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PREPARACIÓN MEDIOS DE CULTIVO

MÉTODOS DE SIEMBRA

ANGIE GABRIELA CORZO NAVARRO 1650975

ROSA MARÍA VILLAMIZAR PINTÓ 1651023

ANDRÉS FELIPE GONZÁLEZ NIÑO 1650933

GILBERTH SNEIDER CORONEL ARIAS 1650938

DOCENTE:

PAOLA ANDREA ROMÁN HERNÁNDEZ

GRUPO 3

UNIVERSIDAD FRANCISCO DE PAULA SANTANDER

FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS Y DEL AMBIENTE

INGENIERÍA AMBIENTAL

2017
Tabla de contenido
Introducción. ................................................................................................................................... 3

Preparación medios de cultivo ................................................................................................... 3

Métodos de siembra .................................................................................................................... 3

Objetivos ......................................................................................................................................... 4

Preparación medios de cultivo. ................................................................................................... 4

Métodos de siembra .................................................................................................................... 4

Fundamento teórico ........................................................................................................................ 5

Preparación medios de cultivo. ................................................................................................... 5

Métodos de siembra. ................................................................................................................. 11

Materiales. ..................................................................................................................................... 15

Preparación medios de cultivo. ................................................................................................. 15

Métodos de siembra. ................................................................................................................. 16

Procedimiento. .............................................................................................................................. 16

Preparación medios de cultivo ...................................................................................................... 16

Métodos de siembra .................................................................................................................. 19

LECTURA DE MICROORGANISMOS (24 HORAS DESPUÉS DE LA SIEMBRA) ............. 21

CUESTIONARIO. ........................................................................................................................ 25

Preparación medios de cultivo. ................................................................................................. 25

Métodos de siembra. ................................................................................................................. 29


Introducción.

Preparación medios de cultivo

Los microorganismos, son seres vivos dotados de individualidad para desarrollar las

funciones vitales como crecimiento, reproducción, alimentación y excreción; pero para ello

requieren de condiciones favorables para llevar a cabo todas estas funciones.

Con el fin de utilizar los diversos microorganismos para estudio en el laboratorio de

microbiología, es importante darle a éstos seres vivos las condiciones necesarias para ello.

Para esto se requieren los medios de cultivo.

Métodos de siembra

Para poder realizar una correcta identificación de microorganismos se requiere una

adecuada técnica de siembra y aislamiento de éstos en los medios de cultivo. Se hace

necesario que el personal que se encuentre en el laboratorio de microbiología tenga una

técnica adecuada de siembra en condiciones asépticas adecuadas.


Objetivos

Preparación medios de cultivo.

 Prepara diferentes medios de cultivo, siguiendo correctamente la técnica para que el

medio sea de óptima calidad.

 Conocer la clasificación de los medios de cultivos utilizados en microbiología.

 Conocer el fundamento de cada uno de los medios preparados en clase.

 Aprender a conservar adecuadamente los diferentes medios de cultivo.

 Dar a conocer la importancia y fundamentos de los medios de cultivo como material

indispensable a utilizar en el laboratorio de microbiología.

Métodos de siembra

 Conocer los métodos adecuados de siembra y aislamiento de microorganismos ya

sea en cajas de Petri o en tubos de agar o medios de cultivo líquidos.

 Practicar las diferentes técnicas de siembra para el crecimiento de cultivos

microbianos
Fundamento teórico
Preparación medios de cultivo.

Un medio de cultivo consiste en un gel o una solución que cuenta con los nutrientes

necesarios para permitir (bajo condiciones favorables de pH y temperatura) el crecimiento

de virus, microorganismos (bacterias, hongos y protozoos), células, tejidos vegetales o

incluso plantas.

Según lo que se quiera hacer crecer, el medio requerirá unas u otras condiciones.

Generalmente se presentan deshidratados en forma de polvo fino o granular antes de ser

preparados, al prepararse podemos encontrarlos en estado sólido, semisólido y líquido.

Una vez que el medio haya sido preparado, puede ser inoculado (es decir se le añaden

microorganismos) y a continuación incubado en condiciones que favorezcan el crecimiento

microbiano.

El crecimiento de los microorganismos es el cultivo y un cultivo axénico o puro contiene un

único tipo de microorganismo.

COMPOSICIÓN

Los medios de cultivo deben contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y

deben estar exentos de cualquier microorganismo contaminante.


Los medios de cultivo contienen como mínimo: carbono, nitrógeno, azufre, fósforo y sales

inorgánicas. En muchos casos serán necesarias ciertas vitaminas y otras sustancias

inductoras del crecimiento. También se añaden colorantes que actúan como indicadores

para detecta, por ejemplo, la formación de ácido o como inhibidores del crecimiento de

unas bacterias y no de otras.

El agar es el principal agente solidificante utilizado en medios bacteriológicos. Se disuelve

completamente a 100°C y se solidifica al enfriarse a 40°C.

PROPIEDADES

Como todos los organismos vivos, los microorganismos requieren ciertos nutrientes básicos

y factores físicos para el mantenimiento de su vida, estas necesidades vari según el tipo de

microorganismo y es necesario conocerlas para cultivarlos en el laboratorio.

Las necesidades nutricionales básicas pueden suministrarse en el laboratorio, mediante el

uso de medios de cultivos artificiales, los cuales se encuentran disponibles en una gran

variedad y los cuales en general aportan a los microorganismos:

1. Una fuente de carbono. El carbono es un componente esencial y central para

conformar la estructura celular y permitir a la célula realizar todas sus funciones.

Según la fuente de carbono los microorganismos se encuentran en dos grupos

autótrofos y heterótrofos. Los organismos autótrofos pueden cultivarse en medios

que contengan únicamente compuesto inorgánicos (utilizan principalmente dióxido

de carbono como carbono inorgánico)


2. Una fuente de Nitrógeno elemento esencial para que la célula construya

macromoléculas como: proteínas y ácidos nucleicos. Algunos microorganismos usan

nitrógeno atmosférico, otros emplean sales de nitrato o de amonio como compuestos

inorgánicos, así como, otros requieren compuestos orgánicos que contengan

nitrógeno como los aminoácidos.

3. Elementos no metálicos iones o metálicos como el azufre y el fosforo. El azufre puede

encontrarse en proteínas, sulfatos como azufre elemental; mientras que el fosforo

puede encontrarse formado sales.

4. Elementos metálicos (Ca, Zn, Na, K, Cu, Mn, Mg, Fe) llamados también

micronutrientes oligoelementos o elementos traza. Encontrados e sales inorgánicas

adicionadas a los medios y los cuales son tomados en bajas concentraciones por los

microorganismos.

5. Vitaminas los microorganismos puede tomarlas del medio ya elaboradas o iniciar

procesos de síntesis de las mismas. Algunos microorganismos poseen una variedad

de vías para sintetizar vitaminas; mientras otros, sintetizan un número muy

limitado de ellas a partir de componentes del medio. Otros las requieren como

suministros.

6. Agua

7. Energía existen dos tipos bioenergéticos de microorganismos, los fototrofos y los

quimiotrofos, los fototrofos emplean la energía radiante (luz solar), como única

fuente de energía; y los quimiotrofos que, obtienen la energía por oxidación de

compuestos químicos orgánicos o inorgánicos.


Las necesidades físicas involucran factores, como: temperatura, pH y gases, los cuales se

encuentran en un rango óptimo específico para cada microorganismo; por lo tanto, su

variación puede acelerar o disminuir el crecimiento.

Medios de cultivo y clasificación.

Propiedades de los medios de cultivo

 Humedad indispensable para el crecimiento de microorganismos, su carencia

(desecación) puede llevar a la muerte del microorganismo.

 Fertilidad se refieren a los elementos o compuestos básicos que permiten el

crecimiento bacteriano.

 pH se refiere a los pH óptimos para el desarrollo bacteriano, indispensable para su

aislamiento; variaciones acidas o alcalinas, pueden inhibir su crecimiento.

 Transparencia permite la observación bacteriológica, evidenciar morfológica y

físicamente su crecimiento en medios de cultivo adecuado.

Los medios de cultivo se clasifican de acuerdo:

a. Consistencia:

 Líquidos: se denominan caldos de cultivo y no tienen agar en su formulación.

 Semisólidos: contienen 0,5% de agar. Se utilizan para estudiar la movilidad de las

bacterias (presencia o ausencia de flagelo).

 Solidos: contienen 1,5% a 2% de agar en su formulación. Estos medios inmovilizan

a las células, permitiéndoles crecer y formar masas aisladas visibles llamadas

colonias. Las colonias permiten al microbiólogo reconocer la pureza del cultivo. Las

placas que contengan más de un tipo de colonia no se consideran cultivo puro. Las
placas también se utilizan para la determinación de células viables (recuento de

placas).

b. Composición:

 Definidos y sintéticos: se conoce la composición exacta del medio. Los medios

mínimos son medios definidos que únicamente le proporcionan al microorganismo

los nutrientes necesarios para crecer, pero no para desarrollarse óptimamente. Un

ejemplo de éstos son los medios deshidratados que se consiguen en el comercio en

forma de polvo o granulado.

 Complejos o naturales: son aquellos empleados para el cultivo de microorganismos

que se encuentran en la naturaleza. No se conoce la composición exacta del medio.

Ejemplo: sangre, leche, extracto de levaduras o de carne.

c. Función:

 Medios selectivos: son aquellos que poseen uno o más componentes añadidos, los

cuales inhibirán o prevendrán el crecimiento de ciertos tipos de especies de bacterias

y/o promoverán el crecimiento de las especies deseadas. Se puede ajustar las

condiciones físicas de un medio de cultivo tales como el pH, la temperatura, para

hacerlo selectivo para los organismos de interés.

 Medios diferenciales: permiten al investigador distinguir entre diferentes tipos de

bacterias con base en algún a característica observable en su patrón de crecimiento

en el medio, ya sea por producción de algún pigmento o por cambios de color en el

medio debido a indicadores de pH, o por halos de degradación de algún componente

en el medio de cultivo.
 Medios de enriquecimiento: contiene algún componente que permite el crecimiento

de cierto tipo específico de bacteria, pero no contienen sustancias inhibidoras.

 Medios enriquecidos: se emplean para cultivar microorganismos que requieren un

gran número de factores de crecimiento. Generalmente contienen extractos

biológicos poco usuales como sangre, suero en polvo, extracto de cerebro de res,

yema de huevo, etc.

Preparación de los medios de cultivo.

1. Disolución del medio de cultivo deshidratado se debe emplear agua limpia, recién

destilada o desmineralizada y con pH lo más cercano posible al neutro. Los

recipientes a usar debe ser lo suficientemente grandes para que el medio sea agitado

con facilidad. Inicialmente se añade la mitad de agua y se agita suficientemente

para conseguir una suspensión homogénea; después, se incorpora la cantidad de

agua restante. Todo tipo de medio de cultivo es sensible al calentamiento, pero no

debe calentarse más de lo estrictamente necesario. Leer siempre la etiqueta del

envase, en caso de que no deba ser sometido a ulterior esterilización en autoclave, es

imprescindible prestar atención en su disolución completa, esto se confirma cuando

al agitar no se adhiere a la pared interna del recipiente ninguna partícula de agar o

de medio la solución fluye libremente.

2. Esterilización antes de su esterilización y después de su completa disolución se debe

repartir el medio en los recipientes definitivos o en los que se lleve a cabo el trabajo

de investigación, excepto si corresponde a cajas de Petri. La esterilización, si así lo

indica la etiqueta, se lleva a cabo en autoclave a 121°C/15 libras de presión/15 min.

Tras la esterilización y después de haber alcanzado el equilibrio de presiones. Y


para evitar la sobrecarga térmica de medio de cultivo, este debe sacarse enseguida

del autoclave y enfriar

3. Vertido en placa previamente, remover el medio de cultivo oscilando el recipiente en

sentido circular para entremezclarlo de manera uniforme; verter el medio a las

cajas de Petri a la temperatura de vertido, evitando la formación de humedad en la

tapa de la caja. Las burbujas de aire en la superficie de la placa se eliminan

abanicando brevemente con la llama no luminosa de un mechero de bunsen.

Recuerde que el proceso de servido de las cajas debe realizarse en un cuarto estéril o

en cámara de flujo laminar.

4. Tubos de agar inclinado (bisel o pico de flauta), y sin inclinación los tubos llenos de

medio de cultivo esterilizado, todavía líquido, se colocan en una posición inclinada

de tal forma que se forme una placa de aproximadamente 3 cm y una superficie

inclinada de iguales dimensiones (Agar inclinado, pico de flauta o bisel). En los casos

en los cuales se requiere el medio sin inclinar, estos deben dejarse solidificar en

posición vertical sobre una gradilla.

Métodos de siembra.

La técnica más usada probablemente en el laboratorio de microbiología es probablemente


la transferencia de microorganismos de un ambiente a otro con el propósito de cultivarlos.
Existen varios métodos para aislar las bacterias en cultivo puro con el fin de evaluar sus
características en estos medios.
Se entiende por cultivo puro una población de células las cuales todas proceden de una
misma célula. Existen gran variedad de técnicas por medio de las cuales las diferentes
especies en una muestra natural puede ser aislada den cultivo puro
Técnica de siembra en caja de Petri
En presencia del mechero se debe hacer la siembra del inoculo en la caja de Petri teniendo
en cuenta los cuidados pertinentes para evitar contaminación por microorganismos del
ambiente

Siembra en cajas de Petri por la técnica


Figura de agotamiento,
1. Siembra en caja deaislamiento
Petri o de estría cruzada.
Es un buen método para el aislamiento de colonias (obtención de colonias aisladas);

mediante esta técnica buscamos obtener colonias separadas a partir de un inoculo. Para su

realización:

1. se toma la caja de Petri e la palma de la mano y ligeramente inclinada; con la mano

contraria, se manipula el asa de argolla previamente esterilizada por flameado

directo a la llama y con ella se recoge el material de cultivo, para colocarlo en un

área periférica de la caja haciendo movimientos circulares para homogeneizar el

inoculo.

2. El asa debe ser nuevamente flameada y enfriada en un lateral del agar (procurando

no dañarlo); a continuación se realiza una estría partiendo de la primera y

arrastrando los microorganismos presentes en ella hacia el extremo contrario de la

superficie del agar. Se debe procurar que en cada sección de la caja las estrías

queden trazadas con mayor separación.

3. Repita el paso 2, por tres veces , recordado flamear y enfriar el asa cada vez que

culmine una estría y solo tocar con el asa la estría inmediatamente anterior, con el
objetivo de ir reduciéndola carga microbiana arrastrada por la argolla finalmente

se esteriliza el asa antes de descartarla.

Figura 2. Método de estría cruzada o agotamiento


Siembra para el recuento de colonias o siembra en rejilla:

Esta siembra se utiliza para recuento de colonias. Se hace una sola estría que cruce el

centro del agar. Luego se hacen estrías en ángulo recto con respecto a la estría inicial; se

voltea el agar en un ángulo de 90° y se hacen estrías hasta cubrir todo el agar.

Figura 3. Siembra en rejilla


Siembra por cuadrantes

El objetivo de esta técnica, es el de diluir el inoculo a medida que se realizan estrías en la

superficie del agar, para realizar la siembra, la caja se divide en cuatro cuadrantes, se

procede a esterilizar el asa en el mechero, se toma el inóculo y se inicia el rayado de la


superficie del agar, en cuatro cuadrantes consecutivos, las cajas así se sembradas, se

incuban a la temperatura adecuada de acuerdo a la bacteria.

Figura 4. Siembra por cuadrantes

Siembra en tubo:

La siembra de medios contenidos en tubos requiere mayor cuidado, puesto que un solo

organismo contaminante del aire puede superar en crecimiento al microorganismo de

interés, por lo tanto se debe tener mucha precaución.

 Siembra en tubos por estría simple: Se realiza en un tubo con medio solido inclinado y

deslizando el asa sobre la superficie expuesta del agar de manera que se marque

surcos o estrías.
 Siembra en tubos por picadura: Se designa con este nombre la siembra que se realiza con

asa recta en tubos con medios sólidos y semisólidos generalmente sin inclinar. Se realiza

introduciendo el asa cargada con el microorganismo al medio de cultivo por el centro de

la superficie y llegando con el extremo del asa al fondo del tubo.

 Siembra en tubo en medio liquido: Para transferir material a partir de un medio

liquido o solido a otro líquido, puede usarse el asa de punta redonda, o e algunos

casos, pipetas estériles o hisopos. Si se utiliza asa de punta redonda, se inocula el

microorganismo en medio líquido haciéndola rotar del mango de la misma.

Materiales.
Preparación medios de cultivo.
 Cajas de Petri
 Erlenmeyer
 Autoclave
 Agua destilada
 Medios de cultivo
 Tubos de ensayo
 Balanza
 Espátula
Figura 5. Materiales usados en la práctica
Métodos de siembra.

 Medios de cultivo en cajas de Petri


 Medios de cultivo en tubo
 Mecheros

Procedimiento.

Preparación medios de cultivo

a. Para la preparación de medios de cultivo, siga las instrucciones dadas por la etiqueta

en cada uno de los envases del medio respectivo.

32 g 1000 mL

X 96 mL

32 × 96
= 3,072𝑔
1000

b. Proceder a pesar la cantidad necesaria en la

balanza y agregarla en los Erlenmeyer

correspondientes.
Figura 6. Agar lisina- hierro
Figura 7. Cantidad de agar calculada.

c. Agregar agua desmineralizada.

Figura 8. 96 mL de agua destilada

d. Medirle el pH al medio líquido.


e. Para los medios sólidos, calentar en la estufa hasta que se disuelva el agar; dejar el

medio hasta que hierva y retirar del fuego.

Figura 9. Agar LIA en previo calentamiento Figura 10. Agar CITRATO en previo calentamiento

f. Tapar el Erlenmeyer con papel y


Figura 10. Agar EMB en previo calentamiento
cinta de enmascarar High pressure y marcar.
g. Llevarlos a la autoclave.

h. Sirva los medios según corresponda.

Figura 11. Medio LIA servido Figura 12. Medio CITRATO servido.

Métodos de siembra

El procedimiento de los métodos de siembra trabajados en el laboratorio fue estría,

cuadrante y agotamiento, en el caso de mi grupo número 3 trabajamos el método de estría

en el agar rosa de bengala con el microorganismo Geotrichum que es un hongo.

Primero esterilizamos el asa hasta que esté totalmente roja, y abrimos el microorganismo

cerca al mechero tomamos una muestra cerramos, e igualmente abrimos el agar cerca al

mechero y usamos la técnica de estría y cerramos, igualmente lo hicimos con 5 placas más,

usando el mismo método de estría, y esterilizando cada vez el asa. Y una placa diferente de

una bacteria Serratia spp usando el método de agotamiento.


Figura 13. Toma de muestra Figura 14. Siembra en el agar Figura 15. Finalización de siembra
del microorganismo rosa de bengala en rosa de bengala

Figura 16. Siembra de la bacteria Serratia spp


Metodos de siembra usado en la práctica y correspondiente a cada grupo

1. Agar de EMB E.coli Estría cruzada

2. Agar Mc Conkey Pseudomonas Serratia agotamiento

3. Rosa de bengala Geotrichum Estría

4. Manitol Staphylococcus Cuadrante


LECTURA DE MICROORGANISMOS (24 HORAS DESPUÉS DE LA
SIEMBRA)

EMB (e.coli)

Figura 17. Lectura de EMB Figura 18. Lectura de EMB Figura 19. Lectura de EMB

Figura 20. Lectura de EMB Figura 21. Lectura de EMB


MC CONKEY (pseudomonas)

Figura 22. Lectura de Mc conkey Figura 23. Lectura de Mc conkey

Figura 24. Lectura de Mc conkey Figura 25. Lectura de Mc conkey


ROSA DE BENGALA (Geotrichum)

Figura 26. Lectura de rosa de


bengala

Figura 27. Lectura de rosa de Figura 28. Lectura de rosa de


bengala bengala
MANITOL (sthapyloccocus)

Figura 29. Lectura de manitol Figura 30. Lectura de manitol Figura 31. Lectura de manitol

Figura 32. Lectura de manitol Figura 33. Lectura de manitol


AGAR NUTRITIVO (serratia spp)

Figura 34. Lectura de agar Figura 35. Lectura de agar Figura 36. Lectura de agar
nutritivo nutritivo nutritivo

CUESTIONARIO.

Preparación medios de cultivo.

1. Elabore un cuadro que comprenda las siguientes característica para cada uno de los

medios que va a trabajar (Mac Conkey, Agar Nutritivo):

 Medio

 Composición (incluyendo inhibidores e indicadores)

 Aporte nutricional

 Microorganismo que comúnmente se siembran

R//:
Nombre Mac Conkey Agar nutritivo Agar Sangre EMB TSI IMViC Urea

Es un medio selectivo Es un medio de Medio para Medio de Medio de cultivo. Es una prueba Medio utilizado para
diferencial utilizado cultivo usado propósitos cultivo usado para Gracias a su utilizada en biología diferenciar
para el aislamiento y normalmente como generales, para el el aislamiento y composición es uno de para la identificación microorganismos en base
diferenciación de rutina para aislamiento y diferenciación los medios de bacterias. Se compone a la actividad ureásica.
bacilos Gram todo tipo de bacteri cultivo de de E.coli, tiene un cultivo más empleados de cuatro Se utiliza para identificar
negativo a. Es muy útil numerosos aspecto purpúreo, para la diferenciación pruebas, Rojo de bacterias que hidrolizan
fermentadores y no porque permanece microorganismos. aunque naranja de entero-bacterias metilo, Citrato. El urea, tales como Proteus
fermentado- sólido incluso a tras su resultado de este test spp., otras
Res de lactosa. Se relativamente altas esterilización, es se expresa mediante enterobacterias y
Medio utiliza con frecuencia temperaturas. semisólido, y está símbolos de positivo o estafilococos.
para el aislamiento Además, el destinado al negativo (+ o -) según
de coli-formes crecimiento cultivo en placa el resultado de cada
bacteriano en prueba, siguiendo
este agar lo hace en siempre el orden
la superficie, establecido por las
porque se iniciales del método.
distinguen mejor
las colonias pequeñ
as
Digerido pancreático 0,5% de peptona; 5% Peptona 10g Peptona 159 g Polipeptona Tripteina
de gelatina 17,0 g de sangre ovina, Lactosa 10g Extracto 7,0 g 1.0 g
Digerido pancreático 0,3% de extracto también puede 3 Glucosa
Fosfato de
9.9g Glucosa
de caseína 1,5 g de carne/extracto usarse sangre 2g levadura 1.0 g
Digerido péptico de de levadura; humana, para dipotásico 5,0 g Cloruro de sodio
tejido animal 1,5 g cultivos en Eosina 0,40g Extracto Fosfato dipotásico 5.0 g
3g
Lactosa 10,0 g una placa de Agar de carne 5,0 g Fosfato monopotasico
1,5% de agar; Azul de
0,065g Sacarosa 10 g
Mezcla de sales metileno 2.0 g
Composición biliares 1,5 g 0,5% de cloruro de Agar 15g Sulfato de 0,20 Rojo de fenol
Cloruro de sodio sodio; hierro g 0.012 g
5,0 g Cloruro Agar
Agar 13,5 g agua destilada; 5g 15.0 g
sódico
Rojo neutro 30,0 mg
Tiosulfato 0,30
Cristal violeta pH casi neutro (6,8) de sodio g
1,0 mg a 25 °C.
Agua destilada 0,024
Rojo fenol
1.000 mL g
Su uso está El agregado de Es nutritivo por la Fermentación de En el medio de cultivo, la
descripto en sangre al medio de presencia de glucosa, lactosa, tripteína y la glucosa,
muchos cultivo, en peptona que sacarosa y a la aportan los nutrientes
procedimientos concentración final favorece el producción de ácido para el desarrollo de
para el análisis de de 5-10 %, aporta desarrollo sulfhídrico. microorganismos
alimentos, aguas y nutrientes para el microbiano. La
Aporte otros materiales de crecimiento diferenciación
nutricional importancia bacteriano, y entre organismos
sanitaria permite detectar capaces de utilizar
hemólisis la lactosa y/o
sacarosa, y
aquellos que son
incapaces de
hacerlo,
se utiliza para el Medio usado para Permite el Bacilos Gram Proteus spp.,
aislamiento de el cultivo de crecimiento de negativos de Otras enterobacterias y
bacilos Gram microorganismos microorganismos rápido desarrollo estafilococos.
negativos de fácil poco exigentes en nutricionalmente y escasas
desarrollo, aerobios sus requerimientos exigentes y la clara exigencias
y anaerobios nutricionales. No visualización de nutricionales.
Microorganismo facultativos contiene reacciones de Permite el
que comúnmente inhibidores del hemolisis. desarrollo de
se siembra desarrollo todas las especies
bacteriano. La de la familia
pluripeptona es la Enterobacteriacea
fuente de carbono y e.
nitrógeno para el
desarrollo
bacteriano.
2. ¿Qué medios de cultivo utilizan normalmente para el cultivo de las bacterias de interés?.

R//: no de los sistemas más importantes para la identificación de microorganismos es

observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio.

El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el

crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Se han preparado más de 10.000 medios

de cultivo diferentes.

Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir

una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presión de oxígeno

adecuado, así como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe

contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo

microorganismo contaminante.

La mayoría de las bacterias patógenas requieren nutrientes complejos similares en

composición a los líquidos orgánicos del cuerpo humano. Por eso, la base de muchos

medios de cultivo es una infusión de extractos de carne y Peptona a la que se añadirán

otros ingredientes.

Tipos básicos de medios de cultivo

Atendiendo a su estado físico:

 Líquidos
 Semisólidos
 Sólidos

Atendiendo a su utilidad práctica:


Medios para aislamientos primarios:

Para usos generales: no selectivos, para cultivo de una amplia variedad de

organismos difíciles de hacer crecer. A menudo están enriquecidos con materiales

como: sangre, suero, Hemoglobina, FX, FV, glutamina, u otros factores accesorios

para el crecimiento de las bacterias (Agar Sangre, Schaeadler, etc)

 Selectivos: (pueden ser de moderada o de alta selectividad) se añaden

sustancias que inhiban el crecimiento de ciertos grupos de bacterias,

permitiendo a la vez el crecimiento de otras. Variando las sustancia

añadidas, se varía el tipo y grado de selectividad (Mac Conkey, Kanamicina-

Vancomicina)

 Enriquecidos: ralentizan/suprimen el crecimiento de la flora competitiva

normal potenciando el cultivo y crecimiento deseado (Selenito, medio con

Vitamina K).Para aislamientos especializados: formulaciones nutritivas

especiales que satisfacen requerimientos de grupos específicos de bacterias,

ayudando a su identificación (Lowenstein).

Medios para identificación:

 Diferenciales: formulaciones especiales en las que se estudian las

peculiaridades fisiológicas (nutrición y respiración sobre todo) específicas de

las bacterias. Seleccionando los medios adecuados se puede llegar a la

identificación de casi cualquier bacteria (Oxidación-Fermentación)

Métodos de siembra.
1. ¿Qué es un cultivo puro y que es un cultivo mixto?

R//: Cultivos puros: son aquellos que contienen un solo tipo de microorganismo. El modo de

obtener estos cultivos consiste en obtener colonias aisladas.

El cultivo mixto consiste en plantar distintas variedades en estrecha vecindad, basándose

en el antiguo concepto de “plantas compañeras”. El cultivo mixto permite que las

cualidades naturales de las diferentes especies se complementen.

2. ¿Qué ocurrió con el agar antes de hacer la inoculación y como se tornó éste después de

cumplido el periodo de incubación?

R//: Antes del proceso de incubación en el agar, una vez sembrado el microorganismo solo

se observaba el color del agar utilizado y una ligera línea donde se había pasado el asa con

la técnica usada para la siembra del microorganismo, después de la incubación esa línea

trasparente se formó de un color diferente para cada microorganismos sembrado, y se

volvió más gruesa, dependiendo del microorganismo cambio su textura, forma y color, en

unas se observaba verdoso brillante, en otras rosado, en otros un color blanco, en algunas

placas se sintió un fuerte olor al tomar la lectura.

3. ¿Cómo se comportaron las bacterias en el caso de los tubos de agar?

R//: En nuestro caso nos correspondieron e.coli y pseudomonas.

Lectura: En nuestro caso el comportamiento para las siembras en los tubos de ensayo fue

negativo, se podria decir que fue por un mal procedimiento en el momento de hacer la

siembra del microorganismo, ya que no pudimos presenciar ninguna variacion en el color

de las muestras.
Figura 36. Tubos en donde se
realizó nuestras muestras

TSI
Por fermentación de azúcares, se
producen ácidos, que se detectan
por medio del indicador rojo de
fenol, el cual vira al color
amarillo en medio ácido. El
tiosulfato de sodio se reduce a
sulfuro de hidrógeno el que
reacciona luego con una sal de
hierro proporcionando el típico
sulfuro de hierro de color negro.
LIA
Es un medio que sirve para demostrar
la producción de dos enzimas: la lisina
descarboxilasa y la lisina desaminasa,
además la presencia de sales de hierro
sirve para detectar la producción de
H2S por algunos microorganismos

CITRATO
El desarrollo de un color
azul intenso en 24-48
horas indica una prueba
positiva y revela que el
microorganismo en estudio
ha sido capaz de utilizar el
citrato en el medio con la
formación de productos
alcalinos. La prueba
también es positiva en
ausencia de color azul si
existe crecimiento del
microorganismo a lo largo
de la estría de inoculación.

SIM
Luego de la incubación,
se le agrego 3-5 gotas de
reactivo de Kovac´s o de
Erlich.
4. ¿Qué errores siente Ud. que cometió su grupo o usted en el momento de hacer los

procedimientos?

R//: El error que creo haber cometido en el momento de la siembra fue en la manera en

como use el método de siembra de estría ya que no me quedo muy bien en el agar, aunque

el microorganismo si creció.

5. ¿Qué puede hacer para corregirlos?

R//: Para corregir estos errores se debe tener mayor precaución con los agentes que pueden

contaminar nuestras muestras, en el momento de hacer la siembra se debe tener un total

cuidado y hacer los procedimiento conforme están estipulados para así poder tener unos

resultados favorables posteriormente

6. ¿Qué es oxidasa y catalasa?

R//:

 La catalasa es una enzima perteneciente a la categoría de

las oxidorreductasas que cataliza la descomposición del peróxido de

hidrógeno (H202) en oxígeno y agua.2 Esta enzima utiliza como cofactor al

grupo hemo y al manganeso.2El peróxido de hidrógeno es un residuo

del metabolismo celular de muchos organismos vivos y tiene entre otras una función

protectora contra microorganismos patógenos, principalmente anaerobios, pero

dada su toxicidad debe transformarse rápidamente en compuestos menos peligrosos.

Esta función la efectúa esta enzima que cataliza su descomposición en agua y

oxígeno. Además la catalasa se usa en la industria textil para la eliminación del


peróxido de hidrógeno, así como en menor medida se emplea en la limpieza de lentes

de contacto que se han esterilizado en una solución de peróxido de hidrógeno.

 Una oxidasa es una enzima que cataliza una reacción de oxidación/reducción

empleando oxígeno molecular (O2) como aceptor de electrones. En estas reacciones

el oxígeno se reduce a agua (H2O) o a peróxido de hidrógeno (H2O2). Las oxidasas

son una subclase de las oxidorreductasas.

En microbiología la prueba de la oxidasa se utiliza como una característica fenotípica en la

identificación de cepas bacterianas pues determina si la bacteria produce citocromo

oxidasa (y por lo tanto utiliza oxígeno en la cadena de transporte de electrones). Las

bacterias que deben utilizar oxígeno se denominan aerobias, y las que pueden utilizar

oxígeno pero también otros compuestos se denominan anaerobias facultativas.

La prueba de la oxidasa se usa sobre todo para

 Identificar todas las especies de Neisseria (+)

 Diferenciar Pseudomonas de los miembros oxidasa negativos de las enterobacterias.

El reactivo de la oxidasa más recomendado es la solución acuosa al 1% de diclorhidrato de

tetrametil-p-fenilendiamina. Es menos tóxico y mucho más sensible que el correspondiente

compuesto dimetilo (reactivo de Gordon y McLeod), pero es más caro. Este reactivo tiñe las

colonias oxidasa positivas de color lavanda que vira gradualmente a púrpura-negruzco

intenso.
CONCLUSIONES:

 En la partes de método de siembra por tubos, podemos concluir que se debe tener

un gran cuidado en el momento de hacer la siembra ya que de no ser así no se

tendrá un buen resultado.

 Es necesario tener en cuenta todas las indicaciones de manejo y empleo del método

que se llevara a cabo para una siembra exitosa.


BIBLIOGRAFIA:

 https://www.academia.edu/11620994/T%C3%A9cnicas_de_siembra

 http://microbiologia3bequipo5.blogspot.com.co/2014/10/tecnicas-y-

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 https://es.slideshare.net/rebecaoloarte/tecnicas-de-siembra-de-

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 http://gsdl.bvs.sld.cu/cgi-bin/library?e=d-00000-00---off-0preclini--00-0--

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