Universidad Nacional Autónoma

de México.

Facultad de Estudios Superiores

Zaragoza.

Laboratorio de bioquímica celular y de tejidos 1

Separación y cuantificación de proteinas plasmaticas y

electroforesis de proteinas.

Integrantes:
Badillo Espinoza René Aldhair.
Medina Aguilera Marlon Noel.
Melo Forjas Ariadna Daniela.
Morales Sánchez Paola.

Asesor.
Adriana Hernández.

Grupo:
2451.
Equipo 7.

Fecha de entrega
22 de abril de 2019
Objetivos
● Separar albúmina y globulina a partir de una muestra de sangre.
● Determinar cuantitativamente por medio de una curva estándar la concentración de
proteínas totales, albúmina y globulinas presentes en el plasma por el método de
biuret.
● Separar las proteínas del plasma o suero sanguíneo, mediante la técnica de
electroforesis vertical en poliacrilamida (PASE-SDS).
● Analizar las bandas obtenidas en el gel identificado a qué tipo de proteína
corresponde.

Introducción

La sangre es el fluido corporal más utilizado con fines analiticos. Las proteínas plasmáticas
constituyen un grupo de aproximadamente cincuenta proteínas contenidas en el fluido
sanguíneo. La concentración presente de cada una de las proteínas plasmáticas es muy
variable oscilando desde los 0.01 g / 100 ml, siendo el contenido total de proteínas en el
plasma de 6-8 g/ 100 ml. Las proteínas plasmáticas por su importancia se clasifican en 3
grupos principales: albúmina, globulinas, fibrogeno.
En la presente práctica obtendremos de forma directa la concentración de proteínas totales
y albúmina mediante el método de biuret.
La electroforesis es una técnica de separación molecular en una mezcla por aplicación de
un campo magnético. Las moléculas disueltas se desplazan o migran en un campo eléctrico
a una velocidad determinada por su relación carga-energía.

Resultados

Curva estándar de proteínas totales y albúmina.

 Estándar Observancia (A) Concentración (mg)

3 0.104 0.7

4 0.186 1.4

5 0.262 2.1

6 0.339 2.8

7 0.409 3.5

Problema: Totales 0.248

Problema: Albúmina 0.151

Concentración Patrón : 350 mg / 100 ml

Concentración = Absorbancia / Pendiente

Concentración ( Totales) = 0.248 / 0.115 = 2.15 mg

Factor de dilución 1= V Total / V muestra = 5ml / 0.2 ml = 25

Factor de dilución 2 = 1 ml / 0.5 ml = 2

25 x 2 = 50

2.27 x 50 = 107.54 mg / 1 ml

0.1075 g → 1 ml
10.75 g → 100 ml EXPERIMENTAL
6-8 g / 100 ml TEÓRICO

Concentración (Albúmina) = 0.151 / 0.115 = 1.3130 mg

1.3130 x 25 = 32.82 mg / 1 ml

0.03282 g → 1 ml
3.28 g → 100 ml EXPERIMENTAL

4g / 100 ml TEÓRICO

Imagen 1. Separación de proteínas Teórico

Imagen 2. Separación de Proteínas y Albúmina

Análisis de resultados.
Al comparar en ambas imágenes, tanto teórico como en el gel experimental tratado dentro
del laboratorio, se puede observar que en los carriles 3 y 4 se encuentra una mayor
concentración de albúmina, mientras que en el carril 8 una concentración de globulina, así
mismo, se puede suponer que en los carriles restantes contenían suero diluido o incluso
nada, comparando nuevamente con la imagen teórica, omitiendo el carril número 5 el cual
contenía el marcador.
El corrimiento de las bandas y la separación de estas directamente relacionados con el
tiempo que se dejó el corrimiento fue de 1 hora y en algunos casos el carril dónde se colocó
la muestra no fue el correcto, es por ello que en algunas bandas no se puede observar con
claridad la separación. Esto se podría corregir con un mayor tiempo de corrimiento y una
mejor técnica para aplicar las muestras.
Para la cuantificación de proteínas al realizar la curva estándar y obtener la concentración
de las proteínas totales y la albúmina se ve que el valor de las proteínas totales varió por 2
gramos próximamente, lo que se interpreta como un valor no tan confiable y que existieron
fallas en el método y el procedimiento utilizado o quizá en la realización de la curva
estándar. El valor de la albúmina si fue más cerca por ello podemos mencionar que el
resultado es confiable.

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Conclusión.
Se lograron separar y cuantificar las proteínas plasmáticas a partir de la muestra de sangre
extraídas, utilizando un método de análisis colorimétrico (Biuret).
Los valores obtenidos de proteínas en la muestra se encuentran ligeramente por debajo de
los indicados en el manual, esto se pudo deber a que no se realizó un óptimo trabajo en la
lectura del espectrofotómetro, una toma de muestras deficiente (no tomando correctamente
la solución de proteínas con la pipeta, en donde los errores pueden ser desde un mal
manejo del equipo, hasta una toma de muestra fuera de la fase que contenía las proteínas),
durante la centrifugación no se logró separar todas las proteínas de la donadora, puede
deberse a una falta de proteínas debido a la dieta o enfermedad.

Bibliografía.
1° Jean-Cluede C.Jean-Louis C.Las proteínas de la sangre.En: Francisco López
C/Traductor.Proteinas alimentarias. 1° Ed.España:ACRIBIA, S.A;1989.
2° Rendina G.Aislamiento,propiedades químicas y físicas y medición cuantitativa de las
proteínas. En: Folch R./Truductor.Tecnicas de bioquímica aplicada.1°Ed.México:NUEVA
EDITORIAL INTERAMERICANA, S.A de C.V;1974.
3° Serran M, Devis R.“Salado” (salting aut) de proteínas, su aplicación en separación y
determinación de albúmina y globulina en suero o plasma[Internet].Ciudad Bolivar.
4° Clark.J.Bioquímica Experimental.1°Ed.España:ACRIBIA;1932