Resumen Agar Müller-Hinton y TSI (laboratorio microbiologia)

Melissa Herrera
Malory Cadiz
Roderick Miranda
El agar Müller-Hinton es un medio de cultivo microbiológico utilizado comúnmente para
realizar la prueba de susceptibilidad a antibióticos. También es usado para aislar y mantener
especies de Neisseria y Moraxella .Originalmente fue creado por John Howard Müeller
y Jane Hinton para aislar bacterias exigentes desde el punto de vista nutricional,
como Neisseria gonorrhoeae y Neisseria meningitis. Sin embargo, debido a sus
características resultó ser ideal para el estudio de la susceptibilidad a los antibióticos,
proporcionando resultados confiables y reproducibles.
Por ello, el agar Müeller Hinton es el medio de cultivo aceptado por la Instituto de Estándares
Clínicos y de Laboratorio. Comité Europeo de Pruebas de Susceptibilidad Antimicrobiana,
para la ejecución de la prueba de susceptibilidad antimicrobiana por el método de difusión
en disco de Kirby y Bauer.
CARACTERISTICAS
Por ser un medio nutritivo no selectivo es excelente para el crecimiento de la mayoría de las
bacterias patógenas.
Otra de sus características es que contiene baja cantidad de inhibidores, lo que permite que
puedan evaluarse de manera efectiva las sulfonamidas, el trimetoprim y las tetraciclinas.
PREPARACIÓN
Pesar 37 gr del medio Müeller Hinton deshidratado y disolver en 1 litro de agua destilada.
Calentar el medio mientras se agita para ayudar a su disolución. Dejar hervir por 1
minuto.Llevar al autoclave para esterilizar a 121°C por 15 minutos. Al sacar del autoclave,
se debe colocar la fiola en un baño de maría a 50°C para enfriar. Verter 25 a 30 ml en placas
de Petri estériles de 10 cm de diámetro.Las placas deben quedar con un grosor promedio de
4 mm (ideal), siendo permitido un rango de 3-5 mm.Si se desea preparar agar sangre usando
como base agar Müeller Hinton, se vierte 5% de sangre de cordero estéril y desfibrinada antes
de servir en las placas.El pH final del medio debe quedar entre 7,2 a 7,4.Invertir y guardar en
nevera, hasta su uso. Dejar que la placa tome temperatura ambiente antes de usar.El color del
medio preparado es beige claro.

USOS

Se utiliza para realizar el antibiograma o la prueba de susceptibilidad a los antibióticos a la

mayoría de los patógenos no exigentes de crecimiento rápido.
Si el agar es suplementado con sangre sirve para realizar el antibiograma de microorganismos
exigentes como:
Streptococcus pneumoniae,
Haemophilus sp,
Neisseria meningitidis, entre otros.
La determinación de la concentración mínima inhibitoria es la medida de sensibilidad de una
bacteria a un antibiótico. Este método nos ofrece información sobre la sensibilidad de las
bacterias sensibles, intermedios o resistentes.
• Sensibles: si existe un una buena probabilidad de éxito terapéutico en el caso de un
tratamiento a la dosis habitual.
• Intermedio: cuando el éxito terapéutico es imprevisible.
• Resistente: si la probabilidad de éxito terapéutico es nula o muy reducida.
Algunas cepas que no tienen criterios establecidos para la resistencia pueden informarse solo
como susceptibles o no susceptibles. La determinación de qué concentraciones específicas
de fármaco representan S, I y R se basa en múltiples factores, especialmente en datos
farmacocinéticas, farmacodinámicos, clínicos y microbiológicos.
COLOCACIÓN ESTRATÉGICA DE DISCOS SOBRE EL AGAR MÜELLER HINTON
Para enterobacterias se debe colocar el disco de ácido clavulánico frente a cefalosporinas de
3er y 4ta generación. Un ensanchamiento en forma de huevo indica que la cepa es productora
de betalactamasas de espectro extendido (BLEE) Esto significa que el paciente no debe ser
tratado con ninguna cefalosporina.
• En Staphylococcus es importante colocar el disco de eritromicina o azitromicina
frente al disco de clindamicina (prueba D-test).
• Un halo resistente en eritromicina y un achatamiento en el halo de clindamicina indica
que la cepa posee una resistencia inducible a clindamicina, cepa (RIC). Esto quiere
decir que un tratamiento con clindamicina no será efectivo.
• Para la búsqueda de cepas AMP C inducibles en enterobacterias y algunos bacilos
Gram negativos no fermentadores, se enfrentan los discos de ceftazidime, cefoxitin o
piperacilina tazobactan frente a un disco de imipenem, a una distancia de 27 mm.
-Discos de antibióticos mal conservados puede producir falsas resistencias. Por ejemplo, el
disco de oxacilina es muy vulnerable a los cambios de temperatura.
-Un pH del medio por debajo al indicado (ácido) produce halos más pequeños en los
aminoglucósidos y macrólidos (riesgo de falsa resistencia), y halos más grandes en la
penicilina, tetraciclina y novobiocina (riesgo de falsa sensibilidad).
-Si el pH se encuentra por encima del indicado (alcalino) se invierten los efectos descritos
anteriormente.
-Los medios con concentraciones de timina y timidina elevadas influyen reduciendo
significativamente los halos de inhibición de las sulfonamidas y el trimetoprim.
-Altas concentraciones de calcio y magnesio producen falsas resistencia de los
aminoglucósidos, polimixina B y tetraciclinas frente a cepas de Pseudomonas aeruginosa.
-Bajas concentraciones de calcio y magnesio producen falsas sensibilidades de los
aminoglucósidos, polimixina B y tetraciclinas frente a cepas de Pseudomonas aeruginosa.
-La presencia de zinc afecta los resultados de los discos de carbapenems (imipenem,
meropenem y ertapenem).
-El grosor del medio por debajo de 3 mm produce resultados de falsa sensibilidad, mientras
que un grosor por encima de 5 producirá falsa resistencia.-La movilización de discos en el
antibiograma dará halos deformes, ya que la descarga de antibióticos es inmediata.
 TSI Agar (Triple Sugar Iron Agar)

Medio empleado para la diferenciación de enterobacterias, en base a la fermentación de los

hidratos de carbono, glucosa lactosa, sacarosa y la producción de ácido sulfhídrico.
FUNDAMENTO:

COMPOSICIÓN
• Peptona 159 g
• Extracto de levadura 39.9 g
• Extracto de carne 3 g
• Sacarosa 10 g
• Sulfato de hierro 0,20 g
• Cloruro sódico 5 g
• Tiosulfato de sodio 0,30 g
• Rojo fenol 0.024 g

RESULTADOS:
 Se debe considerar los cambios de color en el pico y el fondo del tubo y la formación de
burbujas.
 Cuando el medio es acido (A) este se torna de color amarillo y cuando es alcalino (K)
permanece rojo
Otros resultados presentes en TSI.
 Pico de flauta alcalino/ profundidad alcalina (K/K)
• No fermentación de hidratos de carbono
 Característico de bacterias no fermentadoras como Pseudomonas aeruginosa

- Pico de flauta alcalino/ profundidad ácida (K/A)

- Glucosa fermentada; lactosa o sacarosa no fermentada
- Característico de bacterias no fermentadoras de lactosa como
especies de Shigella

 Pico de flauta alcalino/ profundidad ácida(negro) (K/A/H2S+)

• Glucosa fermentada; lactosa y sacarosa no fermentadas, producción de H2S
 Característico de bacterias no fermentadoras de lactosa y productoras de H2S
como especies de Salmonella, especies de Arizona, especies de Citrobacter
algunas especies de Proteus