Karakterisasi Bakteri pada Air WC Menggunakan Media Selektif

Salmonella Shigella Agar (SSA) dan Eosin Methylene Blue Agar (EMBA)

Pendidikan Biologi Unggulan 2017

Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam
Universitas Negeri Surabaya

Abstrak
Dalam kehidupan manusia sehari-hari sangat erat kaitannya dengan kehidupan
mikroorganisme. Mikroorganisme dapat ditemukan dalam tubuh makhluk hidup
dan lingkungan bebas. Dalam sistem pencernaan manusia diketahui dalam
prosesnya dibantu oleh mikroorganisme. Oleh sebab itu, ketika sisa metabolisme
manusia yang berupa feses dikeluarkan dari dalam tubuh banyak mikroorganisme
yang ikut keluar. Air WC (Water Closet) menjadi salah satu tempat yang
menyimpan banyak bakteri. Tujuan dari penelitian ini untuk mendeteksi
keberadaan bakteri dari sampel air WC menggunakan media selektif Salmonella
Shigella Agar (SSA) dan Eosin Methylene Blue Agar (EMBA). Identifikasi
bakteri dilakukan di Laboratorium Mikrobiologi, Jurusan Biologi, Fakultas
Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam (MIPA), Universitas Negeri Surabaya,
pada bulan Oktober sampai November 2018. Berdasarkan hasil deteksi dan
identifikasi ditemukan bakteri anggota Enterobactericeae pada sampel air WC,
yang meliputi tiga genus bakteri, yaitu anggota genus Escherichia, Salmonella,
dan Shigella.

Kata Kunci: Air WC, Bakteri, Enterobacteriaceae

PENGANTAR beberapa penyakit seperti diare,

Air WC (Water Closet) atau
air kamar mandi merupakan air yang
berada di bagian closet. Dalam Air
WC tersebut akan didapati banyak
bakteri yang hidup, yang berasal dari
tubuh manusia. Bakteri tersebut
masuk kedalam tubuh manusia
melaui makanan atau bakteri
pembantu dalam proses pencernaan
makanan.
Air WC dipilih sebagai
sampel pada penelitian ini karena
dalam kehidupan sehari-hari banyak
masyarakat yang kurang menjaga
kebersihan WC. Kurangnya
kesadaran dalam menjaga kebersihan
ini pada akhirnya akan menimbulkan
typus, dan penyakit lain. Selain itu
air WC juga berhubungan langsung
dengan kehidupan sehari-hari. Oleh
karena itu Air WC digunakan sebagai
sampel penelitian ini. Kontaminasi
yang terjadi pada makanan dan
minuman yang dimakan oeh manusia
dapat menyebabkan berubah dan
bertambahnya bakteri pada air
tersebut. Bakteri yang sering
didapatkan pada air WC kebanyakan
merupakan bakteri anaerob yang
merupakan bakteri patogen penyebab
penyakit. Makanan konsumsi bahan
pangan yang tercemar oleh
mikroorganisme patogen yang dapat
menyebabkan infeksi ataupun
intoksifikasi. Infeksi makanan adalah
masuknya bakteri kedalam tubuh
melalui makanan yang
terkontaminasi, sedangkan
intoksifikasi makanan adalah adanya
toksin bakteri yang terbentuk
didalam makanan pada bakteri
bermultifikasi dan tubuh
memberikan reaksi terhadap bakteri
tersebut yang kemudian akan
dikeuarkan bersamaan dengan
keluarnya sisa pencernaan. Bakteri
tersebut dapat berupa bakteri
Escherecia coli, Shigella sp., dan
Salmonella sp.
Bakteri dapat ditumbuhkan
dan dikembangkan pada suatu
substrat yang disebut media. Media
yang digunakan tersebut harus sesuai
susunannya dengan kebutuhan jenis-
jenis bakteri yang bersangkutan.
Media yang digunakan pada
pertumbuhan bakteri air WC adalah
media SSA dan EMBA. Media SSA
dan EMBA digunakan karena media
tersebut selektif dan pertumbuhan
bakteri. Media SSA dan EMBA
mengandung berbagai sumber yang
berfungsi untuk menunjang
kehidupan bakteri tersebut, yakni
sebagai sumber energi, bahan
mineral bagi mikroba, pemberi
vitamin E yang diperlukan oleh
mikroba, sebagai sumber nitrogen,
sumber karbohidrat, sumber karbon
organik, dan sebagai sumber energi
bagi mikroba. Akuades, sebagai
bahan pelarut untuk
menghomogenkan larutan.
Tujuan dilakukannya
penelitian ini pada pengisolasian,
enumerasi, pemurnian, karakterisasi,
uji katalase, uji motilitas dan uji
resistensi bakteri untuk memisahkan
bakteri tertentu dari lingkungannya
menggunakan media pada cawan
petri, menghitung jumlah koloni,
mengembangbiakan satu koloni
bakteri menggunakan media agar
miring pada tabung reaksi,
mengkarakterisasi suatu biakan
murni bakteri hasil isolasi,
membedakan antara bakteri yang
menghasilkan katalase dan tidak
menghasilkan katalase, mengetahui
bakteri motil atau non motil, dan
untuk menguji tingkat resistensi
suatu bakteri terhadap antibiotik
tertentu.
METODE KARAKTERISASI
Mengkarakterisasi suatu
biakan murni bakteri hasil isolasi
dilakukan dengan menentukan
morfologi sel, sifat – sifat
pengecatan, morfologi koloni, sifat
biokimiawi (fisiologi), patogenitas
dan serologi. Karakterisasi bakteri
yang terdapat pada air WC dengan
menggunakan media SSA
(Salmonella shigella Agar) dan
EMBA (Eosin Methylene Blue Agar)
dilakukan dengan menentukan sifat
morfologi koloni bakteri yang sudah
melalui proses pengenceran
kemudian ditanam dimedia SSA dan
EMBA pada cawan petri setelah itu
diinkubasi.
Karakteristik Koloni Bakteri
a. Karakteristik Optik (opaque,
translucent, transparent).
b. Karakteristik permukaan (halus
mengkilap,kasar, berkerut,
kering seperti bubuk).
c. Karakteristik pigmentasi HASIL PENELITIAN
(pigmentasi dan nonpigmentasi).
d. Karakteristik ukuran. Berdasarkan hasil pengamatan,
e. Karakteristik bentuk koloni bakteri anggota
(punctiform, circular, Enterobacteriaceae yang diisolasi
filamentous, irregular, rhizoid, dari sampel air WC yang
spindle). ditumbuhkan pada media selektif
f. Karakteristik elevasi (flat, diferensial yaitu Salmonella Shigella
raised, convex, pulvinate, Agar (SSA) dan Eosin Methylen
umbonate). Blue Agar (EMBA) dapat lihat pada
g. Karakteristik bentuk tepian Tabel 1 dan 2.
(entire, undulate, lobate, erose,
filamentous, curled).

Tabel 1. Hasil pengamatan morfologi koloni pada media SSA

Samp Kolo Gamb Krakte Kara Pigm Ukur Bentuk Eleva Bentu
el ni ar r- kter- entasi an si k
Ke- istik istik (Dia Tepia
Optik Perm meter n
ukaa )
n
Hitam 0.2 cm Punct Flat entire
10-1 B S1 Opaque Halus iform

Translu merah 0.3 cm Circu Raise entire

10-3 B S2 Halus muda lar d
cent
Translu merah 0.5 cm Circu Raise entire
10-3 B S3 Halus muda lar d
cent
merah 0.05 cm Punct Raise entire
10-3 B S4 Opaque Halus muda iform d

Translu Trans 0.5 cm irreg Flat Undul

10-3 B S5 Halus paran ular ate
cent
 Gambar 1. Morfologi koloni bakteri pada cawan petri media SSA

Tabel 2. Hasil pengamatan morfologi koloni pada media EMBA

Sam Ko Gam Krakte Karakter- Pigmentas Ukuran Bent Eleva Ben

pel lon bar r- istik i uk si tuk
i (Diameter Tep
Ke istik Permuka ) ian
- an
Optik

Hijau D1:0,5 cm Circ Con- Enti

Translu Halus ular vex re
10-2 JJ5 mengkilap D2:0,3 cm
cent mengkilap
D3:0,2 cm

Translu Halus Hijau 0.3 cm Circ Con- Enti

10-3 JJ1
cent mengkilap mengkilap ular vex re

Translu Halus Hijau D1:0,4 cm Circ Con- Enti

10-2 JJ6
cent mengkilap mengkilap D2:0,3 cm ular vex re

Translu Halus Hijau 0.4 cm Circ Flat Enti

10-2 JJ7
cent mengkilap mengkilap ular re

Hijau D1:0,3 cm Circ Con- Enti

Translu Halus mengkilap ular vex re
10-2 JJ4 D2:0,1 cm
cent mengkilap
.
D3:0,2 cm
Gambar 2. Morfologi koloni bakteri Escherichia coli pada cawan petri media
EMBA
Analisis ;
Hasil pengamatan morfologi koloni
sampel Salmonella sp.
1. Pada Sampel 10-1 B koloni ke-1
didapatkan karakteristik Optik
Opaque, Karakteristik Permukaan
halus, pigmentasi hitam, ukuran
(diameter) 0.2 cm, dengan bentuk
Punctiform, Elevasi flat, dan
Bentuk Tepian Entire.
-3
2. Pada Sampel 10 B koloni ke-2
didapatkan karakteristik Optik
Translucent, Karakteristik
Permukaan halus, pigmentasi
merah muda, ukuran (diameter)
0.3 cm, dengan bentuk Circular,
Elevasi raised, dan Bentuk Tepian
Entire.
3. Pada Sampel 10-3 B koloni ke-3
didapatkan karakteristik Optik
Translucent, Karakteristik
Permukaan halus, pigmentasi
merah muda, ukuran (diameter)
0.5 cm, dengan bentuk Circular,
Elevasi raised, dan Bentuk Tepian
Entire.
4. Pada Sampel 10-3 B koloni ke-4
didapatkan karakteristik Optik
Opaque, Karakteristik Permukaan
halus, pigmentasi merah muda,
ukuran (diameter) 0.05 cm,
dengan bentuk Punctiform,
Elevasi raised, dan Bentuk Tepian
Entire.
5. Pada Sampel 10-3 B koloni ke-5
didapatkan karakteristik Optik
Translucent, Karakteristik
Permukaan halus, pigmentasi
merah muda, ukuran (diameter)
0.5 cm, dengan bentuk Irregular,
Elevasi flat, dan Bentuk Tepian
Undulate.
Hasil pengamatan morfologi koloni
sampel Escherchia coli
1. Pada sampel 10-2 JJ5 diperoleh
karakteristik optik translucent,
karakteristik permukaan halus
mengkilap, pigmentasi hijau
mengkilap, ukuran diameter :
D1 : 0,5 cm D2 : 0,3 cm D3 : 0,2
cm dengan bentuk circular, elevasi
convex, dan bentuk tepian entire.
2. Pada sampel 10-3 JJ1 diperoleh
karakteristik optik translucent,
karakteristik permukaan halus
mengkilap, pigmentasi hijau
mengkilap, ukuran diameter 0,3
cm dengan bentuk circular, elevasi
convex, dan bentuk tepian entire.
3. Pada sampel 10-2 JJ6 diperoleh
karakteristik optik translucent,
karakteristik permukaan halus
mengkilap, pigmentasi hijau
mengkilap, ukuran diameter D1 :
0,4 cm D2 : 0,3 cm dengan bentuk
circular, elevasi convex, dan
bentuk tepian entire.
4. Pada sampel 10-2 JJ7 diperoleh
karakteristik optik translucent,
karakteristik permukaan halus
mengkilap, pigmentasi hijau
mengkilap, ukuran diameter 0,4
 cm dengan bentuk circular, elevasi
flat, dan bentuk tepian entire.
5. Pada sampel 10-2 JJ4 diperoleh
karakteristik optik translucent,
karakteristik permukaan halus
Pembahasan
Dari hasil pengamatan morfologi
koloni pada media SSA didapatkan
hasil pada tabel diatas. Identifikasi
bakteri dilakukan berdasarkan metode
Carter (1976). Biakan pada media SSA
(Salmonella Shigella Agar) yang telah
diinkubasi selama 24 jam dengan suhu
37ºC (Erina,dkk.2017). Identifikasi
morfologi koloni dilakukan setelah
isolat bakteri diinkubasi 24 jam
menggunakan metode pour plate pada
medium SSA untuk memudahkan
memperoleh koloni bakteri yang
terpisah-pisah, sehingga bakteri aerob
maupun anaerob dapat tumbuh.
Parameter yang diamati meliputi
bentuk, warna, dan ukuran koloni
(Ekowati dkk., 2011). Media SSA
mampu menghambat pertumbuhan
bakteri gram positif sehingga medium
ini bersifat selektif untuk bakteri gram
negatif khususnya Salmonella-Shigella
yang tumbuh dan berkembang biak
berdasarkan komposisinya. Koloni
Salmonella ditandai adanya black
center dibagian tengah berbentuk
bulat, memiliki bau yang khas,
cembung, pinggiran rata dan
mengkilap ini diduga sebagai bakteri
Salmonella sp. Hasil pengamatan ini
mengkilap, pigmentasi hijau
mengkilap, ukuran diameter D1 :
0,3 cm D2 : 0,1 cm D3 : 0,2 cm
dengan bentuk circular, elevasi
convex, dan bentuk tepian entire.
sesuai dengan Erina,dkk (2017) dalam
Budiarso (2009), yang menyatakan
bahwa pada medium Salmonella
Shigella Agar (SSA) koloni Salmonella
sp berwarna hitam karena mampu
menghasilkan H₂S. Adanya bakteri
yang berwarna merah muda atau
merah yaitu bakteri Gram negatif dan
berbentuk batang panjang, hal ini
merupakan ciri-ciri morfologi dari
bakteri Salmonella sp. Pernyataan
Erina,dkk (2017) dalam Firnanda dkk.,
(2013) bahwa Salmonella sp
merupakan bagian dari bakteri Gram
negatif yang berbentuk batang panjang
memiliki dinding sel yang
mengandung lipid, lemak, atau
substansi seperti lemak dengan
persentase yang lebih tinggi.
Menurut Widodo (2008),
karakteristik bakteri Salmonella pada
media SSA adalah tidak berwarna,
transparan, memiliki endapan hitam
jika memproduksi H2S. Salmonella-
Shigella Agar (SSA) adalah media
selektif yang digunakan untuk
memisahkan bakteri Salmonella dan
Shigella. Salmonella sp. adalah bakteri
penyebab penyakit salmonellosis yang
merupakan penyakit menular yang
dapat menyerang hewan maupun
manusia. Bakteri tersebut dapat
menimbulkan berbagai macam
manifestasi penyakit pada hewan dan
demam enterik, serta gastroenteritis
pada manusia. Salmonella sp. yang
terbawa melalui makanan ataupun
minuman akan memasuki saluran
pencernaan. Di lambung, bakteri ini
akan dimusnahkan oleh asam lambung
namun yang lolos akan masuk ke
lumen usus. Bakteri ini akan
melakukan penetrasi pada mukosa
usus dan tinggal secara intraseluler dan
akan berproliferasi. Ketika bakteri ini
mencapai epitel dan IgA tidak bisa
menanganinya, maka akan terjadi
degenerasi brush border. Selanjutnya,
di dalam sel bakteri akan dikelilingi
oleh inverted cytoplasmic membran
mirip dengan vakuola fagositik (Cita,
2011).
Escherichia coli membentuk
koloni yang bundar, cembung, dan
halus dengan tepi yang nyata berwarna
hijau metalik. Escherechia coli
merupakan salah satu anggota famili
Enterobacteriaceae yang menimbulkan
penyakit diare, karena strain dari
bakteri ini menghasilkan enterotoksin
yang mampu merusak mukosa usus
(Jiwanjaya, 2015). Berdasarkan hasil
percobaan yang dilakukan dapat
diperoleh hasil bahwa bakteri
Escherichia coli berbentuk circular
berwarna hijau metalik serta memiliki
diameter yang berkisar antara 0,1 - 0,5
cm dan karakteristik permukaan yang
halus mengkilap.
Di dalam uji analisis air, E. coli
merupakan mikroorganisme yang
dipakai sebagai indikator untuk
menguji adanya pencemaran air oleh
tinja. Di dalam kehidupan kita E.coli
mempunyai peranan yang cukup
penting yaitu selain sebagai penghuni
tubuh ( di dalam usus besar) E. coli
juga menghasilkan kolisin yang dapat
melindungi saluran pencernaan dari
bakteri patogenik. Escherichia coli
akan menjadi patogen bila pindah
dari habitatnya yang normal kebagian
lain dalam inang, misalnya, bila E.
coli di dalam usus masuk ke dalam
saluran kandung kemih kelamin dapat
menyebabkan sistitis, yaitu suatu
peradangan pada selaput lendir organ
tersebut.
Bakteri dari anggota genus
Escherichia tumbuh di media EMBA
memiliki koloni berwarna hijau
mengkilap dan bakteri anggota genus
Enterobacter yang tumbuh di media
SSA memiliki warna merah muda
sedangkan bakteri anggota genus
Shigella tidak berwarna. Hal ini sesuai
dengan pernyataan Matuwo (2012)
bahwa bakteri anggota spesies E. coli
yang tumbuh pada media EMBA akan
berwarna hijau metalik, hal ini
dikarenakan bahwa kemampuan yang
dimiliki oleh bakteri dalam
memfermentasikan Laktosa dan
Methilen blue, sedangkan bakteri
anggota spesies Enterobacter
aerogenes akan berwarna merah muda terbentuk bintik hitam di bagian
hingga tidak berwarna. Bakteri tengah koloni. Hal menunjukan bahwa
anggota genus lain yang memiliki warna koloni tersebut adalah bakteri
koloni transparan menunjukkan anggota genus Shigella dan
bahawa bakteri tersebut tidak mampu Salmonella.
memfermentasikan laktosa.
SIMPULAN
Hasil pengamatan uji bakteri
melalui media SSA menunjukan Berdasarkan hasil penelitian
bahwa koloni bakteri anggota genus yang telah dilakukan dapat
Salmonella memiliki warna transparan disimpulkan bahwa koloni bakteri
dengan bintik hitam di bagian tengah pada sampel air WC yang diuji dengan
dan bakteri anggota genus Shigella media Salmonella Shigella Agar (SSA)
memiliki warna merah muda. Hal ini, dan Eosin Methylene Blue Agar
sesuai dengan Tankeshiwar (2015) (EMBA) ditemukan tiga genus bakteri,
dalam Zahrotu (2016) dan Sulaeman yaitu anggota genus Escherichia,
(2015) bahwa bakteri yang diinokulasi Salmonella, dan Shigella. Pada media
pada media SSA bening tanpa bintik SSA terdapat bakteri Salmonella sp
hitam dan putih transparan merupakan dan Shigella sp. Salmonella sp dapat
koloni bakteri anggota genus Shigella diketahui dengan karakteristik
yang tidak dapat memfermentasikan berwarna merah muda dan terkadang
laktosa dan menghasilkan gas H2S, memiliki bintik hitam, sedangkan
koloni yang berwarna transparan Shigella sp.ditunjukkan dengan
bertitik hitam merupakan koloni karakterisasi pigmentasi berwarna
bakteri anggota genus Salmonella. transparan. Koloni bakteri Escherichia
Zahrotu (2016) menambahkan bahwa coli ditemukan pada media EMBA
warna koloni transparan pada media dengan karakteristik morfologi
SSA disebabkan karena bakteri tidak permukaan halus mengkilap,
mampu memfermentasi laktosa, pigmentasi hijau mengkilap, berbentuk
namun dapat memecah asam amino circular, translucent, dan karakteristik
yang mengandung sulfur, maka bentuk tepian entire.
 DAFTAR PUSTAKA

Cita YP. Bakteri Salmonella thypi dan Demam Tifoid. Jurnal Kesehatan
Masyarakat 2011; 10(1): 42- 46

Ekowati, C.N., Sumardi, dan Handayani, K. 2011. Panduan Praktikum

Mikrobiologi. Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas
Lampung. Lampung

Fardiaz. 1992. Mikrobiologi Pangan I. Jakarta: PT. Gramedia Pustaka Utama

Pelczar dan Chan. 2007. Analisis Mikroba pada Inokulasi . Edisi

Kelima.Erlangga: Jakarta

Matuwo, A, 2012, ‘Kualitas Mikrobiologis Daging Ayam Pada Pasar Modern Dan
Tradisional Di Makassar,’(Skripsi), Fakultas Peternakan; Teknologi Hasil
Ternak, Makassar (http://repository.unhas.ac.id/bitstrea
m/handle/123456789/1479/Skripsi.pd f). Diakses tanggal 11 November
2018

Muslim. 2011. http://pengujiankadarpengendalian.blogspot.com/. Diakses pada

tanggal 26 Oktober 2018 pukul 22 :42 WIB di Surabaya.

Sulaeman, LP, 2015, Deteksi Bakteri Escherichia Coli Dan Shigella Sp. Dalam
Telur Balado Serta Resistensinya Terhadap Beberapa Antibiotik, (Skripsi),
Program Studi Pendidikan Dokter, Fakultas Kedokteran Dan Ilmu
Kesehatan, Universitas Islam Negeri Syariff Hidayatullah Jakarta, Jakarta

Waluyo, 2004. Diktat Kuliah Mikrobiologi Dasar. Universitas Jenderal Sudirman

Zahrotu, R, 2016, ‘Identifikasi Bakteri Escherichia Coli Dan Salmonella Sp. Pada
Siomay Yang Dijuall Di Kantin Sd Negeri Di Kelurahan Pisangan, Cirendeu
Dan Cempaka Putih’, (Skripsi), Program Studi Kedokteran Dan Profesi
Dokter, Fakultas Kedokteran Dan Ilmu Kesehatan, Uin Syarif Hidayatullah
Jakarta