Aislamiento e identificación de bacterias capaces de degradar el plástico (HPDE) de

muestras de sedimentos obtenidos del Caño de Tiburones en Arecibo, Puerto Rico

Alondra Pastor Calcaño, Joshua Navedo Jackson, Jomuel Ramos Rosa. Coralis López Castro y José
Arbelo
Departamento de Biología, Universidad de Puerto Rico en Arecibo

Resumen

La contaminación antropogénica es un problema de conocimiento público a nivel mundial que es

constantemente ignorado o pasado por alto. El plástico, representa uno de sus componentes más
importantes, ya que es empleado en una gran cantidad de materiales de uso diario de los seres humanos,
como lo son las botellas y las bolsas. Debido al constante incremento en las cantidades de plástico en el
ambiente, nuevas técnicas contra la contaminación han surgido, entre ellas la biorremediación. Esta
consiste en el empleo de microorganismos en la bioconversión de material recalcitrante a material menos
tóxico. Como parte de esta investigación se aislaron del sedimento del Caño de Tiburones en Arecibo,
Puerto Rico posibles microorganismos con la capacidad de degradar el plástico. Dicho dato fue confirmado
mediante un ensayo de biorremediación en donde las bacterias aisladas si presentaron cierto grado de
degradación del plástico (HDPE). Entre los posibles candidatos hallados del Caño Tiburones se encuentra
Bacillus subtilis y Bacillus mycoide cuyos estudios han demonstrados que son muy eficaces en la
biorremediación de plástico. Todas las bacterias aisladas demonstraron características biorremediativas,
pero Bacillus. subtilis fue el de mayor eficacia.

Introducción (Nathanson, 2016). Según la “Environmental

La contaminación ambiental es un tema
de gran preocupación a nivel mundial. La misma
es el resultado del uso irracional de los recursos
naturales lo cual ha modificado el estilo de vida
de los seres humanos y ha reducido la vida en la
tierra (Kumar Srivastava, 2012). Es debido a la
industrialización, urbanización, la gran cantidad
de desperdicios desechados de manera
inapropiada y la inconsciencia de las personas
que ha ocasionado graves problemas de salud y
complicaciones en los sistemas acuáticos y
terrestres (Kelishadi, 2012). La contaminación
puede ser lumínica, acústica, aérea, acuática o
terrestre (Bradford, 2015). Dentro de estas la más
comúnmente percibida es la del suelo y se debe a
los desechos de residuos sólidos o líquidos en la
tierra o en el subsuelo, que llega a contaminar la
superficie terrestre y hasta las aguas subterráneas
Protection Agency” (EPA), cada persona desecha
4.3 libras diaria de desechos sólidos, lo cual solo
el 54% es recolectado en los vertederos y un 34%
se recicla, el resto termina en el ambiente
(Bradford, 2015). Generalmente los
contaminantes terrestres se clasifican como
desechos sólidos municipales, de construcción y
demolición, desechos peligrosos, basura no
peligrosa y basura doméstica, institucional,
comercial e industrial (Nathanson, 2016). Dentro
de esos desechos, uno de los más comunes son los
objetos plásticos.
Los plásticos, también conocidos como
polímeros, son producidos por la conversión de
productos naturales o por la síntesis de productos
químicos primarios que generalmente proceden
del petróleo, gas natural o carbón (Plastics
Industry Producer Statistics Group, 2005). Se ha

1
encontrado que el plástico ha superado a la
mayoría de los materiales realizados por el
hombre ya que está amenazando con una
contaminación casi permanente del medio
ambiente natural (Taylor, 2017). Estudios han
demostrado que la cantidad de plástico producido
equivale en peso a mil millones de elefantes y
probablemente estos desechos tarden entre cien a
mil años en descomponerse (Taylor, 2017). El
polietileno es uno de los plásticos más utilizado
alrededor del mundo, debido a su gran
versatilidad. Existen dos tipos de polietileno, el
de baja densidad (LD), el cual es utilizado para
bandejas y para cintas de tarea pesada y alta
densidad (HD), el cual es utilizado para fundas de
compras, algunas botellas y para tapas de botella
(British Plastics Federation, 2017). Poco a poco
este material ha encontrado su camino en la
cadena alimentaria humana por lo cual se ha visto
como una gran amenaza para la salud del ser
humano y animales (Taylor, 2017). Es por eso
por lo que se han investigado numerosas maneras
para remediar y disminuir la contaminación
terrestre como, por ejemplo, la biorremediación
de plástico.
La biorremediación estimula el
crecimiento de algunos microorganismos que son
capaces de utilizar los contaminantes como
fuente de energía y alimento (EPA, 2012). Para
que este proceso sea efectivo se requiere que esté
presente una temperatura adecuada, humedad,
fuentes de carbono, concentración del
contaminante apropiado, pH, nutrientes y
alimentos necesarios para el desarrollo de los
microorganismos (EPA, 2012). Además, la
biorremediación es capaz de realizarse a través de
dos enfoques los cuales son la bioestimulación y
la bioaumentación. La bioestimulación consiste
en estimular las comunidades microbianas
naturales presentes en el área al proveer
nutrientes y otras necesidades, como la alteración
del pH, y humedad, requeridas para degradar el
contaminante (EPA, 2012) (Scow, 2016). Por
otro lado, la bioaumentación consiste en inocular
al lugar contaminado microorganismos
seleccionados con altas capacidades de
degradación (Scow, 2016). La biorremediación
de plásticos ocurre mediante ciertas actividades
enzimáticas que conducen al rompimiento de la
cadena de polímeros a monómeros, pero como la
mayoría de los polímeros son demasiado grande,
primero se despolimerizan a unidades de
monómeros (Saad Jumaah, 2017). Estos
monómeros son luego mineralizados para que
puedan atravesar la membrana celular y ser
utilizados como fuente de carbono, donde en
condiciones aeróbicas se produce dióxido de
carbono y agua y en condiciones anaerobicas se
produce agua, dióxido de carbono y metano (Saad
Jumaah, 2017) (Ali Shah, et al., 2008). Existen
varios parámetros que afectan el grado de
degradación del plástico, tales como humedad,
temperatura, pH, salinidad, presencia de oxígeno,
luz solar, agua y estrés, donde a su vez afecta el
crecimiento poblacional de los microorganismos
(Saad Jumaah, 2017). Además, el peso molecular
del plástico afecta el grado de degradación del
mismo, donde si el peso es bajo, aumenta su
velocidad, al igual que si en la cadena del
polímero hay unidades de monómeros repetidos
(Saad Jumaah, 2017) (Ali Shah, et al., 2008). El
peso molecular alto tiene una baja degradabilidad
debido a que se disminuye su solubilidad,
haciéndolo desfavorable para el microorganismo
debido a que no se asimila completamente dentro
de la membrana para luego ser destituido (Ali
Shah et al., 2008). Los microorganismos capaces
de biorremediar plásticos pueden ser bacterias,
hongos o algas y algunos de ellos son especies de
Pseudomonas y Streptomyces, Aspergillus flavus,
Brevibacillus borstelensis, Rhodococcus ruber,
Penicillium simplicissimum, Inonotus hispidus y
Bacillus subtilis (Kale et al., 2015).
Muchos de los contaminantes,
especialmente el plástico, han llegado a sistemas
acuáticos recreacionales lo cual presentan un gran
peligro sobre la gran variedad de organismos que
habitan en el área y los seres humanos que visitan
2
 los mismos. El Caño de Tiburones en Arecibo, de agua y 1.50mL de amortiguador y se les
Puerto Rico es una reserva natural muy turísticas transfirió con una probeta 99 mL a 20 botellas
en la cual habitan una gran diversidad de especies pequeñas con tapas. Estas botellas, otros cinco
(Ortiz, 2015). Sin embargo, en años reciente el envases vacíos con tapa y el medio fueron
Departamento de Recursos Naturales de Puerto esterilizados en un autoclave a 125ºC por 3 horas
Rico está investigando dicho ecosistema por y colocados en la nevera (Balasubramanian, et al.,
posible contaminación antropogénica 2010) (Bonhomme, et al., 2003) (Satlewak, Soni,
proveniente del vertedero de Arecibo (Ortiz, Zaidi, Shouche, & Goel, 2008) (Paul & Kumar,
2015). Para poder remediar este problema, la 2014).
biorremediación es una vía efectiva y de bajo
II. Toma de Muestra
costo que debe ser empleada para evitar que el
ecosistema se afecte gravemente. Por lo tanto, el
La toma de muestra se realizó en el Caño
propósito de esta investigación es aislar
de Tiburones en Arecibo, Puerto Rico. Se
microorganismos del suelo del Caño de
obtuvieron dos muestras de sedimento en
Tiburones en Arecibo, Puerto Rico que tienen la
áreas distintas del sistema, una cercana al
capacidad de degradar plástico, en especial los
cuerpo de agua y otra lejos del cuerpo de
HDPE que son los comúnmente desechados por
agua. El sedimento obtenido tenía plástico
el ser humano, e identificarlos haciendo uso de
a su alrededor. Se tomaron los parámetros
pruebas bioquímicas.
físicos de las áreas seleccionadas, los cuales
fueron pH, temperatura del ambiente,
temperatura del suelo y humedad relativa.
Metodología
Luego, se recolectaron muestras del suelo y
I. Preparación de medio sintético y buffer del plástico que estaba en el área y se echó
en fundas estériles.
Se preparó 1000 mL de un medio
sintético que contenía agua y los siguientes III. “Screening”
compuestos: En el laboratorio, bajo el “Fume Hood”,
Compuesto Masa (g) se transfirió 100 mL del medio sintético a 5
botellas esterilizadas. De la primera
NH4NO3 1.00330
muestra, se transfirió 10.01g y 10.00g de
MgSO4 7H2O 0.20017 tierra en dos medios, para la segunda
K2HPO4 1.00683 muestra se echaron 10.01g y 10.04g a otras
CaCl2 2H2O 0.10301 2 botellas y la quinta botella fue
seleccionada como grupo control negativo.
KCl 0.15087
Luego, se cortaron pedazos del plástico
Extracto de 0.10068 encontrado, se pesaron y se echó 0.5g a cada
Levadura una de las 4 botellas ya que el otro envase
FeSO4 6H2O 0.00143 fue utilizado como grupo control. Una vez
ZnSO4 7H2O 0.00093 se inocularon las muestras, estas fueron
MnSO4 0.00128 colocadas en un “shaker” a 150 rpm a 37ºC
por 18 días.

Además, se prepararon 2 rondas de 1,000 mL de IV. Preparación de medio TSA

amortiguadores, los cuales contenían 1,000 mL

3
 Se prepararon 500 mL del medio TSA y
se esterilizó.
V. Preparación de medio sintético y dilución
de muestras
Mientras se derretía el medio TSA
preparado, se creó 1,000 mL de otro medio
sintético utilizando los mismos ingredientes
con las mismas cantidades. Además, se
realizaron 3 diluciones de cada muestra con
amortiguador bajo el mechero, donde sus
concentraciones eran 10-2, 10-4 y 10-6. De
estas diluciones, se utilizó una propipeta
para sacar 1.0 mL y 0. 1mL y colocarlos en
platos Petri y se transfirió 20 mL del medio
en 15 platos. Se movieron de forma circular
para así nivelar el agar y fueron colocados
en la incubadora a 37ºC por 24 horas.
VI. Estriado
Se llevó acabo un estriado bajo el
mechero con un asa microscópico de cada
colonia que parecía distinta de las diluciones
de las muestras en medios TSA, donde estos
fueron luego fueron puestos en la
incubadora a 37ºC por 24 horas. Luego, se
prepararon 50 mL de TSB, fueron
esterilizados y luego transferir 3 mL del
medio en 16 tubos de ensayo.
VII. Inoculación y aislamiento
Se escogió la colonia más aislada para
inocularlo bajo un mechero en los tubos de
ensayo con TSB. Estos tubos luego fueron
incubados a 37ºC por 24 horas.
VIII. Preparación de prueba de
biorremediación
Se recortaron 10 pedazos de plástico de
una funda plástica, se pesaron en una
balanza analítica y luego fueron colocados
bajo un “Fume Hood” con luz ultravioleta
por 15 minutos en cada lado del plástico
para ser esterilizados. Mientras se
esterilizaban los plásticos, de las 16
muestras aisladas, se seleccionaron 5
aleatoriamente para llevar a cabo la prueba
de biorremediación. A estas muestras se le
llevó a cabo una tinción Gram para poder
empezar a identificarlos. Luego, se
transfirió 100mL del medio sintético a 5
botellas estériles dentro del “Fume Hood” y
se inocularon las muestras junto con los
pedazos de plásticos. Estos medios luego
fueron colocados en un “shaker” a 150 rpm
a 37ºC por 12 días. Además, se realizó un
estriado de cada muestra en medios TSA, se
les coloco encima un pedazo de plástico y
fueron incubados a 37ºC por 24 horas.
IX. Preparación de pruebas bioquímicas
Se prepararon 5 series de pruebas
bioquímicas, las cuales consistían en
hidrolisis de gelatina, fermentación de
lactosa, sucrosa y dextrosa, TSIA (“Triple
Sugar- Iron Test”), Medio SIM para
producción de Indole, H2S y motilidad, 2
tubos de TSB para rojo metilo y Vogues-
Proskaeur, citrato, ureasa, nitrato, litmus
milk, TSA para oxidasa y catalasa y un
medio de almidón. Además, se inocularon
las muestras en tubos de ensayo con TSA
inclinado previamente preparado y al día
siguiente se les añadió a los tubos aceite
mineral para preservar las muestras a
temperatura ambiente.
X. Cultivación en medios de pruebas
bioquímicas
Las muestras preservadas fueron
inoculadas en medio TSB y colocadas en la
incubadora a 37ºC para ser utilizadas el día
siguiente. Después de las 24 horas, se
inocularon las muestras en los medios para
las pruebas bioquímicas, donde estas
últimas fueron incubadas. Al día siguiente,
se analizaron los resultados obtenidos y se
utilizó el manual de Bergey’s para
identificar las bacterias.
4

XI. Filtración y secado de plástico
Las muestras fueron filtradas para remover
el plástico del medio. Este último luego fue
lavado con agua y con etanol y fue puesto a
secar en un horno por 2 horas. Después de
haber sido secado, fue pesado en una
balanza analítica para obtener la masa luego
de haber sido degradado.
presentado en la Imagen 3 es de color blanco
un poco más amarillento que el cultivo puro
anterior (Imagen 2) y de aspecto plano como
con rizos en los bordes, pero más compactos
que el anterior. La Imagen 4 demuestra un
cultivo de color amarillo claro de forma
irregular y poco elevada. Por último, la
Imagen 5 se observó una colonia con
crecimiento abundante y rápido de color
blanco-crema y de aspecto plano.

Resultados

En la toma de muestra, el lugar de muestreo

1 (cercano al cuerpo de agua) obtuvo una
temperatura de 33.4oC, un pH de 6.0, una
humedad relativa de 87.7 y una temperatura
ambiente de 28.9oC. Por otro lado, el área de
muestreo 2 (lejano al cuerpo de agua) obtuvo una
temperatura de 28.7oC, un pH de 6.5, una
humedad relativa de 81.4 y una temperatura Imagen 1. Muestra 1, medio 1, colonia 4
ambiente de 29.1oC. Después del proceso de dejar
la muestra por 15 días en el medio sintético, se
inocularon los microorganismos en TSA y
después de las 24 horas se realizaron cultivos
puros, en TSA, de solo cinco colonias que se
seleccionaron al azar. Una vez crecieron los
cultivos puros fueron expuestas al plástico para
medir la cantidad de degradación por un período
de 13 días y se le realizaron tinción Gram y
pruebas bioquímicas para lograr la posible
identificación de los microorganismos. Imagen 2. Muestra 1, medio 1, colonia 8

A. Aislamiento en cultivos puros de las colonias

seleccionadas

Se realización los cultivos puros en un

plato Petri “Tryptic Soy Agar” para la
observación de sus características
macroscópicas. La Imagen 1 se presenta una
colonia de color naranja amarillento y de
aspecto cremoso- brilloso. En la Imagen 2
se observó una colonia blanca-crema, plana y
con un aspecto de rizos que rodeaba los
bordes de la colonia. El cultivo puro Imagen 3. Muestra 2 medio 1, colonia 2

5
 Imagen 4. Muestra 2 medio 2, colonia 6

Imagen 6. Muestra 1.1.4. Positivo a

crecimiento en el plástico

Imagen 5. Muestra 2 medio 2, colonia 7

B. Muestra de crecimiento de los Imagen 7. Muestra 1.1.8. Positivo a

microorganismos seleccionados con crecimiento en el plástico
pedazos de plásticos

Luego de un periodo de incubación de 72

horas con dos pedazos de plásticos de
aproximadamente de un tamaño de 3x3 cm
se observó si las bacterias aisladas eran
capaces de crecer en el plástico. Las
muestras de las colonias aisladas dieron un
resultado positivo ya que se pudo observar
crecimiento encima y debajo del plástico,
esto se presenta en la Imagen 6, Imagen 7,
Imagen 8, Imagen 9 e Imagen 10. Algo
curioso es que se observó que la muestra
#2.2.7, representado en la Imagen 10, creció
Imagen 8. Muestra 2.1.2. Positivo a
en todo el medio incluyendo en el plástico. crecimiento en el plástico

6

Imagen 11. Tinción Gram positiva
Imagen 9. Muestra 2.2.6. Positivo a
crecimiento en el plástico
Imagen 13. Tinción Gram positiva
Imagen 10. Muestra 2.2.7. Positivo a
crecimiento en el plástico
C. Tinción Gram de los microorganismos
aislados
En la Imagen 11 se demuestra la tinción
Gram realizada para la muestra 2.2.7 en la
cual se observó bacilos cortos Gram
positivos y puntos pequeños que se infirió
que era esporas. Para la muestra 1.1.4
(Imagen 12) se observó bacilos alargados
de aspecto de hifas cortas y de color rosa por
lo que se clasificaron como Gram negativos.
En la Imagen 13, se observó bacilos cortos
Gram positivos en la muestra 2.2.6 y algo
similar fue observado en la muestra 1.1.8
(Imagen 14), sin embargo, estos eran más
estrechos. Por último, en la Imagen 15, se
observó bacilos cortos Gram positivos más
agrupados que en las otras tinciones.
Imagen 12. Tinción Gram negativa
Muestra 2.2.7. Muestra 1.1.4.
Imagen 14. Tinción Gram positiva
Muestra 2.2.6. Muestra 1.1.8.
Imagen 15. Tinción Gram positiva
Muestra 2.1.2.
D. Resultados de las pruebas bioquímicas
La Tabla 1 demuestras los resultados de
las pruebas bioquímicas realizadas para
cada una de las bacterias aisladas. La
Imagen 16 demuestra la observación final
de las pruebas bioquímicas de la muestra
1.1.4. La observación final de los resultados
de las pruebas bioquímicas de las muestras
2.1.2, se representan en la Imagen 17 y los
de la muestra 2.2.7 se observan en la
Imagen 18. Por último, lo observado para
7
 el análisis de las pruebas de las muestras
2.2.6 y 1.1.8 se representan en la Imagen 19
e Imagen 20, respectivamente.
Tabla 1. Resultados de las pruebas bioquímicas realizadas en las
muestras bacterianas aisladas

Prueba M#2.1.2 M#2.2.6 M#1.1.8 M#2.2.7 M#1.1.4

Gelatina - + - + -
Fermentación - - - - -
Lactosa
Fermentación + + + + -
Dextrosa
Fermentación - - - - -
Sucrosa Imagen 17. Resultados de la muestra 2.1.2.
TSIA K/K K/A K/K K/A A/K
Indol - - - - -
Motilidad + - + - -
MR + - + - -
VP - - - - -
Citrato - - - - -
H2S - - - - -
Ureasa - - - - -
LM- Lactosa - - - - -
LM- Acepta - - - - -
H+ Imagen 18. Resultados de la muestra 2.2.7.
LM- - - - - -
Coagulo
Rennet
LM- Coagulo - - - - -
ácido
LM- - + - - -
*+/resultado positivo, -/resultado negativo, LM se refiere a “Litmus Milk”*
Proteólisis
LM- + - + + -
Reaccion
alcalina positivo, -/resultado negativo, LM se refiere a “Litmus Milk”*
*+/resultado Imagen 19. Resultados de la muestra 2.2.6.
Nitrato +, gas + +, gas + +
Catalasa + + + + +
Oxidasa + + - - +
Almidón - - - - -

Imagen 16. Resultados de la muestra 1.1.4

8
 cinco microorganismos aislados no solo tienen la
habilidad de crecer en conjunto con el plástico,
sino que en todos ellos se observa un crecimiento
congruente en la superficie del HDPE colocado
en el medio. Esto indica que dichas bacterias
tienen la maquinaria genética necesaria para
reconocer el HDPE como una superficie de
adhesión y colonizarlo totalmente, formando una
especie de biopelícula, permitiéndole así, obtener
una mayor cobertura del área superficial del
E. Resultados del ensayo de biorremediación HDPE (Gilan &Imagen
Sivan,20.2013). Estade
Resultados característica
la muestra 1.1.8.
es la deseada para cumplir con los objetivos de
Para poder determinar el porcentaje de
nuestra investigación, ya que para poder degradar
degradación del plástico de cada una de las
el HDPE, el microorganismo debe tener la
muestras aisladas, se comparó la masa del
capacidad de reconocerlo como una posible
plástico antes del ensayo de biorremediación y
superficie de adhesión y como una posible fuente
después del ensayo de biorremediación. Dicho
de carbono. Con dicha prueba reforzamos aún
ensayo se dejó por un periodo de 13 días y luego
más la teoría de que estos microorganismos son
se lavó y se pesó el plástico. La Tabla 2 posibles degradadores de HDPE.
demuestra la comparación de la masa del plástico
antes y después del ensayo de biorremediación en El ensayo de biorremediación fue la
medio sintético con cada una de las bacterias prueba confirmatoria para saber si en realidad
aisladas. dichos microorganismos tenían la capacidad de
degradar el HDPE. Después de un periodo 13
días de incubación, a 37ºC y 150 revoluciones por
Tabla 2. Resultados del ensayo de biorremediación luego de
minuto en el medio sintético, se obtuvieron los
un periodo de exposición de 13 días
resultados de este ensayo. Al crear un medio
Porciento sintético con todos los nutrientes inorgánicos
Muestra Plástico Peso Peso
de necesarios para el crecimiento y desarrollo
# # antes después
degradación microbiano sin ninguna fuente de carbono, aparte
2.2.7 1 0.05374g 0.05314g 1.11% del HDPE, se asegura de que el crecimiento del
1.1.4 2 0.04904g 0.04882g 0.45% microorganismo inoculado esté estrictamente
1.1.8 3 0.04699g 0.04668g 0.66% ligado a la utilización del HDPE como fuente de
2.1.2 4 0.06903g 0.06881g 0.32% carbono para la producción de energía (Nupur
2.2.6 5 0.05849g 0.05813g 0.62% Ojna et al., 2017). Antes de iniciar el ensayo y
después del mismo se obtuvieron las masas de
cada pedazo de HPDE colocado, la Tabla 2
Discusión demuestra los resultados obtenidos. Como se
observa en el Gráfico 1, al evaluar el pedazo de
Luego de aislar efectivamente cada uno
HDPE utilizado como fuente de alimento por
de los microorganismos seleccionados y obtener
cada uno de los microorganismos, se obtuvieron
cultivos totalmente puros se prosiguió a realizar
resultados cuantitativos distintos para cada uno
la prueba de confirmación de crecimiento sobre
de ellos. La muestra rotulada como 2.1.2 fue la
el plástico. Como se observa en la Imagen 6,
de menor porciento de degradación con un
Imagen 7, Imagen 8, Imagen 9 e Imagen 10, los
0.32%, luego le siguió la muestra 1.1.4 con un

9
 0.45%, después las muestras 2.2.6 y 1.1.8 con
porcientos relativamente cercanos de 0.62% y
0.66% respectivamente y finalmente la muestra
2.2.7 con el porciento mayor de 1.11%. Estos
porcientos de degradación son los que finalmente
confirman la habilidad de estos microorganismos
en sobrevivir utilizando el HDPE como fuente de
carbono.
PORCIENTO DE
DEGRADACIÓN DE CADA
MUESTRA
1.2
PORCIENTO DE DEGRADACIÓN
1 (Imagen 2), tinción Gram (Imagen 14) y
0.8
0.6
0.4
0.2
0 (Imagen 15) y los resultados de las pruebas
1.1.4 1.1.8 2.1.2 2.2.6 2.2.7
# DE MUESTRA
Grafico 1. Porciento de degradación de plástico en cada muestra
Generalmente, los ensayos
biorremediación se realizan por periodos
extensos de tiempo, en donde el microorganismo
tiene más posibilidad de expresar su habilidad de
degradar el HDPE, pero por razones ajenas a
nuestra voluntad, se tuvo que restringir este
tiempo a solo 13 días, limitando el tiempo de
exposición al HDPE y, por ende, limitando su
biorremediación. Se esperaría que un mayor
tiempo de exposición y una modificación de los
factores fisicoquímicos, se reflejara con un mayor
porciento de degradación (Bozena Nowak et al.,
2011). De los cinco microorganismos presentes,
el microorganismo 2.2.7 fue el de mayor
degradación en comparación con los demás. Un
posible factor causante de este alto porciento
pude ser la capacidad de este microrganismo de
colonizar los sustratos, ya que cada vez que se
inoculaba en un medio de cultivo para observar
su crecimiento, crecía alrededor de todo el plato,
sin importar como se inoculara.
Con el propósito de identificar los
microorganismos que estábamos manejando, se
realizaron cinco sets de pruebas bioquímicas y
tinciones Gram. De las cinco bacterias, se
identificaron tres de ellas correctamente. En base
a toda la data recopilada de estos procedimientos,
pudimos utilizar el Bergey’s manual como
referencia para la identificación de los
microorganismos. El primer microorganismo
identificado fue el rotulado como 1.1.8, donde de
acuerdo con sus características coloniales
resultados en pruebas bioquímicas, coincide con
Bacillus mycoide. La muestra 2.12, por sus
características macroscópicas (Imagen 3), sus
características microscópicas de la tinción
bioquímicas, se identificó como Bacillus
mycoide. Esto se debe a que los resultados de las
pruebas bioquímicas eran idénticos a los de la
muestra 1.1.8, por lo que es posible que este sea
otra cepa de la bacteria. La misma es una bacteria
Gram positiva, no motil, comúnmente hallada en
de
la tierra y se encuentra asignada al grupo de
Bacillus cereus (Franco, et al., 2002). Su
presencia no es extraña, ya que se ha reportado
que las bacterias del género Bacillus son un
componente importante de la composición
microbiana en los suelos; esto debido a su gran
resistencia brindada por su habilidad de producir
endosporas (Hatha Abdulla & Kumar, 2007).
Según los resultados de las pruebas bioquímicas
y lo escrito en el manual de Bergey’s, se
identificó la muestra 2.2.7 como Bacillus subtilis.
La misma es una bacteria Gram positiva en forma
de bacilo y formadora de esporas como se puede
observar en la tinción (Imagen 11) (Piggot,
2009). Es comúnmente aislado del suelo y es de
gran importancia comercial debido a la fácil
manipulación de su genoma (Piggot, 2009).
Estudios previos demuestran que esta bacteria es
10
capaz de degradar “Low-density polyethylene”
(LDPE) y “High-density polyethylene” (HDPE)
y utilizarlos como una fuente de carbono (Vimala
& Mathew, 2016). La modificación de factores
fisicoquímico, como la luz ultravioleta, y la
adición de biosurfactantes pueden acelerar el
proceso de Bacillus subtilus para utilizar el
polímero (Vimala & Mathew, 2016). Se ha
encontrado que esta especie, junto con Bacillus
mycoide, son especies que tienen una gran
capacidad adaptativa y bajo largos periodos de
exposición a suelos contaminados con aceite
adquieren la habilidad de degradar hidrocarburos
como los poliuretanos presentes en las bolsas de
plástico (Ibiene et al., 2013). El caño Tiburones
es aledaño a un vertedero, por lo que se han
reportado varios derrames de aceite en áreas
cercanas y dentro del Caño, donde el último
derrame reportado oscila entre los 35 y 40
galones de aceite (El Nuevo Día, 2015). Es por
esto que la habilidad de estas especies de
adaptarse es evidente y en cierto sentido
beneficiosa en la adquisición de nuevas
características biorremediativas por parte de las
especies.
Conclusión
La contaminación terrestre por
desperdicios sólidos es un problema grave que
afecta tanto los organismos del hábitat como a los
seres humanos. Los desechos y residuos sólidos
o líquidos mal manejados encuentran su vía a
sistemas recreacionales y a la cadena alimentaria
por lo que es sumamente dañino para la salud. El
plástico que es producido por la conversión de
productos naturales o por la síntesis de productos
químicos primarios que generalmente proceden
del petróleo, gas natural o carbón es un material
mayormente utilizado por el hombre.
Actualmente este es el que amenaza
primordialmente con la contaminación del
ambiente terrestre. Por tal razón, se ha
investigado sobre la biorremediación de estos
contaminantes para poder lidiar con el problema.
La biorremediación de plástico consiste en
emplear microorganismos capaces de utilizar
compuestos recalcitrantes en sus rutas
metabólicas para convertirlos en compuestos
menos dañinos para el medio ambiente.
En esta investigación se aislaron
microorganismos del sedimento que contenía
basura del Caño de Tiburones en Arecibo, Puerto
Rico. Se seleccionaron cinco al azar y se
sometieron a un ensayo de biorremediación con
cierta cantidad de plástico para poder conocer
cuánto plástico degradan en un periodo de 13
días. Todas las muestras aisladas obtuvieron
cierto grado de degradación, por lo que se
concluye que todas ellas tienen la capacidad de
utilizar el HDPE como fuente de carbono. Cabe
resaltar que la muestra 2.2.7, posiblemente
Bacillus subtilis, obtuvo un por ciento de
degradación mucho mayor que las otras muestras,
lo que podría deberse a su gran capacidad de
crecer y multiplicarse rápidamente.
Posteriormente, para poder obtener
mejores resultados en la degradación se debe
modificar los parámetros fisicoquímicos para
determinar si el proceso de utilización del
plástico por las bacterias se acelera o disminuye.
Para esto se necesita largos periodos de tiempo
para llevar a cabo varios ensayos de
biorremediación, manipulando una variable a la
vez. Entre estas variables que afectan el
crecimiento de los microrganismos podemos
encontrar el pH del medio donde se inoculan, la
temperatura en la que se incuban para realizar el
ensayo, las revoluciones por minuto, la
concentración de soluto en el medio, la cantidad
de nutrientes inorgánicos presentes, entre otras.
Manipulando estas variables obtendríamos un
panorama mucho más amplio de los usos que se
le podría dar a estas bacterias en un ensayo de
biorremediación a grande escala.
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