Elisa Toxocariasis - En.es

ARTÍCULO DE INVESTIGACIÓN
El potencial serodiagnóstico de las proteínas de TES-30

recombinantes y TES-120 en un ELISA indirecto en el
diagnóstico de toxocariasis en el ganado, caballos y ovejas
Lucas Moreira dos Santos CARNÉ DE IDENTIDAD 1 *, Rafael Amaral Donassolo CARNÉ DE IDENTIDAD 1, Maria Elisabeth Berna 2,
Fa'bio Pereira Leite Leivas 1, Luciana Farias da Costa Ávila 3, Carlos James Scaini 3, A Ángela Moreira Nunes 1, Fabricio
Rochedo Conceiç una o 1
1 Departamento de Biotecnología de la Universidad Federal de Pelotas, Pelotas, RS, Brasil, 2 Departamento de Parasitología, Universidad
a1111111111
Federal de Pelotas, Pelotas, RS, Brasil, 3 Facultad de Medicina de la Universidade Federal do Rio Grande, Rio Grande, RS, Brasil
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a1111111111
a1111111111 * lucass1@hotmail.com
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Resumen
La toxocariasis es una enfermedad zoonótica que afecta a los seres humanos y animales por igual. Aunque las proteínas
ACCESO ABIERTO
recombinantes se utilizan ampliamente para el diagnóstico en seres humanos, su rendimiento en compañía y de producción
Citación: Santos LMD, Donassolo RA, Berne ME, Leite FPL, Ávila
animales sigue siendo desconocido. El objetivo del estudio para investigar el potencial de serodiagnóstico de las proteínas
LFDC, Scaini CJ, et al. (2019) El potencial serodiagnóstico de las
proteínas de TES-30 recombinantes y TES-120 en un ELISA recombinantes Rtes-30 y Rtes-120 a partir de Toxocara canis en un ELISA indirecto para el ganado, caballos y ovejas. Las
indirecto en el diagnóstico de toxocariasis en el ganado, caballos y muestras de suero recogidas de los animales se ensayaron con ELISA indirecto andWestern Blotting utilizando T. canis TES-30 y
ovejas. PLoS ONE 14 (3): e0213830. https://doi.org/
TES-120 proteínas recombinantes producidas en Escherichia coli, así como nativo-TES. En el ELISA, Rtes-30 mostraron un alto
potencial de serodiagnóstico en ovejas y caballos (92,6% y 85,2%, respectivamente), mientras que la sensibilidad de Rtes-120 fue
10.1371 / journal.pone.0213830
mayor en el ganado vacuno y caballos (97,2% y
Editor: Henk DFH Schallig, Centro Médico Académico,
PAÍSES BAJOS
92,6%, respectivamente). Además, se observó una asociación altamente positiva entre las proteínas nativas y recombinantes en
Recibido: 14 de noviembre 2018
muestras seropositivas, mientras que se observó una asociación moderadamente positiva en muestras seronegativas,
Aceptado: 3 de marzo de, 2019
probablemente debido a la especificidad inferior de TES nativo. En conclusión, nuestro estudio indica que el uso de proteínas
Publicado: 14 de marzo de, 2019 recombinantes en un ELISA indirecto es una herramienta eficaz para el serodiagnóstico de toxocariasis en los animales, con la
Derechos de autor: © 2019 Santos et al. Este es un artículo de acceso

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Disponibilidad de datos Declaración: Todos los datos relevantes se
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después de la aceptación (doi: 10.6084 / M9. figshare.7339016 ; 10.6084 /

Introducción
m9.figshare.7339013 ;
10.6084 / m9.figshare.7339007 ). Los endoparásitos son algunas de las amenazas importantes para la salud de los animales de compañía y de producción, con lo cual
disminuyen las infecciones por el valor económico de los animales [ 1 ]. Entre las infecciones causadas por endoparásitos, toxocariasis
Fondos: Este estudio fue financiado en parte por:
es importante. Se transmite a través de los huevos infecciosos Toxocara sp., y su sintomatología varía en función de la migración de
Programa de Pesquisa para o SUS (PPSUS); Consejo
Nacional de Desarrollo Cientı 'fico correo las larvas y especies de parásitos y de acogida. Por ejemplo, vitulorum Toxocara infección en los rumiantes era
Tecnolo'gico (CNPQ); Coordenaç una O de
PLoSONE | https://doi.org/10.1371/journal.pone.0213830 14 de marzo de, 2019 1/10

serodiagnóstico Toxocariasis en animales
Perfeccionamiento de Personal de NI 'vel Superior detectado en el 21,1% de 819 animales en la meseta tibetana de Qinghai, China, y se asoció con un aumento de la morbilidad y la
(CAPES), el código de las finanzas a 001 LMS.
mortalidad, causando pérdidas económicas importantes para los agricultores [ 2 , 3 ].
Conflicto de intereses: Los autores han declarado que no existen Compañía y de producción animales tales como caballos y ovejas, que comparten comúnmente entorno ambiental con huéspedes
conflictos de intereses. definitivos (cánidos y ganado), son propensos a convertirse en anfitriones paraténicos del parásito, en calidad de vectores en la
propagación del parásito a un gran número de especies y afectando negativamente a la economía de la región [ 4 , 5 ].
El diagnóstico clínico de toxocariasis es difícil, ya que la mayoría de las manifestaciones no son específicos [ 6 ]. Por lo
tanto, las únicas opciones de diagnóstico viables son basada en el laboratorio y dependen de si el anfitrión es definitiva o
paraténico, con lo cual se utilizan examen fecal y ligado a enzima ensayo inmunoenzimático (ELISA) en combinación con el
Western Blot (WB) [ 2 , 6 ]. El examen fecal es mucho tiempo y requiere experiencia para producir un diagnóstico viable.
Además, dependiendo del grado de la infección, tiene baja sensibilidad, produciendo más falsos negativos que los métodos
serológicos [ 7 , 8 ].
Por el contrario, ELISA andWB son ensayos indirectos, pero son rápidos, accesibles, y requieren una formación mínima [ 9 ]. sin
embargo, el Toxocara familia excreción-secreción de proteínas (TES), obtenido a partir del cultivo de las larvas, se requiere para estos
ensayos, lo cual es un proceso laborioso y también presenta una serie de especies cruzadas reacciones, especialmente con otros
helmintos que se encuentran comúnmente en el ganado, dando como resultado una errónea diagnóstico [ 10 - 12 ]. Con el fin de encontrar
una alternativa, varios estudios han investigado el potencial de proteínas recombinantes para el diagnóstico de la toxocariasis en un intento
de reducir el tiempo, el coste y la reactividad cruzada contra TES nativa [ 13 - dieciséis ].
Este estudio investiga el potencial de serodiagnóstico T. canis TES-30 y TES-120 proteínas recombinantes en un
ELISA indirecto para la detección de toxocariasis en animales. Esta técnica podría representar un avance importante en el
aumento de la especificidad del diagnóstico serológico y facilitar un diagnóstico rápido y preciso.
Materiales y métodos
Clonación y expresión de proteínas recombinantes
Las proteínas recombinantes se clonaron, expresaron y purificaron como se describe en nuestros estudios anteriores [ 17 - 18 ].
Producción de TES nativos
Los gusanos adultos de T. canis fueron obtenidos por tratamiento de los jóvenes (4-8 semanas de edad) los perros con 15 mg / kg pamoato
de pirantel. Los parásitos femeninos fueron sometidas a histerectomía para obtener los huevos del parásito, que se incubaron durante 28
días en 2% de formalina a 28ºC para permitir la formación de embriones [ 19 ].
Los antígenos TES nativas se prepararon como se describe por Savigny (1979) [ 20 ]. En resumen, las larvas de T. canis se
cultivaron en RPMI 1640, y las mediumwas recogieron cada tres días, se agruparon y se centrifugaron. El sobrenadante se filtró
a través de un filtro de 0,2 m (Sigma Aldrich, EE.UU.) en un tubo de diálisis (peso molecular de corte de 6,000 a 8,000 Da;
Sigma Aldrich, EE.UU.). La solución se dializó frente a 250 volúmenes de agua destilada a 4ºC. Después de la diálisis, el
sobrenadante se concentró en un concentrador de vacío, se reconstituyó en agua destilada, y se almacena en alícuotas a
-70ºC. Las proteínas fueron cuantificados usando un kit de Pierce BCA (Thermo Fisher Scientific, EE.UU.).
Coleccion de muestra
Las muestras se recogieron a partir de tres paneles de sueros de animales hembras de edades comprendidas más de un año macho y todos
los seleccionados al azar. Se realizó inicial de recogida de sangre (antes de este estudio)

de la vena yugular de los animales, utilizando un tubo vacutainer. Las muestras de suero se almacenaron a - 20 ° C hasta su
uso. Sera panel 1 consistía de 104 muestras de ovejas no inmunizados que se asignaron al azar a partir de un total de 1.642
muestras recogidas de 95 granjas en 21 países [ 5 ]. Sera panel 2 consistió de muestras de 46 no inmunizados Bos taurus ganado
que se recogieron para el estudio por Cunha et al. ( 2012) [ 21 ]. Sera panel 3 consistió de muestras de 38 caballos no
inmunizados utilizados para el estudio de Moraes et al. ( 2014) [ 22 ].
Para los controles negativos para el serodiagnóstico de cada especie animal, se seleccionaron muestras de suero negativas de
los bancos de suero de cada especie que se mantuvieron por el Laboratorio de Parasitología UFPel. Estas muestras se recogieron
de los animales que dieron negativo en la excreción-secreción Toxocara canis ( TES) antígeno unido a enzima ensayo
inmunoenzimático (ELISA) y nacieron en explotaciones donde no había perros. sueros Fetal también se utilizaron como controles
negativos. Los sueros positivos (controles positivos) se recogieron a partir de dos animales adultos de cada especie después de la
vacunación experimental con Rtes-30 y Rtes-120 (400 ng) por la aplicación subcutánea.
Blot (WB) de ensayo Western
El ensayo WB se utilizó en dos fases durante el estudio. En primer lugar, se utilizó para probar las muestras con el fin de distinguir los
sueros negativos de sueros positivos. En segundo lugar, se utilizó para confirmar los resultados de ELISA cerca de la absorbancia de corte
(borderline).
El siguiente método fue seguido en tanto los ensayos de WB: 20 g / ml cada uno de Rtes-30 y Rtes-120 se sometieron a
electroforesis en un SDS-PAGE al 12% y se electrotransfirieron a una membrana de nitrocelulosa (GE Healthcare Life Sciences,
EE.UU.) utilizando un transblot aparato (Bio-Rad, EE.UU.) durante la noche a 4ºC. La transferencia de proteínas a la membrana se
confirmó usando Ponceau S tinción (Sigma-Aldrich, EE.UU.). La membrana se cortó en tiras y se bloqueó usando 5% en seco de
leche (Nestle, Suecia) en PBS-T durante 1 h. Las tiras se incubaron con muestras de suero (diluido 1: 200 en PBS-T) durante la
noche a 4ºC, seguido de incubación con anti-IgG de caballo (molécula completa) peroxidasa de rábano picante (Sigma Aldrich,
EE.UU.), IgG anti-oveja ( molécula entera) peroxidasa de rábano picante (Sigma Aldrich, EE.UU.), o anti-bovina IgG (toda
molécula) peroxidasa de rábano picante (Sigma Aldrich, EE.UU.) a una dilución optimizado (1: 10.000, 1: 5.000, o 1: 2500,
respectivamente) en PBS-T, y se incubaron durante 3 h a temperatura ambiente. Las tiras se lavaron con PBS-T durante 5 min
cada uno entre cada paso. Por último, la solución de DAB (0,025% 3,3 0- diaminobencidina, 0,0009% H 2 O 2, y se utilizó 0,05 MTris /
HCl-solución, Sigma Aldrich, EE.UU.) para desarrollar las transferencias.
ELISA indirecto
ELISA se utilizó para verificar la antigenicidad de las proteínas. El protocolo de ELISA se optimizó antes del estudio. Cada pocillo de la
placa de microtitulación de 96 pocillos de fondo plano (Nunc Immuno Maxisorp, Thermo Fisher Scientific, EE.UU.) se recubrió con 100!
L de cada antígeno a la concentración óptima (50 ng) en tampón de 0,02 M de bicarbonato, pH 9,6. Las placas se cubrieron entonces
y se incubaron durante la noche a 4ºC. Las placas se lavaron con PBS-T para eliminar los antígenos no unidos. Las placas se lavaron
tres veces durante 5 minutos cada vez con PBS-T, y después cada pocillo se bloqueó con 5% en seco de leche (Nestle, Suecia) en
solución de PBS-T durante 1 h a 37ºC. Las placas se lavaron de nuevo como se describió anteriormente, seguido de la adición de
muestras de suero (100! L, 1: 150 en PBS-T, pocillos duplicados) e incubación durante 1 h a 37ºC. Después de la etapa de lavado,
anti-IgG de caballo (molécula completa) peroxidasa de rábano picante (Sigma Aldrich, EE.UU.), antisheep IgG (molécula completa)
peroxidasa de rábano picante (Sigma Aldrich, EE.UU.), o IgG anti-bovina (molécula completa) peroxidasa de rábano picante (Sigma
Aldrich, EE.UU.) se añadido a diluciones optimizados (1: 10.000, 1: 5.000, 1: 2.500, respectivamente) en PBS-T, y se incubó durante 1
h a 37ºC. Después de

etapa de lavado final, se añadió o-fenilendiamina sustrato dihidrocloruro (Sigma Aldrich, EE.UU.), y después de 15 min, se
midieron las DO a 450 nm usando un espectrofotómetro de ELISA (Biochrom EZ Lee 400, Reino Unido). Las lecturas de
DO se ajustaron con PBS-T como en blanco, y se utilizó el valor de corte para distinguir entre los resultados positivos y
negativos. Estos valores de corte se basaban en los resultados de la característica (ROC) análisis estadístico de
funcionamiento del receptor ( S1 - S3 Archivos). Los valores de corte fueron: de ganado 0,332 (Rtes-30) y 0,414 (Rtes-120);
caballos- 0,099 (Rtes-30) y 0,189 (Rtes-120); y de ovejas 0,499 (Rtes-30) y
0.4015 (Rtes-120).
análisis estadístico
Los datos se analizaron estadísticamente usando chi-cuadrado de Pearson y la matriz de correlación de Pearson (para las variables
cualitativas, seropositivos y seronegativos); ANOVA de dos vías (para las variables cuantitativas, lecturas OD); y la curva ROC (para
determinar los valores de corte) utilizando el software estadístico GraphPad Prism versión 7.
Los valores de corte se calcularon utilizando el método descrito por Hanley (1982) [ 23 ], Mediante el trazado de la sensibilidad
contra especificidad. Se añadieron las muestras negativas y positivas en el software basado en los resultados de la WB inicial. El
punto de corte para cada especie animal fue elegido en base a la relación de probabilidad utilizando el método descrito por
Johnson (2004) [ 24 ].
Ética
Este estudio retrospectivo fue aprobado previamente por la Universidad Federal de Investigación Comité de Ética Pelotas
bajo protocolo CEEA 2133 [ 5 , 21 , 22 ].
Resultados y discusión
Rendimiento, el tamaño, y la purificación de las proteínas recombinantes fueron como se describe en nuestros estudios anteriores [ 17 - 18 ]. Al
igual que en Farmer et al. ( ) Estudio de 2017, estas proteínas se almacenaron en urea buffer [ 25 ].
La sensibilidad y especificidad de las proteínas recombinantes en el ELISA indirecto se presentan en las Tablas 1 - 3 . No hubo un
beneficio asociado con el uso de ambas proteínas al mismo tiempo ( p = 0,9313), en cualquiera de los ensayos animales de
serodiagnóstico estudiados. La confirmación de la prueba ELISA de corte se puede ver en Figura 1 . A pesar de la menor sensibilidad
de
el ELISA en el caso de algunas proteínas recombinantes y combinaciones de los animales, el ensayo WB permite la visualización
de ambas bandas en el suero seropositivo.
En este estudio, se evaluó el rendimiento de una alternativa propuesta (TES recombinantes en un ELISA indirecto) Método
para el serodiagnóstico de toxocariasis. Nuestra metodología para el diagnóstico serológico de la toxocariasis se basa en
nuestro estudio anterior [ 18 ] Y la de Nguyen et al.
Tabla 1. sensibilidad ELISA y especificidad para cada proteína recombinante tal como se determina mediante un análisis de características operativas del receptor (ROC)
para el ganado.
Parámetro Rtes-30 Rtes-120
Las muestras positivas 14/36 (38,89%) 35/36 (97,22%)

(sensibilidad)
Sensibilidad intervalo de confianza del 95% 23.14% - 56.54% 85.47% - 99.93%
Las muestras negativas (especificidad) 9/10 (90,00%) 9/10 (90,00%)
Especificidad intervalo de confianza del 95% 55,5% - 99.75% 55,5% - 99.75%
Cortar > 0,332 > 0,414
pag valor < 0,001
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0213830.t001

para los caballos.

(sensibilidad)
Sensibilidad intervalo de confianza del 95% 66,27% - 95,81% 75.71% - 99.09%
Especificidad intervalo de confianza del 95% 58.72% - 99.77% 58.72% - 99.77%
Cortar > 0,099 > 0,189
pag valor 0.6687
[ 26 , 27 ] estudiar. En ambos estudios, TES-30 (en formas recombinantes y nativas) demostró ser el biomarcador más específico
para el serodiagnóstico de la toxocariasis en animales y seres humanos [paraténicos 18 , 27 ]. Aunque habíamos evaluado diferentes
especies en el estudio anterior y este estudio ha empleado proteínas recombinantes para el diagnóstico serológico de la
toxocariasis en animales de producción, por primera vez, hemos aplicado la mejor herramienta disponible para el diagnóstico
serológico de la muestras desconocidas, además de positivo y negativo controles.
Uno de los principales problemas con el diagnóstico de la toxocariasis utilizando TES nativos es la falta de especificidad, debido a la
presencia de otras familias de helmintos parásitos que son comunes en los animales de producción [ 10 , 11 , 28 ]. En los seres humanos, el
diagnóstico de toxocariasis no sólo requiere un laboratorio de diagnóstico, sino también datos epidemiológicos y clínicos para evitar
diagnósticos erróneos, que no están disponibles en los animales de producción [ 9 ]. Para superar este obstáculo, se empleó un método
adicional para evitar falsos positivos y falsos negativos, en el que ensayamos cada muestra con proteínas recombinantes en un ensayo
de transferencia en lugar de utilizar ELISA como punto de partida. Este paso adicional permite la confirmación de los seronegativos,
haciendo que el ELISA de corte viable. Por último, sólo las muestras que estaban por encima del punto de corte con una proteína
recombinante, así como TES nativas, fueron considerados seropositivos, anulando así la posible baja sensibilidad de proteínas
recombinantes y la baja especificidad de TES nativas por completo.
En general, se observó una alta especificidad con las proteínas recombinantes, concordante con el estudio de Mohamad et al. [ 13 ].
Además, estas proteínas (Rtes-30 y Rtes-120) se habían probado anteriormente contra ascariasis, tricuriasis, ancylostomids,
estrongiloidiasis, himenolepiasis, y fasciolosis en los seres humanos sin ningún tipo de reacciones cruzadas [ 17 ]. Sin embargo, los
animales de producción están en estrecho contacto con el medio ambiente y la especificidad humana no deben extrapolarse a la
especificidad de los animales, ya que diferentes parásitos podrían introducir nuevas cuestiones de especificidad. La cuestión de la
especificidad no está todavía para ser completamente explorado y debería estudiarse más [ 29 , 30 , 31 ].
para las ovejas.

(sensibilidad)
Sensibilidad intervalo de confianza del 95% 79,7% - 96.92% 35.33% - 74.52%
Especificidad intervalo de confianza del 95% 90.02% - 97.73% 92.98% - 99.97%
Cortar > 0,499 > 0,401
pag valor 0,0041

Fig 1. (A) bovina ELISA cerca de corte ensayo viaWB confirmación. Carril 1: PageRuler ™ Pre manchado-Protein Escalera (Thermo Fisher Scientific, EE.UU.); Carril 2: Rtes-30 con sueros reunidos a partir de cuatro animales
seropositivos; Carril 3: Rtes-120 con sueros reunidos a partir de cuatro animales seropositivos; Carril 4: Rtes-30 con sueros reunidos a partir de cuatro animales seronegativos; Carril 5: Rtes-120 con sueros reunidos a partir de
cuatro animales seronegativos. ( B) Horse ELISA cerca de corte, confirmado por el ensayo WB. Carril 1: Rtes-30 con sueros reunidos a partir de cuatro animales seropositivos; Carril 2: Rtes-120 con sueros reunidos a partir de
cuatro animales seropositivos; Carril 3: rTES- 30 con sueros reunidos a partir de cuatro animales seronegativos; Carril 4: Rtes-120 con sueros de cuatro animales seronegativos; ( C) Sheep ELISA cerca de corte, confirmado por el
ensayo WB. Carril 1: Rtes-30 con sueros reunidos a partir de cuatro animales seropositivos; Carril 2: Rtes-120 con sueros reunidos a partir de cuatro animales seropositivos; Carril 3: Rtes-30 con sueros reunidos a partir de cuatro
animales seronegativos; Carril 4: Rtes-120 con sueros reunidos a partir de cuatro animales seronegativos.
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0213830.g001
Vale la pena señalar que elegimos no para adsorber el suero con una Ascaris suum antígeno en un intento de lograr una mejor
especificidad en TES nativos [ 11 ]. Hemos tomado la decisión para comparar la eficacia absoluta de recombinante contra TES nativas
debido a la adición de otro antígeno con el procedimiento en el diagnóstico de enfermedades de los animales de producción habría
aumentado el costo relacionados con el diagnóstico adicional, que es un factor importante para los agricultores [ 31 ]. Por otra parte, la
adsorción de
Ascaris suum antígenos sólo previene reacciones cruzadas con el Ascarididae familia; por lo tanto, los problemas de reactividad
cruzada con infecciones fascioliasis y estrongiloidiasis permanecerían [ 32 , 33 ].
sensibilidades ELISA con proteínas recombinantes en diferentes especies animales fueron muy variables. En los caballos, ELISA
con proteínas recombinantes tenía una alta sensibilidad, mientras Rtes-30 ELISA fue más sensible en ovejas y Rtes-120 ELISA era
mejor para el serodiagnóstico bovina. Como las proteínas recombinantes son significativamente diferentes en estructura de los
aminoácidos, sugerimos que los sistemas inmunes de diferentes especies reaccionan de manera diferente a cada proteína, tal vez
debido a las diferencias en la patogenia y perfil proteómico que la Toxocara larvas presentes en las funciones fisiológicas e
inmunológicas de cada especie animal [ 34 ]. Por ejemplo, nuestro estudio anterior informó que las ETR-30 parecía ser la única
herramienta viable para el diagnóstico serológico en ratones [ 18 ].
Rtes-30 ha sido ampliamente utilizado como un biomarcador específico para toxocariasis en huéspedes paraténicos. Esto está de
acuerdo con nuestros resultados, en los que las ETR-30 mostraron una mejor sensibilidad en las ovejas y caballos [ 25 , 27 ]. Rtes-30 ELISA
tiene una alta sensibilidad hacia T. canis y T. cati infecciones en los anfitriones paraténicos, siendo capaz del serodiagnóstico de ambos
parásitos, aunque la sensibilidad contra T. vitulorum y T. malaysiensis sigue siendo [unknown 35 , 36 ].
Por otro lado, las ETR-120 realiza mejor con el ganado, que podrían ser influenciados por el hecho de que el ganado
hospedadores definitivos de la T. vitulorum. Por lo tanto, Rtes-120 potencialmente podría estar relacionado con el pleno desarrollo de
las larvas; Sin embargo, se necesitan más estudios para apoyar esta conclusión [ 14 , 35 , 36 ].
En este estudio, no hemos podido confirmar la enfermedad real, ya que no fue posible realizar biopsias en los hosts paraténicos o
exámenes fecales en los huéspedes definitivos. Como toxocariasis es una enfermedad crónica con fases de larvas activos e inactivos, los
animales infectados pueden ser mal diagnosticados como falso

negativos en biopsias o examen fecal que son ensayos que tienen una menor sensibilidad en esta enfermedad [ 8 ]. En estos
casos, WB con TES-30 se ha demostrado que es el método más sensible y específico para este fin [ 27 ]. Sin embargo, el objetivo
principal de este estudio fue evaluar una herramienta potencialmente rápida, factible, y de bajo costo para el serodiagnóstico de
toxocariasis para toda una población de animales de granja, para los que se comparó la eficacia de nuestros métodos contra el
método estándar (ELISA TES).
conclusiones
En conclusión, nuestro estudio indica que es beneficioso utilizar proteínas recombinantes como un sustituto de la laboriosa
nativo-TES. Sin embargo, la selección de la proteína recombinante para ser utilizado puede depender de la especie animal
diagnosticada.
Información de soporte
Archivo S1. ELISA y los valores de corte para TES nativas y recombinantes en ganado. Archivo que contiene las absorbancias ensayo
de inmunoabsorción ligados a enzimas, el funcionamiento del receptor análisis de las características y las resultantes valores de corte para
el diagnóstico toxocariasis usando nativa y recombinante
Toxocara proteínas de excreción-secreción en el ganado. (XLSX)
Archivo S2. ELISA y los valores de corte para TES nativas y recombinantes en ovejas. Archivo que contiene las absorbancias ensayo
de inmunoabsorción ligados a enzimas, el funcionamiento del receptor análisis de las características y las resultantes valores de corte para
el diagnóstico toxocariasis usando nativa y recombinante
Toxocara proteínas de excreción-secreción en las ovejas. (XLSX)
Archivo S3. ELISA y los valores de corte para TES nativas y recombinantes en caballos. Archivo que contiene las absorbancias ensayo
de inmunoabsorción ligados a enzimas, el funcionamiento del receptor análisis de las características y las resultantes valores de corte para el
diagnóstico toxocariasis usando nativa y recombinante
Toxocara proteínas de excreción-secreción en los caballos. (XLSX)
Expresiones de gratitud
Nos gustaría expresar nuestro profundo agradecimiento por la colaboración y hospitalidad a los colaboradores del
Hospital Veterina'rio (UFPEL) y Laborato'rio de Micología (UFPEL).
Contribuciones de autor
conceptualización: Fabricio Rochedo Conceicao.
los datos de curación: Lucas Moreira dos Santos, Fabricio Rochedo Conceicao.
Análisis formal: Lucas Moreira dos Santos, Fabricio Rochedo Conceicao.
adquisición de financiación: Fabricio Rochedo Conceicao.
Investigación: Lucas Moreira dos Santos, Fabricio Rochedo Conceicao.
Metodología: Lucas Moreira dos Santos, Rafael Amaral Donassolo.
Administración de proyecto: Lucas Moreira dos Santos, Fabricio Rochedo Conceicao.
recursos: Maria Elisabeth Berna, Fa'bio Pereira Leite Leivas, Luciana Farias da Costa Ávila,
Carlos James Scaini, Ángela Nunes Moreira, Fabricio Rochedo Conceicao.

Supervisión: Lucas Moreira dos Santos, Fabricio Rochedo Conceicao.
Validación: Lucas Moreira dos Santos, Fabricio Rochedo Conceicao.
Visualización: Lucas Moreira dos Santos, Fabricio Rochedo Conceicao.
Escribiendo - proyecto original: Lucas Moreira dos Santos.
Redacción - revisión y edición: Lucas Moreira dos Santos, Fabricio Rochedo Conceicao.
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Elisa Toxocariasis - En.es

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ARTÍCULO DE INVESTIGACIÓN

El potencial serodiagnóstico de las proteínas de TES-30

Derechos de autor: © 2019 Santos et al. Este es un artículo de acceso

abierto distribuido bajo los términos de la

Licencia Creative Commons , Que permite el uso ilimitado,

Disponibilidad de datos Declaración: Todos los datos relevantes se

encuentran dentro del manuscrito. Los meta-datos también estarán disponibles

después de la aceptación (doi: 10.6084 / M9. figshare.7339016 ; 10.6084 /

Tecnolo'gico (CNPQ); Coordenac¸ una O de

PLoSONE | https://doi.org/10.1371/journal.pone.0213830 14 de marzo de, 2019 1/10

de reducir el tiempo, el coste y la reactividad cruzada contra TES nativa [ 13 - dieciséis ].

Clonación y expresión de proteínas recombinantes

Producción de TES nativos

días en 2% de formalina a 28ºC para permitir la formación de embriones [ 19 ].

PLoSONE | https://doi.org/10.1371/journal.pone.0213830 14 de marzo de, 2019 2/10

Blot (WB) de ensayo Western

HCl-solución, Sigma Aldrich, EE.UU.) para desarrollar las transferencias.

PLoSONE | https://doi.org/10.1371/journal.pone.0213830 14 de marzo de, 2019 3/10

de ambas bandas en el suero seropositivo.

Parámetro Rtes-30 Rtes-120

Las muestras positivas 14/36 (38,89%) 35/36 (97,22%)

Sensibilidad intervalo de confianza del 95% 23.14% - 56.54% 85.47% - 99.93%

Las muestras negativas (especificidad) 9/10 (90,00%) 9/10 (90,00%)

Especificidad intervalo de confianza del 95% 55,5% - 99.75% 55,5% - 99.75%

Cortar > 0,332 > 0,414

pag valor < 0,001

PLoSONE | https://doi.org/10.1371/journal.pone.0213830 14 de marzo de, 2019 4/10

para los caballos.

Parámetro Rtes-30 Rtes-120

Las muestras positivas 23/27 (85,19%) 25/27 (92,59%)

Sensibilidad intervalo de confianza del 95% 66,27% - 95,81% 75.71% - 99.09%

Las muestras negativas (especificidad) 10/11 (90,91%) 10/11 (90,91%)

Especificidad intervalo de confianza del 95% 58.72% - 99.77% 58.72% - 99.77%

Cortar > 0,099 > 0,189

pag valor 0.6687

serológico de la muestras desconocidas, además de positivo y negativo controles.

recombinantes y la baja especificidad de TES nativas por completo.

para las ovejas.

Parámetro Rtes-30 Rtes-120

Las muestras positivas 25/27 (92,59%) 15/27 (55,56%)

Sensibilidad intervalo de confianza del 95% 79,7% - 96.92% 35.33% - 74.52%

Las muestras negativas (especificidad) 73/77 (94,81%) 76/77 (98,7%)

Especificidad intervalo de confianza del 95% 90.02% - 97.73% 92.98% - 99.97%

Cortar > 0,499 > 0,401

pag valor 0,0041

PLoSONE | https://doi.org/10.1371/journal.pone.0213830 14 de marzo de, 2019 5/10

cruzada con infecciones fascioliasis y estrongiloidiasis permanecerían [ 32 , 33 ].

herramienta viable para el diagnóstico serológico en ratones [ 18 ].

parásitos, aunque la sensibilidad contra T. vitulorum y T. malaysiensis sigue siendo [unknown 35 , 36 ].

animales infectados pueden ser mal diagnosticados como falso

PLoSONE | https://doi.org/10.1371/journal.pone.0213830 14 de marzo de, 2019 6/10

el diagnóstico toxocariasis usando nativa y recombinante

Toxocara proteínas de excreción-secreción en el ganado. (XLSX)

el diagnóstico toxocariasis usando nativa y recombinante

Toxocara proteínas de excreción-secreción en las ovejas. (XLSX)

diagnóstico toxocariasis usando nativa y recombinante

Toxocara proteínas de excreción-secreción en los caballos. (XLSX)

conceptualización: Fabricio Rochedo Conceicao.

Análisis formal: Lucas Moreira dos Santos, Fabricio Rochedo Conceicao.

adquisición de financiación: Fabricio Rochedo Conceicao.

Investigación: Lucas Moreira dos Santos, Fabricio Rochedo Conceicao.

Metodología: Lucas Moreira dos Santos, Rafael Amaral Donassolo.

Administración de proyecto: Lucas Moreira dos Santos, Fabricio Rochedo Conceicao.