Estructura-Función del Receptor Acoplado a la

PROTEÍNA G SUPERFAMILIA
ABSTRACT

Durante los últimos años, la cristalografía de los receptores acoplados a la proteína

G (GPCR) se ha crecimiento exponencial experimentado, que resulta en la
determinación de la estructura de 14 receptores distintos, 7 de estos sólo en 2012.
Incluyendo modelos de homología de subtipos estrechamente relacionados, esto
equivale actualmente a alrededor del 10% de cobertura de la superfamilia GPCR. Las
estructuras de estado activo unidas a agonistas son ahora conocido por los sistemas
de receptores adrenérgicos, rodopsina y adenosina, incluida una estructura del
Complejo receptor-G-proteína para el receptor β2-adrenérgico. Bioquimico y biofisico
Técnicas, como la resonancia magnética nuclear (RMN) y la masa de intercambio de
hidrógeno / deuterio.
La espectrometría (HDX-MS) proporciona información complementaria sobre la
dinámica dependiente de ligando equilibrio entre diferentes estados funcionales.
Estructuras de alta resolución como la 1.8 A.
El receptor de adenosina A2a está clasificando al receptor como máquinas
alostéricas, controladas no solo por ligandos, pero por sodio, lípidos, colesterol y
agua. Esta riqueza de datos está ayudando a redefinir nuestro conocimiento de cómo
los GPCR reconocen un conjunto tan diverso de ligandos y transmiten señales 30
Angstroms a través de la membrana celular, también arrojando luz sobre una base
estructural de GPCR alostérica Modulación y señalización sesgada.

INTRODUCCION

Los receptores acoplados a proteínas G (GPCR) constituyen la superfamilia de

proteínas más grande en genomas de mamifero Comparten una topología común de
siete transmembranas y median Respuesta celular a una variedad de señales
extracelulares que van desde fotones y pequeños Moléculas para péptidos y
proteínas (1). La diversidad de los ligandos extracelulares se refleja en La diversidad
estructural de más de 800 GPCR humanos, que se pueden agrupar en cinco grandes
familias y numerosas subfamilias basadas en su secuencia de aminoácidos (2). Señal
La transducción por GPCR es fundamental para la mayoría de los procesos
fisiológicos, que abarca desde Visión, olfato y gusto neurológico, cardiovascular,
endocrino y reproductivo. funciones, por lo que hacen de la superfamilia GPCR un
objetivo importante para la intervención terapéutica (3, 4). Los esfuerzos actuales de
descubrimiento de fármacos apuntan a mejorar las terapias para más de 50 estableció
los objetivos de GPCR, y al ampliar la lista de GPCR dirigidos (5, 6). Además de
Regulación de la activación de la señal GPCR con agonistas e inhibición con
antagonistas e inversa. agonistas, las tendencias en la farmacología moderna
incluyen el descubrimiento de alostéricos y / o funcionalmente moduladores selectivos
(7) que desvían la señalización en sentido descendente hacia una proteína G
específica o vías de detención activada (8).
COBERTURA ESTRUCTURAL DE LA SUPERFAMILIA GPCR.
AVANCES RECIENTES EN LA CARACTERIZACIÓN ESTRUCTURAL DE GPCR.

Antes de 2007, la estructura y función de los GPCR, que se habían investigado

exhaustivamente con Métodos biofísicos y bioquímicos, se interpretaron a través de
ab initio o basados en rodopsina (9) modelado (por ejemplo, revisado en (10, 11)).
Avances en la ingeniería de proteínas. (12, 13) y cristalografía (14, 15) crecimiento
exponencial galvanizado en la estructura GPCR determinación, que hasta el momento
(hasta mayo de 2012) ha dado como resultado estructuras de 14 receptores (Figura
1 y Tabla 1). Cada uno de estos GPCR se capturó inicialmente en estados inactivos
estabilizado por antagonistas o agonistas inversos, mientras que la elevada
plasticidad conformacional y La heterogeneidad de los estados activados plantea
desafíos adicionales para la cristalización. Los primeros conocimientos sobre las
estructuras cristalinas de estado activo se obtuvieron en 2008 para un dispositivo sin
ligandos. rodopsina (opsina) (14, 16). La estabilización selectiva del estado activo
resultó en estado activo estructuras de rodopsina (17, 18), A2AAR (19, 20), así como
β2AR unida a un agonista y estabilizado por una proteína Gs heterotrimérica (21) o
nanobody (22). Estos cristalograficos Las ideas se complementan en gran medida
con estudios de cambios conformacionales de GPCR y Dinámica obtenida mediante
métodos bioquímicos y espectroscopia. Esta revisión discutirá cómo las ideas
estructurales y biofísicas recientes contribuyen a nuestra comprensión de las
interacciones moleculares, subtipo y selectividad funcional de los ligandos,
Mecanismos de activación y dinámica conformacional, y otros aspectos de GPCR
biológicos. Función. También detallaremos las líneas de investigación emergentes y
futuras para estudiar GPCR Mecanismos de señalización y aprovechamiento para el
descubrimiento de fármacos (23, 24)., han sido co-cristalizados en complejos con
diferentes ligandos, en diferentes formas de cristal o utilizando diferentes enfoques
A la estabilización del receptor y la cristalización. Es importante destacar que las
diferencias conformacionales entre las múltiples estructuras inactivas del mismo
receptor se encontraron menores (todos desviación al cuadrado media de la raíz del
átomo (RMSD) <0,8 A), dejando la mayoría de los receptores clave específicos
Rasgos estructurales bien conservados. Esta reproducibilidad establece una línea de
base importante para comparaciones estructurales entre diferentes GPCR y entre
diferentes estados funcionales de estos receptores Los niveles moderados de ajuste
inducido en los bolsillos de unión de GPCR (41) también son una clave para la
aplicación efectiva de estructuras al descubrimiento racional de medicamentos, donde
se golpea
Se han mostrado tasas de identificación tan altas como del 20 al 70% en la detección
virtual de novelas. quimiotipos ligando para β2AR (46), A2AAR (47, 48), histamina H1
(49), dopamina D3 (50)y los receptores de quimiocina CXCR4 (50a), y para la
optimización racional de los
Andamios en receptores de adenosina (51).
DIVERSIDAD ESTRUCTURAL ENTRE SUBFAMILIAS Y SUBTIPOS DE GPCRS.

Aunque todos los GPCR se caracterizan por una topología de siete transmembrana
(7TM) similar,
Las cinco familias principales de GPCR humanos (2, 52) (Figura 1) comparten una
secuencia muy pequeña identidad (SI, <20% en el dominio TM) y poseen diferentes
terminales N extracelulares dominios La familia más grande y diversa de Rhodopsin-
like (también conocida como Clase A) consta de unos 700 GPCR en humanos y puede
clasificarse en cuatro subgrupos
(α-δ) (2) (SI ≥ 25%). Cada subgrupo contiene numerosas subfamilias que comparten
más similitud de secuencia (SI ≥ 30%) y, a menudo, selectividad de ligando común.
El análisis de las variaciones estructurales en diferentes niveles de homología
proporciona información importante en el ámbito de la diversidad estructural en los
GPCR, como se ha revisado (53). Dentro subfamilias, secuencia y similitud estructural
pueden ser lo suficientemente altas como para permitir una precisión predicciones por
modelado de homología, que es útil en aplicaciones prácticas como el ligando
acoplamiento (54), o detección virtual de antagonistas de dopamina D3 (50), así como
perfil de
Selectividad de ligandos dentro de la subfamilia de receptores de adenosina (55). Sin
embargo, estructural
Las diferencias entre las diferentes subfamilias y grupos de GPCR son mucho más
dramáticas.
Las variaciones más sorprendentes reveladas por la cristalografía se encuentran en
la región del bucle extracelular,
El cual presenta un repertorio diverso de estructuras secundarias y reticulación
disulfuro. Las variaciones clave también se encuentran en el propio paquete helicoidal
7TM, incluyendo ambos dobleces y “protuberancias” de prolina y no prolina, hélices
π y otras variaciones locales, que resultan en tanto como ~ 7 A desviaciones en las
puntas extracelulares de las hélices transmembrana. Más
De manera importante, tales variaciones en los bucles extracelulares, hélices
transmembrana y cadenas laterales crear una variedad notable de tamaños, formas
y propiedades electrostáticas de la unión del ligando en diferentes subfamilias de
GPCR, reflejando la diversidad de sus correspondientes
ligandos (figura 2).
Con la determinación de la estructura de S1P1 (32), acetilcolina muscarínica (30, 31)
y opioide.
(34-37) receptores, se agregan más ejemplos de diversidad estructural a este
repertorio. Por
Por ejemplo, la estructura de un GPCR de unión a lípidos, S1P1, revela una
configuración única de bucle extracelular 2 y extremo N, que sella completamente la
entrada extracelular en
El bolsillo de encuadernación. Aunque la rodopsina también tiene una “tapa”
extracelular apretada que cubre el bolsillo, la estructura principal de estos elementos
en S1P1 es diferente, el bucle extracelular 2 es carece de estructura secundaria, un
enlace disulfuro a la hélice III que está altamente conservado en otros
Falta el GPCR y el N-terminal forma una hélice α en la parte superior del bolsillo de
enlace.
Consistente con la naturaleza altamente lipofílica de los ligandos S1P1, la estructura
revela un "lado"
Abertura entre las hélices I y VII, que proporciona acceso directo del ligando a la
Bolsillo de la bicapa lipídica. En contraste, una característica estructural prominente
de la M2 y M3
Los receptores de acetilcolina muscarínicos (30, 31) incluyen un sitio de constricción
aparente en el bolsillo de unión ortostérico controlado por varios residuos aromáticos
de gran tamaño. Este estrechamiento crea un bolsillo alostérico separado en los
bucles extracelulares del receptor, que potencialmente juega un papel en la cinética
de unión del ligando y puede acomodar a un alostérico, Modulador o un ligando
bitópico extendido (31).

COBERTURA ESTRUCTURAL INTEGRAL DE LA SUBFAMILIA DE OPIOIDES.

La cobertura estructural integral de la subfamilia de receptores opioides (34-37) es

especialmente perspicaz para la apreciación de la conservación estructural y la
diversidad en GPCRs. Opioide las estructuras de los receptores ejemplifican la
segunda subfamilia en la rama γ de unión al péptido de la Árbol GPCR, representado
anteriormente solo por el receptor de quimiocinas CXCR4 (33). A pesar de bastante
baja homología entre los receptores de opioides y quimioquinas (identidad de
secuencia <27%), ambas subfamilias tienen una conformación de horquilla β muy
similar a su bucle extracelular 2, que surge como un motivo común de unión a péptidos
en el gran y diverso grupo γ de GPCRs. En contraste, la región del paquete 7TM de
los receptores opioides aparece estructuralmente más cerca de receptores
aminérgicos del grupo α, con algunas características clave en común entre ellos. Por
ejemplo, todos los receptores opioides tienen el mismo residuo de aspartato
(utilizando Ballesteros-Weinstein). Numerando (115) este residuo se identifica como
Asp3.32), que también se conserva completamente en receptores aminérgicos; en
ambas familias, la cadena lateral ácida de Asp3.32 sirve como sal principal Anclaje
de puente crítico para la unión del ligando y la activación del receptor. Curiosamente,
el receptor "opioide" NOP (35), a pesar de una secuencia general muy alta identidad
(60%) con los receptores “clásicos” opioides (34), κ-opioides (36) y δ-opioides (37),
muestra perfiles de selectividad de ligandos muy diferentes tanto para péptidos
endógenos como pequeños Derivados de la morfina de la molécula. Estos cambios
en la selectividad del ligando son consistentes con arreglos estructurales dramáticos
entre los receptores opioides clásicos y el NOP, donde los reemplazos de solo unos
pocos residuos clave en la región de la bolsa de unión al ligando dan como resultado
cambios conformacionales en la estructura de la red troncal, incluidos los cambios en
las hélices V y VI (35). Dichas desviaciones tanto en la selectividad del ligando como
en las conformaciones de la bolsa de unión, a pesar de la La alta identidad de
secuencia general, está en marcado contraste con la estrecha conservación de los
bolsillos. previamente observado en otros subtipos de GPCR estrechamente
relacionados. Por ejemplo, entre β2AR y β1AR, así como entre los receptores
muscarínicos M2 y M3, las cadenas laterales del núcleo Los bolsillos de unión
ortostéricos son todos idénticos y tienen conformaciones muy similares. Esta La
observación sugiere una divergencia de NOP de los receptores opioides clásicos
impulsados por la cambio en la selectividad de ligandos, que enfatiza la naturaleza
altamente dinámica de GPCR Evolución en genomas de mamíferos (58).
MARCO ESTRUCTURAL PARA ENTENDER LA ACTIVACIÓN DE GPCR

La multitud de datos bioquímicos, biofísicos y estructurales sugiere que la mayoría de

los GPCRs existen en un equilibrio dinámico entre los estados inactivos (R, R ’) y
activos (R’ ’, R *), que se puede convertir adicionalmente al estado de señalización (R
* G) en presencia de heterotrimérico G proteína, como se ilustra en la Figura 3. La
distribución entre estados en receptores libres de ligando puede varían drásticamente,
reflejando sus diferentes niveles de actividades basales (59, 60). Agonistas inversos
cambiar el equilibrio hacia estados inactivos, disminuyendo el nivel de actividad basal,
mientras que
Los antagonistas neutros no afectan el equilibrio basal. La unión de agonistas
desplaza la
Equilibrio hacia los estados activados caracterizados por cambios conformacionales
a gran escala. En el lado intracelular del receptor (61). Estos cinco estados
funcionales conformacionalmente distintos. Ahora se han caracterizado
cristalográficamente en rodopsina, receptores A2AAR y β2AR como se indica en la
Tabla 2.

Reordenamientos a gran escala de las hélices transmembrana.

Muy notable, a pesar de las diferencias en la identidad de los receptores, las

comparaciones de las estructuras de estado inactivas y activas revelan características
comunes relacionadas con la activación con respecto a Cambios conformacionales
en el lado intracelular de los receptores (Figura 4a). Lo más pronunciada reordenación
común de las hélices en el lado intracelular incluye un exterior
Movimiento de balanceo de la hélice VI en concierto con un movimiento de la hélice
V, como parte de la mecanismo de "conmutador de palanca global" propuesto
anteriormente (10, 61). La magnitud de esto el movimiento varía entre diferentes
GPCR y diferentes estados activos, por ejemplo, en la punta intracelular de la hélice
VI mueve ~ 3.5 A en A2AAR (R ''), ~ 6 A en opsina (R '' y R *) y tanto como 11 A y 14
A en el complejo β2AR con nanocuerpo (22) y proteína G (R * G) (21),
respectivamente. Además, las posiciones finales de las puntas intracelulares de las
hélices V y VI en el los estados R * G de señalización parecen estar controlados en
gran medida por reordenamientos dramáticos en el G
Las proteínas en sí y están acompañadas por la liberación del PIB (ver Barra lateral
y Figura 5b).
Las hélices III y VII también experimentan reordenamientos sustanciales durante la
activación en los tres receptores, con los cambios más pronunciados en esta región
observados en A2AAR agonista atado a estructuras (19, 20). La parte intracelular de
la hélice VII se mueve hacia el interior hacia la eje central del haz helicoidal 7TM y
sufre una distorsión troncal marcada en el
Región del motivo NPxxY conservado. El movimiento de la hélice III se compone de
un cambio hacia arriba. A lo largo de su eje y algún movimiento lateral. En β2AR los
cambios globales de las hélices III y VII son menos pronunciadas que en A2AAR y
rodopsina, aunque todavía hay una pronunciada distorsión en el motivo helix VII
NPxxY.
Estas observaciones sugieren que los movimientos de las hélices V y VI son
absolutamente esenciales para
La unión y activación de la proteína G, y es probable que se conserven en los GPCR
de clase A. Movimientos de las hélices III y VII dependen más probablemente del
receptor y el ligando particulares, y aunque su papel en la activación de la proteína G
no está claro, puede contribuir a la proteína G independiente vías de señalización
(104) como se describe más adelante.

Conserved microswitches in GPCR activation

Los movimientos globales de hélices durante la activación están acompañados por

un conjunto común de
"microinterruptores" locales en la parte intracelular de los GPCR. Los
microinterruptores son. caracterizada por cambios de rotámero en cadenas laterales
altamente conservadas (61), que estabilizan la
Movimientos globales de hélices y ayuda a cebar el lado intracelular de GPCR para
la proteína G encuadernación (figura 4a). La secuencia D [E] RY en la hélice III
representa una de las más conservadas
Motivos de GPCR de clase A, en los que el residuo Arg3.50 (96% de conservación
entre la clase A
GPCRs) forma un puente salino a la cadena lateral ácida vecina Asp (Glu) 3.49 (Asp
68%,
Glu 20%) (62), como se encuentra en todas las estructuras de GPCRs de estado
inactivo hasta la fecha. Curiosamente, la
Arg3.50-Asp3.49 El puente salino permanece intacto en el complejo β2AR-anon-
nadie (22), como así como en el estado activo de las estructuras A2AAR (R ’’) (19,
20). Sólo en el estado activo de rodopsina.
Las estructuras (R *) y β2AR (R * G) son el puente salino roto, y la guanidina Arg3.50
cambia el rotámero para interactuar con la hélice C-terminal de la subunidad Gα (14,
17, 18, 21), por lo que sugiere que el cambio en Arg3.50 requiere la presencia de una
proteína G (Figura 4a).
La cadena lateral Arg3.50 también puede formar un puente salino interhelical a
Asp6.30, conocido como
"Bloqueo iónico", que conecta los extremos intracelulares de las hélices III y VI. El
bloqueo iónico era
Primero observado en las estructuras de rodopsina bovina adaptada a la oscuridad,
estabilizando este receptor en un estado totalmente inactivo (62). El papel
estabilizador del bloqueo iónico puede ser menos pronunciado en
Otros GPCR, ya que está ausente en muchas estructuras de GPCR, incluyendo
aquellas con un intacto bucle intracelular 3 (42), y simulaciones por computadora
sugieren una naturaleza altamente dinámica para esto interacción (63). Además, un
residuo ácido en la posición 6.30 se conserva en solo alrededor del 30%. De los
GPCR, por ejemplo, falta en los receptores de quimioquinas. En cambio, algunas
estructuras de cristal. Revelan interacciones de enlaces de hidrógeno entre la cadena
lateral Arg3.50 y otras polares residuos en la hélice VI, por ejemplo Thr6.34 en los
receptores κ-opioides y μ-opioides, que también pueden
Juega un papel en la regulación de la señalización del receptor.
El motivo “NPxxY” está ubicado cerca del extremo intracelular de la hélice VII y
contiene una gran
(92%) conservó Tyr7.53 como un microinterruptor de activación importante en los
GPCR. Inactivo
El GPCR estructura la cadena lateral de Tyr7.53 hacia las hélices I, II o VIII. En
contraste, en
En todas las estructuras de cristal de GPCR de estado activo, la cadena lateral
Tyr7.53 cambia su rotámero y conformación y puntos hacia el eje medio del haz 7TM,
formando interacciones.
Con cadenas laterales de hélices VI y III. En las estructuras de estado activo de β2AR
y rodopsina, el hidroxilo Tyr7.53 también puede formar un enlace de hidrógeno
medido en agua tentativo con otro supuestamente microinterruptor, Tyr5.58 (89%
conservado). Curiosamente, la cadena lateral Tyr5.58 se comporta de manera muy
diferente en los tres modelos de activación: en rodopsina, cambia de afuera a dentro
de los paquetes helicoidales, en A2AAR hace un cambio opuesto de adentro hacia
afuera, mientras que en todos los complejos β2AR este residuo permanece en el
interior del paquete 7TM. Nota además, esa mutación de Tyr5.58 a alanina contribuye
a la estabilización de β1AR en su estado inactivo (64), y reducción de la actividad
basal en muscarínica M3 (65) y tirotropina receptores (65a), aunque el papel preciso
de este residuo en varios GPCR necesita un estudio adicional

LIGANDO DEPENDIENTE “DESENCANDENANTES” DE ACTIVACION DE GPCR

Uno de los ejemplos destacados de reordenamientos dependientes de ligando en el

bolsillo de unión implica un desplazamiento del residuo Trp6.48, que pertenece al
motivo CWxP conservado en la hélice
VI. Aunque esta cadena lateral se clasificó previamente como un microinterruptor (o
"palanca de rotámero"
switch ”) (70), las estructuras cristalinas de los GPCR de estado activo no mostraron
cambios de rotámero en este residuo tras la activación. Además, un estado de
rotámero modificado de la cadena lateral Trp6.48 fue observado en estructuras de
receptores muscarínicos M2 y M3 inactivos (30, 31), mostrando que
El estado de rotámero de Trp6.48 no se correlaciona con el estado funcional del
receptor.
Sin embargo, las estructuras cristalinas sugieren un papel prominente para Trp6.48
como un importante ligando dependiente
"Gatillo" en algunos GPCRs. Así, A2AAR y las estructuras de estado activo de
rodopsina revelan interacciones estéricas directas de la cadena lateral Trp6.48 con
agonistas (19, 20), que estabilizan una cambio pronunciado de Trp6.48 y el
correspondiente movimiento de giro de la hélice VI (Figura
5). Por otro lado, la posición inactiva de Trp6.48 se puede estabilizar mediante
interacciones directas con agonistas inversos, como se observa en la rodopsina / 11-
cis retinal (9), A2AAR / ZM241385 (45), y complejos de histamina H1 / doxepina (28).
A diferencia de A2AAR y rodopsina, las estructuras β2AR y β1AR carecen de
contactos directos entre la cadena lateral Trp6.48 y los agonistas o agonistas
inversos. En cambio, conformacional. los cambios que promueven el movimiento de
la hélice VI en β2AR (22) dependen en gran medida de que los agonistas se
involucren en interacciones polares con Ser2035.42 y Ser2075.46 y estabilizando un
desplazamiento interno de ~ 2 A del parte extracelular de la hélice V, como se predijo
inicialmente a partir de los resultados de modelado obtenidos con el estructura β2AR
inactiva (71, 72). Más detalles de este cambio conformacional, resuelto en
Las estructuras cristalinas de β2AR activo (21, 22) muestran que este movimiento en
la hélice V da como resultado un conmutador rotámero en Ile1213.40, que a su vez
está acoplado con un movimiento de 4 A del
Phe2826.44 cadena lateral y un correspondiente giro de hélice VI. Así, en el caso de
β2AR,
Trp6.48 parece tener solo un papel indirecto en la activación, como también se
desprende de su gran parte
Movimiento más pequeño (<1 A) que en otros receptores. Por lo tanto, el papel de
Trp6.48 no es universal incluso entre los tres modelos disponibles actualmente de
activación de GPCR; además aproximadamente el 30% de los GPCR de clase A
tienen diferentes cadenas laterales en la posición 6.48.
Otro sitio común de cambios conformacionales en el bolsillo vinculante son las hélices
III. y VII, que están unidos por fuertes interacciones mediadas por ligandos en los tres
GPCR
Modelos de activación. Los detalles de los cambios en este sitio, sin embargo, varían
dramáticamente para
Diferentes receptores (figura 4b). En la rodopsina, la activación de la luz produce la
interrupción de una sal. puente entre Glu1133.28 y la base Lys2967.43 de Schiff unida
a la retina, y corresponde a un aumento de la distancia entre las hélices III y VII en
aproximadamente 2–3 A. Por el contrario, en
A2AAR, de los anillos ribosa de los agonistas, participa en una fuerte red de enlace
de hidrógeno. con Thr883.36 y Ser2777.42 / His2787.43, acercando las hélices III y
VII en aproximadamente 2 A,
En comparación con la estructura con agonista inverso. En β2AR, Asp1133.32 y
Asn3127.39 son unida por una cola de etanolamina en los complejos agonistas y
antagonistas, por lo que el papel de este puente en la activación de β2AR no está
claro a partir de las estructuras cristalinas. Más información sobre cómo la
participación de este y otros activadores puede afectar la señalización (incluido el
sesgo) puede ser obtenidos por métodos biofísicos sensibles a la dinámica del
receptor, como se explica a continuación.

Enlace de proteínas G y señalización.

La estructura del complejo de señalización β2AR / Gαβγ (21) (Figura 5a) revela una
serie de Cambios conformacionales adicionales en el receptor que son controlados
en gran parte por el pleno Compromiso y activación de Gαβγ. Según lo sugerido por
Rasmussen et al. (21), inserción inicial de la hélice α5 C-terminal de Gαs en el sitio
accesible transitoria entre las hélices β2AR es es probable que se parezca a la
inserción de un péptido C-terminal Gα en la estructura de la rodopsina (14). El
compromiso de otras interacciones receptor-Gαβγ conduce a una rotación similar a
una palanca de Gαs Hélice α5 en aproximadamente 30 °, remodelando la región del
bucle β6-α5, seguida de una rotación dramática del dominio GαAH y la liberación del
PIB (21). Todos estos reordenamientos aparentemente obligan Desplazamiento
adicional de las hélices β2AR V y VI, de modo que la hélice VI está dramáticamente
curvada hacia afuera (ver Figura 5b) y su punta se desplaza hasta 14 A (21) en
comparación con Estados inactivos. La estructura cristalina unida a la proteína G
también revela la gran interfaz de la proteína β2AR / Gα formado por el bucle
intracelular 2 y las hélices V / VI del receptor, y por las hélices α4 / α5, el Unión αN –
β1 y cadena β3 de GαsRas. Cabe destacar que las partes resueltas
cristalográficamente del receptor carecen de interacciones directas con las
subunidades Gαβγ. Estructuras adicionales de Los complejos de proteína GPCR / G
pueden ser necesarios para explicar la selectividad entre los subtipos Gα, que en
algunos casos puede estar regulado diferencialmente por ligandos sesgados (66–69).
los La estructura del complejo también, sorprendentemente, no revela ningún
contacto de proteína G con β2AR helices VII y VIII, lo que sugiere que los cambios
relacionados con la activación en estas helices pueden no es necesario para la
señalización de la proteína G, pero posiblemente puede mediar otras interacciones
de GPCR, por ejemplo, con β-arrestinas.
Conocimientos estructurales sobre alosterismo y oligomerización.
Bases estructurales para la modulación alostérica de GPCRs.

Además de los ligandos ortostéricos, la señalización de GPCR puede verse afectada

por una variedad de Moduladores alostéricos endógenos, como proteínas
reguladoras (64, 65), lípidos y esteroles (59, 73) e iones (66). Por otra parte, los
moduladores alostéricos y bitópicos (7) sintéticos han sido identificados para muchos
GPCR, que prometen ser candidatos a medicamentos con subtipo mejorado
Selectividad y perfiles farmacológicos. Varios sitios alostéricos potenciales en GPCRs
revelados por estructuras cristalinas se han revisado previamente (53), incluida una
unión de iones fosfato sitio en el subpollete extracelular de la estructura de histamina
H1 (28), un enlace de colesterol sitio en β2AR (40) y una extensión extracelular "apta
para medicamentos" de la dopamina D3 ortostérica subpocket (29). Los nuevos
conocimientos sobre la regulación alostérica de GPCR provienen de la estructura de
resolución de 1.8 A de A2AAR inactivo (57) que reveló un estrecho canal lleno de
agua que se conecta extracelular y Lados intracelulares del receptor. Un bolsillo
alostérico pequeño (ca. 200 A 3) en la parte media de Se encontró que el canal se
unía a un ion Na + rodeado por un grupo de 10 aguas estructuradas (Figura 6a). El
bolsillo está limitado por Trp2466.48 (conservado en el 71% de los GPCR de clase A)
en el lado extracelular y Tyr2887.53 (92%) en el lado intracelular, así como los
residuos Asn241.50 (100%), Asp522.50 (94%), Ser913.39 (Ser: 53%, Asp: 26%),
Asn2807.45 (67%) y Asn2847.49 (75%), previamente predicho para participar en un
enlace de hidrógeno mediado por agua red (61). El efecto de modulación alostérica
negativa de Na + en la unión del agonista y la activación se ha observado en muchos
GPCR (74), y se vinculó provisionalmente a la
Asp2.50 residuo por mutagénesis dirigida al sitio (75-77); Sin embargo, el ion
permaneció sin ser detectado.
En todas las estructuras de media resolución anteriores. La estructura A2AAR de alta
resolución reveló la ubicación del ion Na + coordinada por los residuos conservados
Asp522.50 y Ser913.39 y
Agua estructurada, que racionaliza el efecto estabilizador del ion Na + en el receptor
inactivo. estado (57). Además, el análisis de las estructuras de cristal A2AAR muestra
que en el estado activo
A2AAR (19, 20) la bolsa de Na + / agua se colapsa de ca. 200 a 70 A 3 por
movimientos de
Hélices transmembrana. El bolsillo colapsado no proporciona una coordinación
adecuada para
Na +, lo que sugiere que el ion abandona el bolsillo y potencialmente deja el receptor
al
Activación (57).
Los aminoácidos clave en la bolsa de Na + / agua representan el grupo espacial más
conservado de residuos en los GPCR de clase A (61), lo que sugiere que tienen un
papel común clave en el receptor función. Al mismo tiempo, cualquier variación en
estos y en los residuos circundantes que afectan la
El grupo de agua y el ion Na + también pueden alterar la dinámica y los perfiles de
activación en diferentes
GPCRs. Curiosamente, mientras que la entrada extracelular al sitio de Na + / agua es
algo restringido por la cadena lateral Trp6.48 en la mayoría de las estructuras GPCR
que se han resuelto, esto
El paso es más abierto en los receptores muscarínicos M2 y M3 (30, 31). Promover
La comprensión de los detalles estructurales y funcionales del bolsillo crea una
oportunidad para diríjase a este sitio conservado por moléculas alostéricas (p. ej.,
análogos de amilorida (57)), o bitópicas compuestos, algunos de los cuales tendrían
una capacidad mejorada para estabilizar el receptor en el forma inactiva
Otros sitios alostéricos específicos del receptor también han sido revelados por
estructuras cristalinas recientes, incluyendo un bolsillo de "vestíbulo" en los bucles
extracelulares de los receptores muscarínicos (30, 31), que puede unirse a algunos
de los ligandos alostéricos conocidos (68). El A2AAR de alta resolución
La estructura (57) también sugiere un segundo sitio de unión al colesterol (Figura 6c),
distinto de un sitio descrito anteriormente en β2AR (40). Otra observación intrigante
en este A2AAR. la estructura es una molécula de agua intercalada en el pliegue
noprolina entre los residuos Ile803.28 y Val843.32, que aparentemente estabiliza la
conformación retorcida de la hélice III (Figura 6b).
Es importante destacar que, en todas las estructuras de estado activo ligadas a
agonistas de A2AAR, la torcedura en esta región de
La hélice III se endereza completamente, lo que impide la unión al agua. El
reordenamiento en este sitio de unión de agua, por lo tanto, podría jugar un papel
importante en el mecanismo de activación de la subfamilia del receptor de adenosina,
y puede ser explotada para la modulación alostérica por
Extendiendo un andamio de ligando para interactuar con este sitio.

Dimerización y oligomerización de GPCR.

Aunque los GPCR de clase A pueden marcar efectivamente como monómeros,

numerosos estudios han Sugirió la existencia de homodímeros, heterodímeros y
oligómeros superiores en muchos GPCR. y propusieron su papel en la regulación de
la función GPCR y la interferencia (revisado en (78, 79)). La dimerización y
oligomerización de GPCR ha sido ampliamente estudiada por atómica microscopía,
FRET, BRET, reticulación, espectroscopia de resolución temporal y molecular
modelado (revisado en (80, 81)), con resultados recogidos sistemáticamente en el
GPCR-OKB base de datos (82). La información estructural de alta resolución sobre
las interacciones GPCR-GPCR acaba de Comenzó a emerger de los estudios
cristalográficos. Dímeros paralelos con proteína sustancial. Se ha encontrado una
interfaz (> 800 A 2) en estructuras de cristal de 4 GPCR diferentes, incluyendo los
receptores de rodopsina (83), CXCR4 (33), κ-opioide (36) y μ-opioide (34) (ver Tabla
3). En general, hay dos grupos de consenso de interfaces simétricas sugeridas por
estos Estructuras que concuerdan con los datos bioquímicos de la rodopsina (84, 85),
serotonina 5HT2C. (86), dopamina D2 (87, 88), α1bAR adrenérgico (89, 90),
quimiotáctica C5a (91), quimioquina CCR5 (92), y otros GPCRs. La primera interfaz
simétrica A (Figura 7a), encontrada en Las estructuras de rodopsina (15, 83), κ-
opioide (36) y μ-opioide (34) están formadas por las hélices I, II y VIII, que comprende
dos parches de interacción separados en los lados extracelular e intracelular. Los
estudios biofísicos revelaron que este modo de dimerización es insensible a la
activación del receptor (86), de acuerdo con cambios conformacionales mínimos
relacionados con la activación en estas interfaces hélices La segunda interfaz
simétrica B (Figura 7b) involucra las hélices V y VI, y en la El caso de los complejos
de CXCR4 / péptido también puede involucrar las hélices III y IV en el intracelular.
lado (33). Orientación general similar de las subunidades de dímeros, aunque con un
contacto diferente interfaz formada por el haz transmembrana de las hélices V y VI,
se ha observado en μ- receptor opioide (34). Es probable que la interfaz B interfiera
con el estado de activación, porque La activación requiere grandes movimientos
conformacionales de las hélices V y VI. Combinado en un patrón repetido, las
interfaces A y B son compatibles con una oligomerización de alto nivel encontrado en
las matrices de rodopsina (87, 93), aunque no está claro si tal patrón es relevante
para la oligomerización observada en algunos otros GPCR (por ejemplo, (89, 90). Los
estudios bioquímicos y biofísicos ayudarán a comprender mejor las bases
estructurales y Función funcional de las interfaces de dimerización y su variabilidad
entre diferentes GPCR.

Estudios biofísicos complementarios de dinámica conformacional

en GPCRs.
Como se mencionó anteriormente, la dinámica de activación de GPCR se caracteriza
por un complejo equilibrio entre múltiples estados conformacionales (94, 95), que se
manifiesta en niveles basales significativos actividad, existencia de moduladores
alostéricos (68, 96) y todo un espectro de funcional
Respuestas incluyendo señalización sesgada (69). La comprensión de estos
fenómenos requiere una capacidad de sondear el equilibrio entre diferentes
conformaciones, que está más allá de lo capacidades de los métodos cristalográficos
que dan una imagen muy detallada, pero "congelada" de
El estado receptor de menor energía. Varios enfoques biofísicos han mostrado utilidad
en evaluación de cambios conformacionales locales y globales en GPCR, incluyendo
fluorescentes espectroscopia (94, 97, 98), doble electrón-electrón resonancia (DEER)
(99), hidrogendeuterim intercambio acoplado con espectrometría de masas (HDX-
MS) (100–102) y nuclear
Espectroscopia de resonancia magnética (RMN) (103, 104). También se están
desarrollando métodos para evaluar la cinética de los cambios en los GPCR utilizando
estudios de molécula única de resolución temporal (105, 106).
La disponibilidad de estructuras 3D ahora permite el diseño de sitios de etiquetado
optimizados y
Proporciona un marco estructural para el análisis de los datos obtenidos. Así, 13C
NMR la espectroscopia se ha empleado para evaluar los cambios conformacionales
dependientes de ligando en la
Región extracelular mediante la medición de la formación de un puente de sal que
conecta los bucles extracelulares
2 y 3 (103), previamente encontrados en la estructura cristalina β2AR (27). Otra
técnica de RMN que se ha utilizado para sondear la dinámica de los cambios
intracelulares en los espectros de explotaciones β2AR de etiquetas sensibles 19F
(104). En particular, los espectros de 19F RMN sugirieron que las hélices VI y VII cada
uno puede adoptar al menos dos estados conformacionales principales que tienen un
lento (> 100 ms) tipo de cambio (figura 8). La distribución de equilibrio entre estos
estados es controlada por unión del ligando: mientras que los antagonistas y los
agonistas inversos mantienen β2AR en un predominantemente estado inactivo, la
unión de agonistas parciales, y especialmente completos, cambia el conformacional
equilibrio hacia un estado activo tanto en la hélice VI como en la hélice VII.
Lo más llamativo se observó un efecto diferencial para los ligandos βAR cargados con
arrestina carvedilol y isoetharine, que mostró un aumento espectacular (> 40%) en la
ocupación de la hélice VII
Estado activado en comparación con sus análogos no cares carazolol e isoproterenol.
Estas los resultados demuestran al menos una disociación parcial entre los cambios
conformacionales en las hélices
VI y VII, y una asociación específica de los cambios de la hélice VII con la señalización
sesgada por la detención de
Carvedilol e isoetharine. Como se describe aquí, la asociación de la hélice VII con
arresto sesgada
La señalización también está respaldada por estudios recientes de FRET (107),
interacciones clave de la detención con la parte C-terminal de los GPCR adyacentes
a la hélice VII (108), así como la falta de proteína G contactos con la hélice VII en la
estructura del complejo β2AR-Gαβγ (21).
Se pueden obtener conocimientos complementarios de la función GPCR mediante
modelado molecular. Enfoques, incluidos el muestreo conformacional y el
acoplamiento de ligando-receptor flexible (71,
72). Además, gracias a un rápido crecimiento de la potencia del ordenador y la
paralelización, imparcial
Las simulaciones de dinámica molecular a una escala de ~ 10 microsegundos han
permitido observaciones de grandes cambios conformacionales, es decir,
transiciones activas a inactivas en β2AR (109) así como
Predicción de rutas de unión de ligandos y cinética (110).
Otros estudios estructurales, biofísicos y computacionales de la dinámica de
receptores, que incluyen
Los estudios de una sola molécula resueltos en el tiempo ayudarán a caracterizar la
relación entre diversos estados de activación y subestados en diferentes GPCR, y
estudiar las posibilidades de Modulación selectiva de estos estados por ligandos
"sesgados" y / o alostéricos.

Puntos de resumen

1. Con los recientes avances en la cristalografía GPCR, la cobertura estructural de

GPCR ha experimentado una tendencia de crecimiento exponencial, lo que sugiere
que los receptores de la mayoría de las subfamilias se resolverán en la próxima
década.
2. Las estructuras de cristal de los GPCR en estado inactivo y activo proporcionan un
nivel atómico 3D Marco para consultas bioquímicas, biofísicas y computacionales en
GPCR Función y dinámica.
3. Todos los GPCR tienen una topología 7TM común, sin embargo, presentan una
gran variedad de Características en su estructura, dinámica, selectividad a ligandos,
moduladores y Detectores de señalización aguas abajo. Mientras que las mayores
diferencias estructurales pueden ser Se encuentran entre las clases y subfamilias de
GPCR, estructuras de los receptores opioides revela importantes desviaciones
estructurales dentro de la subfamilia, incluso a una secuencia del 60% identidad.
4. Los mecanismos de activación en GPCR comparten una serie de características
comunes, que incluyen movimientos de hélices, microinterruptores de cadena lateral
y posibles reordenamientos en el grupo Na + / agua. Los cambios en el lado
intracelular se acoplan suavemente al ligando unión a través de una serie de
contactos ligando-receptor de anclaje (o "desencadenantes"). Un conjunto Los
desencadenantes específicos pueden variar entre los ligandos y entre los diferentes
GPCR. El compromiso preferencial de "desencadenantes" específicos por ligandos
estructuralmente distintos puede explicar la variedad de respuestas conformacionales
y funcionales conocidas como “sesgadas señalización."
5. Homodimerización, heterodimerización y oligomerización han sido sugeridas en
Regulación de GPCR y diafonía. Mientras que la cristalografía revela varios distintos
interfaces homodimer, se necesitan estudios bioquímicos adicionales para entender
Sus roles funcionales en diferentes GPCRs.
6. Las estructuras de cristal proporcionan nuevos conocimientos sobre la regulación
alostérica de los GPCR mediante iones endógenos (por ejemplo, sodio), lípidos,
colesterol y polipéptidos, así como por
Moléculas sintéticas, que pueden modular la función GPCR y farmacológica.
Respuesta. Estos descubrimientos resaltan que los GPCR son máquinas alostéricas
complejas,
Controlado por algo más que su ligando farmacológico.
7. El modelado por computadora tiene un papel importante en la creación de una
imagen completa de
Función de estructura de GPCR al llenar las brechas restantes en la cobertura de la
superfamilia y interacciones moleculares, y proporcionar una plataforma para el
descubrimiento racional de fármacos.

Direcciones futuras

1. Determine las estructuras representativas para los grupos β y δ de la familia

Rhodopsin, como así como para las otras familias de GPCR (secretina, adhesión,
glutamato, frizzled / TAS2),
En complejo con antagonistas y agonistas.
2. Aumentar la cobertura estructural dentro de subfamilias GPCR específicas a través
de la estructura
Determinación y modelación de homologías.
3. Explorar más a fondo la dinámica de GPCR mediante la combinación de elementos
estructurales y biofísicos. Herramientas (por ejemplo, HDX, RMN, EPR) que incluyen
enfoques de molécula única resueltos en el tiempo, así como la dinámica molecular.
4. Explorar las bases estructurales de la proteína G y la selectividad del tipo β-
arrestina.
5. Obtener estructuras de complejos GPCR con moduladores alostéricos.
6. Mejorar nuestra comprensión de la señalización sesgada a través de estructurales
y biofísicos estudios.
7. Aplicar el conocimiento estructural para el descubrimiento exitoso de fármacos
basados en estructuras.

Movimientos de las hélices TM: ¿cuerpo rígido o no?

Los reordenamientos globales de las hélices transmembrana durante la activación son a

menudo Aproximados como movimientos corporales rígidos (18). Comparación de hélices
individuales en cristal. Las estructuras de los GPCR inactivos y activos muestran ejemplos de
deformaciones locales en las hélices,durante la activación una de las más pronunciadas es
una torcedura en torno a la altamente conservada. Pro6.50 en hélice VI. Una superposición
de la parte extracelular de la hélice VI inactiva y Las estructuras activadas (ver ejemplo de
β2AR en la Figura 5) revelan una activación relacionada con Movimiento de "balanceo" de la
parte intracelular de la hélice VI, que implica un poco de desenrollamiento. De la hélice en la
curva Pro6.50. Flexión elástica adicional de la punta intracelular de la hélice VI. En el área de
contacto con la proteína G o la proteína G que imita a nadie, es evidente a partir de la
estructuras, lo que sugiere una fuerza aplicada en esta región por la proteína G o la inserción
de nanocuerpo. Por el contrario, en A2AAR / complejo agonista, o en rodopsina / opsina unida
a Gα C-terminal péptido, las puntas intracelulares de las hélices V y VI están rectas o
ligeramente dobladas en el Dirección opuesta al movimiento helicoidal general (19).
Figure 1.
Dendrograma de la superfamilia del GPCR humano con las estructuras cristalinas
resueltas. El árbol basado en la similitud de secuencia en el dominio de siete
transmembrana se redibuja desde (2).
Según esta notación, los GPCR humanos incluyen la Clase A (familia Rhodpsin), la
Clase B (Familias secretoras y de adhesión), Clase C (Familia glutamato) y Familia
Frizzled / TAS2.
La familia Rhodopsin se divide en Grupos (α-γ). Los GPCR pueden ser aún más
provisionales divididos en grupos (por ejemplo, aminérgicos), subfamilias (por
ejemplo, adrenérgicas u opioides) e individuales Subtipos de GPCR (por ejemplo,
subtipo D3 del receptor de dopamina). Los receptores olfativos comprenden la el
grupo más grande de 388 receptores (solo se muestran 4 subtipos) en el grupo de la
Clase A (Familia Rhodopsin) de GPCRs.
Figure 2.
Diversidad de los bolsillos de unión al ligando en los GPCR. Los bolsillos se muestran
como superficies moleculares para Estructuras de GPCR de estado inactivo
disponibles en complejo con antagonistas correspondientes.
Las orientaciones de los receptores y los planos de recorte de la superficie son los
mismos para todos los receptores. Pares de Subtipos de GPCR estrechamente
relacionados con bolsillos similares se resaltan con marcos de colores.
Figure 3.
Intermedios clave en el mecanismo de activación de GPCR, caracterizados
cristalográficamente (ver
Tabla 1 para códigos y referencias de PDB): R representa estados inactivos (tierra),
que pueden ser
Estabilizado por la unión de agonistas o antagonistas inversos. R 'representa baja
afinidad inactiva estados unidos a agonistas, que difieren de R por solo pequeños
cambios locales en el receptor bolsillo de encuadernación. R '' representa el (los)
estado (s) activado (s), caracterizado por sustanciales
Reorganización de las hélices y microinterruptores de cadena lateral en el lado
intracelular que exponen, al menos parcialmente, la grieta de unión a la proteína G.
R * representa subestados activados con inicial Inserción de la α-hélice C-terminal de
la proteína G (o su mímico sustituto g) en el intracelular (IC). Finalmente, R * G es
una conformación de señalización de proteína G distinta de un receptor, que se puede
lograr con el compromiso completo y la activación del complejo GPCR-Gαβγ. Otro
también es probable que existan estados activos conformacionalmente distintos (no
representados), por ejemplo para GPCR
Unión a las proteínas quinasas receptoras G (R * GRK) ya la β-arrestina (R * A).
Tenga en cuenta que la transición desde la unión inicial a la proteína G (R *) hasta el
estado completo de señalización R * G se acompaña de la liberación de
PIB y, por tanto, procede unidireccionalmente; posterior retorno a los estados de pre-
señalización requiere la disociación del complejo de proteínas y la unión de una nueva
unidad de Gαβγ-GDP a la receptor.

Figure 4.
Principales reordenamientos conformacionales y desencadenantes dependientes de
ligando en los tres disponibles modelos estructurales de activación de GPCR. a) Vista
intracelular: desplazamientos comunes de las puntas intracelulares de las hélices
transmembrana (flechas amarillas), incluyen el balanceo hacia afuera de la hélice VI,
acompañada por el movimiento de la hélice V, así como el desplazamiento hacia el
interior de la hélice VII y desplazamiento axial de la hélice III. Los microinterruptores
conservados establecidos, mostrados por palo.
Presentaciones y rotulados, sufren cambios de rotámero al activarse. b) Vista
extracelular: los "desencadenantes" dependientes de ligando de la activación de
GPCR (resaltados por la forma magenta) flechas) encontradas en el sitio ortostérico.
Tenga en cuenta que los residuos de disparo y su Ballesteros. Las posiciones de
Weinstein no se conservan entre estos receptores, y las direcciones de los cambios
helicoidales son diferentes. Los ligandos se muestran mediante líneas finas con
carbonos negros para todos antagonistas (ZM241385, 11-cis retinal y carazolol,
respectivamente) y carbonos de colores para agonistas (NECA, retinal todo trans y
BI-167107 de color naranja, púrpura y verde, respectivamente). En todos los paneles,
las conformaciones inactivas se muestran en gris, y las correspondientes
Las conformaciones activadas son de color naranja para A2AAR, códigos PDB 3EML
(45) y 3QAK
(19), púrpura para Rhodopsin, códigos PDB 1GZM (114) y 2X72 (17), y verde para
β2AR,
Códigos PDB 2RH1 (27) y 3SN6 (21).

Figure 5.
a) Estructura del complejo β2AR con el agonista BI167107 y el heterotrímero de la
proteína G (PDB código 3SN6) (21). El receptor y la proteína G se muestran mediante
cintas de colores, mientras que
El agonista es ilustrado por esferas con átomos de carbono de color amarillo.
Estabilizando a nadie y La lisozima T4 utilizada para la cristalización no se muestra
por claridad. b) Cambios conformacionales en hélice VI tras la activación de β2AR.
Estructuras de R inactivo (código PDR 2RH1, gris) (27),
R * G unido a nanocuerpo (código 3P0G de PDB, amarillo) (22) y R * G unido a
proteína G (código PDB Los estados 3SN6, naranja) (21) están superpuestos en la
parte extracelular de la hélice anterior Pro2886.50, enmarcado por rectángulo azul.
Mientras que el ángulo de curvatura de la torcedura inducida por Pro6.50 es
mantenido, el movimiento de Phe2826.44 estabilizado por ligando desenrolla el
Pro6.50 torcedura, resultando en un movimiento de balanceo (inclinación y rotación
combinadas) de la porción intracelular de hélice VI. Tenga en cuenta también que el
movimiento de la parte intracelular no se puede describir completamente en
Los términos de cuerpo rígido, pero muestra un comportamiento elástico sustancial.
Esta curva adicional y
el desplazamiento de la punta de la hélice VI es aparentemente inducido por la
inserción de la proteína G o
No imitar a nadie.
Figure 6.
Sitios alostéricos en la estructura A2AAR inactiva de alta resolución (cinta azul y
cadenas laterales) (57), en comparación con el complejo A2AAR de estado activo
(cinta amarilla) (19).
(a) Altamente conservado en la Clase A GPCR es un sitio alostérico en medio del
paquete transmembrana.
Se observa un grupo de Na + / agua en el estado inactivo, pero el bolsillo colapsado
en el activo El estado excluye la unión de Na +.
(b) La unión apretada de un agua estructurada en una torsión sin prolina en La hélice
III de A2AAR, se suprime en el estado activo, donde la hélice III se endereza (amarillo
cinta).
(c) Dos moléculas de colesterol (Clr2 y Clr3) emparedan el anillo de fenol de
Phe2556.57 cerca del bolsillo de unión y estabilizar la conformación del
Parte extracelular de la hélice VI
Figure 7.
Dos tipos principales de interfaces de dímeros simétricos observados en estructuras
GPCR. Una se muestra la estructura representativa de la interfaz de dímero A con
contactos a través de las hélices I, II, VIII Aquí para κ-opioide, código PDB 3DJH (36)
(naranja y magenta muestran el receptor, el JDTic El ligando se muestra mediante
esferas con carbonos blancos). La interfaz A también se ha observado dentro de
Estructuras μ-opioides, rodopsina y opsinas. Otro grupo de interfaces dímero B
involucra contactos a través de las hélices IV, V, VI (cian y amarillo) y se muestra aquí
para el complejo CXCR4 con antagonista peptídico código PDB 3OE0 (33).
Orientación similar de subunidades también ha sido observado en la estructura
opioide μ, código PDB 3DKL (34), con una extensa interfaz formada a través de las
hélices V y VI.

Figure 8.

Los experimentos de RMN arrojan luz sobre las principales vías de señalización en
β2AR (104). (a) 19F NMR los espectros sugieren la existencia de al menos dos
estados distintos en Cys265 (Helix VI) y Cys327 (Helix VII). El equilibrio en cada hélice
está regulado diferencialmente por un agonista (isoproterenol), agonista inverso
(carazolol), agonista predispuesto a la arrestina (isoetharine) y predispuesto a la
detención antagonista (carvedilol). (b) Efecto diferencial sugerido de imparcial (fila
superior) y ligandos sesgados (fila inferior) de señalización mediada por la proteína G
y mediada por la β-arrestina. Las hélices V / VI y III / VII de β2AR se muestran como
dos conjuntos de cajas dobladas, de las cuales la mayoría Los estados altamente
ocupados se muestran en gris oscuro, los estados menos ocupados en gris claro, y
Estados mínimamente ocupados enmarcados con una línea de puntos. Las flechas
en la parte inferior indican la el flujo de señales a través de cada hélice hacia el efector
corriente abajo correspondiente, con una número creciente de signos más (+) que
indican niveles más altos de señalización y un signo menos (-) que indica señalización
reducida, en comparación con el nivel basal.Katritch et al. Page 27