LABORATORIO No 6 ANALISIS MICROBIOLOGICO DE AGUA

PAULA JAIMES CÓD. 1610811

MAILYN PORRAS CÓD. 1610815

SAMUEL CORREDOR CÓD. 1610806

BRYAN PINEDA CÓD. 1610864

Profesora:

AZULA SANGUINO QUINTERO

UNIVERSIDAD FRANCISCO DE PAULA SANTANDER

INGENIERIA BIOTECNOLOGICA

MICROBIOLOGIA AMBIENTAL

2014
 METODOLOGIA

TOMA DE
MUESTRA

ANALISIS DE AGUA POR

EL METODO DEL
NUMERO MÁS PROBABLE

Diluir 10 ml de agua en 90 ml de
agua peptonada estéril. Partiendo
de la muestra de suelo se preparan
diluciones hasta 10^-2 10^-3.

Sembrar en 9 tubos de caldo Con la dilución 10^-2 y Con la dilución 10^-3

lauryl sulfato, ayuda al 10^-2 sembrar en agar y 10^-3 sembrar en
crecimiento de plate count, ayuda al agar saboroud ayuda
microorganismos como crecimiento de aerobios al crecimiento de
Echerichia coli o coliformes. mesofilos. hongos y levaduras.

Incubar a 35°C +/ - 2°C 48 horas para

aerobios mesofilos y coliformes.

Incubar a 25° C 3 a 5 días para hongos.

 Si sale positivo , Siembra
en caldo Bilis Verde
Brillante (brilla) con
campanita dunhan.

Incubar a 35°C +/ - 2°C

48 horas

Si sale positivo Sembrar en

caldo brilla, caldo
triptófano, agar eosina azul
de metileno (EMB).

Fig. siembra en caldo lauryl sulfato

 INFORMACION DE LA MUESTRA DE AGUA TOMADA

CONDICIONES PARA LA TOMA DE LA MUESTRA:

La muestra de agua tomada fue extraída de la Fuente del Parque Santander ubicado en
el sector del centro frente a la Cátedra; la cual fue embazada en un recipiente con
capacidad de 1.4 L. este procedimiento se realizó de la siguiente manera:

Se introdujo el recipiente en la fuente, dejándolo sumergir a una buena profundidad para

posteriormente tomarla; evitando así que otros agentes externos puedan contaminar la
muestra.

CARACTERISTICAS ORGANOLEPTICAS DE LA MUESTRA DE AGUA TOMADA:

Color: verde traslucido, con presencia de partículas.

Olor: no presenta olor.

La muestra de agua tomada pertenece a agua estancada, la cual se encuentra más

susceptible a la contaminación que el agua profunda o subterránea. Esta presenta un
color verde traslucido con presencia de partículas difusas de aspecto verdoso, las cuales
se precipitaban en el fondo del recipiente.

ANALISIS DE AGUA REQUERIDO:

Se requiere un análisis microbiológico de agua procedente de la fuente del parque

Santander, para el cual se necesita un análisis de presencia de microorganismos que
indiquen contaminación de la fuente hídrica por factores externos. Dentro de este se
necesita análisis de microorganismos como:

 Coliformes totales.
 Coliformes fecales: Escherichia coli.
 Aerobios mesòfilos.
 Hongos y levaduras.
 CARACTERISTICAS DE MEDIOS DE CULTIVOS UTILIZADOS EN PRUEBAS DE

COLIFORMES TOTALES Y FECALES.

Aerobios mesofilos: No Hubo Crecimiento

Hongos y levaduras: 10^-3: 7*10^3 UFC/ ml

10^-3: 1*10^3 UFC/ ml
Echerichia coli / coliformes:

1/9 tubos salieron con coloración opaca y mayor predominio de gas.

SEGUNDA PARTE:

Con el tubo que salió positivo se sembró en el caldo brilla y salió positivo.
Brilla: positivo

TERCERA PARTE:

 En el caldo brilla: positivo producción de gas y turbidez. 10^-1 44.5°C.

  En el caldo triptófano: Indol positivo anillo rojo presenta enzima triptofanasa.
44°C

 En el agar Emb: positivo presencia de colonias, precipitado negro,

coloración rojiza o purpura, sospecha de Echerichia coli.

 Debe ser obligatorio el precipitado negro, fuertes fermentadores de lactosa

y sacarosa coliformes y Echerichia coli.

Coliformes: 1 0 0: 4 bact/ ml
Echerichia coli: 1 0 0: 4 bact/ ml

𝐷𝑇∗𝐷𝑖𝑙𝑢𝑐𝑖𝑜𝑛 𝑖𝑛𝑡𝑒𝑟𝑚𝑒𝑑𝑖𝑎
NMP:
100

4 bacterias* 100/ 100

4 bacterias* 10/ 100 = 0.4 bacterias/ ml
4 bacterias * 1000/100: 40 bacterias/ml
ANALISIS DE RESULTADOS

Los miembros de la familia Enterobacteriaceae son bacilos gram negativos, inmóviles o

móviles con flagelos. Peritricos se desarrollan en medios artificiales y todas las especies
forman ácido o ácido y gas a partir de glucosa. Su composición antigénica es un mosaico
que interrelaciona serológicamente varios géneros y aun familias, muchas de estas
bacterias son parásitos de animales y otros patógenos.

Para enjuiciar la calidad de las aguas se recorre a parámetro físico químico y biológico.
Los parámetros bacteriológicos tienen mayor importancia para dictámenes higiénicos ; es
preciso hallar el número de gérmenes saprófilos o de coli y de bacterias procedentes del
intestino humano como indicadores de la contaminación.

Conviene destacar la importancia que tienen las cifras de coli y coliformes, pertenecientes
a las enterobacterias que fermentan lactosa con producción de gas y ácido. Para
determinar el número de estas bacterias se suele emplear medio selectivo.

Bacteria Coliforme:

Incluyen E. Coli y otras bacterias que se asemejan morfológica y fisiológicamente. Estos

M.O. con frecuencia difieren entre si en características pequeñas. Las bacterias coliforme
suelen encontrarse en el aparto intestinal del hombre y animal. E. Coli, rara vez se
encuentra fuera del intestino

Las bacterias coliformes son bacilos cortos, gram negativos que fermentan la lactosa y
forman ácido y gas.

Son anaeróbios facultativos, se multiplican a mayor rapidez a temperatura entre 30 y 37

ºC, crecen a gran abundancia en medios corrientes, como caldo y agar.

La colonia de E. Coli en agar E.M.B (eosina y azul de metileno) tienen 2 a 4 mm de

diámetro, un centro grande de color oscuro e incluso negro, y tienen brillo verde metálico
cuando se observan con luz refleja.

Se han creado otras pruebas para diferenciar tipos de bacterias coliformes, suelen
emplearse 4 y se han juntado sus iniciales en la palabra nemotécnica IMViC (Indol, Rojo
Metilo (R.M.), Borges – Proskauer (V: P) y utilizada de citrato.

La reacción de IMViC de algunas bacterias coliformes como E. Coli ++ --, significa que el
MO produce Indol y es positivo al rojo metilo y negativo al V.P.

Hay 16 combinaciones posibles de resultados prueba negativa y positiva.

Se considera que todas las bacterias coliformes, tienen importancia en el H2O desde el
punto de vista sanitario aunque muchos autores han tratado de diferenciar el tipo fecal
(e.coli) y el no fecal (A: aurogenes)

Análisis sanitario del H2O

El diagnostico de las colonias coliformes en la muestra de H2O se basa en la capacidad
de dicho M: O: para producir gas a partir de la lactosa.

Filtración:

Es un medio eficaz de eliminar M.O. y otras sustancias de suspensión del H2O.

Cloración:

Es el método más eficaz de hacer potable el H2O. La cantidad de cloro que se agrega
depende del grado de contaminación del abasto hídrico y su contenido de sustancias
orgánicas. El cloro mata la mayor parte de las bacterias no esporágenas. El H2O clorada,
en consecuencia no siempre es estéril, pero suele brindar seguridad para consumo por el
ser humano.

H2O potable:

Sea limpia, fresca, sin olores o sabores desagradables o que causen rechazo de quien lo
consume y sin sustancias químicas o M.O. nocivos.

Ventajas del uso de Filtro de membrana para las H2O:

 Rapidez en la obtención de resultados

 Ahorro de manos de obra, medios, materiales de vidrios, y coste de los materiales
si el filtro se lava y se vuelve a utilizar.
 Pueden exponerse los organismos a medio de enriquecimiento muy fácilmente
durante un corto tiempo y a una temperatura conveniente.

Inconvenientes de Uso:

 No hay indicación de formación de gas (algunas H2O tienen gran cantidad de

organismos fermentadores de la lactosa sin producción de gas capaces de crecer
en el medio).
 La filtración por membrana es inadecuada para H2O con mucha turbidez y bajos
recuentos, porque el filtro llega a obturarse antes de que pase agua suficiente.
 Cantidades grandes de organismos no coliformes capaces de crecer en el medio
pueden interferir en el crecimiento de los coliformes.

Número Más Probable de Coliformes (NMP)

En este experimento, agarramos 9 tubos con caldo nutriente amarillo, le agregamos 1 ml

de la muestra agregada en los envase de 0,1 peptona y rotulada 10-1; 10-2;10-3.

Cada tubo tiene un tubo Durjam invertido en su interior, si en el interior de este tubo,
después de 24 horas no hay formación de gas la prueba es negativa, no hubo crecimiento
de presunto coliforme, y efectivamente este fue el resultado obtenido, no hubo presencia
de gas en el interior del tubo Durjam.
Nota: cada tubo contenía 10 ml de caldo L.S.T.

Con respecto a N.M.P de coliforme COVENIN dice en 7.2.3, se considera tubo positivo en
la prueba presuntiva aquellas que presenten cualquier cantidad de gas en el tubo Durham
y / o Turbiedad después de 24 a 48 horas de incubación.

Este resultado no fue el nuestro, pero para demostrar lo señalado anteriormente, que si
no hay presencia de gas, es porque la prueba es negativa, según COVENIN, o sea, que el
H2O utilizada para este análisis ha sido adecuadamente físico o químico analizada, para
considerarla agua potable.

Cabe destacar que la estimación del N.M.P., se basa en la presunción de que las
bacterias se hallan naturalmente distribuida en un medio líquido.

Discusión:

A partir de los siguientes resultados de población microbiana presentes en este análisis

Se deduce que:

Aerobios mesofilos: No Hubo Crecimiento

3B

2B
Hongos y levaduras: 10^-3: 7*10^3 UFC/ ml
10^-3: 1*10^3 UFC/ ml

2B

3B

Echerichia coli / coliformes:

1/9 tubos salieron con coloración opaca y mayor predominio de gas.

Fig. derecha 3B izquierda 2B

Teniendo en cuenta los resultados obtenidos del análisis del agua se puede decir que el
índice de contaminación de la fuente del parque Santander es bajo en relación a los
resultados arrojados sobre bacterias mesofilas aerobicas; debido a, que la muestra
analizada fue obtenida de un agua estancada en la cual, es muy poco el oxígeno que esta
posee para la supervivencia de los mismos, lo que genero un alce en la población de
microalgas las cuales pudieron generar una inhibición en el crecimiento de la población
bacteriana teniendo en cuenta que estas son anaeróbicas y autótrofas, lo que desarrollo
la presencia de varios tipos microorganismos los cuales la utilizan como fuente de
alimento.
 CONCLUSIONES

 El agua constituye un elemento esencial, ya que es indispensable para la

vida, por lo que es necesario llevar un seguimiento de la calidad. Con este
análisis se ha querido determinar la calidad de un agua tomado de un pozo
o fuente.

 Sería normal que apareciera una contaminación fecal en el agua si hubiera

habido un hallazgo de la presencia de Escherichia Coli, o coliformes los
cuales son los mejores indicadores de este tipo. Debido a su débil
presencia se puede concluir que su contaminación fecal es mínima.

 Teniendo en cuanta el exceso de presencia de microalgas en los resultados

del análisis realizado a la muestra de agua se puede deducir que las
microalgas inhibieron el crecimiento bacteriano; pero a su vez fue el
causante de la presencia de otros tipos de microorganismos como los
protozoos
 BIBLIOGRAFIA

 http://www.ing.unal.edu.co/catedra/drs_diaz_collazos/Salud,%20Calidad%20y%20Tratam
iento%20de%20AR/Calidad%20Microbiologica%20del%20Agua.pdf
 http://www.respyn.uanl.mx/viii/3/articulos/calidad_de_agua.htm
 http://quimiambientalutp.files.wordpress.com/2012/05/analisis-microbiolc3b3gico-del-
agua.pdf