Calidad

 Certificar que no se han experimentado ni cambios ni mutaciones.

 Descripción completa de las células, las bacterias o las variedades de virus y los
plásmidos* con los que se comienza la “construcción” de la vacuna recombinante.
*En caso de presentar indicios de inestabilidad serán rechazados.

 Estrategia de construcción de los vectores según lo descrito en la directiva

2001/18/EC .

 Caracterizar con métodos bioquímicos, inmunológicos y moleculares el antígeno

expresado por la vacuna , para garantizar la calidad del producto obtenido.

Seguridad

 Ensayos que acrediten la seguridad de la vacuna en la misma especie animal que

vaya a ser la destinataria del producto (Directiva 2001/82/EC -Annexo I, título II,
Parte 7 -).

 Cerciorar que los animales vacunados no pueden trasmitir la enfermedad a los

humanos o otros animales (si puede suceder, se especifica claramente en las
condiciones de uso).

 Acreditar que no son patogénicas o lo son en un nivel insuficiente para poner en

peligro la seguridad del animal vacunado.

 Demostrar que la inserción de genes foráneos no provoca un aumento de la

virulencia ni una modificación en el tropismo tisular.

 Cumplir normativa comunitaria sobre ecotoxicidad (Directiva 2001/82/CE y

2001/18/EC -Annex II- ):

Estudio de virulencia en situaciones de riesgo en diferentes especies (tanto diana como no

diana).
Estudio de posible transmisión horizontal y recombinación potencial del vector vacunal o
de parte de él.
Estudio de especificidad de especie diana.
Estudio de la posible instalación en el ambiente.
Método validado para poder distinguir entre vacuna y microorganismo “salvaje”,
especialmente en situaciones de planes de control y erradicación de la enfermedad.
Utilización de datos obtenidos de ensayos realizados con el mismo vector pero
acompañado de otras secuencias.
Eficacia

Estudiar el efecto de la inmunidad preexistente al vector y/o al antígeno.

Documentar la inmunorespuesta post-vacunación y considerar impacto en planes de
vacunación en vigor.
En vacunas que contienen más de un antígeno, es necesario evaluar la respuesta a cada
antígeno.

Tipos

Podemos subdividirlas en 3 subtipos:

1. Vacunas que utilizan virus o bacterias como vectores.

2. Vacunas de ADN desnudo.

3. Vacunas comestibles.

VACUNAS QUE UTILIZAN VIRUS O BACTERIAS COMO VECTORES

 Se incorpora un gen que codifica para una proteína inmunogénica en el genoma de

un microorganismo atenuado que se denomina vector.

 El vector al replicarse en el organismo receptor, expresa los genes propios y el que

produce la proteína incorporada.

 La proteina incorporada se presenta al sistema inmune en su superficie celular.

 Induce respuesta inmune humoral y celular.

Los vectores más usados son:

 Virus de família poxviridae.

 Adenovirus.
 Herpevirus.
 Influenza.
 Bacterias como Salmonella, Streptococcus, Staphilococcus y E-coli.

Existen riesgos asociados:

 La multiplicación viral es intracelular, por tanto una sola partícula en una sola
célula puede dar lugar a millones de virus en poco tiempo.
  ADN viral puede integrarse en el genoma de los hospedadores de forma latente
(esta integración puede tener consecuencias no deseables).

 Posibilidad de recombinación genética entre virus MG y otro cercano que esté

circulando en el receptor, que generaría genotipos y fenotipos alterados.

 Cambios menores en los virus pueden dar lugar a cambios drásticos en espectro de
hospedador, permisividad y patogenidad.

 Características específicas de los nuevos virus introducidos en el ecosistema.

VACUNAS DE ADN DESNUDO

 Son plásmidos de DNA en los que se incorpora gen que expresa antígeno
inmunógeno del patógeno e induce inmunidad contra él.

 Se expresan dentro de células del organismo receptor y se presentan al sistema

inmune en combinación con antígenos celulares de clase I (igual que en infección
natural).

 Útiles particularmente en inducción de células T-citotóxicas, por tanto protegen

más ampliamente ante diferentes cepas virales.

 Presentan el antígeno con modificaciones translacionales y conformacionales

nativas, por tanto estimulan anticuerpos de óptima especificidad.

Existen riesgos asociados:

 Integración potencial del plásmido en el genoma de las células hospedadoras.

 Inducción potencial de anticuerpos contra ADN del plásmido inyectado.

 Problema de conformación no nativa de proteinas bacterianas en vacunas con

ADN inoculadas en animales.

 Inducción potencial de autoinmunidad.

 Liberación accidental de las construcciones de ADN desnudo pueden favorecer

transferencia horizontal de genes.

 Tienden a la inestabilidad, por tanto posibilidad de generar nuevos virus.

Existen beneficios asociados:

 Efectivas en modelos animales sin necesidad de adyuvantes o sistemas de

administración.

 Solo expresan genes que inducen inmunidad.

 Las produce el mismo animal, siguiendo las instrucciones del gen insertado en el
plásmido de expresión.

 Menor dependencia de la cadena de frío que las vacunas con proteínas.

VACUNAS COMESTIBLES

 Se producen a partir de plantas modificadas genéticamente que actúan como

bioreactores de antígenos de patógenos que inducen inmunidad.

 Administración tan segura como el simple hecho de comer una fruta.

 Su producción puede resultar barata.

 Son ideales contra patógenos que causan enfermedades respiratorias, urogenitales

e intestinales, donde es básico sensibilizar el sistema inmunitario mucosal.

 Se evita el problema de degradación de proteínas inmunogénicas por temperatura

Existen riesgos asociados:

 Posibilidad de intercambio genético entre la planta modificada genéticamente y

especies silvestres asociadas.

 Actualmente la ingeniería genética controla con precisión las características que se

quiere implementar en las plantas, pero no controla totalmente la localización de
la inserción dentro del genoma de la planta hospedadora.

 La mayoría de los intentos realizados para producir antígenos de patógenos

animales en plantas, han resultado ser tóxicas para la planta.

 La cantidad del antígeno producido no es uniforme, por tanto la dosificación es

difícil de controlar.
Mecanismo de acción

Estrategias de Inmunización

 Es ventajoso combinar 2 o más tipos de vacuna (se administra 1 o más dosis de la

1ª vacuna seguida de 1 o más dosis de la 2ª).

 Estrategia ideal :Inmunizar primero con vacuna de ADN y después administrar una
vacuna de subunidades como recuerdo.

El resultado final de la respuesta inmune puede verse influido por:

 Modo de administración.
 Dosis (número, tamaño y frecuencia).
 Adyuvantes.

Modo de administración:

Múltiples rutas de inoculación:

1. Intramuscular.
2. Subcutánea.
3. Intraperitoneal.
4. Intradérmica.
5. Intravenosa.
6. Oral.
7. Rectal.
8. Vaginal.
9. Intraorbital.
10. Intratraqueal.
11. Intranasal.

Administración vía inyección con aguja (parenteral) o vía métodos biolísticos con pistola
de genes.

La pistola de genes garantiza una mayor eficiencia, porqué hace que ADN penetre al
interior de la célula, además también representa un ahorro porqué se necesitan dosis
hasta 100 veces menores.

La administración parenteral es menos eficaz porqué se queda en medio intersticial (es

decir desprotegida frente a nucleasas).
Dosis

El número de dosis afecta la respuesta inmune (generalmente, se necesita > 1

inmunización para obtener respuesta lo suficientemente fuerte como para ser
protectora).

El intervalo entre las dosis resulta crítico (al aumentarlo aumenta la respuesta inmune
conferida por la vacuna).

La cantidad; depende de diferentes factores:

Tamaño del individuo.

Inmunogenicidad del antígeno utilizado.
Eficiencia de transfección durante la administración.

Adyuvantes

Selección en función del tipo de respuesta inmune que busquemos.

Existen diferentes tipos:

Adyuvantes químicos (hidróxido de aluminio).
Adyuvantes genéticos (consisten en coinmunizar con un gen estimulatorio).
Adyuvantes que potencian la inmunidad mucosal (toxina lábil de E.coli mutante, IL
proinflamatorias,…)

El MECANISMO DE ACCIÓN se resume en :

Inmunización con un plásmido que contiene la información genética de uno o varios genes
que codifican para proteínas inmunogénicas de determinado patógeno.
El plásmido actúa como un vector permitiendo la expresión en el interior de las células
que son transfectadas por la inmunización.
La respuesta inmune generada (humoral o celular), ayuda a contrarrestar una infección
con el patógeno, por tanto es una buena herramienta de profilaxis, sobre todo en las
enfermedades (como las virales) que requieren ambas ramas de la respuesta inmune.

MECANISMOS DE PRESENTACIÓN ANTIGÉNICA

Existen al menos tres que garantizan la inducción de una respuesta inmune:

Estimulación directa mediada por células somáticas (miocitos, queratinocitos o cualquier

célula MHC II negativa).
Transfección directa de APC.
Presentación cruzada (Cross-priming), donde el plásmido transfecta una célula somática
y/o APC, y la proteína secretada es captada por otra APC donde es procesada para su
presentación a linfocitos T CD8+ .

Inmunidad CELULAR vía LT CD4+ cooperadores .

Si se administra vía IM, el carácter proinflamatorio de los motivos CpG no metilados del
ADN bacteriano induce síntesis y excreción de IL-12 y por tanto una respuesta Th-1.
Si se administra con pistola de genes, se genera una respuesta de tipo Th-2.

Inmunidad MUCOSAL, es decisiva en la protección contra los microorganismos invasores,

ya que la mayoría de patógenos veterinarios se transmiten a través del epitelio de los
tractos respiratorio, gastrointestinal y genital.
Las estructuras linfoides asociadas a estas mucosas, tienen epitelio con células
especializadas que transportan el antígeno intacto desde la membrana apical expuesta
hasta la superficie basolateral donde el antígeno interactúa con la APC y se inicia la
estimulación de la respuesta mediada por LT y LB.

MEMORIA INMUNITARIA

Esta respuesta depende del tipo de antígeno empleado en la vacuna.

Existen varias posibilidades para explicarla :
El antígeno está presente continuamente a bajos niveles (suficientes para la presentación
antigénica pero por debajo del límite de detección) o bien el ADN no se detecta pero el
antígeno sintetizado pudiera persistir in vivo, proporcionando así un reservorio para
mantener la respuesta inmune
El plásmido y el antígeno sintetizado desaparecen y las respuestas observadas son
antígeno-independientes.
Las células memoria generadas por esta vacunación son cualitativamente diferentes de
las inducidas por otros tipos de vacuna.