRNA
•Transferente: tRNA

•mRNA: es el que lleva el mensaje, es decir

el que codifica la secuencia de los
aminoácidos (AA) en las proteínas.
•rRNA: forma parte de lo ribosomas.
•tRNA: activa a los AA y los transporta
hasta los ribosomas, para la síntesis de las
proteínas.
 Tipos y funciones de RNA*

mRNA rRNA tRNA

T-transcripción

Lugar de unión
de los AA

mRNA

Codificante
Anticodón
 m- RNA: RNA mensajero

T-transcripción

La cadena de
mRNA es la copia
de la hebra
codificante del
DNA; va a servir
para codificar el
orden de AA en
las proteínas
 r- RNA: RNA ribosomal

T-transcripción

El rRNA
forma
parte de
los
ribosomas
junto con
varias
proteínas
PROCARIOTAS: ribosoma 70S
EUCARIOTAS : ribosoma 80S
 t- RNA: RNA de transferencia
Lugar de unión
de los AA

T-transcripción
Extremo 5’
fosfato
El tRNA es el de
menor tamaño. ψC
Bucle Tψ
Bucle DHU
Su estructura
en hoja de
trebol tiene
muchos lugares
con función
propia. Bucle
anticodón
T-transcripción

t- RNA:
RNA de
transferencia

La
conformación
del tRNA es en
ángulo recto
 t- RNA: RNA de transferencia

T-transcripción

Lugar de uni
de los AA

Bucle Bucle
anticodón anticodón
 t- RNA: RNA de transferencia
Lugar de
unión
T-transcripción de los AA
 t- RNA: función

T-transcripción

El tRNA es el
transportador
de los AA
hasta el lugar
de síntesis de
las proteínas
mRNA
 procesamiento de los RNAs nativos*

T-transcripción

Procesado o
maduración:

•Metilación

•Eliminación de intrones
(Corte y empalme de
exones)

•Poliadenilación

No todos los RNAs se

procesan igual.
 Modificaciones post-Transcripción:
procesamiento de los RNAs nativos

T-transcripción
 procesamiento de los RNAs nativos

Procesado o maduración:
•Metilación
T-transcripción •Eliminación de intrones (Corte y empalme)
•Poliadenilación

No todos los RNAs se procesan igual.

 t- RNA: final del procesamiento del
RNA de transferencia

T-transcripción Lugar de unió

de los AA
 síntesis
de proteínas
rRNA
T-transcripción

mRNA

rRNA

Los tres tipos de tRNA

RNA participan en la
síntesis de proteínas
Replicación, Transcripción y
síntesis de proteínas en procariotas