UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

FACULTAD DE INGENIERÍA QUÍMICA

BIOQUÍMICA
NOMRE: FÁTIMA CARVAJAL PARALELO: 1

SECUENCIACIÓN DE PROTEÍNAS
1. La degradación de Edman es la degradación por etapas iniciada con fenilisocianato y
completado con ácido, el cual es un procedimiento para secuenciar aminoácidos presentes en
proteínas. Los pasos de la degradación de Edman son: acoplamiento, escisión y conversión. Paso
1: el reactivo fenilisotiocianato reacciona en medio alcalino con el grupo amino terminal para
dar un derivado feniltiocarbamilo del péptido. Paso 2: el derivado de feniltiocarbamilo se
desarrolla en condiciones anhidras que cortan el residuo amino terminal (N-terminal). Paso 3: el
derivado del residuo N-terminal se reagrupa para dar un derivado de feniltiohidantoína.
2. Son dos, el primer logro es que el residuo n- terminal se ha marcado lo cual lo haceidentificable,
mientras que el resto de polipéptido se ha acortado en un residuo. El segundo puede repetirse la
secuencia de reacciones y así determinar el segundo residuo (N-terminal), por repetición puede
leerse un polipéptido largo empezando desde el extremo N-terminal. Con ello se logró aislar una
proteína de insulina bovina.
3. Un secuenciador de proteínas es un instrumento para la determinación automática de secuencia
de aminoácidos en proteínas y péptidos, realiza todas las reacciones de la degradación de
Edman. Acumula a parte el derivado de feniltiohidantohína de cada residuo de aminoácido,
comenzando con el residuo N-terminal, éste tiene una velocidad de 15.4 ciclos por día, el
derivado se identifica por cromatografía de capa fina.
4. La primera proteína secuenciada fue la insulina bovina con un total de 51 aminoácidos, dicha
proteína fue secuenciada por Frederick Sanger a inicios de 1950, Bioquímico y Biólogo británico
ganador del Premio Nobel de Química.
5. Para secuenciar una proteína primero se debe purificar la muestra mediante separación de otras
proteínas, luego comprobar su pureza y determinar si la muestra tiene más de una cadena
polipeptídica, separar los enlaces disulfuro para separar las cadenas realizando dos reacciones
correspondientes: 1. Oxidación con ácido perfórmico y 2. Reducción con B-mercaptoetanol.
Finalmente se separan las cadenas por cromatografía. Para determinar si hay una o varias
cadenas polipeptídicas se lo hace por medio de electroforesis en gel y cromatografía con
dodecilsulfato sódico en presencia y ausencia de agentes reductores. Para identificar los puentes
disulfuro es necesario conocer la posición de las cisteínas ya que en ellas están presentes los
enlaces de disulfuro por medio de reacción con yodo acetato y fragmentación de la proteína. La
cantidad máxima que se puede secuenciar de manera fiable está entre 40-60 residuos.
6. Solubilidad: la solubilidad entre proteínas varía con la fuerza iónica. Centrifugación: la
partícula está sometida a una fuerza centrífuga. Cromatografía: consiste en el paso de una
solución a través de un medio de absorción selectivo. Filtración en gel: es una separación
tomando en cuenta el tamaño molecular. Diálisis y ultrafiltración: sirve para eliminar partículas
contaminantes y concentrar disoluciones. HPLC.