MARCO TEÓRICO

¿QUÉ ES IN VITRO? In vitro (del latín, en vidrio) designa un experimento llevado a acabo fuera
del organismo, vegetal o animal, generalmente en un recipiente de vidrio cualquiera. En cambio,
in vivo significa un experimento en un organismo animal o vegetal vivo. Si inyectamos glucosa
radioactiva (marcada con carbono radioactivo) en la vena de una rata, y medimos la cantidad de
elemento radioactivo en los gases pulmonares y la orina animal, se tratará de un experimento
in vivo. Pero si cultivamos células musculares en una solución de glucosa radioactiva contenida
en un recipiente de vidrio, y procedemos al análisis para establecer el metabolismo del carbono
radioactivo, se tratará de un experimento in vitro.

ENZIMAS

Una de las características más distintivas de la célula activa es su habilidad para desarrollar
reacciones complejas rápidamente y a la temperatura ambiente. Fuera de la célula estas
reacciones se desarrollarían con demasiada lentitud. La compleja maquinaria metabólica
fundamental para la célula n podría trabajar a velocidades tan bajas. Los principales agentes que
participan en las notables transformaciones celulares pertenecen a un grupo de proteínas
denominadas enzimas.
Una enzima es una proteína, sintetizada por la célula viva, que cataliza, o acelera, una reacción
termodinámicamente posible. De esta manera, la velocidad de la reacción resulta compatible
con el proceso bioquímico esencial para el mantenimiento de la vida celular. La enzima no
modifica en forma alguna la constante de equilibrio o el ΔG de una reacción. Como son
proteínas, todos los agentes capaces de desnaturalizar a estos compuestos (como el calor, los
ácidos y las bases fuertes, los solventes orgánicos y otros materiales) hacen perder a las enzimas
sus propiedades catalíticas.

La elevada especificidad de la función catalítica de las enzimas se debe a su naturaleza proteica.

La extraordinariamente compleja estructura de las proteínas les confiere tanto los medios para
un mecanismo de reacción particular, como la capacidad de molde para identificar sólo a un
limitado grupo de sustratos. La célula puede elaborar enzimas para diferentes funciones debido
a que, en realidad, la estructura primaria dictamina la estructura compleja final (estructura
terciaria). Por ejemplo, una proteína de 500 residuos aminoácidos puede ordenaros en tal forma
que constituya una seroalbúmina, o bien 10499 proteína limitado de ellas que estén muy
relacionadas entre sí. Debido a esta especificidad, se necesitan literalmente miles de ellas. Por
ello el estudio de la química y la regulación enzimática resulta un requisito previo esencial para
comprender el mecanismo de crecimiento celular, reproducción celular.

Sus propiedades de las enzimas son las siguientes:

 EFECTO DE LA CONCENTRACIÓN DE ENZIMA Y DE LA CONCENTRACIÓN DE SUSTRATO:

Como sucede con todos los catalizadores, la velocidad de una reacción catalizada
enzimáticamente depende en la forma directa de la concentración de la enzima. Un
aumento de sustrato, manteniendo fija la concentración de la enzima produce al
principio un incremento considerable en la velocidad de la reacción. Sin embargo a
medida que se va aumentando la concentración del sustrato, la aceleración de la
velocidad de la reacción empieza a decrecer, hasta que finalmente, cuando la
concentración del sustrato es elevada, no se observa cambio en la velocidad.
 EFECTO DE LA TEMPERATURA: La temperatura afecta a las reacciones químicas. Las
reacciones enzimáticas no son una excepción y, por lo tanto, son sensibles a los cambios
de temperatura. Sin embargo, debido a la naturaleza proteica de las enzimas, la
desnaturalización térmica de éstas, causada por la elevación de la temperatura, hará
que disminuya su concentración efectiva y por lo tanto la velocidad de la reacción. Hasta
quizás unos 45°C, el efecto predominante corresponderá a un incremento en la
velocidad de reacción (como predice la teoría cinética química).
 EFECTO DEL PH: Precisamente por ser proteínas, los cambios en el pH afectan de
manera notable el carácter iónico de los grupos amino y carboxílico de las enzimas, lo
que a sus vez modifica marcadamente el sitio catalítico y en general, su conformación.
Los valores bajos o altos del pH, además de producir efectos puramente iónicos, pueden
determinar una desnaturalización considerable que también conduce a la inactivación
enzimática.

 ESPECIFICIDAD: Como ya se ha mencionado, la especificidad del sustrato es una

característica importante de las enzimas. Estas pueden seleccionar para su ataque sólo
a un número limitado de compuestos. Ello se debe a la conformación de la molécula
compleja de la proteína, a las características tan especiales del sitio activo y a la
configuración estructural de la molécula de sustrato.
Por la general las enzimas exhiben una especificad de grupo. Es decir, que un grupo
general de compuestos puede servir como sustratos.
PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

a) Materiales, medios de cultivo y equipos

MATERIALES: EQUIPOS:
 Tubos de ensayo
 Mortero con pistilo REACTIVOS:
 Frascos gotero  Biuret
 Pipeta  Solución de Lugol
 Agitador  Agua Oxigenada
 Solución de almidón al 1%
MATERIALES BIOLOGICO:
 Hígado
 Papa
 Jamón
 Saliva
 Almidón 10%
 Semillas de papaya (10 a 15)

b) Metodología

El desarrollo de dicho experimento se llevó acabo en 3 fases (A, B y C), cada fase consta
de su respectivo procedimiento y empleo de materiales. En la Fase A se utilizó una
solución de almidón al 1% conjunto con Lugol, además de saliva para su posterior
análisis y observación.

En la Fase B se trabajó con semillas de papaya (aproximadamente 10) moler y decantar

con un poco de agua, también se utilizó jamón decantado (molido con el mortero y
agua). Agregando aparte en un tubo de ensayo el jamón conjunto con unas 4 gotas de
Biuret y agua se notará la presencia de proteínas si este cambia de color (lilácea). Por
último en otro tubo de ensayo se colocó el líquido del jamón decantado y el líquido de
las semillas de papaya pero esta vez primero se dejó reposar por 25 minutos la solución
para después agregar 4 gotas de Lugol y compararlo con el tubo anterior.

Finalizando en la Fase C trabajamos con hígado (cocido y molido), agua oxigenada, papa
(cruda y cocida). Se hará pruebas en 3 tubos comparándolas y anotando las
observaciones que se presente

BIBLIOGRAFÍA:

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