Microbiología

GARZÓN JOVE Lucero; ZAFRA MEDINA Yarid Natalia; TARAZONA CAÑIZARES Yesica; SUAREZ
LINEROS

Unidades Tecnológicas de Santander. Laboratorio de Biología. Grupo A136.

Tecnología en Recursos Ambientales. Bucaramanga. Colombia

e-mail: garzonjove@gmail.com

Marzo 26 de 2019

RESUMEN:

Se llevó a cabo la respectiva practica de laboratorio utilizando algunos materiales que se pidieron
prestados al laboratorista, entre los materiales utilizados se encontraba la pipeta plástica un asa
bacteriológica, una gradilla etc. Esta práctica consistía en la identificación de microrganismo
presentes en el agua de lixiviados, se utilizó la pipeta plástica para tomar una pequeña muestra de
lixiviados y posteriormente ser puesta en el embudo con una pequeña cantidad de arena para hacer
una pequeña filtración, se toma una pequeña cantidad y se puso en la lámina para ser observada con
el microscopio se observó bacterias como las espiroquetas y bacilos. También se tomaron muestras
de un hongo a este se le añadió unos reactivos antes de poner la lámina en el microscopio para
observar la muestra, este hongo se generó en una naranja e igualmente se realizó la observación por
el microscopio, De esta práctica se concluyó que existen diferentes tipos de microorganismos
presentes en diferentes lugares, aunque nosotros a simple vista no lo podamos ver.

Palabras Clave: Bacteriología, Filtraciones, Microscopio, Bacterias, Reactivos y Microorganismos.

ABSTRACT:

The laboratory practice was carried out using some materials that were borrowed from the laboratory,
among the materials used was the plastic pipette, a bacteriological handle, a rack, etc. This practice
consisted in the identification of microorganisms present in the leached water, the plastic pipette was
used to take a small sample of leachate and then be placed in the funnel with a small amount of sand
to make a small filtration, a small sample is taken amount and put on the sheet to be observed with
the microscope was observed bacteria such as spirochetes and bacilli. Samples of a fungus were also
taken, some reagents were added before putting the sheet under the microscope to observe the
sample, this fungus was generated in an orange and the observation was also made by the
microscope. From this practice it was concluded that There are different types of microorganisms
present in different places although we can not see it at first sight.

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Key words: Bacteriology, Filtrations, Microscope, Bacteria, Reagents and Microorganisms.

INTRODUCCIÓN:

La microbiología es la ciencia que estudia los microrganismos que son una serie de organismos
diversos pertenecientes a las bacterias, hongos, algas, virus y protozoos. Hay algunos que son
estructuras acelulares como los virus y otros son células eucariotas y procariotas. Lo que tienen en
común es que son pequeñas dimensiones y solo son observables al microscopio.

Microorganismo:

Los microrganismos son la forma de vida más antigua, son los organismos más relacionados
directamente con los primeros seres vivos y son la mayor parte de la biomasa del planeta. Superan
en masa a todas otras biomasas. En cualquiera de nosotros el conjunto de microorganismos puede
representar un kilo y medio de nuestra masa corporal.

Participan en los principales ciclos biogeoquímicos. Hay reacciones que solo son llevadas a cabo por
microorganismos y son clave en los procesos de cambio del medio ambiente. Pueden vivir en
condiciones extremas, en las que ningún otro organismo `puede vivir, como nosotros y las bacterias
simbiontes de nuestro intestino.

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Figura 1. Diferentes tipos de microorganismo

Fuente: https://tecreview.tec.mx/wp-content/uploads/2018/10/iStock-464462144.jpg

Microorganismos y el medio ambiente:

Los microrganismos y el medio ambiente están constantemente interactuando. Los microorganismos

son capaces de modificar su medio ambiente y en función de este se permiten unas formas de vida u
otras (determinan la diversidad y abundancia de microorganismos).

Los microorganismos forman comunidades microbianas que interaccionan con otras en la naturaleza.
El ambiente en el que vive la comunidad es el habitad y el ecosistema es el conjunto de todos los
seres vivos y las condiciones fisicoquímicas de su ambiente. La ecología microbiana estudia los
microrganismos en su medio ambiente.

Microrganismos y su evolución:

Están relacionados con la evolución de la vida, por que son la forma de vida mas parecida a los
primeros entes capaces de replicarse. LUCA, que es el ancestro más común a todas las formas de
vida se dividió en Bacteria, Archea y Eurcarya.

Figura 2. Evolución de los microorganismos

Fuente:https://1.bp.blogspot.com/gx3ukylJA7k/V7BBCSsamcI/AAAAAAAABtM/k_a52jyAeHUeG2M5S
S_QxBG1u9UrOAuzACLcB/s1600/Arbol%2Bdos%2Bramas%2BLUCA.png

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La vida empezó a hace 3,8 millones de años cuando aparecieron las pseudocélulas. Aparecieron los
organismos fotótrofos que modificaron la atmosfera al aportar oxígeno. Hace 1500 millones de años
aparecieron las algas y la atmosfera se hizo oxigénica. Hasta hace 1000 millones de años aparecen
los primeros organismos superiores. (universidad de zaragoza , 2014)

Figura 3. Historia geológica de la tierra

Fuente: https://www.ecured.cu/images/b/b3/Escala_geol%C3%B3gica_de_la_tierra.jpg

Morfología microscópica:

la forma de las bacterias al microscopio esta determinada por la rigidez de su pared celular.
Básicamente, se diferencian según su forma en cocos (esféricas u ovaladas), bacilos (cilíndrica o de
bastones; rectos o curvos), y espirilos (espiral); dentro de estas ultimas se encuentran treponema,
borrelia y leptospira. Los espirilos varían en el número de vueltas.

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Figura 4. Variedad de formas de bacterias

Fuente:http://daniandreaexamen.blogspot.com/2014/10/un-microbio-del-griego-cientifico.html

¿Qué es una colonia bacteriana?

Una colonia bacteriana es una población de células que puede observarse macroscópicamente (o
sea a simple vista) y que crecen en un medio sólido, procedentes de una sola célula. (Muñoz, 2014)

Una de las características principales de las bacterias es su apariencia (características de su

desarrollo) seguida del crecimiento en los diferentes medios de cultivo.
Los microorganismos que crecen sobre la superficie sólida tienden a formar agrupaciones
que se denominan colonias, las colonias suelen ser de características constantes para el
medio de cultivo usado, la temperatura de incubación y el microorganismo del que se trate,
por lo que su estudio es de gran utilidad tanto en la clasificación como en la identificación.
Una colonia microbiana está constituida por individuos de la misma especie provenientes de
una célula y de un grupo de ellas, llamadas Unidades Formadoras de Colonias (UFC).
Las colonias aisladas se pueden subcultivar individualmente transfiriéndolas a otros medios
de cultivo a fin de obtener cultivos puros y pueden ser estudiadas en medios diferenciales. Y
la evaluación de las características macroscópicas de las colonias se lleva a cabo
usualmente mediante el examen visual del desarrollo en la superficie de las placas de agar.
La inspección de los cultivos se lleva a cabo sosteniendo la placa con una mano y
observando la superficie del agar para comprobar la presencia del desarrollo bacteriano. Las
placas de cultivo comunes tienen 100 mm de diámetro y son adecuadas y pueden
sostenerse en una mano. Se debe estudiar con cuidado a cada placa debido a que las
bacterias aisladas inicialmente a partir de la muestra, constituyen a menudo cultivos mixtos y

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puede haber una gran variedad de tipos de colonias. (bacteriologia , 2012)

La evaluación macroscópica de las colonias se lleva acabo usualmente mediante el examen

visual del desarrollo en la superficie de las placas de agar.

Los tubos que contienen los medios primarios no se utilizan comúnmente para evaluar la
morfología colonial pero una excepción a esto es el tubo rotatorio con estría utilizado por el
laboratorio, este sistema sirve para el estudio de anaerobios ya que la evaluación de la
morfología de las colonias se puede efectuar directamente a través del vidrio de los tubos sin
exponer los organismos al aire durante el examen. (bacteriologia , 2012)

Figura 5. Tipos de colonias bacterianas

Fuente: http://1.bp.blogspot.com/-lZqeVVfS0sg/UMUWf9AGjYI/AAAAAAAAAH8/EQUaXhIUO-
k/s1600/morfologiacolonial.png

la morfología bacteriana debe ser observada con el microscopio óptico o el microscopio electrónico,
dado el tamaño pequeño des estos microorganismos, el más usado en el laboratorio es el
microscopio óptico de campo claro, pero existen otros como el microscopio óptico de campo oscuro
en los que los organismos en los que los organismos aparecen brillantes en fondo oscuro. Este

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microscopio permite la visualización de bacterias difíciles de colorear como la treponema pallidum,
agente de la sífilis.

Las bacterias pueden observarse sin tinción (examen en fresco) si se la colocan en glicerol o
soluciones no acuosas que aumentan el índice de refracción o con tinción usando distintas
coloraciones que mejoran su visualización ya que son células incoloras. Dichas tinciones se basan en
la afinidad que presentan los colorantes por las estructuras bacterianas. Los colorantes catiónicos,
por ejemplo, son atraídos por los componentes de carga negativa como los ácidos nucleicos y los
polisacáridos, ejemplo de este tipo son, el azul de metileno, el cristal violeta y la safranina.

El examen en fresco no es el más usado para observar la morfología bacteriana porque las bacterias
tienen citoplasma incoloro y su índice de refracción no difiere mucho del vidrio y del agua. Con esta
técnica se puede verificar la existencia de bacterias y evidenciar su capacidad para moverse. El
examen en fresco también puede ser usado con técnicas especiales como la tinción con tinta china
que nos permite determinar la presencia de cápsula rodeando la bacteria. También puede usarse en
el microscopio de campo oscuro por ejemplo para observar Treponemas o Leptospira con su
movimiento característico. Las coloraciones que se usan para teñir los preparados de bacterias se
pueden dividir en: simples, diferenciales y especiales. Las primeras, por ejemplo, el azul de metileno,
nos permiten observar la existencia de bacterias, su morfología, su agrupación, la presencia de
esporos y la existencia de otros tipos celulares. Las diferenciales (por ejemplo, la coloración de Gram
y la de Ziehl Nielseen) además de lo anterior, permiten la diferenciación de las bacterias porque usan
diferentes colorantes que se comportan distinto según el microorganismo en cuestión. Las tinciones
especiales se usan para objetivar distintas estructuras como la cápsula, el núcleo, los flagelos, los
esporos, etc. Antes de la coloración hay que realizar la preparación y la fijación del frotis. La
preparación del frotis consiste en extender homogéneamente la muestra (por ejemplo, un cultivo
bacteriano) o una suspensión de esta sobre una lámina. Una vez preparado el frotis debe secarse y
fijarse (por ejemplo, con calor). (M. Pírez, s.f.)

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 Solución Tiempo de aplicación Bacterias Gram Bacterias Gram
positivas negativas
Colorante 1 min Violeta Violeta
Cristal violeta
Mordiente 1 min Violeta Violeta
Lugol
Decolorante 10 s Violeta Incolora
Alcohol acetona
Colorante de contraste 30 s Violeta Roja o rosada
Safranina

Tabla 1. Identificación de bacterias por la aplicación de colorantes.

MATERIAL BIOLÒGICO:

 Naranja dañada
 Lixiviados
 MATERIALES DE LABORATORIO:
 1 mechero bunsen
 1 pipeta plástica
 1 Asa bacteriológica
 5 láminas
 5 laminillas
 1 gradilla
 1 embudo
 1 papel filtro

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Figura 6. Mechero bunsen

Fuente: https://www.google.com/search?q=mechero+bunsen&client=ms-android-
samsung&prmd=ivn&source=lnms&tbm=isch&sa=X&ved=2ahUKEwi6_cq8maDhAhUmrVkKHaavCE8
Q_AUoAXoECA0QAQ&biw=360&bih=560#imgrc=aXcxwcW6hXsZdM

Figura 7. Pipeta plástica

Fuente: https://www.google.com/search?q=pipeta+plàstica&client=ms-android-
samsung&prmd=isnv&source=lnms&tbm=isch&sa=X&ved=2ahUKEwjk_6z7mqDhAhXMo1kKHVEfD3I
Q_AUoAXoECAwQAQ&cshid=1553617327817&biw=360&bih=560#imgrc=kQWezBpo5aXxBM&imgdi
i=FeBs6mhIKeU5pM

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Figura 8. Asa Bacteriológica

Fuente: https://www.google.com/search?q=asa+bacteriológica&client=ms-android-
samsung&prmd=isvn&source=lnms&tbm=isch&sa=X&ved=2ahUKEwiC6s7InaDhAhUHuVkKHd1sBD
wQ_AUoAXoECBAQAQ&biw=360&bih=560#imgrc=l75XwEMA_CF-XM

EQUIPO:

Microscopio óptico

REACTIVOS:

 Hipoclorito de sodio
 Cristal violeta o violeta de genciana
 Lugol
 Alcohol cetona
 Azul de lactofenol
 Fucsina o safranina
 Aceite de inmersión
 Agua destilada

METODOLOGÍA:

1. Consistió en tomar una muestra de agua contaminada con una bureta de plástico, colocamos
tierra en el embudo, la aplastamos un poco con la yema de los dedos y pusimos el agua
contaminada. Dejamos reposar sobre la gradilla a temperatura de ambiente para que baje el
agua, luego de haber obtenido algunas gotas de los residuos la colocamos sobre la lámina,
para proceder con la coloración Gram.
 Sobre la lámina con el residuo echamos una gota cristal violeta o violeta genciana
durante 1 min, luego lavamos suavemente con agua
 Luego hacemos el mismo procedimiento cubriendo con lugol por 1 min y se lava
suavemente agua
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  Decoloramos con alcohol-acetona 10 seg y se lava suavemente con agua
 Cubrimos con fucsina o safranina por 30 seg
 Quitamos el exceso de agua corriente que queda en la lamina
 Dejamos secar la lámina al aire en posición vertical
 Secar y limpiar la lámina
 Vamos y examinamos al microscopio con obj de 40X y con aceite de inmersión
observar a 100X

Figura 9.
Reactivos que utilizamos para la coloración Gram: hipoclorito de sodio, cristal violeta o violeta de
genciana, lugol, alcohol cetona, azul de lactofenol, fucsina o safranina y aceite de inmersión.

Figura 10.
En esta imagen podemos observar como con la bureta contaminada se toma la muestra de agua
contaminada.

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 Figura 11.
Se está purificando un poco el agua por medio de un embudo.

2. Luego, tomamos una muestra de una naranja dañada con moho, colocamos una pequeña parte de
residuo con el asa bacteriológica en la lámina y sobre esta un poco de agua destilada, por último, la
observamos en el microscopio y primeramente la enfocamos en el obj de 4x, para después observar
con obj de mayor aumento.

Figura 12.7

Naranja con moho

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RESULTADOS:

Figura 13.

Muestra del agua contaminada, en la que podemos ver que en el resultado hay una gran diversidad
de bacterias.

Figura 14.

Muestra de la naranja vista desde el microscopio

En la muestra de agua, pudimos encontrar distintos tipos de bacterias, las cuales como el agua
estaba contaminada, sólo fueron bacterias tóxicas y que nos pueden causar graves enfermedades,
como: Cocos, Bacilos, Espiroqueta, Cocobacilos, Filamentoso, Diplococo, Cocos en cadena y
Racimos en forma de uva.

En la muestra de la naranja, estaba un hongo llamado PENICILLIUM; el cual hizo que la fruta
secretara tal moho verde, que cubrió por completo lo que quedaba de la naranja.

DISCUSIÓN:

Algunos microorganismos son patógenos y causan enfermedades a personas, animales y plantas,

algunas de las cuales han sido un azote para la humanidad desde tiempos inmemoriales. No
obstante, la inmensa mayoría de los microbios no son en absoluto perjudiciales y bastantes juegan un
papel clave en la biosfera al proporcionar oxígeno (algas y cianobacterias), y, otros, descomponer la
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materia orgánica, mineralizarla y hacerla de nuevo accesible a los productores, cerrando el ciclo de la
materia. (Wiesmann, 1982)

La tinción gram; se utiliza tanto para poder referirse a la morfología celular bacteriana, como para
poder realizar una primera aproximación a la diferenciación bacteriana, considerándose bacterias
grampositivas a las que se visualizan de color morado, y bacterias gramnegativas a las que se
visualizan de color rosa, rojo o grosella. (E., 2004)

CONCLUSIÒN:

De la anterior practica se concluyó que existen diferentes microorganismos presentes en el medio

ambiente normal y ellos pueden ser vistos mediante un microscopio apropiado, se pudo obtener el
objetivo de la práctica que era reconocer los grupos de microorganismos presentes en el medio
ambiente normal, Vemos que ellos a simple vista no pueden ser visto siendo indispensable para este
reconocimiento el microscopio.

Referencias
bacteriologia . (9 de Diciembre de 2012). Obtenido de http://projectomartin.blogspot.com/2012/12/practica-
8_9.html

E., A. M. (2004). Obtenido de https://es.m.wikipedia.org/wiki/Tinción_de_Gram

M. Pírez, M. M. (s.f.). Morfologia y estructura bacteriana . Obtenido de

http://www.higiene.edu.uy/cefa/2008/MorfologiayEstructuraBacteriana.pdf

Muñoz, F. (26 de Agosto de 2014). colonias bacterianas . Obtenido de

https://prezi.com/xpqkpckvl0kg/colonias-bacterianas/

universidad de zaragoza . (2014). microbiologia . Obtenido de

https://www.studocu.com/es/document/universidad-de-zaragoza/microbiologia/apuntes/1-
introduccion-a-la-biologia-de-microorganismos-copia/341493/view

Wiesmann, E. (1982). Obtenido de https://es.m.wikipedia.org/wiki/Microorganismo

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