Las especies del género Fusarium son muy variables debido a su composición genética.

y porque los
cambios en el medio ambiente en el que crecen causan problemas morfológicos. cambios. Ya que
la morfología, especialmente la morfología de las macroconidias. es la base para la identificación.
es necesario tomar todas las medidas posibles para estandarizar los procedimientos para facilitar la
tarea de identificación. Las especies de Fusarium pueden ser identificadas con certeza sólo si los
cultivos se han cultivado en condiciones óptimas para la esporulación. Todos los cultivos utilizados
deberán ser inducidos a partir de conidios únicos, excepto en casos especiales, en los cuales se
discutirá más tarde. Dado que cada conidio es de un solo genotipo, la colonia que se desarrolla,
salvo mutaciones, es de ese genotipo. Es un clon reconocible por su particularidad. características.
Las culturas mutantes que surgen pueden reconocerse fácilmente. De esta manera los clones
pueden mantenerse indefinidamente en cultivo. Mientras que para los no iniciados todos los
macroconidios de Fusarium se parecen. el taxónomo, todos pueden tener un aspecto diferente y un
determinado aislado puede parecer que tiene macroconidios. de varias especies. El problema más
imperativo, entonces, es reducir este fenotípico variación tanto como sea posible. Esto se puede
hacer siguiendo los siguientes procedimientos de este libro; si estos procedimientos son seguidos
cuidadosamente, el valor total de este libro y las fotografías serán directamente comparables a las
del investigador. preparaciones.

Nelson 1987

Medio clavel Las semillas no son se recomiendan porque son generalmente demasiado altos en
carbohidratos disponibles y son más difícil de esterilizar. También instamos encarecidamente a los
investigadores a que sean coherentes en sus el uso del sustrato elegido, ya que cada material
vegetal tiene un efecto modificador sobre

la forma de la conidia. Las hojas jóvenes de clavel (Dianthus caryophyl/us L.) se cosechan de un
crecimiento activo, plantas desprovistas de residuos de plaguicidas. Las hojas se cortan en trozos
de aproximadamente 5 mm2 y secar en horno a 45-55 C durante 2 hr. Cuando están secas, las
hojas son verdes y crujiente. La pérdida de pigmentación verde indica que la temperatura de
secado era demasiado alta. alto. Las piezas de la hoja se colocan en latas de aluminio de 5 em de
profundidad y 9 em de diámetro. y esterilizado con 2,5 megaradios de radiación gamma de una
fuente de Cobalto 60. Propileno La fumigación con óxido puede ser usada como un método
alternativo de esterilización (31, 68), pero la esterilización de las hojas verdes no es tan completa
como con la irradiación gamma y la repetida puede ser necesaria la fumigación.

El agar de hoja de clavel (13) se prepara colocando varios trozos de hoja estériles en una placa de
Petri o tubo de cultivo y flotando en un 1.5 a 2% de agar de agua enfriado a 45 C. El medio es

dejar a temperatura ambiente durante 3 a 4 días antes de su uso para comprobar el crecimiento
de posibles contaminantes de las hojas. Observación microscópica directa de una especie de
Fusarium que crece en agar de hoja de claveltambién indica la manera en que los conidios se
transmiten en los conidióforos. Uso de este también favorece el desarrollo de peritecias de
especies homotálicas de Fusarium (69). KCI medio. La observación de la formación de
microconidios en cadenas en la sección

Liseola se facilita en un medio KCI (14). Este medio se prepara añadiendo de 4 a 8 g de

KCI a un litro de 1,5% de agar de agua. Las especies que forman cadenas de microconidios forman
más abundantes, cadenas más largas en este medio. Además, las cadenas son más fáciles de
observar porque hay menos humedad en la superficie del agar y menos gotitas de humedad en el
micelio aéreo. Observación directa bajo el microscopio de niños de 4 a 5 días de edad en placas de
Petri demostrará si las cadenas de microconidios son o no y puede mostrar la presencia de
monofisarios o polifisarios

 La esporulación y la pigmentación

se ven favorecidas por la luz, incluyendo las longitudes de onda ultravioleta, y por condiciones de
temperatura fluctuantes (62, 77). Si es posible, todos los cultivos deben ser incubados en una
temperatura alterna de 25 C día/20 C noche. Los cultivos se incuban en Difundir la luz del día
desde una ventana norte o desde tubos fluorescentes. Hemos encontrado que los tubos
fluorescentes F4055/SX (Consumer Lighting Products, Inc., P. 0. Box 5760, Baltimore, Maryland
21208) son excelentes sustitutos de la luz natural. Dos de estos en un aparato fluorescente
ordinario de 40 vatios se suspenden 40-45 cm por encima de los mesa de laboratorio o estante
que sostiene los cultivos. Un día de 12 horas es suficiente. Los cultivos que no esporulan
fácilmente pueden colocarse debajo de un cultivo que contenga uno de los siguientes elementos
tubo de luz negro de 40 vatios y uno de los tubos fluorescentes de 40 vatios descritos
anteriormente a aumentar la esporulación. Esta combinación de luz también mejora la formación
de la perfecta (teleomorfo) en la cultura. Un banco de luz móvil útil para las culturas en
crecimiento ha sido descrito por Burgess et al. (6). Mientras que las temperaturas fluctuantes son
las mejores, las especies de Fusarium crecen bien a temperaturas constantes. temperaturas de 21
a 22 C; la mayor excepción es F. nivale, que se desarrolla mejor a una temperatura de
temperaturas fluctuantes de 12 a 18 C. Producción de clamidiosporas. Las clamidiosporas
generalmente se producen en cultivo. Sin embargo,un método para su producción más rápida es
colocar un pequeño trozo del hongo, junto con parte del medio PDA en el que crece, en agua
destilada estéril. Las clamidiosporas se formarán, en algunas especies que las producen, en unos 7
días. Alejandro et al. (1) también han utilizado extractos de suelo estériles, obtenidos de suelos
arenosos pobres; se trata de preparado mezclando 1 litro de agua con 1 kg de tierra no
esterilizada, filtrando a través de vidrio de lana, y esterilización pasando a través de un filtro de
miliporos de 0.22 f.Lm. Suelos más altos en orgánicos también se puede utilizar si se sigue el
procedimiento descrito en su documento. Observación y fotomicrografía. Dado que las manchas y
los fijadores distorsionan con frecuencia esporas, es preferible utilizar agua como medio de
montaje para examinar conidios. A menos la preparación temporal se puede hacer con una
solución de gelatina al 0,15%. Este es un excelente método para la preparación de los montajes a
ser fotomicrografiados; de hecho, todas las fotomicrografías en este libro fueron hechas por este
método. Se utilizan anteojos protectores circulares, y las monturas se pueden mantener de 15 a
20 minutos. A medida que la montura se va secando la cubierta el vidrio presiona hacia abajo para
que todas las esporas estén en un solo plano y a menudo se alineen a través del mismo tensión
superficial. Se acumula una capa de gelatina en la periferia del cristal de protección, ralentizando
la evaporación del agua. Las observaciones deberán efectuarse rápidamente, ya que
las macroconidias tienden a hincharse debido a la ingestión de agua. Estos soportes se pueden
guardar durante períodos más largos en cámaras húmedas. Las esporas germinarán,
particularmente en los bordes de el cubreobjetos, y el proceso puede seguirse bajo el microscopio.

Las fotografías reproducidas aquí fueron tomadas en un Leitz Ortholux Research Microscope con
un objetivo Leitz 40X apochromat y un ocular 1 OX. La cámara era un Leitz 4 x 5 Aristophot que
ofrece una ampliación final de 1 OOOX en el proceso de contraste de Kodak

Película Pancromática. Los negativos se imprimieron por contacto en papel Kodak Azo. Variación
cultural. La mayoría de las especies de Fusarium aisladas de la naturaleza producen sus
macroconidia en esporodoccia. El tipo esporodochial a menudo muta en el cultivo y en el naturaleza.
Estos mutantes a su vez pueden dar lugar a otros, de modo que una secuencia mutacional es
desarrollado. En los aislados patógenos, estos mutantes suelen presentar una pérdida de virulencia,
y la pérdida de la producción de toxinas también puede ocurrir. La variabilidad y su efecto sobre la
virulencia y la La taxonomía ha sido discutida en detalle por varios investigadores (34, 50, 51, 56, 57,
63), 72). Nunca se ha demostrado experimentalmente que la secuencia de mutación se revierta por
sí misma.

Partiendo del tipo esporodochial, la mutación en general procede en dos direcciones opuestas:

i) hacia formas que producen micelio aéreo abundante pero pocas macroconidias, denominadas

tipos miceliales (Placa 6b; cf. tipo esporodoccial, Placa 2c), y ii) hacia formas que producen

poco o nada de micelio aéreo, sino abundantes macroconidios, denominados tipos pioneros (Placas

1d, 8d; cf. tipos esporodócicos, Placas 1c, 2c). En el tipo micelial hay frecuentemente un

esclerocia, esporodoccia y pigmentación, de modo que estos mutantes a menudo tienen una

blanco, sin rasgos distintivos. Las macroconidias son escasas y, como resultado, se obtiene la
identificación

más difícil. Las macroconidias de los tipos pioneros, por otro lado, se forman de monofisarios no
ramificados en láminas sobre la superficie de la colonia. La colonia tiene una apariencia brillante y
húmeda. Estos cultivos a menudo tienen un color más intenso que el esporodochial. de donde
surgieron. Las macroconidias pueden ser más largas y delgadas o más cortas. que los de los tipos de
padres. Básicamente, la evitación de mutantes implica i) un único patrocinio de cultivos, ii) la hífica
de los medios ricos en carbohidratos disponibles, y iv) mantener el subcultivo. a un mínimo. El
almacenamiento a largo plazo es mejor en nitrógeno líquido o por liofilización. Control de ácaros de
cultivo. Estos pueden ser excluidos de los tubos de cultivo por medio de Barreras de papel de fumar
que se fijan a la boca del tubo con una simple gelatina. que contiene CuS04 como inhibidor del
crecimiento microbiano (61).
Figura 12-1. Caracteres de la morfología de las esporas utilizadas en la identificación de
las especies de Fusarium
A-D: Formas macroconidiales.
A. Típico de Fusarium . Célula apical a la izquierda, célula basal a la derecha.
B. Macroconidio esbelto, recto, casi como una aguja, por ejemplo, F. avenaceum.
C. Macroconidio con curvatura dorsiventral, por ejemplo, F. equiseti.
D. Macroconidio con el lado dorsal más curvado que el ventral, por ejemplo, F.
crookwellense.
E-H: Formas de células apicales macroconidiales.
E: célula apical embotada
F: papilato de célula apical ( papilado)
G: célula apical enganchada,
H: célula apical en disminución ( conica):
Formas macroconidiales de células basales.
I: célula basal en forma de pie
J: célula basal en forma de pie alargado
K: célula basal con muescas claras
L: célula basal con muescas mínimas.
formas de esporas.
M. Oval.
N. Óvalo de dos celdas
O. Óvalo de tres celdas.
P. Renitiforme
Q: oblicua con base truncada
R: piriforme
S: napiforme
T: globosa

Fiálidos

U y V: monofiálidos,
W y X: polifiálidos,:
Cadenas microconidiales
Y: cortas, Z : largas
Macroconidios: abundantes en esporodoconiosis, 3- septos, de pared delgada, de corta a
moderadamente larga, recta, de célula apical corta y ligeramente enganchada, de célula
basal dentada o en forma de pie. Sporodochia: abundante, de color naranja pálido.
Microconidios: pequeños, ovalados, elípticos o en forma de riñón, 0- septos.
Clamidosporas: abundantes

Morfología de la colonia.
En el PDA. el crecimiento es rápido y el micelio blanco aéreo puede se tiñen de púrpura o
se sumergen en el color azul de la esclerocia cuando son abundantes, sobre todo en la
base de la inclinación, o por la crema de bronceado a naranja esporodoccia cuando son
abundantes. Se presentan esporodocos anaranjados discretos y erúmpidos. en algunas
cepas. La superficie inferior puede ser incolora a azul oscuro o púrpura oscuro, y estos
colores pueden ser visibles a través del micelio cuando se ven desde arriba.
Características más distintivas. La presencia de clamidiosporas y microconidios en
monofisarios cortos. Los cultivos de F. oxysporum a menudo se asemejan a los cultivos
de F. subglutinans, pero este último tiene microconidios que nacen en los polifielidos. y las
clamidiosporas están ausentes.

Morfología de la colonia PDA

Aislamiento Color Color Tipo de Crecimiento Foto

anverso reverso micelio
1
2
3
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5
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