Introducción

Un plásmido es una pequeña molécula de ADN circular que a menudo se encuentran en

bacterias y otras células. Los plásmidos son separados del cromosoma bacteriano y se
replican independientemente de ella. (NHGRI, s.f.).
La palabra plásmido fue dada a conocer por primera vez por el biólogo molecular
norteamericano Joshua Lederberg en 1952 (quien obtuvo el premio Nobel de Fisiología
y Medicina en 1958). En 1957, durante una epidemia de disentería en Japón, un grupo
de investigadores descubrió que ciertas formas bacterianas eran resistentes a los
antibióticos empleados para tratar esta enfermedad. Tiempo después se encontró que
esta resistencia se debía nada más y nada menos que a los mencionados plásmidos.

Fig. 1 Representación de la diferencia entre la estructura del DNA bacteriano y un

plásmido.

En esta definición podrían incluirse los episomas, que pueden existir tanto integrados en
el cromosoma bacteriano como libre y ciertos fagos atenuados en su forma de profago
como el P1. Los plásmidos son normalmente utilizados en Ingeniería Genética ya que
poseen un peso molecular que oscila entre los 2 y 20x104 daltones. Los plásmidos
poseen propiedades semejantes que están presentes en todos ellos, pero también
contienen características que los hace ser especiales. Algunas de estas características
son las siguientes:

-La mayoría son muy pequeñitos en comparación con el cromosoma bacteriano. Esto lo
podemos apreciar mejor en la siguiente figura y, aunque casi todos ellos son circulares,
hay algunos lineales.

-Cada plásmido contiene al menos una secuencia de ADN que sirve como un origen de
replicación lo cual permite al ADN ser reproducido en forma independientemente del
cromosoma.

-Poseen genes que dan ventajas a las bacterias que los contienen, de lo que hablaremos
más adelante.
Un sistema sencillo de clasificación de los plásmidos consiste en determinar si su
replicación se encuentra sometido a un control restringido o relajado los plásmidos
sometidos a control restringido se encuentran en pequeño número en células de
crecimiento activo, mientras que los de control relajado pueden encontraren gran numero.
Este último tipo de plásmidos no requiere síntesis, como el cloranfenicol, que bloquea la
replicación cromosómica, el plásmido continúa multiplicándose llegando a obtener hasta
2000 copias del plásmido por célula. Es indudable la importancia que posee esta
propiedad en los experimentos de clonación, puesto que permite incrementar
enormemente la cantidad de información genética exógena introducida en la célula.
Otra propiedad importante de los plásmidos es la que determina la incompatibilidad entre
plásmidos relacionados estrechamente. Así, los plásmidos de origen similar parecen
compartir los mismos elementos que controlan su replicación y, como consecuencia, no
pueden coexistir en la misma célula en ausencia de una considerable presión selectiva.
El conjunto de plásmidos incompatibles entre sí constituyen un grupo de incompatibilidad,
conociéndose actualmente 23 de estos grupos. La autonomía de los plásmidos permite
asimismo que puedan se segregados en las denominadas mini células, que son carentes
de cromosoma producidas por algunos mutantes bacterianos. Esta propiedad es
importante cuando se quiere estudiar la expresión de la información genética acarreada
por el plásmido, dado que la totalidad de la síntesis proteica en las mini células esta
codificada por él. No obstante para ciertos estudios puede resultar más conveniente el
empleo de sistemas acelulares de síntesis proteica in vitro. (Alfonso)
Dependiendo de su tamaño pueden codificar desde unas cuantas proteínas hasta cientos
de ellas. Sin embargo, raramente codifican productos esenciales para el crecimiento
celular, tales como ARN polimerasas o enzimas del ciclo de los ácidos tricarboxílicos. En
cambio, los productos de sus genes generalmente dan a las bacterias una ventaja
selectiva sólo bajo ciertas condiciones. La resistencia a antibióticos como la ampicilina,
tetraciclina y kanamicina; la nodulación de raíces de leguminosas; y la producción de
antibióticos como la bacteriocina (activa contra otras especies bacterianas), son algunas
características fenotípicas codificadas por los plásmidos.
Snyder L. 2007. Algunos plásmidos de origen natural y algunos rasgos que codifican, así
como el huésped en el que se encontraron originalmente. Tabla N°1. Recuperado de
molecular genetics of bacteria. Third edition. ASM PRESS. 2007. Chapter 4. Page 198

Los productos génicos codificados por plásmidos incluyen enzimas para la utilización de
fuentes de carbono inusuales, tales como tolueno, resistencia a las sustancias tales como
metales pesados y antibióticos, síntesis de antibióticos, y la síntesis de toxinas y proteínas
que permiten la infección exitosa de los organismos superiores (Snyder L. 2007).
Es interesante especular acerca del por qué tantas funciones no esenciales están
codificadas en plásmidos y no en el cromosoma. Si los genes del plásmido, tales como
los de resistencia a los antibióticos y la síntesis de toxina, fueron parte del cromosoma,
todas las bacterias de una especie, no sólo los que tienen los plásmidos, tendrían los
beneficios de esos genes. En consecuencia, todos los miembros de esa especie serían
más competitivos en entornos en los que estos rasgos eran deseables, tal vez tenga
algunos genes de plásmidos que hace que la especie huésped capaces de sobrevivir en
los ambientes más sin la carga de un cromosoma más grande. (Snyder L. 2007).
Los plásmidos que codifican diferentes rasgos se pueden distribuir entre los diferentes
miembros de la población, sin embargo, si el entorno cambia abruptamente de manera
que los genes transportados en uno de los plásmidos se vuelven esenciales, las bacterias
que llevan el plásmido de repente tienen una ventaja selectiva y sobrevivirán, asegurando
así la supervivencia de las especies. De esta manera, los plásmidos que permiten que
las bacterias ocupan una mayor variedad de nichos ecológicos y contribuyen al éxito
evolutivo no sólo de las especies de bacterias, sino también los plásmidos que se
encuentran en esa especie. (Snyder L. 2007).
Objetivos
Demostrar la pérdida espontanea de DNA plasmídico en cepas de Escherichia coli.
Demostrar la perdida inducida de plásmidos en las cepas de Escherichia coli.
Comparar el comportamiento de un plásmido grande unicopia con el de un plásmido
pequeño multicopia en relación a su curación.
Comparar el efecto curante de dos agentes químicos de diferente naturaleza.

Resultados
Tabla 1. Porcentaje de sobrevivencia de las cepas de Escherichia coli (DH5α y
JC4046) sometidas a tratamiento de temperatura a 45°C.

Número de colonias Titulo Sobrevivencia

Cepa Tubo Equipo
10-4 10-5 10-6 (UFC/mL) (%)
1 Inc 370|368 60|50 5.50x108
JC4046

Testigo NA
3 Inc 114|120 19|20 1.26x108
1 293 22 2 2.93x107 5.32
Problema
3 56|28 4 1 4.2x106 3.33
2 Inc 415|397 79|87 8.3x108
Testigo NA
DH5α

4 Inc 228|322 22|25 3x108

2 Inc 378|290 43|38 3.35x108 40.36
Problema
4 163 15|14 4|2 1.6x107 5.33
“NA”: No Aplica, “Inc”: Incontable.

Tabla 2. Porcentaje de sobrevivencia de las cepas de Escherichia coli (DH5α y

JC4046) sometidas a tratamiento de ácido ascórbico [0.2M].

Número de
Titulo Sobrevivencia
Cepa Tubo Equipo colonias
-4 (UFC/mL) (%)
10 10-5 10-6
100 13
JC4046

Testigo 5 Inc 1.21x108 NA

113 6
180 26
Problema 5 Inc 1.4x108 115
120 2
118 15
Testigo 6 Inc 1.06x108 NA
DH5α

81 20
114 6
Problema 6 Inc 1.17x108 110
120 12
“NA”: No Aplica, “Inc”: Incontable.
Tabla 3. Porcentaje de segregación y curación de los plásmidos presentes en las
cepas de E. coli DH5α (pBS) y JC4046 (F’) sometidas a tratamiento de temperatura
de 37°C y 45°C.
Testigo (37°C) Problema (45°C)
Curación
Cepa Equipo Colonias Colonias Segregación Colonias Colonias Curación
real (%)
MP MNP (%) MP NMP (%)
1 416 414 0.48 416 410 1.44 0.96
JC4046
3 90 84 6.38 Cont. Cont. NA NA
2 289 169 41.52 186 114 38.71 -2.81
DH5α
4 361 360 1.90 385 335 12.98 11.08
“Cont.”: Contaminación, “NA”: No Aplica, “MP”: Medio Permisivo, “MNP”: Medio No Permisivo.

Tabla 4. Porcentaje de segregación y curación de los plásmidos presentes en las

cepas de E. coli DH5α (pBS) y JC4046 (F’) sometidas a tratamiento de ácido
ascórbico 0.2 M.
Testigo (37°C) Problema (45°C)
Curación
Cepa Equipo Colonias Colonias Segregación Colonias Colonias Curación
real (%)
MP MNP (%) MP NMP (%)

JC4046 5 415 411 0.96 414 406 1.93 0.97

DH5α 6 416 416 0 416 416 0 0

“MP”: Medio Permisivo, “MNP”: Medio No Permisivo.