Tipos de cultivos vegetales

Cultivo de meristemas

Esta técnica consiste en el aislamiento del domo apical, más uno o dos
primordios foliares.
El cultivo de meristemas fue utilizado en un inicio, para la eliminación de
hongos y bacterias en plantas, y poco después, para la producción de plantas
libres de virus. En la actualidad se obtienen los mejores resultados al combinar
la termoterapia, la quimioterapia y la electroterapia con el aislamiento y el
cultivo de meristemas y la subsecuente regeneración de plantas completas.
Se han observado grandes diferencias en el porcentaje de plantas libres
de virus en relación al tamaño del meristema aislado. En general, entre menos
primordios foliares tenga el ápice meristemático, mayor es el porcentaje de
plantas libres de virus producidas, sin embargo, existen evidencias de que el
domo aislado sin primordios difícilmente se desarrolla hasta planta completa.

Procedimiento.
Explante: domo meristemático de cualquier especie disponible, según la época
del año
Metodología:
1- Desinfección del tejido:
- Remover de la planta, secciones juveniles de tallo de aproximadamente 5 cm
de largo.
- Retirar las hojas
- Colocar en solución de etanol 70% durante 2 minutos.
- Colocar en solución de hipoclorito de sodio 30% durante 30 minutos
- Enjuagar tres veces con agua estéril, bajo campana de flujo laminar.
2- Disección de ápices meristemáticos: este trabajo debe realizarse en forma
aséptica (bajo campana de flujo laminar).
- Esterilizar los instrumentos a utilizar (bisturí, agujas, pinzas)
- Limpiar la lupa y el área de disección con una solución de etanol 70%.
- Sostener el tallo desinfectado con una pinza estéril y observarlo bajo la
lupa.
- Remover las hojas externas con un bisturí hasta llegar al domo
meristemático (se observa como un punto brillante).
- Hacer cuatro cortes en ángulos iguales, remover el domo con dos primordios
y depositarlo suavemente en el medio de cultivo.
- Incubar los meristemas en la cámara de cultivo, bajo condiciones
controladas de luz y temperatura.

Utilidad:
¾ obtención de plantas libres de patógenos
¾ mantenimiento de plantas libres de enfermedades
¾ clonación
¾ conservación de germoplasma

Cultivo de semillas, cotiledones y embriones (rescate de embriones)

Existen situaciones de cruzamientos inter-específicos que aunque se

produce la fertilización, poco después ocurre el aborto del embrión híbrido.
Esto puede deberse a distintas causas, siendo la más común la incompatibilidad
del embrión con el endosperma. También puede ser debido a la carencia de
formación del endosperma, por falla de la provisión de nutrientes. En estos
casos es posible rescatar al embrión inmaduro y cultivarlo in vitro hasta
obtener una planta completa. El cultivo de cotiledones y embriones permite,
también obtener respuestas que con otro tipo de explante no se obtendrían o
se demoraría mucho más tiempo.

Procedimiento.
Explante: semillas, cotiledones y embriones de Phaseolus vulgaris (poroto)
Metodología:
1- Desinfección del tejido:
- Tratar las semillas con etanol (70%) 2 minutos
- Colocar en solución de hipoclorito de sodio 30% durante 20 minutos
- Enjuagar tres veces con agua estéril, bajo campana de flujo laminar.
3- Disección de cotiledones y embriones: este trabajo debe realizarse en
forma aséptica (bajo campana de flujo laminar).
- Esterilizar los instrumentos a utilizar (bisturí, agujas, pinzas)
- Limpiar el área de disección con una solución de etanol 70%.
- Sostener la semilla desinfectada con una pinza estéril y retirar el
tegumento
- Separar los cotiledones y el embrión y depositarlos suavemente en el medio
de cultivo.
- Incubar en la cámara de cultivo, bajo condiciones controladas de luz y
temperatura.

Utilidad:
¾ acortar el ciclo de reproducción
¾ prevenir el aborto embrionario
¾ material de partida para la obtención de callos y embriones somáticos
¾ superar la latencia de algunas semillas
¾ rescate de embriones híbridos derivados de cruzamientos interespecíficos
e intergenéricos
¾ estudios de requerimientos nutricionales de embriones en desarrollo

Cultivo de anteras y granos de polen

El sueño de todo fitomejorador es la obtención de un nuevo cultivar

mejorado en el menor número posible de generaciones. Con esta técnica, es
posible la obtención de plantas haploides, cuyo número n de cromosomas puede
ser duplicado mediante tratamientos con colchicina, mediante el cultivo de
células sexuales, ya sean las microsporas o los óvulos (aunque es más común el
cultivo de anteras y granos de polen), y la subsiguiente regeneración de
plantas. El número de especies en la que se produjeron plantas haploides es
importante e incluye a plantas hortícolas (ají, tomate, berenjena, papa, nabo),
frutícolas (manzano, vid, cerezo), cereales (trigo, centeno, cebada, maíz),
forrajeras (ray grass, festuca), forestales (álamo).

Procedimiento.
Explante: pimpollos de cualquier especie disponible, según la época del año
Metodología:
1- Desinfección del tejido:
- Tratar los pimpollos con etanol (70%) 1 minuto
- Colocar en solución de hipoclorito de sodio 20% durante 5 minutos
- Enjuagar tres veces con agua estéril, bajo campana de flujo laminar.
2- Disección de las anteras: este trabajo debe realizarse en forma aséptica
(bajo campana de flujo laminar).
- Esterilizar los instrumentos a utilizar (bisturí, agujas, pinzas)
- Limpiar el área de disección con una solución de etanol 70%.
- Sostener el pimpollo desinfectado con una pinza estéril y remover el cáliz y
la corola
- Con un bisturí fino separar las anteras del los filamentos y depositarlas
suavemente en el medio de cultivo.
- Incubar en la cámara de cultivo, bajo condiciones controladas de luz y
temperatura.

Utilidad:
¾ Producción de haploides
¾ Obtención de plantas homocigotas en todos sus caracteres
¾ Acortar los ciclos de mejoramiento

Cultivo de embriones somáticos

Los embriones somáticos tiene, al igual que los cigóticos, la capacidad de

formar una nueva planta después de un proceso de germinación, con la
diferencia de que la embriogénesis somática es un proceso asexual por lo que la
nueva planta será exactamente igual a la donadora de la célula inicial. Este no
es un proceso que sucede únicamente en cultivos in vitro, de hecho es
relativamente común en algunas familias de plantas y se conoce como apomixis.
Como embriones somáticos, asexuales o adventicios se han definido los
iniciados a partir de células que no son el producto de la fusión de gametos.
Son estructuras bipolares con un eje radical-apical, y no poseen conexión
vascular con el tejido materno; las estructuras bipolares deben ser capaces de
crecer y formar plantas normales.

Procedimiento.
Explante: callos embriogénicos de Acacia caven (espinillo)
Metodología:
1- Mantenimiento de callo embriogénico por largo tiempo:
- Reconocer las zonas embriogénicas de los no embriogénicas
- Transferir a medio de cultivo fresco solamente los sectores embriogénicos
2- Disección de los embriones: este trabajo debe realizarse en forma aséptica
(bajo campana de flujo laminar).
- Esterilizar los instrumentos a utilizar (bisturí, agujas, pinzas)
- Limpiar la lupa y el área de disección con una solución de etanol 70%.
- Separar con una pinza estéril los sectores friables del callo de los que no
los son
- Identificar y separar con un bisturí fino las masas de embriones somáticos,
subdividirlas en pequeños grupos y depositarlas suavemente en el medio de
cultivo.
- Incubar en la cámara de cultivo, bajo condiciones controladas de luz y
temperatura.

Utilidad:
¾ altísima tasa de multiplicación
¾ selección de super genotipos
¾ obtención de semillas de especies que no las forman
¾ desarrollo de semillas artificiales

Cultivo de callo en medio líquido

Se inicia por transferencia de callos friables a medio líquido, que se disgregan

para formar agregados celulares y células libres. Las células en suspensión
tienen mayor diponibilidad de nutrientes, se dividen y crecen rápidamente,
tienen mayor inestabilidad genética y bioquímica y requieren de una reselección
continua de líneas celulares.

Procedimiento.
Explante: callos embriogénicos de Acacia caven (espinillo).
Metodología:
1- Mantenimiento de callo organogénico por largo tiempo:
- Transferir a medio de cultivo fresco periódicamente
2- Disección de las porciones de callo: este trabajo debe realizarse en forma
aséptica (bajo campana de flujo laminar).
- Esterilizar los instrumentos a utilizar (bisturí, agujas, pinzas)
- Limpiar el área de disección con una solución de etanol 70%.
- Separar y descartar con una pinza y bisturí estériles los sectores del callo
necrosados
- Identificar y separar con un bisturí fino las porciones organogénicas,
subdividirlas en pequeños grupos y sembrarlas en el medio de cultivo líquido.
- Colocar los medios de cultivo en un agitador orbital o shaker, incubar en la
cámara de cultivo, bajo condiciones controladas de luz y temperatura.
Utilidad:
¾ obtención de protoplastos
¾ obtención de material de partida para crioconservación
¾ producción de metabolitos secundarios
¾ biotransformación
¾ estudios fisiológicos

Enraizamiento en puente de papel

La inducción del enraizamiento y alargamiento de las raíces es

fundamental para lograr, luego, la transferencia de las vitroplantas a
condiciones de invernadero. Aunque es muy común realizar el enraizamiento en
medios semisólidos, muchas veces se presentan problemas que afectan luego la
etapa de aclimatización (raíces anormales, ausencia de pelos radicales,
defectuosa conexión vascular). El enraizamiento en puente de papel resulta
muy eficiente en muchas especies para evitar estos problemas.

Procedimiento.
Explante: brotes de 4 a 5 cm de largo, obtenidos in vitro, de Pelargonium
graveolens (malva rosa)
Metodología:
1- siembra de los brotes en el medio de cultivo: este trabajo debe realizarse
en forma aséptica (bajo campana de flujo laminar).
- Esterilizar los instrumentos a utilizar (bisturí, agujas, pinzas)
- Limpiar el área de disección con una solución de etanol 70%.
- Subcultivar los brotes de malva rosa en tubos de ensayo, con medio de
cultivo líquido con puente de papel
- Asegurarse que los brotes permanezcan erguidos sobre el puente de papel y
éste pesque el medio de cultivo
- Incubar en la cámara de cultivo, bajo condiciones controladas de luz y
temperatura.

Utilidad:
¾ Obtención de plantas con buen sistema radicular
¾ Acortar la etapa de enraizamiento
¾ Garantizar el éxito de la etapa de aclimatización
Cultivo de raíces

El principal problema en este tipo de cultivo es obtener el inóculo

adecuado, pues siempre se encuentra gran contaminación en las raíces. En la
práctica, el explante se obtiene de semillas germinadas asépticamente. El
cultivo en medio líquido ha tenido más éxito para raíces que el uso de agar

Procedimiento.
Explante: raíces, obtenidas de plántulas cultivadas in vitro, de Pelargonium
graveolens (malva rosa)
Metodología:
2- siembra de las raíces en el medio de cultivo: este trabajo debe realizarse
en forma aséptica (bajo campana de flujo laminar).
- Esterilizar los instrumentos a utilizar (bisturí, agujas, pinzas)
- Limpiar el área de disección con una solución de etanol 70%.
- Disectar las raíces de las plántulas cultivadas in vitro
- Subcultivar las raíces de malva rosa en frascos, con medio de cultivo líquido
- Incubar en la cámara de cultivo, bajo condiciones controladas de luz y
temperatura.

Utilidad:
¾ formación de suspensiones celulares
¾ produccióm de metabolitos secundarios importantes para el hombre
(alcaloides, glucósidos, esteroles, enzimas, compuestos aromáticos
colorantes)