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Firma de la Directora.
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4
TABLA DE CONTENIDO.
AGRADECIMIENTOS. ........................................................................................ 4
RESUMEN. ....................................................................................................... 10
ABSTRACT. ...................................................................................................... 11
1. INTRODUCCIÓN. ......................................................................................... 12
2. OBJETIVOS.................................................................................................. 16
3.1. Aerobiología......................................................................................... 17
3.2. Métodos e instrumentos para la recuperación de bacterias en el aire. 19
3.2.1. Técnica de sedimentación por gravedad. ...................................... 19
3.2.2. Técnica de filtración. ..................................................................... 19
3.2.3. Técnica de impacto sobre superficies sólidas. .............................. 20
3.2.4. Técnica de borboteo en líquidos. .................................................. 20
3.3. Ambientes internos. ............................................................................. 20
3.4. Síndrome del edificio enfermo. ............................................................ 22
3.5. Patógenos en el aire. ........................................................................... 23
3.5.1. Bacterias Gram positivas en el aire. .............................................. 24
3.5.2. Bacterias Gram negativas en el aire. ............................................ 26
3.6. Grupos de riesgo de los agentes biológicos. ....................................... 28
3.7. Estadísticas BBL Crystal...................................................................... 29
4. METODOLOGÍA. .......................................................................................... 30
5
4.2. Conteo y aislamiento de bacterias. ...................................................... 33
4.3. Identificación de las bacterias recuperadas. ........................................ 33
4.3.1. Identificación macroscópica y microscópica de las bacterias
recuperadas. .......................................................................................... 33
4.3.2. Siembra en medios selectivos y realización de pruebas
bioquímicas. ........................................................................................... 34
4.3.3. Identificación de bacterias mediante el kit BBL Crystal. ................ 35
4.4. Procesos de inocuidad en los procedimientos del laboratorio. ............ 36
4.4.1. Protocolo de esterilidad. ................................................................ 36
4.4.2. Control de calidad de medios de cultivo. ....................................... 37
4.4.3. Control de ambientes. ................................................................... 37
5. RESULTADOS Y ANÁLISIS DE RESULTADOS. ......................................... 38
7. RECOMENDACIONES ................................................................................. 59
8. BIBLIOGRAFIA. ............................................................................................ 60
9. ANEXOS. ...................................................................................................... 67
6
LISTA DE TABLAS.
Tabla 1. Toma de muestras para bacterias presentes en el aire del
laboratorio de microbiología. ......................................................................... 31
Tabla 2. Toma de muestras para la recuperación de Clostridium sp. en el
laboratorio de microbiología. ......................................................................... 31
Tabla 3. Conteo de colonias por punto muestreo. ........................................ 38
Tabla 4. Relación de las variables ambientales con el número de bacterias
recuperadas (UFC/15 min/63.61cm2) ........................................................... 40
Tabla 5. Morfología microscópica de las bacterias recuperadas. ................. 44
Tabla 6. Bacterias presuntivas seleccionadas para identificar a partir de
medios selectivos. ......................................................................................... 45
Tabla 7. Identificación mediante pruebas bioquímicas por punto de muestreo.
...................................................................................................................... 49
Tabla 8. Resultados de identificación de bacterias mediante el Kit BBL
Crystal ........................................................................................................... 51
Tabla 9. Pruebas bioquímicas confirmativas. ............................................... 52
Tabla 10. Relación de enfermedades e infecciones con bacterias
identificadas. ................................................................................................. 53
7
LISTA DE FIGURAS.
Figura 1. Puntos de recolección de muestras. ............................................. 32
Figura 2. Relación entre la humedad relativa y el número de colonias en la
clase de microbiología. ................................................................................. 41
Figura 3. Relación entre la humedad relativa y el número de colonias en la
clase de biorremediación. ............................................................................. 42
Figura 4. Relación entre la humedad relativa y el número de colonias en la
toma de muestras para la recuperación de Clostridium sp. .......................... 43
8
LISTA DE ANEXOS.
9
RESUMEN.
10
ABSTRACT.
Air samples were taken by the sedimentation technique in Nutrient Agar (NA)
for aerobic bacteria and Sulfite Polymyxin Sulfadiazine (SPS) for anaerobic
bacteria in two points of the laboratory, different times with different activities.
After incubation to 37C for 48 h., the results were reported as
UFC/15min/63.61cm2, and the pure cultures of recuperated colonies were
characterized with Gram strain and colony morphology. The isolated bacteria
were re-cultured in selective and differential agars and finally they were
identified using the BD BBL Crystal system.
The results showed that the number of Gram positive bacteria were greater
that Gram negative bacteria, Micrococcus sedentarius, Staphylococcus sp.,
S. haemolyticus, S. capitis, S. cohnii sp. Cohnii, S. hominis and S.
lentus. Likewise, Leuconostoc pseudomesenteroides, Bacillus subtilis and
Corynebacterium renale Group. associated with pulmonary infections and
allergic reactions. Gram negative bacteria were identified as Pseudomonas
sp., P. stutzeri and P. Putida, Yersinia pseudotuberculosis, Y. enterocolitica
Group., Serratia fonticola, Shigella sp., Klebsiella pneumoniae sp. ozaenae,
Citrobacter freundii and Acinetobacter iwoffii, cause respiratory infections and
lymphadenitis.
11
1. INTRODUCCIÓN.
12
ciertas infecciones que son transmitidas por medio del aire provocan
enfermedades, causan brotes epidémicos, contaminación y alteración de
alimentos, de materiales orgánicos e inorgánicos, como cueros, textiles y
papel (De la Rosa, Ullán, Prieto, & Mosso, 2000).
13
varios de ellos puede resultar costosa (Hernández López & Marín Ramírez,
2013).
14
superficiales en la piel, principalmente en personas inmunodeprimidas (Cruz
Orjuela & Jiménez Pallares, 2006).
15
2. OBJETIVOS.
16
3. MARCO TEÓRICO.
3.1. Aerobiología.
17
puede contener granos de polen, fragmentos de insectos, plantas, ácaros y
sus productos de excreción, en bioaerosoles que pueden afectar la calidad
del aire (Guardino Solá, 2001).
18
Para la realización de los estudios de los bioaerosoles, es necesario utilizar
técnicas desarrolladas para la toma de muestras del aire. Desde el siglo XIX
comenzaron las investigaciones y se han diseñado diversidad de aparatos y
técnicas para su análisis. Actualmente, existen una gran cantidad de
métodos e instrumentos para detectar microorganismos en el aire, son
técnicas diversas, de las cuales, la sedimentación, filtración, el impacto sobre
superficies sólidas y el borboteo en medios líquidos son los más importantes
(Hernández López & Marín Ramírez, 2013).
19
pueden estudiar por microscopía o por cultivo, colocando los filtros en medios
de cultivo sólido para determinar el número de colonias (Hernández López &
Marín Ramírez, 2013).
20
composición microbiológica del aire interior pueden manifestarse en diversos
síntomas agudos y crónicos así como en forma de diversas enfermedades
específicas (Carazo Fernández, Fernández Álvarez, González Barcala &
Rodríguez Portal, 2013).
21
ambientes internos. Entre ellos se encuentran los tableros a base de madera,
el ladrillo y el acero; incluso el aumento y/o la reducción del tamaño de los
edificios junto con el desarrollo de sistemas de tratamiento del aire que han
culminado en los sistemas de calefacción, ventilación y aire acondicionado
(CVAA) modernos (Carazo Fernández et al, 2013).
En las dos últimas décadas, se han desarrollado edificios con una infiltración
y exfiltración de aire muy reducidas, lo que permite la concentración de
microorganismos de transmisión aérea y de otros contaminantes. En este
tipo de edificios o la dificultad de acceso al sistema CVAA para su
mantenimiento y limpieza o desinfección, generan un ambiente hermético en
donde, el vapor de agua, que anteriormente habría sido ventilado hacia el
exterior, se condensa sobre superficies frías. Esta situación genera las
condiciones adecuadas para el crecimiento de microorganismos exponiendo
a los ocupantes a cifras elevadas de microorganismos de transmisión aérea
específicos (Guardino Solá, 2001).
Las quejas pueden ocurrir en una zona particular o en todo el edificio; los
síntomas que generalmente se atribuyen son dolor de cabeza, fatiga, falta de
aliento, congestión nasal, tos, estornudos, irritación ocular, nasal y de
garganta, irritación dérmica, mareos y náuseas; así mismo se ha
documentado la ausencia de estos síntomas en edificios bien diseñados,
ventilados y con un mantenimiento adecuado (Berenguer Subils, 1991).
22
Todo lo que respiramos, puede ser considerado un contaminante, pero no
todos los gases inhalados accidentalmente o partículas de polvo son
considerados relevantes para la salud. La enfermedad o condiciones
insalubres resultantes de exposiciones nocivas incluyen diferentes
enfermedades relacionadas con edificios, afecciones alérgicas, sensibilidad
química múltiple, y efectos vistos por personas de los sectores más
susceptibles de la sociedad; niños, ancianos, mujeres embarazadas y
personas inmunocomprometidos (Observatorio de Salud y Medio Ambiente
en Andalucía, 2011).
Por otro lado, existe un interés sobre el impacto y los efectos ocasionados
por la composición bacteriana en el aire sobre la salud ocupacional. Dentro
de las bacterias de interés es posible encontrar bacterias Gram positivas
como Staphylococcus sp., Streptococcus sp., Bacillus subtilis y Micrococcus
y en menor frecuencia bacterias Gram negativas como Klebsiella sp.,
Pseudomonas sp., Enterobacter sp., Citrobacter sp., y Serratia sp. Debido a
23
la pared celular delgada de las bacterias Gram negativas, algunas tienen
baja probabilidad de permanecer expuestas en el ambiente; solo
permanecen 10 minutos. Por lo tanto al encontrar estas bacterias en 15
minutos, es un indicador de contaminación ambiental (Herrera et al, 2012).
24
producir infecciones pulmonares y en raras ocasiones bacteriemia recurrente,
shock séptico, endocarditis o neumonía (Cole, 1990).
Gemella sp. es un coco Gram positivo, anaerobio facultativo, que hace parte
del componente habitual de la microbiota orofaríngea, intestinal y
25
genitourinaria, que da origen a procesos infecciosos en contadas ocasiones.
Las infecciones asociadas a este patógeno son generalmente
endovasculares y fundamentalmente endocarditis. Las localizaciones
cutáneas no son habituales, describiéndose hasta ahora pocos episodios
(Villamil, Villar del C. & Masa V., 2009).
26
neumonías nosocomiales (Lösch, Gariboglio Vázquez, Rivas, & Merino,
2015).
27
tuberculosis, como también dolor de cabeza y conjuntivitis (Herrera et al,
2012; Cruz Orjuela & Jiménez Pallares, 2006).
1) Agente biológico del grupo 1: Aquel que resulta poco probable que cause
una enfermedad en el hombre.
2) Agente biológico del grupo 2: Aquel que puede causar una enfermedad en
el hombre y puede suponer un peligro para los trabajadores, siendo poco
probable que se propague y existiendo generalmente profilaxis o tratamiento
eficaz.
3) Agente biológico del grupo 3: Aquel que puede causar una enfermedad
grave en el hombre y presenta un serio peligro para los trabajadores, con
riesgo de que se propague y existiendo generalmente una profilaxis o
tratamiento eficaz.
4) Agente biológico del grupo 4: Aquel que causando una enfermedad grave
en el hombre supone un serio peligro para los trabajadores, con muchas
probabilidades de que se propague y sin que exista generalmente una
profilaxis o un tratamiento eficaz.
28
tratamientos eficaces (Instituto Nacional de Seguridad e Higiene en el
Trabajo, 2014).
29
4. METODOLOGÍA.
30
Tabla 1. Toma de muestras para bacterias presentes en el aire del laboratorio de
microbiología.
31
Las muestras de aire se tomaron por el método de sedimentación por
gravedad (De la Rosa et al, 2000), con Agar Nutritivo (AN) para la
recuperación de las bacterias totales presentes en el aire y Agar Sulfito
Polimixina Sulfadiazina (SPS) para la recuperación de Clostridium sp.
32
4.2. Conteo y aislamiento de bacterias.
33
4.3.2. Siembra en medios selectivos y realización de pruebas bioquímicas.
34
Ya realizada la selección de las bacterias, se sembraron en Agar Sangre,
puesto que este medio permite el crecimiento rápido de las bacterias (Becton
& Dickinson, 2010; Becton & Dickinson , 2012). Las siembras se incubaron
por un tiempo de 24 horas a 37ºC para obtener un cultivo fresco y, pasado el
tiempo de incubación, se procedió la identificación mediante el kit BBL
Crystal de BD. Esta prueba requiere una prueba de oxidasa y de indol
previamente para las bacterias Gram negativas seleccionadas, necesarias
para la información que requiere la base de datos para la identificación por
medio del kit BBL Crystal (Becton & Dickinson, 2010).
35
Posteriormente el contenido se vertió en un panel con 30 pocillos, los cuales
contienen distintas reacciones, el panel se cerró debidamente y se incubó
durante 48 horas a 37°C. Al término del periodo de incubación, se
examinaron los pocillos para determinar cambios de color o fluorescencia
resultante de las actividades metabólicas de los microorganismos.
36
Flujo Laminar que se limpió con alcohol antiséptico esterilizando en cada
proceso con la luz ultravioleta, proceso que dura 20 minutos en total. Así
mismo, se esterilizaron todos los materiales en seco en un horno a 160°C
durante 15 minutos y los medios de cultivo en autoclave durante 15 minutos
a 121°C.
37
5. RESULTADOS Y ANÁLISIS DE RESULTADOS.
38
punto M, ya que solo se utiliza como depósito de materiales, estando lejos de
estos focos de contaminación.
Por otro lado, durante la toma de muestras se tuvo la puerta del laboratorio
abierta; estos movimientos como abrir puertas pueden contribuir o no a la
dispersión de colonias de bacterias. Es por eso que los flujos de aire se
controlan en el momento de cualquier toma de muestra, recalcándose que la
recuperación de Clostridium sp. en muestreos de aire resulta sin embargo
esporádica (Riedel, 2010).
5.2. Relación entre los factores del entorno del laboratorio con las
bacterias recuperadas durante los muestreos.
39
higrómetro, y así relacionar estos parámetros con la cantidad de colonias
totales (Tabla 4).
40
encontrar en el aire, ya que son reservorios y medios de transporte de
bacterias (Aburto Torres, 2011). En la investigación no se observó relación
entre el número de personas presentes en el laboratorio y el número de
colonias recuperadas, ya que en el muestreo realizado en la actividad
denominada investigación (2 personas) y en la clase de microbiología (16
personas) se obtuvieron los mismos recuentos (7 UFC/15 min/63.61cm2),
mientras que en el muestreo donde no se realizó actividad y por lo tanto no
hubo presencia de personas se obtuvieron 13 UFC/15 min/63.61cm2.
20
18
Número de colonias
16
14
12
10
8
6
4
2
0
62 66 67 70
Humedad Relativa HR (%)
41
En los datos obtenidos en la clase de biorremediación no se evidencia un
aumento tan evidente del número de bacterias recuperadas con respecto al
aumento de la humedad relativa, pero se observa una tendencia de aumento
con el aumento de la HR (Figura 3).
30
Número de colonias
25
20
15
10
0
56 59 64
Humedad Relativa HR (%)
42
6
Número de colonias
5
4
3
2
1
0
54 64
Humedad Relativa HR (%)
Manejo e Higiene de
Biología 54 64 Alimentos
43
Tabla 5. Morfología microscópica de las bacterias recuperadas.
44
selectivo Agar Sulfito Polimixina Sulfadiazina (SPS) en el cual no se presentó
crecimiento, con resultado negativo para recuperación de Clostridium sp.
No. No.
Medio Descripción de resultado Bacteria presuntiva De bacterias De bacterias
encontradas seleccionadas
Color gris, sin brillo metálico Enterobacterias 7
EMB Salmonella y
Transparentes 1 10
Shigella
CT Colonias azul verdoso Pseudomonas sp. 2
Cambio de color en el medio
Bacillus cereus 6
azul
BC Colonias amarillas, con 10
cambio de color azul del Bacillus sp. 35
medio
Colonias negras, convexas Staphylococcus
10
brillantes, con halo claro aureus
Negras, lustrosas, con forma Staphylococcus
BP 26 10
irregular sp.
Colonias pequeñas, pardas
Micrococcus sp. 40
negras ausencia de halos
Cambio de color del medio a
SPS Clostridium sp. 0 0
Negro
EMB: Eosina Azul de Metileno, BC: Bacillus cereus, BP: Baird Parker, CT: Cetrimide, SPS: Sulfito
Polimixina Sulfadiazina.
45
En el medio EMB se obtuvo 1 bacteria presuntiva de Salmonella y Shigella,
las cuales crecen en un rango óptimo de temperatura entre 30°C a 37°C. El
reservorio principal de estas bacterias es el humano y este las transmite de
manera vía oral-fecal por contacto directo o indirecto a través del consumo
de alimentos o aguas contaminadas con heces (Pascual Anderson, 2005;
Pachón Cubillos, 2009). Una de las razones de haberse encontrado muy
pocas bacterias presuntivas de Salmonella o Shigella puede deberse a la
temperatura promedio del laboratorio por debajo del óptimo de crecimiento
de estas bacterias. Adicionalmente, el reservorio de estas bacterias depende
de una mala higiene, aunque es posible encontrarlas en algunas muestras de
alimentos contaminados que son llevados en las clases de Manejo e Higiene
de Alimentos para el análisis dentro del laboratorio.
46
laboratorio, ya que se acumulan cantidades considerables de polvo, sobre
todo en los depósitos de materiales y en algunos equipos como las neveras,
además durante las actividades académicas en el laboratorio es constante el
análisis de muestras de suelo, agua y alimentos contaminados. Otro factor
importante a considerar es la capacidad de formar esporas, el cual lo hace
muy resistente en el ambiente, aunque la temperatura promedio del
laboratorio sea de 22,5°C y el crecimiento óptimo de Bacillus sp. esta entre
los 30°C y 40°C, no es un problema sobrevivir en el laboratorio gracias a esta
condición. Es por estas razones que se obtuvo un número alto de bacterias
en BC, siendo las más presuntivas Bacillus sp. y Bacillus cereus.
47
la piel de los seres humanos; encontrándose en la cara, manos, brazos y
piernas. Es posible encontrar este género en el suelo, agua, plantas, polvo y
aire y de este modo en las muestras contaminadas de todo tipo que se
trabajan en el laboratorio. La acumulación de polvo incide también en su
presencia (Canet, Hernández, Almagro & Garau, 2001) que es considerable
en muchas zonas de este espacio.
48
5.5. Identificación de bacterias obtenidas en la toma de muestras
para la recuperación de Clostridium sp. mediante pruebas
bioquímicas.
Pruebas bioquímicas
Lugar/ No.
Muestra
de Colonia NaCl
Ur In Ca Ox Mo He OF Género Identificado
6.5%
8 M1 + - - + - - ɣ +/-
Micrococcus sp.
M1 + - - + - - α +/-
M2 - - - + - - α -/-
M3 - - - + - - α -/-
10 Gemella sp.
M4 - - - + - - α +/-
M5 - - - + - - α -/-
M: Mesa, NaCl 6.5%: Cloruro de Sodio 6.5 %, Ur: Ureasa, In: Indol, Ca: Catalasa, Ox: Oxidasa, Mo:
Motilidad, He: Hemólisis, OF: Oxidación/Fermentación, +: Positivo, -: Negativo, α: Alpha, β: Beta, ɣ:
Gamma, M1: Mesa número 1, M2: Mesa número 2, M3: Mesa número 3, M4: Mesa número 4, M5:
Mesa número 5.
49
humana normal en la cavidad oral y del tracto respiratorio superior. Según
sus reservorios y características de crecimiento es posible encontrar esta
bacteria en el laboratorio, el cual se encuentra constantemente utilizado por
personas y su temperatura promedio se encuentra cerca del óptimo de
crecimiento de esta bacteria (Canet, Hernández, Almagro & Garau, 2001).
50
bacterias sobre todo Gram negativas, lo que se evidencia en la variedad de
las bacterias Gram negativas recuperadas (Hernández Calleja, 1996).
51
identificación con el BBL Crystal; Micrococcus sedentarius, Yersinia
enterocolitica Group. y Serratia fonticola con el fin de confirmar el resultado
obtenido con el kit (Tabla 9) (Becton & Dickinson, 2012).
Micrococcus
+ + - + - - α
sedentarius
Micrococcus
+ - - + - - β
sedentarius
Serratia fonticola - - + + ɣ A - + - -
NaCl 6.5%: Cloruro de Sodio 6.5 %, Ur: Ureasa, In: Indol, Ca: Catalasa, Ox: Oxidasa, Mo: Motilidad,
He: Hemólisis, TSI: Triple Sugar Iron, Lac: Lactosa, Gluc: Glucosa, H2S: Sulfuro de Hidrogeno,
+: Positivo, -: Negativo, α: Alpha, β: Beta, ɣ: Gamma, Alc: Alcalino, A: Acido.
52
5.8. Relación entre las bacterias identificadas con las afecciones en
la salud.
Enfermedades y/o
Familia Genero Especie
infecciones asociadas
Infecciones naso-
sedentarius
Micrococcus faríngeas (Cole, 1990).
haemolyticus Infecciones en la piel y
cohnii tejidos blandos,
capitis infecciones
oftalmológicas (Carpinelli,
Coccoceae Samudio, Guillén,
hominis
Staphylococcus Laspina, Sanabria et al.,
2013).
No considerado patógeno
(Romeu Álvarez, Lugo
lentus
Moya, & Rojas
Hernández 2011)
Neumonías
Streptococcaceae Leuconostoc pseudomesenteroides (Taşkapılıoğlu et al.,
2011).
Reacciones alérgicas,
Bacilliaceae Bacillus subtilis algunos casos de
infecciones respiratorias
53
Enfermedades y/o
Familia Genero Especie
infecciones asociadas
(Instituto Nacional de
Seguridad e Higiene en
el Trabajo 2014).
Ocasionalmente,
infecciones del tipo
Gemella Sp.
cutáneo o subcutáneo
(Villamil et al., 2009)
Conjuntivitis (Macedo &
Corynebacteriaceae Corynebacterium renale Group
Vola, 2006).
Otitis media, conjuntivitis
y neumonía (Baron,
stutzeri Miller, Weinstein, Richter,
Gilligan, Thomson et al.,
Pseudomonadaceae Pseudomonas
2013).
Infecciones en las
putida extremidades, (Baron et
al., 2013).
Linfadenitis y diarreas
pseudotuberculosis
(Puerta García, 2010).
Yersinia
enterocolitica Group. Linfadenitis y diarreas
(Puerta García, 2010).
Serratia fonticola Neumonía (Long et al.,
2012).
sp. Diarrea (Lösch,
Enterobacteriaceae Shigella Gariboglio Vásquez,
Rivas & Merino, 2015).
Neumonía primaria,
pneumoniae sp. infecciones en heridas
Klebsiella
ozaenae (Cruz Orjuela & Jiménez
Pallares, 2006)
Otitis media (Baron et al.,
Citrobacter freundii
2013).
Neumonías (Long et al.,
Moraxellaceae Acinetobacter iwoffii
2012).
54
Comprendiéndose la salud ocupacional, como la salud física y mental del
trabajador dentro de su ambiente laboral como fuera del mismo, asociando
las patologías que lleven a una enfermedad, tratando los efectos crónicos al
dar importancia a los estudios que determinen riesgos a la salud, las
personas que realizan actividades dentro del laboratorio pueden llegar a
verse afectados aun cuando se consideren personas sanas. Es decir, que los
trabajadores en el laboratorio no presenten sensibilidad afectada por
patologías previas, medicación, trastornos inmunitarios, embarazo o lactancia
y no estén dentro de un grupo de personas vulnerables, niños, ancianos y
con sistema inmunológico débil (Berenguer Subils, 1991; Rojo Molinero et al,
2015).
55
Group. y Yersinia pseudotuberculosis, se encuentran clasificadas en el grupo
2 como aquellos que pueden causar una enfermedad en el hombre y pueden
suponer un peligro para los trabajadores, con poca probabilidad de
propagación (Instituto Nacional de Seguridad e Higiene en el Trabajo, 2014).
56
La mayoría de los casos de infecciones oftalmológicas como la conjuntivitis,
una infección que puede amenazar la vista, son causadas por bacterias que
normalmente se asocian con infecciones de las vías respiratorias superiores
y por ciertas bacterias que son parte de la microflora de la piel como
Corynebacterium renale Group y las especies de Staphylococcus
identificadas excepto Staphylococcus lentus (Baron et al, 2013).
57
6. CONCLUSIONES
58
7. RECOMENDACIONES
59
8. BIBLIOGRAFIA.
60
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66
9. ANEXOS.
Anexo 1. Toma de muestras preliminares de bacterias en el aire.
67
a. Toma de muestras del aire con actividades académicas.
2
Lugar Descripción de la muestra UFC/15 minutos/63.61cm
3 Colonias amarillo brillante, borde circular y
M1 elevada.
12
Punto A 6 Colonias Blanco brillante, borde circular, cóncava.
3 Colonias beige, borde circular y elevada.
2 Colonias marrón brillante, borde circular elevada.
2 Colonias amarillo verdoso, borde circular, elevada.
M1 4 Colonias blancas circular brillante, elevada.
13
Punto B 2 Colonias beige y redonda plana.
2 Colonias rosadas, circulares.
1 Colonia roja brillante, circular.
4 Colonias amarillas opacas, redondas planas.
M2 2 Colonias naranja brillante, redondas con borde
14
Punto A circular, cóncava.
4 Colonias blanca beige, redondas planas.
3 Colonias blancas, bordes circulares y planas.
M3 3 Colonias amarillas oscuras, borde circular, planas
11
Punto A 3 Colonias color gris, borde circular y planas.
2 Colonias rosadas, borde irregular y poroso.
5 Colonias amarillo verdoso, borde circular.
M4 1 Colonia blanca transparente.
11
Punto A 5 Colonias blancas beige brillante, borde circular y
cóncava.
M: Mesa, UFC: Unidades Formadoras de Colonia, 15 minutos: Tiempo de exposición de la caja de
2
Petri, 63.61cm : Área de la caja de Petri, M1: Mesa número 1, M2: Mesa número 2, M3: Mesa número
3, M4: Mesa número 4.
68
Resultados de la toma de muestras del día jueves.
Lugar 2
Descripción de la muestra UFC/15 minutos/63.61cm
69
la humedad relativa del laboratorio en su momento era de 51% y la
temperatura de 25ºC.
2
Lugar Descripción de la muestra UFC/15 minutos/63.61cm
70
Anexo 2. Procedimiento de anaerobiosis en la cámara Anaerojar de Oxoid.
Se inició colocando dos placas con muestra por cada toma de muestras en el
cestillo, una vez colocadas se abrió el sobre generador de anaerobiosis
GasPak EZ de BD y el indicador que se compone de una pastilla color
blanco, estos se colocaron en las pinzas del cestillo, una vez hecho esto, se
tapó con las 4 pinzas de la cubierta, verificando que la válvula de
compensación estuviera completamente cerrada, se empleó un tiempo muy
corto entre la acción de abrir el sobre generador y cerrar la tapa, menos de
un minuto, ya que una exposición más prolongada hace disminuir la
reactividad y no poder conseguir los resultados esperados. Lo siguiente fue
llevar la cámara a una incubación de 37ºC por 48 horas (Becton & Dickinson
2011; Oxoid Ltd, 2006).
71
del sobre generador no sobrepasa los 65ºC. En 30 minutos se puede
observar una condensación dentro de la cámara, en 2,5 horas se alcanzan
las condiciones anaeróbicas y el nivel de oxigeno es menor o igual al 1%, en
24 horas se obtiene el 13% o más de dióxido de carbono siguiendo los 37ºC
de incubación. La pastilla indicadora inicialmente era de color blanca, una
vez expuesta a una atmosfera oxigenada cambia su color a un tono azul,
poco a poco al ir reduciendo el oxígeno los sobres generadores, la pastilla se
vuelve de nuevo blanca lo que nos indica que la cámara se encuentra en un
estado de anaerobiosis, esto tarda aproximadamente 9 horas (Becton &
Dickinson, 2011).
72
Anexo 3. Procedimiento de identificación BBL Crystal.
Una vez el inoculo se vierte en todos los pocillos del panel se alinea la tapa
con la base, y luego se cierra en dos clic, el inóculo de la prueba rehidrata los
substratos secos e inicia las reacciones de las pruebas. Después de un
periodo de incubación a 37°C en 48 horas, se examinaron los pocillos para
determinar cambios de color o fluorescencia que resultan de las actividades
metabólicas de los microorganismos; las pruebas se basan en la utilización y
degradación microbiana de substratos específicos detectados por varios
sistemas indicadores, se producen cambios de color que pueden detectarse
visualmente. Además, hay pruebas que detectan la capacidad de un
organismo de hidrolizar, degradar, reducir o de alguna forma utilizar un
substrato en los sistemas. La serie de colores resultante de las 29 o 30
reacciones según el sistema, se convierte en un número de perfil de diez
dígitos que se utiliza como la base de identificación. Las series de reacciones
73
bioquímicas y enzimáticas de todos los substratos para una gran variedad de
microorganismos que están almacenados en la base de datos. La
identificación se deriva de un análisis comparativo entre las series de
reacciones del aislado de la prueba y las de la base de datos. El número de
perfil resultante y los resultados de las pruebas Independientes (Tinción de
Gram, Prueba de la oxidasa y Prueba del Indol) se tabularon en un
computador con el libro electrónico de códigos instalado para obtener la
identificación (Becton & Dickinson, 2010; Becton & Dickinson, 2012).
74
Anexo 4. Preparación de medios de cultivo.
a. Medios generales.
- Por ultimo las cajas de Petri se dejan enfriar para que el medio se
solidifique y se almacenan en una nevera para su posterior uso.
b. Medio selectivos.
75
- Después se sirve aproximadamente 20mL de medio en cajas de Petri
debidamente esterilizadas y marcadas.
- Por ultimo las cajas de Petri se dejan enfriar para que el medio se
solidifique y se almacenan en una nevera para su posterior uso.
- Por ultimo las cajas de Petri se dejan enfriar para que el medio se
solidifique y se almacenan en una nevera para su posterior uso.
76
- Luego el medio se pasa a esterilizar en un autoclave durante 15
minutos a 121°C.
- Por ultimo las cajas de Petri se dejan enfriar para que el medio se
solidifique y se almacenan en una nevera para su posterior uso.
- Por ultimo las cajas de Petri se dejan enfriar para que el medio se
solidifique y se almacenan en una nevera para su posterior uso.
77
- Se tapa el Erlenmeyer y se funde en una plancha de calentamiento
hasta su ebullición, se debe de agitar suavemente hasta su completa
dilución.
- Por ultimo las cajas de Petri se dejan enfriar para que el medio se
solidifique y se almacenan en una nevera para su posterior uso.
- Por ultimo las cajas de Petri se dejan enfriar para que el medio se
solidifique y se almacenan en una nevera para su posterior uso.
78
Agar MacConkey (Merk, 1990).
- Por ultimo las cajas de Petri se dejan enfriar para que el medio se
solidifique y se almacenan en una nevera para su posterior uso.
- Por último los tubos de ensayo con medio líquido se tapan, se dejan
enfriar y se almacenan en una nevera para su posterior uso.
79
Agar Triple Sugar Iron (TSI) (MacFaddin, 2003).
80
Medio Basal O.F. (MacFaddin, 2003).
81
Anexo 5. Clasificación de las características microscópicas de las colonias
por cada punto de muestreo.
En esta tabla se pueden ver el número total de las tres diferentes morfologías
determinadas y del resultado de la coloración de Gram por cada muestreo
realizado y por cada punto en donde se tomó la muestra. Encontrándose un
total de 137 bacterias Gram Positivas en donde predominan 133 cocos,
seguido de 2 bacilos y 2 cocobacilos en total, en comparación con las
bacterias Gram negativas, en las cuales se obtuvo un total de 40 bacterias,
clasificándose en 18 Cocos, 16 cocobacilos y 6 bacilos.
Número de colonias según su morfología y el resultado de la coloración de Gram por cada punto de
muestreo
82
Anexo 6. Clasificación de las características microscópicas de las colonias
por cada punto de muestreo para la recuperación de Clostridium sp.
En esta tabla se pueden ver el número total de las tres diferentes morfologías
determinadas y del resultado de la coloración de Gram por cada muestreo
realizado y por cada punto en donde se tomó la muestra. Encontrándose un
total de 6 bacterias Gram positivas en donde predominan los cocos (6), con
ninguna evidencia de bacilos y/o cocobacilos, por otro lado, tampoco hubo
crecimiento de bacterias Gram negativas.
Número de colonias según su morfología y el resultado de la coloración de Gram por cada punto de
muestreo para la recuperación de Clostridium sp.
83