UNIVERSIDAD DE LAS FUERZAS ARMADAS ESPE

EXTENSIÓN SANTO DOMINGO

INGENIERÍA EN BIOTECNOLOGÍA

FISIOLOGÍA DE LOS SISTEMAS BIÓTICOS

TEMA:
Protocolo propagación in vitro de la yuca

INTEGRANTES
Viviana Torres

DOCENTE:
Natasha Baer
NIVEL:
Cuarto “B”

OCTUBRE – FEBRERO 2019

Manihot esculenta lamada comúnmente yuca, aipim, mandioca, guacamota, casabe o
casava, es un arbusto perenne de la familia de las euforbiáceas extensamente cultivado en
América, África y Oceanía por sus raíces con almidones de alto valor alimentario (Suárez,
2011).

La yuca o mandioca es originaria del

centro de América del Sur y desde
entonces se ha cultivado en la mayor
parte de las zonas tropicales y
subtropicales del continente americano.
También se introdujo con gran éxito en
naciones africanas de similares condiciones climáticas, y aunque se estima que las
variedades hoy conocidas son efecto de la selección artificial, hay variedades generadas
por el aislamiento geográfico de la selva al de los altiplanos (Suárez, 2011).

Descripción

La yuca (Manihot esculenta) pertenece a la familia Euphorbiaceae. Es un arbusto perenne,

leñoso, de tamaño variable y fotoperíodo corto. Es monoica, de ramificación simpodial y
con variaciones en la altura de la planta que oscilan entre 1 y 5 metros. Posee flores que
tienen cinco sépalos y 10 estambres. Su fruto es una capsula de 1 a 2 cm de diámetro,
dehiscente y semicircular (Cock, 1989).

Protocolo de propagación in vitro de la yuca

Protocolo 1

Explante: Yemas axiliares

Procedimiento:

Remover los tallos nuevos crecidos de esquejes. Lavar los nudos con 10% de cloro por
15 minutos con algunas gotas de detergente y enjuagar con agua destilada estéril. Escindir
las yemas axilares de secciones nodales luego pasar al medio I descrito en el cuadro 1.
Para la multiplicación, cultivar las secciones nodales en medio fresco libre de hormonas
en el medio II. Después de 3-4 semanas pasar al medio III (Cárdenas, 2014).
 Cuadro 1. Medios para el cultivo de yuca

Protocolo 2

Explante: Yemas axiliares

Procedimiento:

La recolección de explantes se realizó cortando en la parte aérea de la planta segmentos

de tallo de aproximadamente 20 cm de largo con yemas axilares, a los segmentos de tallos
se les eliminaron las hojas y pecíolos dejando únicamente 1.5 cm de pecíolo del tallo
hacia el área foliar. Posterior a la recolección de explantes, estos fueron llevados al
laboratorio donde fueron sometidos a desinfección, preparación, establecimiento y
posteriores tratamientos para la producción de brotes (Reyes, 2012).

Desinfección de explantes: Las estacas de aproximadamente 20 cm de largo que

contenían yemas axilares fueron colocadas durante 24 horas en una solución de 2 g/L de
Benlate® y 2 g/L de Agri-mycin® disueltos en agua destilada, luego las yemas fueron
removidas de las estacas y se les quitaron las estípulas para ser lavadas con agua y jabón,
después fueron sumergidas en ETOH al 70% durante 5 segundos, posteriormente fueron
sumergidas durante 10 minutos en una solución de NaOCl (hipoclorito de sodio) al 10%
(v/v) con dos gotas de Tween 80 por cada 100 ml, preparada con agua destilada estéril.
Seguidamente se enjuagaron tres veces con agua destilada estéril y se finalizó con la
eliminación de todas las capas de primordios foliares que cubren el domo meristemático.
Debido a que el establecimiento in vitro con yemas hace propensa la contaminación con
hongos y bacterias. Las dos inmersiones, los enjuagues y la eliminación de primordios
foliares fueron realizadas en cámara de flujo laminar. Se utilizó cloro comercial para
preparar la solución de NaOCl.

Preparación del medio de cultivo: Se utilizó un medio de cultivo que tuviera las sales
minerales al cual se le añadieron constituyentes orgánicos: 100 mg/L de inositol, 1 mg/L
de tiamina HCL; los reguladores de crecimiento: 0.04 mg/L de 6-Bencil Aminopurina
(BAP), 0.05 mg/L de Ácido Giberélico (AG) y 0.02 mg/L de Ácido Naftalenácetico
(ANA). Además, se agregó 1.8 g/L de Phytagel (CIAT 1991) como agente gelatinizante
(Cuadro 1). Para preparar las soluciones y medios de cultivo se usó agua destilada, para
medir el pH, mientras que para ajustar el pH a 5.8 se utilizó HCL o KOH. Finalizado el
medio se dispensó en frascos de vidrio colocando 10 ml por contenedor. Posteriormente
el medio se esterilizó en autoclave a 15 PSI durante 20 minutos a una temperatura de 121
ºC (Reyes, 2012).

Preparación, siembra y manejo del material vegetal. Se separaron los primordios

foliares de las yemas hasta llegar al domo meristemático. Los domos se sembraron uno
en cada frasco, se sellaron los frascos y se colocaron en el cuarto de crecimiento a una
temperatura de 22 ºC, con un rango de humedad relativa de 70% a 80%. La intensidad de
la luz es de 1800 Lux con un fotoperíodo de 16 horas luz procendente de lámparas
fluorescentes y ocho horas de oscuridad. Después de 26 días del establecimiento in vitro
se procedió a la realización de un experimento orientado a la búsqueda de producción de
brotes. Los domos meristemáticos establecidos y que presentaban un microesqueje de
aproximadamente 1 a 1.5 cm de altura, fueron colocados en tres medios diferentes para
la producción de mayor número de brotes (Reyes, 2012).

Producción de brotes: Se utilizó el regulador de crecimiento 6-Bencil Aminopurina

(BAP) en las concentraciones de 0.04 mg/L y 0.5 mg/L y Sacarosa en las concentraciones
de 20 g/L y 40 g/L (Reyes, 2012).

Preparación, siembra de microesquejes y manejo de material vegetal: A nivel de la

cámara de flujo laminar, se colocó un microesqueje por cada frasco con 20 ml de medio
de cultivo que comprendían los tres tratamientos, posteriormente se sellaron los frascos y
se procedió a colocarlos en el cuarto de crecimiento, a una temperatura de 22 ºC, con un
rango de humedad relativa de 70% a 80%, con 16 horas de luz y ocho horas de oscuridad,
siendo la intensidad de la luz de 1800 Lux (Reyes, 2012).
 Figura 1. Domo meristemático aséptico de Manihot esculenta

Figura 2. Microesquejes desarrollados a partir de domos meristemáticos con

microesqueje. A) Microesqueje en tratamiento Yt 0.04-20. B) Microesqueje en
tratamiento Y1 0.50-20. C) Microesqueje en tratamiento Y2 0.50-40.

Figura 3. Microesquejes de Manihot esculenta a los 14 días de haberse implementado

los tratamientos de producción de brotes. A) Tratamiento Yt 0.04- 20. B) Tratamiento
Y1 0.50-20. C) Tratamiento Y2 0.50-40.

Figura 4. Microesqueje de M. esculenta con formación de raíces.

Bibliografía
Cárdenas, A. (2014). CERS. Obtenido de
file:///C:/Users/User/Downloads/Protocolo%20in%20vitro%20limon.pdf

Reyes, C. D. (Noviembre de 2012). bdigital. Obtenido de

https://bdigital.zamorano.edu/bitstream/11036/1065/1/T3352.pdf

Suárez, L. (Septiembre de 2011). scielo. Obtenido de

http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0258-
59362011000300004