“Año del Diálogo y la Reconciliación

Nacional”
Universidad Nacional Del Piura
Facultad de Ciencias de la Salud
Escuela profesional de Medicina Humana

Nombres y Apellidos:
Héctor David Zapata Vilcherrez

Materia:
Estructura Función Celular y Tisular II

Tema:
Laboratorio No05
“Funcionamiento de la Cadena Respiratoria”

Profesor:
Dra. Violeta Morin Garrido
Dr. Holguin

Ciclo de Estudios:
III Ciclo

Fecha de Entrega:
12 de junio del 2018
 INTRODUCCION

El presente trabajo nos dará entender la importancia que es la cadena

respiratoria pero además saber el estudio de los inhibidores que es muy
importante para descubrir las causa de toxicidad que hace que la cadena
respiratoria se bloquee, y provoque una deficiencia de oxigenación.
Para ello en este laboratorio utilizaremos un homogenizado de hígado, que
tendrá las mitocondrias libres encargadas del proceso respiratorio celular, y así
descubriremos en qué lugar los inhibidores de la cadena actúan y cómo.
La misión de la cadena transportadora de electrones es la de crear un gradiente
electroquímico que se utiliza para la síntesis de ATP. Dicho gradiente
electroquímico se consigue mediante el flujo de electrones entre diversas
sustancias de esta cadena que favorecen en último caso la translocación de
protones que generan el gradiente anteriormente mencionado. De esta forma
podemos deducir la existencia de tres procesos totalmente dependientes:

Un flujo de electrones desde sustancias individuales

Un uso de la energía desprendida de ese flujo de electrones que se utiliza
para la translocación de protones en contra de gradiente, por lo que
energéticamente estamos hablando de un proceso desfavorable.
Un uso de ese gradiente electroquímico para la formación de ATP
mediante un proceso favorable desde un punto de vista energético.
 MARCO TEÓRICO

Conceptos Generales
La misión de la cadena transportadora de electrones es la de crear un gradiente
electroquímico que se utiliza para la síntesis de ATP. Dicho gradiente
electroquímico se consigue mediante el flujo de electrones entre diversas
sustancias de esta cadena que favorecen en último caso la translocación de
protones que generan el gradiente anteriormente mencionado. De esta forma
podemos deducir la existencia de tres procesos totalmente dependientes:

 Un flujo de electrones desde sustancias individuales

 Un uso de la energía desprendida de ese flujo de electrones que se utiliza
para la translocación de protones en contra de gradiente, por lo que
energéticamente estamos hablando de un proceso desfavorable.
 Un uso de ese gradiente electroquímico para la formación de ATP
mediante un proceso favorable desde un punto de vista energético.

La Cadena Respiratoria
En este punto la célula ha ganado solo 4 ATP, 2 en la glucólisis y dos en el ciclo
de Krebs, sin embargo ha capturado electrones energéticos en 10 NADH2 y 2
FADH2. Estos transportadores depositan sus electrones en el sistema de
transporte de electrones localizado en la membrana interna de la mitocondria.
La cadena respiratoria está formada por una serie de transportadores de
electrones situados en la cara interna de las crestas mitocondriales y que son
capaces de transferir los electrones procedentes de la oxidación del sustrato
hasta el oxígeno molecular, que se reducirá formándose agua.

Como resultado de esta transferencia de electrones, los transportadores se

oxidan y se reducen alternativamente, liberándose una energía que en algunos
casos es suficiente para fosforilar el ADP y formar una molécula de ATP. Se trata
de la fosforilación oxidativa que permite ir almacenando en enlaces ricos en
energía la energía contenida en las moléculas NADH2, FADH2, NADPH2, que
se liberan en la glucólisis y en el ciclo de Krebs y que será más tarde fácilmente
utilizada. Toda cadena respiratoria que comience por el NAD conduce a la
formación de 3 ATP mientras que si comienza por el FAD produce sólo 2 ATP.
El rendimiento energético del NADP es similar al del NAD, así como el del GTP
lo es al del ATP.

TRANSPORTADORES REDOX MITOCONDRIALES

 PRACTICA Nº 05
“FUNCIONAMIENTO DE LA CADENA RESPIRATORIA”
1. OBJETIVO:

Demostrar el funcionamiento de la cadena respiratoria a través del efecto de

inhibidores sobre la cadena oxido-reducción biológica.
2. GENERALIDADES:

Se ha demostrado que muchas sustancias inhiben la cadena respiratoria en

mitocondrias aisladas, células intactas y tejidos, produciendo en consecuencia
deficiente respiración celular y deficiente oxidación de los sustratos. Algunos
antibióticos como la antimicina A, la elaborada por un Streptomyces, inhiben la
cadena respiratoria en, o cerca del sitio II. Algunos barbitúricos como el amital y
el seconal inhibirán la NADH2.
El cianuro, la azida sódica (NaN3) y el CO pueden inactivar en forma eficaz la
citocromooxidasa.
El estudio de estos inhibidores es importante porque permite comprender la
causa de la toxicidad de estos compuestos y también porque contribuyen a la
realización de trabajos de investigación relacionados con la estructura y función
de la cadena respiratoria.
En el presente trabajo se trata de demostrar el efecto de algunos inhibidores del
óxido-reducción empleando como fuente enzimática el homogenizado celular de
hígado.

3. MATERIALES:

 Mortero Otros:
 Gasa
 Tubos 16x16  Agua helada
 Pipetas 1mL
Muestra:
 Placa Petri
 Bisturí  Tejido hígado de res
o de pollo
4. REACTIVOS:

 Buffer fosfato de sodio 0.1 M, ph 7.4

 2.6 diclorofenolindofenol 0.02%
 P-fenilondiamina 1%
 Succionato 0.1 M
 Malonato 0.1 M
 Cianuro de sodio 0.1 M
 Barbiturato de sodio 0.1 M
 Homogenizado hepático
5. PROCEDIMIENTO:

 Obtener 100 gr de tejido hígado de res.

 Eliminar completamente la grasa y el tejido conectivo.
 Colocarlo en un mortero de porcelana y triturarlo.
 Agregar 10 mL de agua helada.
 Agitar continuamente durante 15 minutos utilizando el moledor del
mortero.
 Tamizar a través de una gasa fina para eliminar el líquido.
 Repetir el lavado x 2 veces, para eliminar al máximo los sustratos
naturales y el DPN.
 Transferir el tejido lavado a una licuadora.
 Agregar el volumen igual de Buffer Fosfato y mezclar lo mejor
posible.
 Refrigerar o colocar en un recipiente con hielo para evitar el
deterioro de las enzimas.
 Agitar enérgicamente para favorecer la difusión del oxígeno.
 Dejar reposar 30 minutos, agitando continuamente.
 Observar la progresión de las reacciones y el comportamiento de
cada uno de los sistemas.

A. SISTEMA DE SUCCINATO:

COMPONENTES 1 2 3 4 5 6
Buffer fosfato de sodio 0.1 M, ph 7.4 1.5 1.2 1.0 0.5 0.5 0.5
2.6 diclorofenolindofenol 0.02% 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
Succionato 0.1 M 0.2 - 0.2 0.2 0.2 0.2
Malonato 0.1 M - - - 0.5 - -
Cianuro de sodio 0.1 M - - - - 0.5 -
Barbiturato de so dio 0.1 M - - - - - 0.5
Homogenizado hepático - 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5

Mezclar: Dejar en reposo a temperatura

ambiental.
Observar: Constantemente los cambios de
color del indicador.
Interpretar sus resultados.

INDICADORES: Si el sustrato (en el tubo)

cambia de color, de incoloro a rojo, significa
que hubo un correcto funcionamiento del
sistema. Por el contrario, si no cambia de
color, indicara que el sistema se ha inhibido
en alguna de sus partes.
B. SISTEMA USANDO P-FENILENDIAMINA

COMPONENTES 1 2 3 4 5
Buffer fosfato de sodio 0.1 M, ph 7.4 0.2 1.5 1.0 1.0 1.0
Cianuro de sodio 0.1 M - - 0.5 - -
Malonato 0.1 M - - - 0.5 -
Barbiturato de so dio 0.1 M - - - - 0.5
P- fenilendiamina 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
Homogenizado hepático - 0.5 0.5 0.5 0.5

Mezclar: Dejar en reposo a temperatura ambiental.

Observar: Constantemente los cambios de color del indicador.
Interpretar los resultados.
INDICADORES: Si el sustrato (en el tubo) cambia de color, de incoloro a rojo,
significa que hubo un correcto funcionamiento del sistema. Por el contrario, si no
cambia de color, indicara que el sistema se ha inhibido en alguna de sus partes.
Mezclar y dejar en reposo a temperatura ambiente.
 Sí
funciona Sí funciona

CUESTIONARIO
1. ¿Qué interpretación le da a los tubos 1, 2, 3, 4, 5 Y 6 del primer experimento?

No funciona debido a la falta del

homogenizado hepático, no hay
mitocondrias y por consiguiente no hay
traspaso de electrones. A pesar de
contener el aceptor 2,1 diclorofenoldifenol
el buffer no lo colorea ya que la cadena no
llega a su totalidad.

No va a funcionar debido a la falta de

Succinato, esto no va a permitir que
arranque que inicie. Contiene el aceptor, la
sustancia buffer y el homogenizado.

Este sistema es positivo y se colorea

ya que tiene todos los elementos del
sistema y se colorea azul
 El inhibidor Malonato corta la transmisión
del Succinato por lo tanto no hay transpaso
de electrones y no se colorea.

Tiene todos los componentes pero la

cadena es bloqueada por el cianuro
de sodio que actúa entre Coc y el
citocromo oxidasa y bloquea el
proceso.

El Barbiturato de sodio inhibe la otra

cadena, el pase de NAD. La cadena contiene
todos los elementos y completa la reacción
y a pesar de la presencia del barbitúrico de
sodio este no afecta la cadena ya que solo
actúa en las cadenas largas o de P-
fenilendiamina .

2. ¿Qué interpretación le da a los tubos 1, 2, 3, 4, 5, en el segundo

experimento?

Contiene el sistema buffer y el aceptor pero

no contiene el homogenizado hepático por
lo tanto no hay presencia de mitocondrias y
no se produce la reacción ni la coloración
 El sistema tiene todos lo elementos, el
sistema buffer, el aceptor P-fenilendiamina
y el homogenizado hepático por lo tanto el
aceptor de electrones logra colorearlo rojo.

Contiene todos los elementos necesarios

para realizar por completo el
funcionamiento de la cadena, pero el
inhibidor cianuro de sodio que actúa entre
Coc y el citocromo oxidasa bloquea el
proceso y no se colorea.

El sistema tiene todos lo elementos el

buffer, el aceptor y el homogenizado a
pesar de la presencia del inhibidor
Malonato de sodio 0.1M no bloquea el
proceso ya que solo actúa en el sistema
succinato por eso se colorea rojo.

Contien el buffer, el aceptor y el

homogenizado, pero esta la presencia del
inhibidor barbitúrico de sodio que actúa
entre NAD y FAD lo que bloquea la cadena
y no se colorea.
 ANEXOS

BIBLIOGRAFIA

 https://drleivaenriquez.files.wordpress.com/2007/06/cadena-respiratoria-
fosforilacion.pdf

 https://respiracioncelular.wordpress.com/cadena-respiratoria/

 Autores: Horton, Moran, Ochs, Rawn y Scrimgeour

 Editorial “Prentice-Hall Hispanoamérica S.A.”Mexico 1993

 Lengeler JW; Drews G; Schlegel HG (editors) (Jan de 1999). Biology of

the Prokaryotes. Blackwell Science. ISBN 978-0632053575.

 Nelson DL; Cox MM (Apr de 2005). Lehninger Principles of

Biochemistry (4th ed edición). W. H. Freeman.