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EXTRACCIÓN Y CARACTERIZACIÓN DE ADN

DOCENTE. Alba Lucy Enríquez Brand

Ana Sofía Campo Benavides


Jesús David Andrade
Calos Edison Cerón Urbano

Programa de Medicina
Extracción y caracterización de ADN
Universidad de Nariño
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RESUMEN

La extracción y caracterización del ADN es una práctica realizada con el objetivo de analizar la
información genética obtenida en la levadura y poder clasificar e identificar sus particularidades. Se
utilizó métodos de ruptura de células, homogenización en presencia de detergente,
desnaturalización de las proteínas por cloroformo y por último el etanol permite la precipitación del
material obteniendo como resultado fragmentos de ácidos nucleicos una mezcla de ADN y ARN.

PALABRAS CLAVE: ADN, Ácidos Nucleicos, Levadura, EDTA

INTRODUCCIÓN

El ADN también llamado ácido desoxirribonucleico es una molécula de gran tamaño que contienen
la información necesaria para obtener proteínas y a la vez transmitir la información genética a las
siguientes generaciones. Este ADN esta compactado por proteínas que reducen su tamaño de
manera significativa, es por eso que existen diferentes métodos que aíslan las células y tejidos que
rodean a esta molécula con el fin de analizar a esta en particular.

los procesos de extracción más característicos son: agitación de perlas de vidrio (método utilizado
para el rompimiento de la pared celular) y fenol-cloroformo y otros tales como la lisis celular
(método de rompimiento celular) a través de enzimas, eliminando el uso de fenol.

En este laboratorio conoceremos un método que nos permitirán la obtención de ácidos nucleicos
de la mejor manera, con buena concentración y de alta calidad con el fin de clasificar, identificar y
analizar estas moléculas.

RESULTADOS Y DISCUSIÓN

Se agregan 3g de levadura (es importante por su gran capacidad de descomposición y producción


de sustancias) y 3g de arena a un mortero previamente enfriado para proceder a macerar por
aproximadamente 5 minutos. Este proceso se hace con el fin de hacer la superficie de la membrana
más fácil de disolver, y una absorción con mayor eficacia de calor y de las soluciones a utilizar.

se pasa la sustancia a un Erlenmeyer de 125 ml y se le adiciona 10 ml de solución salina de EDTA un


agente quelante que protege al ADN de la actividad enzimática de las nucleasas, capturando los
iones magnesio y de esta manera evitar que actúen como cofactores de las nucleasas. Se adiciona 2
ml de SDS en un baño de hielo, SDS es un detergente aniónico que va a solubilizar las proteínas,
tejidos y membranas, dejando el ADN libre y evita que esta molécula quede atrapada en los
desechos celulares. A continuación, se calienta la solución a 60°C en un baño de agua con el fin de
desnaturalizar las proteínas.

Se enfriar a temperatura ambiente y se agrega 3 ml de perclorato de sodio que retira las proteínas
desnaturalizadas y la mayoría de polisacáridos y a la vez facilita la precipitación de las moléculas, los
cuales se separarán a través del método de centrifugación a 5000 rpm por 10 minutos
aproximadamente. El método de centrifuga se utiliza con el fin de separar tejidos, membranas,
polisacáridos y proteínas de los ácidos nucleicos (sobrenadante).
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Se procede a agregar 25 ml (dependiendo de la cantidad obtenida de ADN) de etanol frio anhidro


sobre la solución, el etanol precipita al ADN en forma de ovillo, separándolo de la fase acuosa. Con
una varilla de vidrio gruesa o una pipeta de Pasteur se puede enrollar o pescar el ADN, se escurre el
exceso de etanol y se le agrega 2 ml de solución salina de EDTA, obteniendo fragmentos de ADN
visibles.

CARACTERIZACIÓN

1. PRUEBA DE FOSFATOS

A 1 ml de solución de ácidos nucleicos anteriormente obtenida se agrega 2 ml de molibdato de


amonio y 1 ml de cloruro estañoso El molibdato de amonio y cloruro estañoso, reaccionan en un
medio ácido con el ortofosfato para formar un complejo fosforomolibdato, que se reduce a
azul/verde amarillento de molibdeno de intenso color. La intensidad del color de la solución
determina la concentración de fosfato.

2. DESOXIPENTOSAS

A 1ml de solución de ácidos nucleicos anteriormente obtenida se agrega 2 ml de ácido


tricloroacetico (extrae el tejido) se calienta a baño maría por 15 minutos aproximadamente y se
agrega difenilamina y se deja en baño de agua por otros 10 minutos. Obteniendo un color azul. Las
desoxipentosas debido al hidrólisis ácida sufren deshidratación, estos reaccionarán con difenilamina
dando un producto de color azul. Así, la reacción de difenilamina servirá para caracterizar, la
presencia de DNA y desoxipentosas en la muestra.

3. REACCION DE FEULGEN-SHIFF

A 1ml de solución de ácidos nucleicos anteriormente obtenida


se agrega 2 ml de solución de Shiff y se calienta a baño de agua
por 10 minutos. Este reactivo identifica el ADN en la muestra. El
material debe ser sometido a un hidrolisis para tener un
resultado óptimo, una coloración violeta.

Como conclusión esta práctica nos permitió conocer sustancias


(EDTA, SDS) que provocan cambios notorios en la muestra que
se evaluó.
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REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

 http://www.fcn.unp.edu.ar/sitio/quimicabiologica1/wp-content/uploads/2010/08/2011-
TP-8-Extracci%C3%B3n-y-caracterizaci%C3%B3n-de-DNA.pdf
 Velasco Mosquera R, PRINCIPIOS DE LAS TECNICAS MOLECULARES BASADAS EN PCR,
Universidad Nacional Sede Palmira. 2004
 https://www.studocu.com/es/document/uned/biologia-i/practica/practica-acidos-
nucleicospdf/276337/view
 https://www.redalyc.org/articulo.oa?id=77612900013
 http://genetica.uab.cat/base/documents/genetica_gen/Laura%20Mart%C3%ADnez%20M
art%C3%ADn2015_4_19P21_19.pdf
 J. DAVIDSON, R.L.P ADAMS BIOQUIMICA DE LOS ACIDOS NUCLEICOS DE DAVIDSON. 1980

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