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Enterobacteriacea
Shigella spp
Klebsiella spp
Familia Enterobacteriaceae
CARACTERISTICAS GENERALES
IDENTIFICACION BIOQUIMICA
Producción de enzimas
Diferentes sustratos
Sistema indicador
Diferencias de pH
Familia Enterobacteriaceae
MEDIOS DE AISLAMIENTO PRIMARIO
Agar Agar SS
Caldo TT
MacConkey
Agar HE
Caldo Salmosyst
Agar EMB
Caldo Selenito
Salmonella typhi
ATCC 19430 (Colonias
marrones a negras, algunas
Acetoina + 2 CO2
Acetato + formato
(CO2+ ácido fórmico+ ácido acético)
Familia Enterobacteriaceae
Control Negativo Positivo
Agar Simons Citrato
Familia Enterobacteriaceae
Agar Fenilalanina
Negativo Positivo
no desamina desamina
Familia Enterobacteriaceae
Producción de indol
• Fundamento:
✓ Permite detectar la producción de indol, producto de la degradación
metabólica del aminoácido triptófano.
✓ Las bacterias que poseen la enzima triptofanasa son capaces de
hidrolizar y desaminar el triptoóano con producción de indol, ácido
pirúvico y amoníaco.
✓ El indol desdoblado de la molécula de triptófano puede ser
detectado cuando reacciona con el grupo aldehído del
para-dimetilamino benzaldehído del reactivo revelador (reactivo de
Kovacs), formándose un complejo de color rojo. Citrato de hierro y
amonio: los microorganismos productores de H2S ennegrecen el
medio de cultivo.
• Procedimiento: A partir de un cultivo axénico se toma una colonia
que se inocula por picadura en agar SIM. Incubar por 18 a 24 horas
a 35± 2°C.
• Interpretación: Revelar con reactivo de Kovacs adicionando
aproximadamente 5 gotas. Observar la formación de un anillo de
color rojo en la parte superior del medio de cultivo.
Familia Enterobacteriaceae
Negativo Negativo Positivo
H2S + H2S - H2S -
Agar SIM
Familia Enterobacteriaceae
Caldo malonato
• Fundamento:
✓ El malonato es un inhibidor enzimático del ácido succínico y
compite por los sitios de unión de la enzima succínico
deshidrogenasa.
✓ Determina microorganismos capaces de utilizar metabólicamente
malonato sódico como única fuente de carbono con la resultante
alcalinidad.
Negativo Positivo
Familia Enterobacteriaceae
Caldo malonato
• Fundamento:
Familia Enterobacteriaceae
Reacción rojo de metilo (RM) (Evalúa la vía ácida mixta)
• Fundamento:
Detectar cuantitativamente la producción de ácidos fuertes (láctico,
acético, fórmico) por parte de los microorganismos a partir de
glucosa,
• Principio:
Determinar la capacidad enzimática de un microorganismo de
descarboxilar un aminoácido para formar una amina (cadaverina o
putrescina) con la resultante alcalinidad. Cada descarboxilasa es
específica para un aminoácido y la reacción es completa e
irreversible. Son enzimas adaptativas o inducidas.
• Fundamento:
La descarboxilación es el proceso por el cual las bacterias que
poseen enzimas descarboxilas específicas atacan los aminoácidos
en su carboxilo terminal COOH, para formar una amina o una
diamina y dióxido de carbono.
Familia Enterobacteriaceae
NH2 NH2 NH2 CH2 – NH2
NH2 NH2
L-Lisina Cadaverina
(diamina)
Familia Enterobacteriaceae
sistema arginina descarboxilasa
Reacción global Sistema total
NH
Arginina
L-Arginina descarboxilasa Agmatina +CO2
CNH2 Agmatinasa Agmatina dehidrolasa
(agmatina ureohidrolasa) (agmatina desiminasa)
NH NH NH2 CH – NH2
CH – NH2 CH – NH2
COOH COOH
(arginina desiminasa)
Sistema de clivaje
de la citrulina (citrulina ureidasa)
Ornitina
descarboxilasa
Putrescina + CO 2
Familia Enterobacteriaceae
Prueba de decarboxilasa (lisina – ornitina - arginina)
Familia Enterobacteriaceae
Prueba de fermentación de hidratos de carbono
• Principio:
Determinar la capacidad de un microorganismo para fermentar
(degradar) un hidrato de carbono específico (en un medio basal) y
de producir ácido o ácido con gas visible.
Familia Enterobacteriaceae
Prueba de fermentación de hidratos de carbono
C6H12O6
Glucosa
Alcohol etílico
Familia Enterobacteriaceae
Prueba de fermentación de hidratos de carbono
• Procedimiento:
A partir de un cultivo axénico se transfiere una colonia al caldo
base (peptona, cloruro de sodio, rojo fenol e hidrato de carbono
correspondiente al 1%) el cual contiene campana de Durham (libre
de burbujas). Incubar por 18 a 24 horas a 35± 2°C.
• Interpretación:
En presencia de fermentación o utilización del carbohidrato el
indicador de pH rojo fenol vira a amarillo. Se debe observar
cuidadosamente la campana de fermentación o campana de
Durham, para precisar si hay o no producción de gas por
desplazamiento de líquido de la campana.
Familia Enterobacteriaceae
Prueba de fermentación de hidratos de carbono
• Interpretación:
Bacteria Prueba(S) específica(S)
Escherichia coli (lac +) citrato (-) Indol(+) Motil
Shigella sonnei (lac -) citrato (-) No motil Xilosa(-)
Citrobacter koseri (lact +) citrato (-) Indol (+) No motil
Proteus mirabilis (lac -) citrato (-) PPA(+) Urea(+)
Salmonella Typhi (lac -) citrato (+) RM(+) motil
Enterobacter cloacae (lac +) citrato (+) LIA (K/A+gas)
*Serratia marcescens (lac -) citrato (+) motil
Klebsiella pneumoniae (lac+) citrato (+) Urea(+debil)
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Familia Enterobacteriaceae
• Sistemas de identificación comercial manual
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API 20E
Enterotube II
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