UNIVERSIDAD DE SANTANDER

LABORATORIO BIOQUIMICA GENERAL

FORMATO PARA PRACTICAS DE LABORATORIO

Fecha: Código: Página 1 Versión:

INFORMACIÓN BÁSICA

NOMBRE DE LA PRÁCTICA: ENZIMAS

PRACTICA No. 8

ASIGNATURA: BIOQUIMICA GENERAL

TEMA DE LA PRÁCTICA:
IDENTIFICACION DE LA ENZIMA CATALAZA
LABORATORIO A UTILIZAR: QUIMICA

CONTENIDO DE LA GUÍA

OBJETIVO
● Observar la acción enzimática de la catalasa y la formación de productos en forma de gas, O2 y liquido
H2O.
● Comprobar la presencia de la catalasa en los tejidos animales y vegetales.
● Comprobar el efecto de pH en las actividades enzimáticas.
INTRODUCCIÓN.
Durante los procesos biológicos y el constante intercambio con el medio, se generan especies químicas
conocidas como radicales libres, se caracterizan por presentar un electrón desapareado y por ser muy reactivas.
Los radicales resultan de gran interés las especies reactivas derivadas del oxígeno (EROS) debido a la estructura
biradicalica de esta molécula y al gran número de procesos que las generan y en los que puede verse
involucradas.
Los principales eros son anión superoxido (O2), radical hidroxilo (OH), oxigeno y el peróxido de hidrogeno
(H2O2). Estas especies radicalicas están implicadas en el daño celular de forma tal que la agresiones oxidantes
pueden dirigirse hacia la carcinogénesis, enfermedades inflamatorias, senectud celular y enfermedades
neurodegenerativas entre otros proceso patológicos.
En el organismo existe un sistema de protección antioxidante formado por enzimas y compuestos de bajo peso
molecular. Una de las enzimas que intervienen en la protección y, en el mantenimiento del balance
oxidante/antioxidante es la catalasa (CAT).
La catalasa se encuentra en las células de tejidos animales y vegetales. La función en los tejidos es necesaria
porque durante el metabolismo celular, se forma una molécula toxica que es el PER-OXIDO DE
HIDROGENO,H2O2 (agua oxigenada), la cata-lasa, lo descompone en agua y en oxígeno.
La reacción de la catalasa sobre el H2O2, es la siguiente,
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2 H2O2 2H2O + O2

CATALASA
Su función es proteger a las células del efecto del peróxido de hidrogeno (agua oxigenada). Fue una de las
primeras enzimas purificadas más suficientes con una velocidad de 200000
transformaciones/segundo/subunidad.
La proteína es un tratamiento formado por cuatro subunidades idénticas. Cada monómero contiene un grupo
prostético HEMO en el centro activo. En algunas especies también contienen una molécula de NADP por
subunidad cuya función es proteger a la enzima de la oxidación por su sustrato H2O2.
Es una enzima tetrametrica, con cuatro subunidades idénticas de 60 KDa contiene cuatro grupos de
ferroprotoporfirina por molécula no puede ser saturada por H2O2 a ninguna concentración, catalizando su
conversión en agua y oxígeno, para proteger a la célula dde agua oxigenada. Con dadores de H (metanol,
etanol, acido fórmico, fenoles…) presenta actividad peroxidasa.
El H2O2 es catalizado enzimáticamente en organismos anaerobios por la catalasa y otras peroxidasas. En
animales, el peróxido de hidrogeno se destoxifica mediante las actividades de la catalasa y la glutatión
peroxidasa. La catalasa no es esencial para algunos tipos de células en condiciones normales, tiene un
importante papel en la adquisición de tolerancia al estrés oxidativa en la respuesta adaptativa de las células. La
catalasa captura el agua oxigenada de que pueda escapar de la célula y lo convierte en oxigeno molecular.

FUNDAMENTACIÓN TEORICA

La catalasa es una enzima que se encuentra en organismos vivos y cataliza la descomposición del
peróxido de hidrógeno (H202) en oxígeno y agua. El peróxido de hidrógeno es un residuo del
metabolismo celular de muchos organismos vivos, pero dada su toxicidad debe transformarse
rápidamente en compuestos menos peligrosos. Para ello se usa con frecuencia esta enzima que cataliza
su descomposición en agua y oxígeno. Además la catalasa se usa en la industria textil para la eliminación
del peróxido de hidrógeno, así como en menor medida se emplea en la limpieza de lentes de contacto
que se han esterilizado en una solución de peróxido de hidrógeno.

El mecanismo completo de la catalasa no se conoce, aun así la reacción química se produce en dos
etapas:

H2O2 + Fe(III)-E → H2O + O=Fe(IV)-EH2O2 + O=Fe(IV)-E → H2O + Fe(III)-E + O2

Donde Fe-E representa el núcleo de hierro del grupo hemo unido a la enzima que actúan como
cofactores. La enzima se presenta en forma de homotetrámero y se localiza en los peroxisomas. Esta
enzima puede actuar como una peroxidasa para muchas sustancias orgánicas, especialmente para el
etanol que actúa como donante de hidrógeno. Las enzimas de muchos microorganismos, como el
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Penicillium simplicissimum, que exhiben actividad de catalasa y peroxidasa, son frecuentemente

llamadas catalasas- peroxidasas.

La deficiencia en catalasa produce acatalasia. Esta enfermedad está caracterizada por la ausencia de
actividad de la catalasa en los glóbulos rojos y se asocia con las lesiones orales ulcerantes.La catalasa es
una enzima que se encuentra en las células de los tejidos animales y vegetales. La función de esta enzima
en los tejidos es necesaria porque durante el metabolismo celular, se forma una molécula tóxica que es
el peróxido de hidrógeno, H2O2 (agua oxigenada).Esta enzima, la catalasa, lo descompone en agua y
oxígeno, por lo que se soluciona el problema.

La existencia de catalasa en los tejidos animales, se aprovecha para utilizar el agua oxigenada como
desinfectante cuando se echa sobre una herida. Como muchas de las bacterias patógenas son anaerobias
(no pueden vivir con oxígeno), mueren con el desprendimiento de oxígeno que se produce cuando la
catalasa de los tejidos actúa sobre el agua oxigenada.

EFECTO DEL pH SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA

Sabiendo que las enzimas son proteínas, cualquier cambio brusco de Ph puede alterar el carácter iónico
de los grupos amino y carboxilo en la superficie proteica, afectando así las propiedades catalíticas de una
enzima. A pH alto o bajo se puede producir la desnaturalización de la enzima y en consecuencia su
inactivación. La fosfatasa ácida es más activa a pH 5,0, mientras que la fosfatasa alcalina lo es a pH 9,0.
Muchas enzimas tienen máxima actividad cerca de la neutralidad en un rango de pH de 6 a 8.El pH per
se no afecta la actividad enzimática, sino la concentración de protones. Los protones además de alterar
la estructura de la enzima y el substrato, pueden participar también en la reacción como substrato o
producto. En esos casos, la concentración de protones afecta directamente la velocidad de la reacción.

pH ÓPTIMO: Catalasa7,6

EFECTO DE LA TEMPERATURA

Un aumento en la temperatura provoca un aumento de la velocidad de reacción hasta cierta

temperatura óptima, ya que después de aproximadamente 45° C se comienza a producir la
desnaturalización térmica. Las enzimas de muchos mamíferos tienen una temperatura óptima de 37° C,
por encima de esa temperatura comienzan a inactivarse y se destruyen Sin embargo existen especies de
bacterias y algas que habitan en fuentes de aguas termales y en el otro extremo ciertas bacterias árticas
tienen temperaturas óptimas cercanas a0° C
MATERIALES Y REACTIVOS
● 6 tubos de ensayo
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● Gradilla
● Pipeta graduada
● Baño María
● pedacitos pequeños de Corazón e Hígado de pollo
● pedazos pequeños de hojas de planta verdes
● Trocitos de papa cruda
● Trocitos de papa cocida
● Vidrio de reloj
● Cinta tirro
● bisturi
Reactivos:
● Agua oxigenada(H2O2)
● vinagre
● Agua destilada
PROCEDIMIENTO

1. Fragmentar en pequeños trozos el hígado.

2. Introducir los trozos del hígado en un tubo de ensayo.

3. Rotular las muestras.

4. Repetir los pasos 1-3 con las hojas de planta.

5. A cada una de las muestras agregar 4 mililitros de agua oxigenada(H2O2)

6. Observar la reacción que se lleva a cabo en el interior de ambos tubos de ensayo.

7. Registrar los cambios y reacciones observados.

8. Tomar 2 nuevas muestras (1 de hígado y 1 de hojas) e introducirlas en 2 tubos de ensayo.

9. Rotular las muestras

10. Someter ambas muestras a baño María con agua previamente calentada durante 5 minutos o hasta
que hiervan.
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11. Observar y registrar los cambios sucedidos.

12. Dejar enfriar ambas muestras.

13. Agregar a cada uno de los tubos de ensayo 4 mililitros de agua oxigenada(H2O2)

14. Observar y registrar los cambios sucedidos.

15. Con ayuda de un bisturí, volver trocitos la muestra de corazón de pollo.

16. Depositar la muestra de corazón en un vidrio de reloj.

17. A esta muestra aplicarle 5 mililitros de agua oxigenada.

18. Observar la reacción que se lleva cabo y registrar los cambios. Cuadro 10,0.-Caracteristicas de la
muestra antes y después de la aplicación H2O2

Muestra +H2O Muestra + H2O2

Practica 2:

Procedimiento: Primera experiencia:

- En dos tubos de ensayo colocar unos trocitos de papa cruda
- Marcar los tubos con las letra A y B
- Al tubo A, añadir 5 ml de agua oxigenada. Observe el resultado e interprete.
- Al tubo B añadir 5 ml de vinagre y dejar actuar por unos minutos.
- Luego retire cuidadosamente el vinagre y añada 5 ml de agua oxigenada.
- Observe el resultado e interprete

Describa los resultados: TUBO DESCRIPCIÓN DEL

RESULTADO
A
B

CONCLUSIONES DE LO OBSERVADO.
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Lavar los tubos de ensayo para realizar la segunda experiencia

Procedimiento: Segunda experiencia:
- Marcar dos tubos con las letras C y D
-En el primer tubo de ensayo marcado con letra C colocar trocitos de papa cruda
-En el segundo (letra D) colocar trocitos de papa cocida.
- Al tubo C, añadir 5 ml de agua oxigenada. Observe el resultado e interprete.
-Al tubo D, añadir 5 ml de agua oxigenada. Observe el resultado e interprete.

Describa los resultados: TUBO DESCRIPCIÓN DEL

RESULTADO
C
D

Observan el desprendimiento de burbujeo (oxígeno) en la papa cruda (viva), verifican si la papa cocida (células
sin vida) ¿es capaz de descomponer el agua oxigenada? ¿Por qué sucede esto? Explique
CONCLUSIÓN DE LO OBSERVADO.

CUESTIONARIO
1¿Por qué presenta un intenso burbujeo cuando el hígado entra en contacto con el H2O2?
Que se debe al desprendimiento de oxígeno de la reacción catalizada por la enzima catalasa.
2.- ¿Por qué la reacción se da en menor intensidad al entrar en contacto el H2O2 con la hoja?

3.- ¿Qué sucede cuando la muestra de hígado se somete a calentamiento?

Todas las enzimas son proteínas. Por lo tanto, todas las enzimas sufren desnaturalizarción frente al
calor. Esto quiere decir que cuando la temperatura es muy elevada, la enzima pierde su estructura
terciaria, por lo tanto su sitio activo también se desnaturaliza, y ya no puede cumplir su función.
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Este hecho se puede demostrar repitiendo el experimento anterior, pero habiendo hervido
previamente los trocitos de hígado. Cuando añadimos el agua oxígenada, no se observa el burbujeo.
3. ¿Para qué se utiliza el agua oxigenada en los botiquines?
Para limpiar y desinfectar heridas y detener ciertas hemorragias superficiales.
4. explica ¿Cómo se sintetiza una enzima dentro de la célula?

Ya te contamos qué hacen las enzimas y es momento de saber cómo funcionan. Las
enzimas participan de las reacciones químicas de las células para generar una acción
determinada. Cada enzima está hecha para una función especifica.

Las moléculas por sobre las cuales trabaja una enzima se denominan sustratos y cada
uno está ligado a una región de la enzima, llamado sitio activo. Existen dos formas o
modelos en que puede actuar una enzima y la velocidad de la reacción depende de ello.

Si la zona activa de la enzima tiene la forma exacta para unirse a ciertos sustrato, la
reacción es veloz. Ese sistema se denomina llave-cerradura. En caso de que la zona
activa de la enzima y el sustrato no sean compatibles, ambas se adaptarán para
funcionar. Ese tipo de reacción, lleva el nombre de encaje inducido.

Una vez que se desarrolla la unión entre enzima y sustrato ocurre una reacción química,
tras las cual se crea una nueva molécula. Esa molécula recién creada se separa de la
enzima y ésta vuelve a estar disponible para catalizar otras reacciones.