1.

Introducción

En su afán de llegan siempre más lejos en la investigación de la naturaleza de lo que

los límites de sus órganos sensoriales le imponen, el hombre ha construido múltiples
instrumentos que le han permitido acceder allí donde los sentidos no podían penetrar.
Así como el telescopio abrió a la humanidad las puertas de lo infinitamente grande,
el microscopio hizo posible conocer los mundos de dimensiones ínfimas, entre ellos la célula,
base de la vida. Se contaban así las bases de las modernas ciencias biológicas que hasta bien
entrada la edad moderna se habían fundado en las observaciones directas.
Los microscopios son aparatos que, en virtud de las leyes de formación de imágenes ópticas
aumentadas a través de lentes convergentes, permiten la observación de pequeños detalles de
una muestra dada que a simple vista no se percibirían.

2. El Microscopio

El microscopio compuesto es un instrumento óptico que se emplea para aumentar o ampliar

las imágenes de objetos y organismos no visibles a simple vista. El microscopio óptico común
está conformado por tres sistemas:

a. El sistema mecánico está constituido por una sene de piezas en las que van instaladas
las lentes que permiten el movimiento para el enfoque.

b. El sistema óptico comprende un conjunto de lentes dispuestas de tal manera que

produce el aumento de las imágenes que se observan a través de ellas

c. El sistema de iluminación comprende las partes del microscopio que reflejan,

transmiten y regulan la cantidad de luz necesaria para efectuar la observación a través
del microscopio.

En los siguientes puntos describiremos cada uno de los sistemas nombrados, a fin de tener
un conocimiento completo del microscopio.

3. La parte mecánica del Microscopio

La parte mecánica del microscopio comprende: el pie, el tubo, el revólver, el asa, la platina, el
carro, el tornillo macrométrico y el tornillo micrométrico. Estos elementos sostienen la
parte óptica y de iluminación, además permite los desplazamientos necesarios para el enfoque
del objeto.

 El pie. Constituye la base sobre la que se apoya el microscopio y tiene por lo general
forma de Y o bien es rectangular

 El tubo. Tiene forma cilíndrica y está ennegrecido internamente para evitar las
molestias que ocasionan los reflejos de la luz. En su extremidad superior se colocan los
oculares.

 El revólver. Es una pieza giratoria provista de orificios en los cuales se enroscan

los objetivos. Al girar el revólver, los objetivos pasan por el eje del tubo y se colocan en
posición de trabajo, la cual se nota por el ruido de un piñón que lo fija.

 La columna, llamada también asa o brazo, es una pieza colocada en la parte posterior
del aparato. Sostiene el tubo en su porción superior y por el extremo inferior se adapta
al pie.
  La platina. Es una pieza metálica plana en la que se coloca la preparación u objeto que
se va a observar. Presenta un orificio en el eje óptico del tubo que permite el paso de
los rayos luminosos a la preparación. La platina puede ser fija, en cuyo caso
permanece inmóvil; en otros casos puede ser giratoria, es decir, mediante tornillos
laterales puede centrarse o producir movimientos circulares.

 Carro. Es un dispositivo colocado sobre la platina que permite deslizar la preparación

con movimiento ortogonal de adelante hacia atrás y de derecha a izquierda.

 El tornillo macrométrico. Girando este tornillo, asciende o desciende el tubo del

microscopio, deslizándose en sentido vertical gracias a una cremallera. Estos
movimientos largos permiten el enfoque rápido de la preparación.

 El tornillo micrométrico. Mediante el movimiento casi imperceptible que produce al

deslizar el tubo o la platina, se logra el enfoque exacto y nitido de la preparación. Lleva
acoplado un tambor graduado en divisiones de 0,001 mm que se utiliza para precisar
sus movimientos y puede medir el espesor de los objetos.

4. Sistema Óptico

El sistema óptico es el encargado de reproducir y aumentar las imágenes mediante el conjunto

de lentes que lo componen. Está formado por los oculares y los objetivos.

 Los oculares. Los oculares están constituidos generalmente por dos lentes, dispuestas
sobre un tubo corto. Los oculares generalmente más utilizados son los de: 8X, 1OX,
12.5X, 15X. La X se utiliza para expresar en forma abreviada los aumentos.

 Los objetivos. Los objetivos producen aumento de las imágenes de los objetos y
organismos y, por tanto, se hallan cerca de la preparación que se examina. Los
objetivos utilizados corrientemente son de dos tipos: objetivos secos y objetivos de
inmersión.

o Los objetivos secos se utilizan sin necesidad de colocar sustancia alguna entre
ellos y la preparación. En la cara externa llevan una serie de índices que
indican el aumento que producen, la abertura numérica y otros datos. Asi por
ejemplo, si un objetivo tiene estos datos: plan40/0,65 y 160/0,17, significa que
el objetivo es planacromático, su aumento 40 y su abertura numérica 0,65,
calculada para una longitud de tubo de 160 mm. El número de objetivos varía
con el tipo de microscopio y el uso a que se destina. Los aumentos de los
objetivos secos más frecuentemente utilizados son: 6X, 1OX, 20X, 45X y 60X.

o El objetivo de inmersión está compuesto por un complicado sistema de lentes.

Para observar a través de este objetivo es necesario colocar una gota
de aceite de cedro entre el objetivo y la preparación, de manera que la lente
frontal entre en contacto con el aceite de cedro. Generalmente, estos
objetivos son de 1 OOX y se distingue por uno o dos círculos o anillos
de color negro que rodea su extremo inferior.

Los objetivos se disponen en una pieza giratoria denominada revólver.

5. Sistema de Iluminación
Este sistema tiene como finalidad dirigir la luz natural o artificial de tal manera que ilumine la
preparación u objeto que se va a observar en el microscopio. Comprende los siguientes
elementos:

 El espejo. Tiene dos caras: una cóncava y otra plana. Goza de movimientos en todas las
direcciones. La cara cóncava se emplea de preferencia con iluminación artificial, y la
plana, para iluminación natural (luz solar). Modernamente se prescinde del espejo en
la fabricación de microscopios, ya que éstos traen incorporada una lámpara colocada
en el eje del microscopio.

 Condensador. El condensador está formado por un sistema de lentes, cuya finalidad es

concentrar los rayos luminosos sobre el plano de la preparación. El condensador se
halla debajo de la platina. El condensador puede deslizarse sobre un sistema de
cremallera mediante un tornillo que determina su movimiento ascendente o
descendente.

 Diafragma. Generalmente, el condensador está provisto de un diafragma-iris, que

regula su abertura y controla la calidad de luz que debe pasar a través del
condensador.

Trayectoria del Rayo de Luz a través del Microscopio

El haz luminoso procedente de la lámpara pasa directamente a través del diafragma al
condensador. Gracias al sistema de lentes que posee el condensador, la luz es concentrada
sobre la preparación a observar. El haz de luz penetra en el objetivo y sigue por el tubo hasta
llegar el ocular, donde es captado por el ojo del observador.

Propiedades del Microscopio

 Poder separador. También llamado a veces poder de resolución, es una cualidad del
microscopio, y se define como la distancia mínima entre dos puntos próximos que
pueden verse separados. El ojo normal no puede ver separados dos puntos cuando su
distancia es menor a una décima de milímetro.

En el microscopio óptico, el poder separador máximo conseguido es de 0,2 décimas de micra, y

en el microscopio electrónico, el poder separador llega hasta 10 ángstrom.

 Poder de definición. Se refiere a la nitidez de las imágenes obtenidas, sobre todo

respecto a sus contornos. Esta propiedad depende de la calidad y de la corrección de
las aberraciones de las lentes utilizadas.

 Aumento del microscopio. En términos generales se define como la relación entre el

diámetro aparente de la imagen y el diámetro o longitud del objeto, o sea:

Aumento (A) = ————

objeto

Esto quiere decir que si el microscopio aumenta 100 diámetros un objeto, la imagen que
estamos viendo es 100 veces mayor que el tamaño real del objeto. Para calcular el aumento de
un microscopio, basta multiplicar el aumento del ocular por el aumento del objetivo. Por
ejemplo, si estamos utilizando un ocular de 10X y un objetivo de 45X, el aumento a que
estamos viendo la preparación será: 1OX x 45X = 450X, lo cual quiere decir que la imagen del
objeto está ampliada 450 veces.
6. Campo del Microscopio

Se denomina "campo del microscopio" al círculo visible que se observa a través del
microscopio. También podemos definirlo como la porción del plano visible observado a través
del microscopio.
Si el aumento es mayor, el campo disminuye, lo cual quiere decir que el campo es
inversamente proporcional al aumento del microscopio. Para medir el diámetro del campo del
microscopio con cualquiera de los objetivos se utiliza el micrómetro, al que se hará referencia
en el siguiente punto.

Tipos de Microscopios
Existen diversas clases de microscopios, según la naturaleza de los sistemas de luz, y otros
accesorios utilizados para obtener las imágenes.

 El microscopio compuesto u óptico utiliza lentes para ampliar las imágenes de los
objetos observados. El aumento obtenido con estos microscopios es reducido, debido
a la longitud de onda de la luz visible que impone limitaciones. El microscopio óptico
puede ser monocular, y consta de un solo tubo. La observación en estos casos se hace
con un solo ojo. Es binocular cuando posee dos tubos. La observación se hace con los
dos ojos. Esto presenta ventajas tales como mejor percepción de la imagen, más
cómoda la observación y se perciben con mayor nitidez los detalles.

 Microscopio estereoscópico. El microscopio estereoscópico hace posible la visión

tridimensional de los objetos. Consta de dos tubos oculares y dos objetivos pares para
cada aumento. Este microscopio ofrece ventajas para observaciones que requieren
pequeños aumentos. El óptimo de visión estereoscópica se encuentra entre 2 y 40X o
aumento total del microscopio.

 Microscopio de campo oscuro. Este microscopio está provisto de un condensador

paraboloide, que hace que los rayos luminosos no penetren directamente en el
objetivo, sino que iluminan oblicuamente la preparación. Los objetos aparecen como
puntos luminosos sobre un fondo oscuro.

 Microscopio de fluorescencia. La fluorescencia es la propiedad que tienen algunas

sustancias de emitir luz propia cuando inciden sobre ellas radiaciones energéticas. El
tratamiento del material biológico con flurocromos facilita la observación al
microscopio.

 Microscopio de contraste de fases. Se basa en las modificaciones de la trayectoria de

los rayos de luz, los cuales producen contrastes notables en la preparación.

Invención del Microscopio Electrónico

En 1932, Bruche y Johnsson construyen el primer microscopio electrónico a base de lentes
electrostáticas. Ese mismo año Knoll y Ruska dan a conocer los primeros resultados obtenidos
con un microscopio electrónico Siemens, construido con lentes magnéticas. Así nace el
microscopio electrónico. Para 1936 ya se ha perfeccionado y se fabrican microscopios
electrónicos que superan en resolución al microscopio óptico.
Estos logros no sólo representan un avance en el campo de la electrónica, sino también en el
campo de la Biología, pues son muchas las estructurasbiológicas que se han descubierto y que
revelan detalles inusitados, al observarlas al microscopio electrónico.

7. El Microscopio Electrónico
El microscopio electrónico utiliza un flujo de electrones en lugar de luz. Consta
fundamentalmente de un tubo de rayos catódicos, en el cual debe mantenerse el vació. El
cátodo está constituido por un filamento de tungsteno, que al calentarse eléctricamente emite
los electrones, los cuales son atraídos hacia el ánodo por una diferencia de potencial de 50.000
a 100.000 voltios. La lente del condensador enfoca este haz y lo dirige hacia el objeto que se
observa, cuya preparación exige técnicas especiales. Los electrones chocan contra la
preparación, sobre la cual se desvían de manera desigual.
Con el objetivo se enfoca la imagen, que es ampliada por la lente de proyección. Para variar los
aumentos en el microscopio electrónico basta variar la distancia focal de la lente proyectora.
Como los electrones no impresionan la retina del ojo humano, debe recogerse la imagen del
microscopio electrónico en una pantalla fluorescente, la cual posee una superficie impregnada
con fósforo o sulfuro de cinc. La imagen obtenida en esta pantalla puede fotografiarse.
Se acostumbra utilizar el término microfotografias para las fotografías tomadas a través del
microscopio óptico y micrografía o electromicrografia para las que se toman en el microscopio
electrónico.
Los aumentos máximos conseguidos en el microscopio electrónico son del orden de 2.000.000
(¡dos millones de aumento!) mediante el acoplamiento al microscopio electrónico de un
amplificador de imagen y una cámara de televisión. En resumen, el microscopio electrónico
consta esencialmente de:

a. Un filamento de tungsteno (cátodo) que emite electrones.

b. Condensador o lente electromagnética, que concentra el haz de electrones.

c. Objetivo o lente electromagnética, que amplía el cono de proyección del haz de luz.

d. Ocular o lente electromagnética, que aumenta la imagen.

e. Proyector o lente proyectora. que amplía la imagen.

f. cPantalla fluorescente, que recoge la imagen para hacerla visible al ojo humano.

Tipos de Microscopios Electrónicos

Existen varios tipos de microscopios electrónicos, que cada día se perfeccionan más.

 El microscopio electrónico de transmisión que utiliza un haz de electrones acelerados

por un alto voltaje (cien mil voltios). Este haz ilumina una sección muy fina de la
muestra, sean tejidos, células u otro material.

 El microscopio electrónico de barrido se utiliza para el estudio de la morfología y

la topografía de los elementos. Estos instrumentos utilizan voltajes cercanos a los
20.000 voltios. Las lentes magnéticas utilizan un haz muy fino de electrones para
penetrar repetidamente la muestra, y se produce una imagen ampliada de la
superficie observada en la pantalla de un monitor.

 El microscopio electrónico mixto tiene propiedades comunes con el de transmisión y

con el de barrido y resulta muy útil para ciertas investigaciones. Hay otros
microscopios analíticos que detectan señales características de los elementos que
constituyen la muestra.

Con estos poderosos instrumentos, que utilizan el flujo de electrones y las radiaciones
electromagnéticas así como la aplicación de técnicas histoquímicas y bioquímicas, además
del empleo de marcadores radiactivos, se han logrado grandes avances en la biología celular.
Medición a través del Microscopio
Muchas veces interesa al observador conocer el tamaño real de los objetos o microorganismos
que está observando a través del microscopio. Para estas mediciones pueden utilizarse
varios métodos.

 Método de los micrómetros. Se utiliza para esto un micrómetro de platina o de

objetivo, que consiste en un portaobjetos en cuyo centro se halla una escala graduada
(de 2 mm de longitud), con separaciones, entre cada división, de una centésima de
milímetro.

Además se utiliza un micrómetro ocular que lleva una escala graduada en décimas de
milímetros. Se coloca el micrómetro objetivo sobre la platina y se enfoca el microscopio hasta
que las líneas de la escala graduada aparezcan nítidas. Luego se hace superponer la escala del
ocular y se toma como referencia las primeras divisiones en que una línea del micrómetro
objetivo y una línea del micrómetro ocular coincidan o se superpongan exactamente.
Luego, por simple regla de tres, se calcula el valor en mieras de cada división ocular. Veamos
un ejemplo. Si 9 divisiones del micrómetro objetivo (0,09mm) equivalen a 30 divisiones del
micrómetro ocular, cada división del ocular equivaldrá a:
0,09 = 0,003 mm = 3 micras
30
Quiere decir que para el objetivo cali-brado y el ocular utilizado, cada división del micrómetro
ocular equivale a 3 micras. Una vez obtenido este dato para cada objetivo en la forma que
hemos expuesto, teniendo el microscopio ocular podrían hacerse todas las mediciones que se
deseen. Para medir, por ejemplo, un Paramecium de una preparación, procedemos así:
haremos coincidir los extremos del microorganismo con las divisiones del micrómetro ocular.
Si la longitud del organismo es de 75 divisiones del micrómetro ocular, y cada división equivale
a 3 mieras, la longitud del Paramecium será 75x3= 225 mieras. También se pueden efectuar
mediciones en el microscopio con cámara clara y utilizando una regla. En realidad, estas
medidas no son tan exactas como cuando se utilizan micrómetros por errores que se
introducen superponiendo imágenes.

8. Mantenimiento del Microscopio

 El microscopio debe estar protegido del polvo, humedad y otros agentes que pudieran
dañarlo. Mientras no esté en uso debe guardarse en un estuche o gabinete, o bien
cubrirlo con una bolsa plástica o campana de vidrio.

 Las partes mecánicas deben limpiarse con un paño suave; en algunos casos, éste se
puede humedecer con xilol para disolver ciertas manchas de grasa, aceite de cedro,
parafina, etc. Que hayan caído sobre las citadas partes.

 La limpieza de las partes ópticas requiere precauciones especiales. Para ello debe
emplearse papel "limpiante" que expiden las casas distribuidoras de material
de laboratorio. Nunca deben tocarse las lentes del ocular, objetivo y condensador con
los dedos; las huellas digitales perjudican la visibilidad, y cuando se secan resulta
trabajoso eliminarlas.

Para una buena limpieza de las lentes puede humedecerse el papel "limpiante" con éter y
luego pasarlo por la superficie cuantas veces sea necesario. El aceite de cedro que queda sobre
la lente frontal del objetivo de inmersión debe quitarse inmediatamente después de finalizada
la observación. Para ello se puede pasar el papel "limpialentes" impregnado con una gota de
xilol.
Para guardarlo se acostumbra colocar el objetivo de menor aumento sobre la platina y bajado
hasta el tope; el condensador debe estar en su posición más baja, para evitar que tropiece con
alguno de los objetivos. Guárdese en lugares secos, para evitar que la humedad favorezca la
formación de hongos. Ciertos ácidos y otras sustancias químicas que producen emanaciones
fuertes, deben mantenerse alejados del microscopio.

9. Conclusiones

El Microscopio es: cualquiera de los distintos tipos de instrumentos que se utilizan para
obtener una imagen aumentada de objetos minúsculos o detalles muy pequeños de los
mismos.
El microscopio simple o lente de aumento es el más sencillo de todos y consiste en realidad en
una lupa que agranda la imagen del objeto observado. Las evidentes limitaciones de este
sistema, conocido desde la antigüedad, y el desarrollo de la óptica y de la construcción de
lentes hizo que surgieran en el siglo XVII los microscopios compuestos, diestramente utilizados
por el holandés Antonie van Leewenhock en el estudio de la microfauna de los estanques y
charlas. Estas observaciones, unidas a las de Robert Hooke, establecieron la microscopia como
poderosa herramienta científica.
Dos lentes convexas bastan para construir un microscopio. Cada lente hace converger los rayos
luminosos que la atraviesan. Una de ellas, llamada objetivo, se sitúa cerca del objeto que se
quiere estudiar. El objetivo forma una imagen real aumentada e invertida. Se dice que la
imagen es real porque los rayos luminosos pasan realmente por el lugar de la imagen. La
imagen es observada por la segunda lente, llamada ocular, que actúa sencillamente como una
lupa. El ocular está situado de modo que no forma una segunda imagen real, sino que hace
diverger los rayos luminosos, que al entrar en el ojo del observador parecen proceder de una
gran imagen invertida situada más allá del objetivo. Como los rayos luminosos no pasan
realmente por ese lugar, se dice que la imagen es virtual.

10. Bibliografía

 Enciclopedia Encarta 2000. Microsoft Corporation

 Enciclopedia Hispánica Millennium. (2000). Volumen 10. Caracas.

 Mazparrote, Serafín. (2000). Biología. 9no. Grado. Editorial Biosfera. Caracas.

 Mundo Científico Nº 27-50. Editorial Fontalba. Barcelona.

Microscopio Compuesto
Microscopio Electrónico De Barrido
El microscopio electrónico de barrido está situado a la izquierda del operador, y las imágenes
computerizadas de la muestra se ven en la pantalla de la derecha. Aunque un microscopio
electrónico de transmisión puede resolver objetos más pequeños que uno de barrido, este
último genera imágenes más útiles para conocer la estructura tridimensional de objetos
minúsculos.
Microscopio quirúrgico
El empleo de microscopios quirúrgicos ha permitido que los cirujanos lleven a cabo
intervenciones que parecían imposibles, como la reimplantación de un miembro y la cirugía de
los ojos y oídos. Estos microscopios son en especial útiles cuando es necesario realinear para
unir o reparar fibras nerviosas y vasos sanguíneos individuales.