La matriz extracelular: estructura, composición, diferencias relacionadas con la edad,

herramientas de análisis y aplicaciones para la ingeniería de tejidos.

Resumen
La matriz extracelular es una red de soporte estructural formado por diversas proteínas, azúcares y otros
componentes. Influye en un gran número de procesos celulares, incluida la migración, la curación de heridas y
la diferenciación, que son de particular interés para los investigadores en el campo de la ingeniería de tejidos.
Comprender la composición y la estructura de la matriz extracelular ayudará a explorar las formas en que se
puede utilizar la matriz extracelular en aplicaciones de ingeniería de tejidos, especialmente como un andamio.
Esta revisión resume el conocimiento actual de la composición, estructura y funciones de la matriz extracelular
e introduce el efecto del envejecimiento en la remodelación de la matriz extracelular y su contribución a las
funciones celulares. Además, también se revisan las tecnologías analíticas actuales para estudiar la matriz
extracelular y los procesos celulares relacionados con la matriz extracelular.
Palabras clave
Matriz extracelular, envejecimiento, cicatrización de heridas, ingeniería de tejidos, tejido conectivo, andamios
Introducción
La matriz extracelular (ECM) es responsable del mantenimiento físico de todas las células. Sin embargo, el
concepto de que el ECM tiene un papel pasivo que desempeñar en la actividad celular se ha refutado. Ahora
se sabe que desempeña un papel en numerosos procesos celulares, incluida la proliferación, diferenciación y
migración celular. La ECM se puede definir como el componente no celular de los tejidos, que se ha
comparado con el "pegamento" que une a las células en los tejidos conectivos, donde es un componente
importante del tejido. La investigación sobre el ECM ha existido durante décadas, y nuestra comprensión
actual del ECM es que influye en la actividad y las respuestas celulares. La célula se corresponde con el
mantenimiento y montaje de la ECM. Más recientemente, ha habido un gran interés en la biología matricial en
dos áreas principales. En primer lugar, se ha demostrado que la ECM es influyente a nivel biomecánico y
molecular, en particular la importancia de su rigidez y su impacto en los perfiles de diferenciación celular. En
segundo lugar, el papel que desempeña en el anclaje de las células a través de mecanismos como las
integrinas. Estos formarán las secciones principales de la revisión, como se describe a continuación.
Inicialmente, esta revisión explorará el conocimiento actual de la composición y estructura de la ECM. Se
detallarán los componentes clave de proteínas como el colágeno y la fibronectina, a las metaloproteinasas de
la matriz (MMP). Además, se examinará la importancia de las interacciones célula-matriz, particularmente en
relación con la forma en que la elasticidad de la ECM regula el comportamiento celular.
Otra área en la que se ha demostrado que la ECM afecta es el proceso de curación de heridas y las
diferencias aparentes que se producen como resultado de la edad. Numerosos estudios han ilustrado en la
etapa fetal que la reacción a la lesión contrasta notablemente con la respuesta en el tejido adulto. Sin
embargo, el papel de la ECM en esto no se ha abordado completamente; por lo tanto, se detallarán los
cambios relacionados con la edad en la ECM de los tejidos conectivos, como el tendón y la piel, junto con el
músculo esquelético, y las implicaciones del envejecimiento de la ECM en el proceso de curación de la herida.
Ambos temas se están volviendo cada vez más relevantes, principalmente debido al creciente número de
personas de edad avanzada, y en segundo lugar, los problemas asociados con la curación de heridas
reparadoras en adultos siguen siendo una carga importante para los clínicos. La siguiente sección de la
revisión se centrará en las numerosas técnicas empleadas por los investigadores, que proporcionan
información cuantitativa y cualitativa de la ECM. Dichas técnicas incluyen inmunotinción, microscopía de
fuerza atómica (AFM) y microscopía confocal. Se criticarán los principios generales de estos métodos, así
como sus ventajas y desventajas. Adicionalmente, se evaluará su rol en el análisis de la ECM. También se
evaluarán otros métodos menos conocidos para el análisis de ECM, como la espectroscopia Raman y la
microscopía de segunda generación de armónicos (SHGM). La sección final de la revisión detallará cómo se
está explorando el área de ingeniería de tejidos como una solución potencial para alentar la cicatrización sin
cicatrices de las lesiones de tejidos blandos en adultos. El ECM es uno de los factores clave a considerar para
las aplicaciones de ingeniería de tejidos. La investigación se ha centrado en gran medida en la forma en que
la matriz puede manipular la diferenciación de las células madre o en cómo sirve de andamiaje hacia las
células, proporcionando una integridad estructural muy necesaria para el entorno celular.
Composición de la ECM
Proteínas
Se puede considerar que la ECM está construida a partir de múltiples proteínas de la matriz, formando el
componente principal de la ECM (Tabla 1). Son estas proteínas las que proporcionan el apoyo necesario a las
células y tejidos. Las proteínas que constituyen la ECM pueden clasificarse como estructurales o no
estructurales (también conocidas como glicoproteínas), dependiendo de su función. Los ejemplos de proteínas
estructurales incluyen colágenos y elastina, con fibronectina, laminina y tenascina en casos de proteínas no
estructurales. Otros componentes importantes de la ECM incluyen integrinas, factores de crecimiento (GF) y
un grupo de MMP.
Colágenos
El colágeno es la proteína más abundante en el cuerpo y se encuentra acumulado en la ECM de los tejidos
conectivos, como el tendón y la piel. Los colágenos son la forma predominante de proteínas estructurales que
se encuentran dentro de la ECM y no solo proporcionan resistencia a la tracción, sino que también
desempeñan un papel en otros procesos celulares, como la adhesión y la migración. Hay casi tipos de
colágeno que se han distinguido, aunque no todos están aislados de la ECM. Aquí, el colágeno se organiza en
fibrillas para proporcionar la integridad estructural requerida para los tejidos. Específicamente, esta formación
de fibrillas está restringida a los tipos de colágeno I, II, III, V y XI. La disposición de fibrillas imparte resistencia
a la tracción a los tejidos conectivos que se requieren para soportar diferentes esfuerzos mecánicos como la
tensión, el corte y la presión. Hay indicaciones de que la formación de fibrillas de colágeno está estrictamente
regulada por otras moléculas de la MEC, como la decorina y la fibromodulina. En este proceso también se
incluyen los receptores de la superficie celular como las integrinas. Las integrinas se componen de una
subunidad alfa (α) y beta (β) que se combinan para formar un heterodímero; entre los diversos tipos de
integrinas se encuentran cuatro receptores de colágeno conocidos; dos de estos receptores α1β1 y α2β1
están bien reconocidos. Se han establecido las funciones de estos receptores, con α1β1 responsable del
control de la producción de colágeno a través de retroalimentación negativa, mientras que α2β1 tiene el efecto
opuesto de aumentar la síntesis y el recambio de la matriz de colágeno. El colágeno tipo I es la forma
dominante que se encuentra ampliamente en casi todos los tejidos, particularmente en los tendones y la piel.
Las otras formas de colágeno ocurren en áreas definidas, por ejemplo, el colágeno tipo II se encuentra en el
cartílago y la córnea, mientras que el colágeno tipo III es la forma principal dentro de las paredes de los vasos
sanguíneos. El colágeno es producido no solo por los fibroblastos sino también por las células endoteliales y
las células epiteliales.
Elastina
La elastina es la otra proteína estructural, con su papel estrechamente relacionado con el colágeno.
Proporciona tejido, como la dermis de la piel, con la capacidad de recuperarse del estiramiento continuo, junto
con las glicoproteínas, que incluyen la fibrilina y la fibulina. Sin embargo, en los tendones, solo forma
aproximadamente el 2% de su peso seco. A pesar de esto, desempeña un papel crucial al permitir que la
estructura de rizo del tendón se estire y retroceda, lo que es crucial para la función del tendón y otros tejidos,
como los vasos arteriales. Su estructura está compuesta por subunidades de tropoelastina individuales que
están reticuladas con una capa exterior de microfibrillas de fibrilina que forman una fibra elástica.
Fibronectina
La fibronectina se ha estudiado en menor grado que el colágeno; está ubicado dentro de la membrana basal
(BM) de la ECM y se ha determinado que tiene un papel clave tanto en la adhesión celular como en la
respuesta de la cicatrización de la herida a la lesión. Además, la fibronectina es crítica para otros procesos in
vivo, como el desarrollo embrionario, ya que se ha observado que la ausencia de fibronectina es fatal en
ratones. La proteína existe en dos formas diferentes, ya sea como plasma que circula en la sangre y es uno
de los primeros componentes entregados por el plasma sanguíneo al sitio de la lesión o como una proteína
celular creada por los fibroblastos. La fibronectina se organiza en una malla de fibrillas similares al colágeno y
está vinculada a los receptores de la superficie celular (integrinas). Se expresa por varios tipos de células y no
es exclusivo de los tejidos conectivos. La fibronectina se produce en forma de un dímero unido por disulfuro
que se puede descomponer en subunidades, de las cuales hay tres tipos diferentes (tipos I, II y III) que se
repiten dentro de cada subunidad. La integrina α5β1 es el principal receptor involucrado en el proceso de
ensamblaje de la matriz de fibronectina que junto con la región RGD (abreviatura de la secuencia tripeptídica
de Arg-Gly-Asp) de la fibronectina promueve la unión de las células a la proteína. La matriz de fibronectina
está asociada con el citoesqueleto de actina de las células a través de la actividad de la integrina. Esta
conexión es clave para la formación exitosa de la matriz y el progreso se puede rastrear fácilmente a través de
la tinción inmunofluorescente de las células. Tras la formación, la fibronectina se convierte en fibrillas que
pueden diferir ampliamente en su grosor entre 10 y 1000 nm.
Lamininas
Las lamininas son otro tipo de glicoproteína, con una estructura trimérica. Están formados por tres cadenas
diferentes, α, β y γ que existen en varias formas genéticamente distintas. A través de la evolución, han
avanzado desde un único heterotrímero de laminina dentro de organismos multicelulares bajos hasta un
exceso de 16 isoformas triméricas únicas en vertebrados complejos. Primero fueron reconocidos como un
componente de la ECM del sarcoma murino de Engelbreth-Holm-Swarm (EHS) (Matrigel). Están implicados
en la adhesión celular, expresados por varios tipos de tejidos que incluyen tanto células musculares como
epiteliales. Las lamininas desempeñan un papel vital en varios procesos celulares, incluida la diferenciación y
la migración a través de sus integrinas, e interceden entre las células y la matriz subyacente, es decir, la BM
en la que residen. Las lamininas se encuentran entre las primeras proteínas de la ECM que aparecen en los
embriones. Como se mencionó, son cruciales para la diferenciación, en la medida en que un defecto en los
genes que codifican para lamininas puede tener resultados fatales en el embrión o manifestarse como
condiciones graves que afectan a múltiples órganos. Esto se apoya en el hecho de que las lamininas
desempeñan un papel importante en diferentes tejidos, como los nervios y los vasos sanguíneos.
Tenascinas
Las tenascinas son un grupo de proteínas ECM y existen como cinco manifestaciones diferentes, TN-C, TN-R,
TN-W, TN-X y TN-Y. Las tenascinas se encuentran típicamente dentro de los tejidos conectivos donde se
requiere carga, aunque también ocurren dentro de la piel y el cerebro. En consecuencia, los niveles de
tenascina se han relacionado con la actividad mecánica. Su expresión también está influenciada por los
cambios provocados por la enfermedad y el desarrollo. Junto con esto, la ausencia de tenascina-C interfiere
con los procesos de regeneración, ya que parece estar regulada al alza dentro de la matriz interina después
de una lesión; por lo general, no se expresa en "tejidos adultos normales".
Otros componentes
Factores de crecimiento (GFs)
El ECM ha sido referido como un 'reservorio' para GFs; una serie de componentes de ECM alteran las
acciones de los GF dentro de las rutas celulares en consecuencia. Esto será discutido brevemente aquí, sin
embargo; varias revisiones completas sobre GFs se pueden encontrar en otra parte. El factor de crecimiento
endotelial vascular (VEGF), el factor de crecimiento de fibroblastos (FGF) y el factor de crecimiento
transformante β (TGF-β) son ejemplos de GFs que están vinculados a la MEC a través de heparán o heparan
sulfato. Los GF se activan mediante una variedad de procesos (no necesariamente en forma soluble), incluida
la cicatrización de heridas y la remodelación de tejidos. Como se mencionó, el estímulo mecánico induce la
proteína tenascina-C; ha habido evidencia de que las FG también son responsables de su activación junto con
la estimulación mecánica. El papel crucial de las GF en la curación de heridas ha sido reconocido por los
investigadores, como lo demuestra el interés en explorar cómo pueden impactar positivamente en la
reparación de tendones en adultos. Sin embargo, las GF son vitales para el desarrollo y la diferenciación de
muchos otros tipos de tejidos; Se pueden vincular a los tejidos con sus nombres. Por ejemplo, VEGF estimula
la formación de vasos sanguíneos y el nervio GF está involucrado en el crecimiento de las neuronas.
Metaloproteinasas de matriz (MMPs)
Las MMP son el grupo clave de enzimas proteasas involucradas en la desintegración de la MEC. En la
actualidad, se han identificado docenas de MMP; son efectivos en su capacidad para descomponer la matriz,
ya que "se superponen en la especificidad del sustrato". Este desglose de la matriz forma parte de la
remodelación en curso del ECM. Este proceso de transformación es crítico para que la ECM de muchos
tejidos se someta y, por ejemplo, se produce durante la neovascularización y la remodelación ósea. Cuando
se produce un aumento en la actividad de citoquinas y GF como resultado de la reparación del tejido, las MMP
se activan. Como las acciones de las MMP son perjudiciales para la ECM, están reguladas de manera estricta
mediante tres mecanismos: principalmente al administrarlas en la transcripción, al preservarlas en un estado
de reposo antes de la activación y, finalmente, tener inhibidores de tejido de las metaloproteinasas (TIMP)
para contrarrestar daños no justificados a la matriz.
Estructura y función del ECM. Figura 1
Los diferentes componentes de la ECM se
organizan en una estructura tridimensional
(3D) reconocible, que se puede dividir en
dos formas principales, el BM y la matriz
intersticial. Aunque existen diferencias entre
estas dos formas, el esquema estructural
básico es similar. Varios colágenos forman
el marco de ambos y las proteínas no
estructurales se unen a este andamio,
comunicándose con las células circundantes
a través de integrinas (Figura 1).
Membrana del sótano (BM)
Los elementos principales del BM incluyen
el colágeno tipo IV, las lamininas y la fibronectina, la última de las cuales equipa al tejido que lo recubre con
cierta resistencia a la tracción. Se sabe que es más densa y "menos porosa" que la matriz intersticial.
Perlecan es un importante proteoglicano de sulfato de heparano (HSPG) de la unión de BM a FGF y VEGF, lo
que influye en los procesos angiogénicos. Por lo tanto, el BM se encuentra en los vasos sanguíneos, además
de los tejidos epiteliales y endoteliales, formando una matriz altamente organizada, con el epitelio
"críticamente dependiente" del BM para llevar a cabo su función esperada. Las integrinas entre el BM y las
celdas anteriores transmiten mensajes sobre la "forma y motilidad de las celdas".
Matriz intersticial
La matriz intersticial ocurre en lugares donde se encuentra el BM; sin embargo, además, también aparece
entre las células del tejido conectivo, como los tenocitos (dentro del tendón). Los elementos principales que
forman esta ECM incluyen colágenos, elastina y fibronectina, que crean un "gel amorfo 3D". A pesar de que
los colágenos constituyen la mayoría de las proteínas fibrosas dentro de la matriz, es la fibronectina la que
dicta la organización de la estructura de la matriz. Cada tejido dentro del cuerpo tiene su propio ECM distintivo
que difiere tanto en la composición como en las características topográficas. El ECM ahora se reconoce como
un entorno activo, que experimenta constantemente cambios en su composición y estructura. Esto ocurre en
respuesta a las acciones de las células circundantes. En consecuencia, la comunicación entre las células y el
ECM es esencial para comprender cómo el ECM y las células aprenden a adaptarse entre sí.
Funciones de la ECM
Hay varias funciones que realiza el ECM (Figura 2) .52 Por ejemplo, su papel en la migración celular es
complejo, ya que puede proporcionarse como un sitio de anclaje. El anclaje al BM es crítico para el proceso
de división celular en las células madre. Además, puede ayudar o dificultar la migración de las células al
actuar para facilitar el seguimiento de la migración o actuar como un obstáculo para la migración de las
células. Estas funciones surgen de las características físicas del ECM. Las propiedades bioquímicas de la
ECM le permiten influir directa e indirectamente en la forma en que las células se interrelacionan con su
entorno a través de diferentes vías de señal, incluido el comportamiento como un reservorio para las
moléculas de señalización de GF. Los componentes particulares de la ECM, como los proteoglicanos, se
unirán y los GF se convertirán en co-receptores de baja afinidad para la señalización o en los presentadores
de señales y tendrán un impacto en las comunicaciones entre las células. Otra forma en la que el ECM pasa
las señales a las células es a través de fragmentos funcionales que primero han sido gestionados por MMP.
Recientemente, las propiedades biomecánicas de la ECM han sido de interés específico para los
investigadores y la forma en que estas propiedades cambian el comportamiento celular en respuesta al grado
de elasticidad de la ECM, especialmente el proceso de diferenciación celular. Esto se explorará con más
detalle más adelante en la revisión.
Papel de la mecanobiología
La relación entre las células y la matriz subyacente se conoce comúnmente como mecanobiología. Hay varios
componentes diferentes involucrados en estas interacciones. La principal forma de comunicación entre las
células y la ECM es a través de adhesiones focales. Se pueden dividir en dos categorías diferentes, proteínas
del citoesqueleto que incluyen talina y filamina y proteínas reguladoras como la quinasa y la paxilina. Las
adherencias focales son características de las
células sembradas en sustratos rígidos, mientras
que los complejos de adhesión dinámica ocurren
con las células en sustratos más blandos. Estos
complejos de adhesión dinámica se producen
durante la migración celular en fases de formación
y desmontaje, ya que el borde de ataque de las
células (lamellipodia) impulsa a las células hacia
adelante. Una vez que finaliza la migración celular,
los complejos de adhesión dinámica se desmontan
y las células comienzan a formular adhesiones
focales más estables y visibles. Las adhesiones
focales proporcionan el vector para transmitir
señales mecánicas a las células desde el ECM. Se
sabe que las células responden en consecuencia
a esta tensión mecánica ya sea aumentando o
limitando la producción de ECM, alterando su estructura citoesquelética y reordenando las fuerzas que
ejercen. Los principales receptores que transmiten estas señales entre las células y la ECM son las integrinas.
Integrinas
La unión de las células a una matriz particular está determinada por "patrones de expresión de integrina
específicos". Esto se lleva a cabo mediante la unión de integrinas a proteínas de la MEC, como la fibronectina;
estos ligandos se unen a los "dominios extracelulares" de las integrinas. Las integrinas se clasifican como
heterodímeros transmembrana y están implicadas en varias vías de señalización celular para procesos
celulares como la propagación y la motilidad. A medida que las integrinas están vinculadas con el
citoesqueleto de una célula, se ha llamado la atención sobre su papel en la estimulación mecánica de las
células, y los investigadores sugieren que actúan como "sensores de estiramiento", lo que provoca que las
vías de señalización se activen a través de diferentes mecanismos. Por ejemplo, "fosforilación de proteínas de
enlace intracelular o lipídicos segundos mensajeros y pequeñas GTPasas". También se ha descrito que
ofrecen "continuidad mecánica" entre el entorno interno y externo de las células.
A pesar de no ser catalizadores en sentido estricto, las integrinas forman parte de una red de otros
componentes de la matriz que están involucrados en la "transducción de fuerzas mecánicas", incluidas las
moléculas de señalización de enlistamiento y provocación tales como las proteínas G, FAK, tirosina quinasas
receptoras (RTK) y proteína quinasas activadas por mitógenos (MAPK); además de proteínas de adhesión
focal, por ejemplo, vinculina y talina. Recientemente, las proteínas enlazadoras talin y kindlin han sido
identificadas como responsables de desencadenar la actividad de la integrina. Talin está involucrado en el
paso inicial de activación de las integrinas que de otro modo están inactivas y se requiere kindlin para
asegurar la "activación máxima de la integrina".
Citoesqueleto
Crítico para esta red es el citoesqueleto celular, que se ajusta de acuerdo con las fuerzas mecánicas ejercidas
sobre las células por el ECM. El citoesqueleto está formado por varios microfilamentos y microtúbulos. Los
microfilamentos están compuestos de actina y tienen una relación fluida con los constituyentes
correspondientes del entorno intracelular. La importancia de las interacciones célula-matriz y su participación
en la mecanotransducción de las células ha aumentado con los años desde que se descubrieron
originalmente. Su papel vital en muchos procesos ha sido destacado; no solo son necesarios para procesos
normales como el desarrollo, sino que además tienen una función que desempeñar en el avance de
enfermedades como el cáncer. Ahora se sabe que la elasticidad de la matriz influye en la diferenciación de las
células madre hacia linajes particulares y las interacciones célula-matriz son fundamentales para descubrir los
pasos de este proceso.
Cómo se altera el ECM de las células con la edad.
A medida que las células experimentan naturalmente cambios relacionados con la edad, la BM subyacente en
muchos tejidos se deteriora. Esto se debe a los efectos de la formación de menos proteínas BM y al aumento
de los niveles de MMP, lo que hace que se descompongan más proteínas. Junto con esto, las células
experimentan niveles más altos de fibronectina, GF, interleucinas y citoquinas. Muchos investigadores han
observado que las células envejecidas se ven impedidas dentro del ciclo celular a la proliferación; Esto ha sido
vinculado al acortamiento de los telómeros. Al igual que con la elastina, la disminución en la cantidad de
colágeno en los tejidos se asocia con el envejecimiento, lo que debilita la "integridad y fortaleza del tejido". La
mayor rigidez observada en el envejecimiento del tejido se ha atribuido a una mayor e innecesaria reticulación
del colágeno, lo que resulta en propiedades biomecánicas comprometidas y, por lo tanto, "compromete la
organización y la función de la ECM". Además, la disposición de las fibras de colágeno (tipo I) se vuelve
menos organizada y más suelta y fragmentada. Esto se observa en la mayoría de los tejidos envejecidos,
particularmente en la piel. La alteración en la disposición de las fibras de colágeno hace que las células sean
menos capaces de unirse a la ECM, lo que tiene un impacto negativo en las interacciones entre la célula y la
matriz. Estas diferencias en la organización de las fibras de colágeno tipo I se han observado en tendones
extraídos de colas de ratones adultos jóvenes y viejos. Además, se han detectado alteraciones en la
composición de la ECM del tendón de la cola de rata por su bajo contenido de colágeno y altamente celular en
ratas jóvenes después del nacimiento y 3 meses de edad. En ratas más viejas, el contenido de colágeno del
tendón es mucho mayor y esto hace que el tejido muestre una mayor rigidez. Al igual que con otros tejidos
conectivos, el equilibrio entre la síntesis de la matriz y la ruptura de la matriz en la piel cambia hacia la ruptura
de la matriz con el proceso de envejecimiento. Esto se demuestra por una pérdida en la elasticidad de la piel,
también conocida como arruga. La pérdida de elasticidad se debe a la acción de las MMP que degradan los
principales constituyentes de la ECM, como el colágeno de los tipos I y III, los proteoglicanos y los
glicosaminoglicanos (GAG). La pérdida de estos componentes de la MEC junto con el aumento de la
reticulación de los colágenos produce una reducción de las propiedades biomecánicas del tejido con la edad.
En contraste con esto, se ha demostrado que los niveles de fibronectina (FN) aumentan con la edad, como se
demostró con la fibronectina aislada de tejido de piel de ratones. Esta alteración en la expresión de la
fibronectina tiene un efecto perjudicial sobre la unión de la integrina-ECM, lo que afecta la capacidad de las
células para responder al cambio ambiental, especialmente con la edad. Dentro del músculo esquelético, la
ECM juega un papel crítico en la transferencia de fuerza y respuesta del tejido a la carga mecánica. Los
estudios en animales realizados en ratas reflejaron hallazgos similares a otros tejidos envejecidos, en que el
contenido de colágeno del músculo esquelético de las extremidades aumentó exponencialmente con la edad.
En contraste con esto, estos estudios, cuando se repitieron en humanos, mostraron que el contenido de
colágeno del músculo esquelético se mantuvo relativamente estable con la edad. Esto resalta que los cambios
relacionados con la edad dentro de la ECM varían según los tipos de tejido y la ECM se modifica de distintas
maneras entre las diferentes especies. Más recientemente, ha habido un renovado interés en el tema;
Primero, esto puede vincularse con el intento de comprender la relación concebible que vincula los cambios
en las células relacionados con la edad y el avance de enfermedades como el cáncer. Segundo, investigar las
diferencias detrás de la cicatrización de la herida reparadora en adultos, en contraste con la cicatrización de la
herida regenerativa como se ve en el feto y cómo la disminución relacionada en la ECM de los tejidos blandos
influye en estas disparidades en la curación de la herida.
Cómo el envejecimiento de la ECM afecta la cicatrización de heridas.
La ECM experimenta una multitud de cambios durante la cicatrización de la herida en un adulto desde los
pasos iniciales que siguen inmediatamente a la lesión hasta el establecimiento del tejido cicatricial colágeno
que señala el final del proceso de curación. La curación de heridas en un feto ocurre de manera opuesta, y
esto se ha confirmado en muchos tipos de tejidos, especialmente en la piel, pero también en el tendón, el
cartílago articular y el hueso. Se han observado diferencias en los modelos de curación de adultos y fetos en
términos de la reacción inflamatoria, los niveles de GF y la expresión génica de proteínas junto con los
componentes de la MEC. Se confirma que esta capacidad regenerativa del tejido fetal es inherente al tejido.
Por lo tanto, los cambios relacionados con la edad en el ECM y su impacto en las interacciones célula-matriz
son vitales para comprender.
Curación de Herida fetal
La mayor parte de la evidencia reunida sobre la curación regenerativa en fetos se ha centrado en la piel. En
los modelos fetales, la dermis y la epidermis se restauran completamente después de la lesión, incluida la
reparación completa de la estructura, la fuerza y la función de la ECM. Además, existen niveles más altos de
colágeno tipo III que de colágeno tipo I en la piel del feto, donde representa entre el 30% y el 60% de la suma
total de colágeno, en comparación con la piel adulta que contiene entre el 10% y el 20% del colágeno tipo III. .
Junto con las variaciones en la cantidad de colágenos presentes, se han observado otras diferencias
relacionadas con la edad entre los procesos de curación de heridas. El ácido hialurónico (HA) está presente
en niveles altos en las heridas de la piel del feto, pero está presente durante más tiempo en las heridas de la
piel del adulto. La presencia de HA es importante para permitir la migración y la proliferación de múltiples tipos
de células después de una lesión en un feto. HA también se considera significativo para la síntesis de
colágeno; esto se ve corroborado por la reducción del tejido cicatricial que se forma durante la cicatrización de
heridas en adultos cuando los niveles de HA aumentan. De manera similar, los niveles de diferentes
proteoglicanos, como la decorina y la fibromodulina, se han relacionado con el fenotipo cicatrizado que se
observa en la piel del adulto curado y con el fenotipo sin cicatrices de la piel reparada fetal. La menor
expresión de decorina en la piel adulta está relacionada con la formación de cicatrices, y se observan niveles
más bajos de fibromodulina en las heridas adultas que en las heridas fetales. Esto se verifica por una
reducción en la extensión de la síntesis de fibromodulina con la edad. Además, la proporción de actividad de
MMP a TIMP parece ser clave para comprender la disparidad entre cicatrización y cicatrización sin cicatrices.
En las heridas cutáneas fetales, el nivel de MMP a TIMP es mucho más alto, particularmente
MMP-1 y MMP-9. En contraste, se expresan más MMP-2 y menos TIMP durante la curación de heridas en
adultos.
Curación de heridas en adultos
En adultos, el ECM desempeña un papel activo en la fase proliferativa y la fase de remodelación del proceso
de curación de la herida. Durante la fase de proliferación, los fibroblastos inician la deposición de la ECM,
luego de su migración hacia el sitio de la herida. Esto se conoce como la matriz provisional. Tenascin-C de la
familia tenascina de proteínas matricelulares desempeña un papel clave en el fomento de los fibroblastos en
el sitio de la lesión para generar la matriz provisional compuesta de fibrina y fibronectina. La matriz provisional
permite que ocurra la adhesión y migración celular y el tejido de granulación reemplaza a la matriz interina.
Este tejido de granulación es abundante en fibronectina y proporciona un sistema vascular para que el
colágeno se deposite. El colágeno forma el componente principal de la ECM final y se conoce comúnmente
como tejido cicatricial. La matriz de colágeno se forma en la etapa de remodelación y el aumento de la
reticulación del colágeno da como resultado una matriz más rígida. Aunque el colágeno es crucial para
restaurar la estructura y la función del tejido en el sitio de la herida, el exceso de colágeno es perjudicial para
el tejido, causando una estructura desestabilizada debido a la presencia de una cicatriz fibrótica que
reemplaza al tejido anterior. Este tejido cicatrizado es un problema para los médicos, ya que la función del
tejido se ve obstaculizada y, en la actualidad, no existe una solución exitosa para restaurar las propiedades
anteriores del tejido curado. Por lo tanto, comprender los cambios en la ECM que se producen con la edad
que resultan en los diferentes mecanismos de curación entre el adulto y la curación fetal es fundamental para
desarrollar una forma de curar las heridas del adulto a través de un proceso regenerativo. Revelar estas
diferencias relacionadas con la edad en el ECM podría resultar en la creación de nuevos métodos a través de
técnicas de ingeniería de tejidos para alentar la reparación de lesiones en adultos sin formación de cicatrices.
Esto se explorará con más detalle en una sección posterior.
Técnicas para analizar la ECM.
Existen varias técnicas que pueden utilizarse para analizar la ECM; Algunos de estos están bien establecidos,
por ejemplo, microscopía confocal y microscopía electrónica. Se están explorando otros métodos, como la
espectroscopia Raman, como nuevas formas de examinar la estructura y composición de la ECM, que
requieren poca o ninguna preparación de la muestra. Estos enfoques permiten examinar la composición,
estructura y propiedades biomecánicas de la MEC. Una selección de estos se detallará aquí con un breve
resumen de sus principios básicos y lo que pueden revelar sobre el ECM.
AFM
El módulo de elasticidad (E) es la forma estándar de calcular la cantidad de estiramiento de un sustrato en
respuesta a un nivel dado de estrés. Los investigadores han empleado AFM en los últimos años como un
método confiable para medir las propiedades mecánicas en términos de rigidez (módulo de Young) de una
matriz. Se ha prestado atención a la forma en que las propiedades mecánicas de la ECM influyen en los
perfiles de diferenciación de las células madre mesenquimales (MSC). Más recientemente, los investigadores
confirmaron el AFM como un método válido para monitorear la diferenciación de las células madre en
tenocitos, midiendo los cambios que ocurrieron en el módulo elástico a nivel celular. Se ha demostrado que
las propiedades mecánicas de un sustrato tienen consecuencias en la 'contractilidad, motilidad y propagación'
de la célula, por ejemplo, las células en un sustrato de gel suave forman 'adhesiones dinámicas', mientras que
en sustratos más rígidos formulan 'adhesiones focales estáticas' . La técnica funciona a través de dos
componentes principales, un sensor y un detector. El detector calcula la reacción del sensor a las fuerzas;
este sensor tiene la forma de una viga en voladizo que responde a las fuerzas que recibe al contorsionarse, y
el detector mide la desviación de la punta del voladizo. Además, hay tres modos clave de operación para
AFM, contacto, modo sin contacto y modo de toque. Para el interés de esta revisión, solo se discutirá el modo
de toque. El modo Tapping fue desarrollado específicamente para superar los problemas con el modo de
contacto y las muestras biológicas, incluidas las muestras dañadas por la punta del voladizo. Es este modo de
AFM que se utiliza para calcular el módulo de elasticidad de las muestras de ECM, durante el cual el contacto
entre la punta y las muestras se mantiene al mínimo, evitando así daños a sustratos más blandos. Además, se
pueden analizar muestras con superficies húmedas o secas. Otras ventajas de AFM en el análisis de ECM
incluyen la capacidad de tomar medidas en tres ejes separados (x, y, z) que proporcionan imágenes en 3D de
una superficie de muestra.96 También es una técnica que no requiere ninguna preparación previa de la
muestra o entorno particular en Para operar como un vacío. Se ha convertido en una herramienta vital para
revelar información sobre el estudio de la mecanobiología y la relación entre las células y la rigidez de la ECM.
Por ejemplo, se ha empleado con éxito para determinar los cambios que se producen en el módulo elástico de
las células de osteoblastos, como resultado de la adhesión a diversas proteínas de la MEC, como la FN.
Además, se utilizaron experimentos de imágenes de AFM para demostrar cómo la unión a diferentes sustratos
causó este aumento en el módulo de elasticidad. Por ejemplo, se descubrió que el recubrimiento de
osteoblastos en FN se asociaba con una amplia formación de fibra y la remodelación del citoesqueleto, lo que
conducía a un aumento en el módulo de osteoblastos.
Inmunotinción
La inmunotinción de la MEC adopta dos formas principales, ya sea como tinción inmunohistoquímica (IHC) o
tinción inmunocitoquímica (ICC). La inmunotinción es una forma cualitativa efectiva de evaluar la presencia de
proteínas individuales expresadas dentro de la ECM. Se basa en relaciones específicas de anticuerpos y
antígenos a través de una etiqueta de visualización para identificar la expresión de proteínas definitivas. El
método de preparación de la muestra difiere entre las dos técnicas; Las muestras de tejido para IHC deben
incrustarse en resina o parafina y cortarlas en secciones delgadas antes de la tinción. Una de las formas más
comunes de realizar la tinción con IHC es usar la tinción con hematoxilina y eosina (H&E). A lo largo de la
literatura, hay varias proteínas que se examinan, por lo general incluyen colágeno tipo I, laminina y
fibronectina. En contraste con esto, para examinar las proteínas de la ECM a nivel celular, se emplea la tinción
ICC. La tinción de IHC se ha ejercido con éxito en los fibroblastos de tendón para determinar los niveles de
expresión del antígeno nuclear de células en proliferación (PCNA) y la actina del músculo liso α (α-SMA), que
se liberan al curar los fibroblastos del tendón. Los fibroblastos son responsables de sintetizar la ECM durante
el proceso de curación de la herida. IHC pudo medir el aumento de los niveles de PCNA y post-SMA después
de la lesión. Además, IHC se ha utilizado para examinar la composición de la ECM en arterias coronarias
humanas donde, por ejemplo, se ha detectado que el colágeno tipo IV está subyacente en el endotelio
equivalente a la posición de la lámina basal. Además, detectó eficazmente la presencia de proteoglicanos
como el biglicano y la decorina, que son componentes cruciales de los tejidos en los vasos sanguíneos y
están implicados en la enfermedad vascular. La tinción ICC examina la composición de la ECM a nivel celular.
De manera similar a IHC, la tinción ICC se llevó a cabo en fibroblastos de tendón observando los niveles de
expresión de PCNA y α-SMA, aunque las células del tendón se inspeccionaron según el principio básico. Esto
permitió la demostración de las diferencias en los fibroblastos de los tendones que se sintetizaron desde un
tendón intacto hasta un tendón posterior a la lesión que sufrió el proceso de curación de la herida.
Recientemente, esta técnica de tinción se ha utilizado para observar las modificaciones en la expresión de
proteínas de las proteínas de la matriz del cartílago en los tenocitos durante el desarrollo, que incluyen
colágeno tipo I y agrecan.
Microscopia confocal
La microscopía confocal se usa típicamente junto con la inmunotinción; Uno de los aspectos más importantes
de esta técnica de imagen es que permite el análisis 3D de muestras. Un microscopio confocal genera
imágenes nítidas de una muestra que aparecerían borrosas si se vieran a través de un microscopio de luz
convencional. Estas imágenes en 3D se atribuyen a la capacidad del microscopio confocal para reducir
significativamente la luz de los planos fuera de foco. Además, esto resulta en una resolución lateral mejorada.
Es particularmente útil para examinar la arquitectura 3D del ECM a través de imágenes bidimensionales (2D)
apiladas en z. La microscopía confocal se usó para examinar la composición general y la estructura de la
ECM sintetizada con fibroblastos mediante la obtención de imágenes apiladas en z para mostrar la
conformación, distribución y orientación de proteínas como FN, colágeno tipo VI y elastina. Estas imágenes
fueron bastante detalladas, destacando las proyecciones de los ejes x e y de las imágenes apiladas en z
donde se mostraba la superposición espacial entre las proteínas. Además, se detectaron diferencias
cuantitativas de las diversas redes de proteínas (red de elastina y red FN). En general, estos hallazgos
demostraron que la microscopía confocal se puede utilizar no solo para determinar la estructura de los
componentes de la ECM, sino también su papel en la organización de los componentes de la ECM. Esto
permite construir imágenes 3D de alta resolución de la ECM y sus diversos componentes, lo que permite a los
investigadores discernir más información sobre el entorno de la ECM, a saber, la organización y distribución
de proteínas y determinar el nivel de deposición de proteínas. Por lo tanto, podría proporcionar información
estructural importante sobre cómo este entorno se ve alterado por cambios relacionados con la edad.
Espectroscopia tándem mass
La espectroscopia de masas en tándem o la espectroscopia de masas / espectroscopia de masas (EM / EM)
es una forma cada vez más popular de caracterizar el perfil de las proteínas de la MEC mediante el examen
de los péptidos individuales que las constituyen y puede considerarse una técnica cuantitativa complementaria
de la inmunotinción. MS / MS incorpora una combinación de dos espectrómetros de masas donde el primer
espectrómetro selecciona una masa individual (precursor), que representa un analito en la mezcla. Los iones
seleccionados en masa pasan posteriormente a través de una región donde se activan para producir iones de
fragmentos (productos), que se llevan a cabo a través de la colisión de iones con un gas neutro en un proceso
denominado activación de colisión. El espectrómetro de masas de la segunda etapa discierne los iones de
fragmentos en función de la masa, generando así un espectro de MS / MS, que consiste simplemente en
iones de producto del precursor seleccionado. Puede proporcionar un análisis detallado de las proteínas
superpuestas que se comparten entre diferentes fuentes de ECM y resaltar cualquier proteína única presente
en casos individuales.107,108 En términos de resultados cuantitativos, se utilizó MS / MS en humanos para
detectar 300 péptidos, donde 25 de ellos exhibieron el existencia de proteínas ECM como FN, fibrilina y una
proteína ECM conocida como frasl. Se sabe que Frasl tiene un papel esencial en la estructura y señalización
celular.109 MS / MS se ha empleado para detectar otras proteínas ECM a través de la identificación de
péptidos que incluyen fibrilina-1, laminina, elastina y lumican, que es un proteoglicano de sulfato de queratina.
Microscopía electrónica de transmisión / microscopía electrónica de barrido
La microscopía electrónica de transmisión (TEM) y la microscopía electrónica de barrido (SEM) son técnicas
de microscopía opuestas que funcionan según el principio de usar electrones para visualizar un sustrato.
Brevemente, SEM se enfoca en la superficie para construir una imagen 3D de la topografía de un sustrato;
mientras que en TEM, como su nombre indica, se trata de transmitir electrones en una muestra, que pasan
directamente a través de proporcionar una imagen 2D de la estructura interna. En el análisis típico de la ECM,
los investigadores han preferido utilizar TEM para ver la ultraestructura. SEM se ha empleado para investigar
el ECM del tendón de cola de rata. La conformación de la ECM en el tendón se pudo detectar donde los GAG
se vieron entrelazados con las fibrillas de colágeno. Además, también podría demostrarse que mientras
algunos filamentos de GAG simplemente interactuaban con una fibrilla, otros hacían contacto con muchas
fibrillas simultáneamente. SEM también se ha utilizado con eficacia para observar la forma y organización de
la laminina y la FN donde, por ejemplo, se encontró que la laminina se formaba como una "cruz rígida
asimétrica que consiste en un largo y tres brazos cortos idénticos" y una FN que consiste en dos idénticos
Cadenas con cadenas peptídicas únicas. Además, el SEM se ha utilizado con éxito para detectar la síntesis y,
por lo tanto, la imagen del material ECM. TEM se ha aplicado de manera efectiva para cuantificar las
diferencias entre geles de colágeno 3D jóvenes y envejecidos en los tendones de la cola de los ratones. Se
usó para evaluar directamente las modificaciones sustanciales que ocurren en el diámetro y la densidad de las
fibrillas como resultado de la transición de un fenotipo de ratones jóvenes a un fenotipo de ratones
envejecidos. Ambas cantidades mostraron una disminución con la edad, destacando la incapacidad del
colágeno senescente para formar una matriz 3D en comparación con el colágeno joven. 58 Además, estos
hallazgos fueron corroborados por evidencia previa donde la reducción en la densidad de las fibrillas de
colágeno corresponde a la resistencia a la tracción del colágeno polimerizado in vitro. Estos son algunos
ejemplos del uso extensivo del TEM para caracterizar muchos aspectos del ECM, así como las modificaciones
que experimenta.
Zimografía de sustrato de gelatina
La zimografía de sustrato de gelatina (GSZ) se usa generalmente en la detección de MMP, en particular MMP-
2 y MMP-9. Las MMP son enzimas que se sabe que degradan la ECM; este procedimiento aprovecha el
hecho de que las MMP se reconocen por su peso molecular y la "degradación de su sustrato preferencial".
Este método le permite a uno determinar si las MMP están en forma activa o latente. En general, el sustrato
más frecuentemente empleado es la gelatina para MMP-2 y MMP-9.19. Se basa en la electroforesis en gel de
dodecil-sulfato de sodio-poliacrilamida (SDS-PAGE), que consiste en un sustrato copolimerizado con gel de
poliacrilamida para observar Actividad enzimática basada en la separación de pesos moleculares. En general,
se considera que la zimografía de sustrato es el método más adecuado para detectar la actividad de MMP a
partir de una variedad de muestras biológicas, ya que puede usarse para seleccionar medicamentos y, como
se mencionó, distingue las MMP latentes de las MMP activadas. Sin embargo, tiene un protocolo bastante
largo (2 días), pero aún así se usa ampliamente para la observación de la actividad MMP
Espectroscopia raman
Una de las mayores ventajas de la espectroscopia Raman es que, a diferencia de todas las técnicas
mencionadas anteriormente, no requiere ninguna preparación previa de la muestra. A pesar de esto, sigue
siendo un método de análisis relativamente nuevo para caracterizar ECM. La espectroscopia Raman se puede
utilizar para evaluar la velocidad de síntesis de ECM y la velocidad de los componentes bioquímicos de la
ECM sintetizada. Su naturaleza no invasiva permite la modulación del crecimiento y la progresión de la ECM
por numerosas células en una serie de materiales de andamios descubiertos a estímulos que incluyen GF y
fuerzas mecánicas. De nuevo, se suele utilizar junto con otros métodos de análisis para confirmar la presencia
de componentes específicos del ECM. El funcionamiento de la espectroscopia Raman se basa en el
tradicional "efecto Raman". La luz incidente o los fotones se dispersan de una muestra de manera inelástica y
se desplazan con poca frecuencia a través de la energía vibratoria distintiva del enlace molecular. Los enlaces
moleculares se analizan simultáneamente mientras se produce un espectro Raman, que actúa como una
"huella digital molecular" que representa los componentes bioquímicos totales de la muestra. Las señales
Raman generadas desde el espectrómetro están correlacionadas linealmente con el número de enlaces
moleculares que se producen en la muestra; De este modo, se pueden obtener datos cuantitativos del
espectro.
SHGM
SHGM funciona sobre la base del "efecto óptico no lineal" como resultado de que los fotones entren en
contacto con una sustancia no lineal y se fusionen para crear nuevos fotones con la mitad de la longitud de
onda y el doble de la frecuencia anterior. Es un proceso de tres niveles y los fotones del segundo armónico se
producen virtualmente al instante para generar una señal clara del segundo armónico que se descarga
principalmente en la dirección hacia adelante. De la misma forma en que la espectroscopia Raman no
requiere preparación de la muestra, la SHGM es una técnica emergente que se ha utilizado de manera
efectiva en otras aplicaciones, como la administración de fármacos, y ahora se está prestando atención a la
identificación de las fibras de colágeno dentro de las células y los tejidos. Se empleó SHGM para demostrar
las diferencias en la distribución del haz de colágeno, la longitud y el empaquetamiento entre la piel normal y
quemar los tejidos cicatriciales. Esto se demostró en tejido dérmico humano, ovino y porcino. SHGM mostró
una resolución aumentada de haces de colágeno individuales en tejido cicatricial. Este estudio fue importante
ya que demostró que la SHGM se puede usar de manera competente para inspeccionar la arquitectura del
colágeno en los tejidos y también se puede realizar sin ninguna tinción previa. SHGM se ha asociado con
varios estudios dermatológicos en la última década. En general, esta técnica es claramente vital y eficiente
para observar las estructuras de colágeno fibrilar en un estado normal y como resultado de los cambios
patológicos que ocurren. En general, existe claramente una amplia gama de técnicas analíticas para la
caracterización en la ECM, que no se limitan simplemente a determinar la composición y estructura, sino que
también se utilizan para determinar las modificaciones que se producen como resultado de enfermedades,
curación de heridas y procesos dependientes del envejecimiento. . Además, estas técnicas a menudo no solo
se usan exclusivamente, sino también junto con otras, ya que algunas pueden proporcionar observaciones
cualitativas, mientras que otras son prominentes en términos de resultados cuantitativos. Además, estas
técnicas varían en términos de su reputación para caracterizar el ECM y cuando se utilizaron para hacer esto.
Algunas de las técnicas más recientes, incluida la espectroscopia Raman, pueden ser incluso más favorables
de usar debido a sus propiedades no invasivas. Sin embargo, esto también depende de la aplicación y del
aspecto del ECM que se requiere caracterizar.
Formas en que se emplea el ECM en ingeniería de tejidos.
Influencia en la diferenciación de MSC.
La importancia de la ECM en la instrucción de la
diferenciación de las células madre se ha demostrado a
nivel orgánico. Sin embargo, la capacidad del ECM para
hacer esto se ve comprometida con la edad. El
envejecimiento de la ECM puede tener efectos
perjudiciales a través de la "degradación proteolítica
desequilibrada y la liberación de radicales libres". Se ha
demostrado que el ECM derivado de MSC jóvenes
muestra niveles significativamente más altos de
expresión de proteínas, en contraste con el ECM tomado
de MSC envejecidos. Es evidente que la edad de los
impactos de ECM en los MSC, ya que los MSC mayores
expresaron una mayor pluripotencia cuando se sembraron en ECM jóvenes. Sin embargo, el mecanismo de
por qué ocurre esto aún no se ha respondido. Recientemente, se ha informado que la ECM sofocada por las
células madre fetales fue superior a la ECM generada por las células madre adultas en el fomento de la
expansión celular y la diferenciación condrogénica. Estos hallazgos indican que la edad de la ECM puede
afectar el comportamiento de las células. Se ha demostrado que muchas otras propiedades de la ECM
influyen en el comportamiento de las células. Los andamios con un diámetro de nanoescala dieron como
resultado que los tenocitos produjeran su propia ECM que se asemejaba a la matriz observada durante el
proceso de curación reparadora. En contraste, los andamios con un diámetro de microescala causaron que
los tenocitos formaran una matriz similar a la observada durante el proceso de curación regenerativa.
Además, se ha indicado que el ECM desempeña un papel importante en diversas actividades celulares,
incluida la migración y proliferación celular. Se ha encontrado que la ECM puede manipular la diferenciación
de las MSC a través de su rigidez con células madre cambiando sus propiedades de acuerdo con el grado de
rigidez del sustrato subyacente. Esto resalta la naturaleza crítica de las señales mecánicas que se transmiten
a las células desde el ECM, y la importancia de la relación entre las células y su entorno para determinar el
compromiso con un determinado linaje celular. Comprender más sobre los mecanismos detrás de esta
relación podría revelar más detalles sobre las diferencias relacionadas con la edad que se muestran durante
el proceso de curación de la herida. Ha habido mucho interés en la influencia de diferentes aspectos de las
características del sustrato sobre la diferenciación de células madre (Figura 3), en particular la rigidez o
elasticidad de un sustrato. Esta relación entre las células y la matriz subyacente se conoce como
mecanobiología. Como se mencionó anteriormente, como parte de su función, el tendón responde a la carga
mecánica. Lo hace de diversas maneras a nivel celular, cambiando su "expresión génica, síntesis de
proteínas y fenotipo". Los componentes involucrados en la mecanobiología de las células y sus interacciones
se detallaron más arriba en una sección anterior. Estos componentes, en particular las fuerzas contráctiles de
la célula, se ejercen a través de su citoesqueleto, utilizando esto para anclar y tirar de un sustrato. Estas
fuerzas contráctiles celulares se involucran en un circuito de retroalimentación con el módulo elástico (E) del
sustrato circundante. Esto se ha demostrado con células en sustratos con una variación en la elasticidad. En
geles blandos (E = 1 kPa), las células se presentaron con adhesiones dispersas, mientras que las células
sembradas en sustratos con una mayor rigidez (E = 30–100 kPa) demostraron fuertes adherencias, similares
a las encontradas en las células unidas al vidrio.
Utilizar como andamio
Existen algunas otras alternativas a la intervención
quirúrgica, como los productos de injerto
fabricados por compañías como DePuy, Zimmer y
Wright Medical. Estos materiales de injerto
fabricados se clasifican como biológicos o
sintéticos (Figura 4). Todos menos uno de los
andamios biológicos disponibles en el mercado se
deriva de una fuente xenogénica, aunque con la
aprobación de la Administración de Alimentos y
Medicamentos (FDA). Estos andamios biológicos
parecen ser más efectivos en el tratamiento de
lesiones del tendón del manguito rotador. Se han
construido andamios sintéticos a partir de
numerosos materiales que incluyen poliéster y
poliacrilamida, aunque se han reportado con un
éxito limitado, debido a problemas con la
reabsorción de los materiales del injerto del sitio de la lesión y la falta de biocompatibilidad adecuada. En
consecuencia, su uso alcanzó su punto máximo hace más de 20 años. La medicina regenerativa se está
convirtiendo cada vez más en una terapia potencial para reemplazar el tejido original, con la ingeniería de
tejidos que proporciona el método para producir construcciones prospectivas para esta terapia. El concepto
implica la implantación de células dentro de una estructura de andamio junto con las biomoléculas requeridas.
Actualmente, hay algunos ejemplos de tales aplicaciones en un entorno clínico, que incluyen la piel artificial y
los materiales de injerto mencionados. Los componentes necesarios para la ingeniería del tejido del tendón
exigen el suministro específico de células, material de andamios y biomoléculas; De particular importancia
para los tejidos vasculares es el tema del transporte masivo de oxígeno y nutrientes.
Conclusión
Esta revisión demuestra que el ECM no es puramente un constituyente no celular dinámico sino que también
es susceptible de modificaciones sustanciales en función del proceso de envejecimiento normal. Sus
componentes regulan diversos procesos que incluyen la proliferación celular, la supervivencia, la
diferenciación y la migración. Además, el ECM también se puede definir como dinámico, ya que está sujeto a
remodelaciones constantes; También la arquitectura 3D del ECM regula las propiedades mecánicas de las
células y es crucial para el contorno de los tejidos conectivos. Los efectos del envejecimiento de la ECM se
han explorado de muchas maneras en varios tejidos conectivos con resultados variables. Por ejemplo, el
consenso general es que el colágeno tipo I disminuye en contenido con la edad en tejidos como la piel,
además de una distribución más desorganizada. Sin embargo, al convertirse la ECM en un tejido altamente
colágeno con la edad, esto tiene implicaciones para las propiedades mecánicas, por ejemplo, un aumento de
la rigidez. Estas modificaciones tienen implicaciones cruciales en numerosos procesos, particularmente para
el proceso de curación de heridas. Las modificaciones relacionadas con la edad, como se mencionó, tienen
implicaciones con la transición de un fenotipo sin cicatrices a cicatrices durante la cicatrización de heridas, lo
que indica que la formación de cicatrices se atribuye a numerosos cambios complejos. Todos los temas
discutidos con referencia a la composición de la ECM, los cambios relacionados con la nutrición y las
propiedades de curación contrastantes en los fenotipos fetal en comparación con el adulto no serían posibles
sin las técnicas analíticas empleadas para examinar la ECM. Se utiliza una variedad de técnicas analíticas
que analizan varias partes de la ECM, desde la observación de las actividades de MMP a través de GSZ
hasta la medición cuantitativa de la rigidez de la matriz a través de AFM. La investigación ha resaltado que la
rigidez de las matrices influye en el linaje de las células madre. Además, las interacciones entre la célula y la
matriz se caracterizan por la rigidez de la matriz con adherencias focales para matrices blandas y adhesiones
dinámicas para matrices rígidas. Además, los tipos de células madre que se sembraron en los andamios se
han investigado predominantemente utilizando MSC con diferentes grados de éxito. Sin embargo, el
conocimiento de los cambios relacionados con la edad en la ECM y sus implicaciones para el proceso de
curación de la herida, así como el potencial de usar la ECM como un andamio para la curación regenerativa,
solo se encuentra en la punta del iceberg. Por lo tanto, la tendencia actual de la investigación en ECM
prevalecerá en las próximas décadas.