Manual de Virología

Facultad QFB. Laboratorio de Microbiología IV.
AUTORES DEL MANUAL DE MICROBIOLOGÍA IV.
QFB. RICARDO VEGA TAVERA
MSP. PATRICIA YAZMÍN FIGUEROA CHÁVEZ
MC. JUDITH AYALA GARCÍA
PROFESORES TITULARES DE LA MATERIA.
QFB. JORGE OCTAVIO AVILA RAMIREZ.
QFB. RICARDO VEGA TAVERA
DC. JUAN MANUEL SÁNCHEZ YAÑEZ
QFB. ROSA EDITH ZAVALA VIVANCO
QFB. ODALINDA ARREYGUE MÉNDEZ
QFB. HÉCTOR MANUEL GALLEGOS LÓPEZ
QFB. TELLITUD HILARIO SOSA RUIZ
Fecha de última actualización: Agosto de 2017
Morelia, Mich.
Vega, R; Figueroa, P; Ayala, J Página 1

INDICE.
I.- INTRODUCCIÓN Página

1.1 Normas a seguir en el laboratorio de Microbiología IV (Virología) 3
1.2 Objetivo del manual 5
1.3 Importancia del laboratorio de Virología 6
1.4 Bioseguridad en el laboratorio de Virología 12
1.5 Generalidades de los virus 14
II.- DESARROLLO DE PRÁCTICAS
2.1 Infecciones respiratorias de origen viral 16
2.2 Infecciones gastrointestinales de origen viral 20
2.3 Infecciones de transmisión sexual (Retrovirus y Hepatitis virales) 24
2.3.1. Determinación del Virus de Inmunodeficiencia Humana (VIH) 24
2.3.2. Determinación del virus de la Hepatitis B 30
2.4 Virosis emergentes y re-emergentes (Dengue) 34
BIBLIOGRAFÍA 38
INDICE DE TABLAS.
Tabla 1. Contribuciones del diágnostico virológico. (Guadalupe Carballal, 2014) 6

Tabla 2. Técnicas de diagnóstico usadas en virología clínica. (Luis Fidel Avendaño, 2011) 10
Tabla 3. Niveles de bioseguridad de los Laboratorios. (BSL). (Guadalupe Carballal, 2014) 12
Tabla 4. Propiedades y clasificación de los virus. (Murray 2013) 14
Tabla 5. Caracteristicas de las enfermedades diarreicas producidas por virus.
20
(Guadalupe Carballal, 2014)
INDICE DE FIGURAS.
Figura 1. Infección viral aguda: métodos directos e indirectos de diagnóstico. El día 0

7
indica el comienzo de los síntomas. (Guadalupe Carballal, 2014)…
INDICE DE IMAGENES.
Imagen1. Instrucciones de extracción de muestra con hisopo. Fuente: Instrucciones del kit de
18
prueba SD BIO-LINE Influenza Antigen.
Imagen 2. Instrucciones de extracción de muestra por aspiración. Fuente: Instrucciones del kit de
18
prueba SD BIO-LINE Influenza Antigen.
Imagen 3. Interpretación de los resultados. Fuente: Instrucciones del kit de prueba SD BIO-LINE
19
Influenza Antigen.

Imagen 4. Instrucciones de uso del kit ROTA-ADENO. Fuente: Instructivo del Kit de
22
Diagnóstico.
Imagen 5. Interpretación de resultados del kit ROTA-ADENO. Fuente: Instructivo del Kit de 22
Diagnóstico.
Imagen 6. Instrucciones para colocar la muestra de suero o plasma en el pozo de muestra. Fuente:
27
Instructivo del Kit diagnóstico de SD BIOLINE HIV-1/2 3.0
Imagen 7. Instrucciones para colocar la muestra de sangre total en el pozo de muestra. Fuente:
Instructivo del Kit diagnóstico de SD BIOLINE HIV-1/2 3.0
27
Imagen 8. Interpretación de resultados. Fuente: Instructivo del Kit diagnóstico de SD BIOLINE HIV-
1/2 3.0
28
Imagen 9. Forma de color la muestra de suero o plasma. Fuente: Instructivo del Kit diagnóstico de
SD BIOLINE HBsAg
32
Imagen 10. Forma de colocar la muestra de sangre total. Fuente: Instructivo del Kit diagnóstico de
SD BIOLINE HBsAg.
32
Imagen 11. Interpretación de resultados. Fuente: Instructivo del Kit diagnóstico de SD BIOLINE
HBsAg.
32
Imagen 12. Instrucciones para colocar la muestra. Fuente: ONE Step Dengue IgG/IgM Antibody
Test.
36
Imagen 13. Interpretación de resultados. Fuente: ONE Step Dengue IgG/IgM Antibody Test 36

I.- INTRODUCCIÓN
1.1 NORMAS A SEGUIR EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA IV

(VIROLOGÍA)
Para que las prácticas se desarrollen adecuadamente y con éxito se deben seguir
las siguientes indicaciones:
1. El alumno debe llegar 5 min antes de la práctica y tendrá 5 minutos de

tolerancia, después de los cuales no podrá entrar al laboratorio. Dos retardos
equivalen a una falta.
2. El alumno que falte a una sesión, no tendrá reposición a la misma. (Si se

presenta justificante debe ser expedido por la dirección en un plazo no mayor a
diez días hábiles de haber faltado).
3. El alumno debe traer el material según se haya indicado en la práctica anterior;

sin él no podrá trabajar. (Si no se cumple con estos requisitos no podrá ingresar al
laboratorio).
4. Antes de ingresar al laboratorio el alumno debe leer el texto de cada práctica a

realizar. Debe presentar un fundamento de media cuartilla y también realizar un
diagrama de bloques de la metodología a seguir. Nota: Aspectos a considerar
para el acceso a la práctica.
5. El alumno debe traer bata blanca, mantenerla siempre abotonada dentro del
laboratorio. Al final de cada práctica, debe retirarla y guardar.
6. Sobre las mesas de trabajo no se debe poner libros, cuadernos, mochilas; las
mochilas tienen su espacio y los libros o cuadernos pueden colocarlos en el área
de arriba de las mismas mesas.
7. Durante el desarrollo de la práctica, queda estrictamente prohibido la entrada

de personas ajenas al grupo, el uso de celulares y/o de cualquier otro distractor.
8. Dentro del laboratorio se debe guardar el comportamiento y vocabulario

adecuado. Debe dirigirse en todo momento con respeto a su Profesor y a sus
compañeros de clase.

9. Por razones de Bioseguridad, queda estrictamente prohibido beber, comer,

masticar chicle o fumar dentro del laboratorio.
10. Si al término de la práctica, se generaron diversos desechos biológicos, estos

deben colocarse en los contenedores correspondientes.
11. El material que es reutilizable, será depositado en recipientes con

desinfectante para su posterior lavado.
12. El alumno debe anotar las observaciones de cada una de las prácticas, y
debe completar y/o contestar las preguntas según corresponda.
13. Una vez concluida la práctica, los integrantes del equipo se harán
responsables de limpiar y desinfectar el área de trabajo y adicionalmente deben
de regresar el material de laboratorio que se le haya proporcionado para realizar
la práctica y revisar que los bancos estén arriba de las mesas.

1.2 OBJETIVO DEL LABORATORIO DE VIROLOGIA
El alumno conocerá el fundamento y desarrollará algunas técnicas aplicadas en

virología además de utilizar las diferentes metodologías que existen para el
diagnóstico de enfermedades causadas por virus.

1.3 LA IMPORTANCIA DEL LABORATORIO DE LAS INFECCIONES VIRALES
El laboratorio de Virología ha aumentado su demanda en los últimos años de manera

espectacular, gracias a este crecimiento se da la introducción de los fármacos antivirales
específicos, la disponibilidad comercial de los reactivos para el diagnóstico rápido por
métodos convencionales como la microscopia fluorescente y los enzimoinmunoanálisis,
disponibilidad de líneas celulares para el procedimiento de cultivos celulares, la
introducción de la PCR en tiempo real para la detección de los genomas virales. 1
El diagnóstico es fundamental para decidir una intervención terapéutica, establecer el

pronóstico en la evaluación de un paciente, en el monitoreo de la respuesta a tratamientos
antivirales específicos, las vacunaciones y desde un punto de vista epidemiológico para
adoptar medidas de Salud Pública en la comunidad.2
La salud pública ha establecido que las enfermedades infecciosas representan un tercio

de las causas de muerte en el mundo; de las cuales las más importantes son: VIH,
hepatitis, VSR, rotavirus, sarampión, dengue, entre otras, a pesar de que se han
desarrollado vacunas y antivirales contra algunas de ellas.
Tabla 1. Contribuciones del diágnostico virológico. (Guadalupe Carballal, 2014)
El diagnóstico virológico comprende la detección e identificación del agente etiológico de

una infección viral, ya sea clínica o inaparente y/o la respuesta inmune específica del
huésped.

Para el diagnóstico se debe de tener en cuenta: la Historia clínica, la edad, los

antecedentes de la enfermedad; el contexto epidemiológico relativo a contactos cercanos
y de la zona geográfica; el uso previo de vacunas y los elementos del examen físico que
orienten a la determinación del virus a investigar. Así mismo revisar la patogenia de la
infección viral (figura 1), el período de incubación, los sitios de excreción y la duración de
la misma, así como los órganos blanco del virus que se estudia, con la finalidad de
orientar el diagnóstico.
Figura 1. Infección viral aguda: métodos directos e indirectos de diagnóstico. El día 0 indica el
comienzo de los síntomas. (Guadalupe Carballal, 2014).
El periodo de incubación es variado, en la mayoría de las infecciones virales es alredor de

días, en el caso de las diarreas que es de 24 a 48 horas y en el caso de la rabia puede
manifestarse tras una año de incubación. Luego aparecen los síntomas, en esta etapa, el
virus se está replicando activamente y por esta razón pueden emplearse métodos directos
(aislamientos en cultivo, detección de antígenos virales, microscopía electrónica y
métodos moleculares) 2 con la finalidad de diagnosticar el agente infeccioso.
1.3.1 SELECCIÓN Y OBTENCIÓN DE MUESTRAS.
La calidad de la muestra es crucial para el buen diagnóstico virológico, antes de realizar la

toma de muestra; se debe de tener en cuenta de que tipo de virus se sospecha, para así
mismo poder obtener la mejor muestra ya sea fluido, secreciones o tejido más

representativo, incluso si este ya no es detectable, se tiene que evaluar la etapa de

respuesta del sistema inmunológico.
Al momento de realizar la toma de muestra, todos los fluidos biológicos son

potencialmente infecciosos, por lo que el personal encargado debe de extremar las
precauciones durante la obtención de la misma.
Los tipos de muestra más comunes son:
 Aspirados y lavados broncoalveolares.

 Cepillados de dracón o plástico.
 Deposiciones. (hisopados rectales).
 Sangre (Total, suero, plasma, paquete globular).
 LCR.
 Orina.
 Médula ósea.
 Lesión de piel y mucosas.
 Biopsias y tejidos.
Una vez que se obtiene la muestra para la detección de virus, lo ideal es que se procese
de inmediato.
1.3.2. MEDIOS DE TRANSPORTE MÁS UTILIZADOS EN EL LABORATORIO DE

VIROLOGÍA.
Los medios de transporte de virus se utilizan para transportar volúmenes pequeños de

muestras líquidas, muestras pequeñas de tejidos, raspados y muestras obtenidas con
hisopos. Algunos medios de transporte contienen proteínas, como suero, albúmina o
gelatina, para la estabilización de los virus y algunos antimicrobianos para evitar el
desarrollo de bacterias y hongos. 3
Los medios de transporte más utilizados en el laboratorio de virología son:
• Medio de Eagle con 2% de Suero Fetal Bovino. (Hisopados, Biopsias,

Necropsias).
• Virocult con hisopos de dacrón ó nylon (Hisopados nasales y faríngeos).
• Solución de buffer de fosfatos (PBS) 0.01 M pH 7.2 estéril. (Biopsias,
Necropsias, Hisopados réctales).
• Medio de Stuart, medio de Amies.
• Solución salina equilibrada de Hanks (HBSS)
• Sueros con EDTA: 0.35 M pH 7.2 (detección de material genético).

• Universal viral transport. (sol. salina equilibrada, albumina bovina, cisteína,

gelatina, sacarosa y ácido glutámico, indicador de pH rojo de fenol y
antibioticos).
1.3.3. CONDICIONES DE ALMACENAMIENTO.
Las muestras para el aislamiento viral, no deben de estar a temperatura ambiente o más
alta. Deben colocarse en hielo y transportarse en seguida al laboratorio. Si por algún
motivo se retrasa la entrega de las muestras, estas deben refrigerarse, no congelarse,
hasta que tenga lugar el procesamiento.
El procesamiento de las muestras debe de ser dentro de las 24 horas de su obtención.

Cuando no es posible esto, se tienen que conservar a 4°C máximo 5 días, si la
conservación es superior a 6 días, se tiene que hacer a -20°C ó de preferencia a -70°C.
En todos los casos, la muestra debe de estar debidamente rotulada, es importante

también remitir al laboratorio con una orden médica que tenga la siguiente información:
Nombre del paciente, estudio solicitado, tipo de muestra enviada, breve historia clínica,
fecha de inicio de la enfermedad actual, fecha de la toma de la muestra, hora de la
obtención de la muestra y datos del médico tratante.
1.3.4. MÉTODOS DE LABORATORIO MÁS UTILIZADOS PARA LA DETECCIÓN DE

VIRUS.
Los virus se pueden identificar mediante diferentes estrategias como:
 Visualización directa en un fluido corporal o tejido a través de microscopia

electrónica.
 Observación de los cambios morfológicos sobre los tejidos infectados.
 Aislamiento viral en líneas celulares.
 Estudio de la secuencias nucleotídicas del genoma viral, que son únicas y propias
de cada virus a través de la aplicación de la Biología Molecular.
 Estudio de la respuesta inmune adquirida mediante la detección de IgM y/o IgG
específica contra un virus.
 Técnicas inmunes específicas que usan los cambios de color o fluorescencia como
señal amplificadora.
Actualmente los métodos de diagnóstico virológico más usados en la actualidad se

orientan a reducir los tiempos de entrega de resultados y al uso de técnicas relativamente
simples que puedan ser utilizadas en los laboratorios. Por eso hoy en día las técnicas más
utilizadas son las de inmunodiagnóstico y las de biología molecular.3

Las técnicas de inmunodiagnóstico permiten detectar el antígeno si se usa como

identificador un anticuerpo específico; sin embargo, este principio también se aplica a la
inversa, cuando el reactivo disponible es un antígeno viral que permite la identificación del
anticuerpo en el paciente. La elección de la modalidad depende de la pregunta que se
necesita responder y se pueden utilizar métodos directos o indirectos.4
Los métodos directos: Se basan en que un anticuerpo específico se dirige contra un

virus que tiene acoplado un marcador y sólo se puede usar para detectar el antígeno.
Los métodos indirectos: Se basa en que un anticuerpo específico (anticuerpo primario)

no está marcado y la formación del complejo antígeno-anticuerpo se evidencia mediante
la adición de un anticuerpo marcado (anticuerpo secundario); este método puede
emplearse para detectar tanto antígenos como anticuerpos. 3
Tabla 2. Técnicas de diagnóstico usadas en virología clínica. (Luis Fidel Avendaño, 2011)
Técnica Principales usos Ventajas Desventajas

Detección de antígenos: Permite evaluar la calidad Precauciones
Virus respiratorios, virus del de la muestra. Se puede estándar más
herpes simplex, varicela evaluar múltiples agentes a mascarilla, guantes y
zóster, citomegalovirus. partir de una muestra. pechera.
Inmunofluorescencia Detección de anticuerpos: Permite estudiar antígenos
IgA/IgG anti VCA VEB. y anticuerpos; tiempo Se requiere de un
IgM/IgG Parvovirus promedio de entrega de microscopio de
IgM/IgG Sarampión resultados es de 4 horas. epifluorescencia, se
necesita capacitación.
La sensibilidad y
especificidad pueden
Requiere de infraestructura variar.
Adecuados para estudios
simple, es de bajo costo, No se puede apreciar
Inmunocromatografía epidemiológicos como los
posible aplicar en el área la celularidad de una
censos serológicos.
de trabajo. muestra en la
detección de
antígenos.
Permite procesar en forma Costo variable, se
automatizada un gran requiere de personal
número de muestras. capacitado.
Detección de anticuerpos
Ensayos Permite estudiar antígenos No se puede apreciar
contra VIH, hepatitis A,B,C, E,
inmunoenzimáticos y anticuerpos. la celularidad de una
hantavirus
Ensayos de alta muestra en la
sensibilidad. detección de
antígenos.
Detección de ácidos Cualitativa. Detecta presencia Alta sensibilidad. Peligro de
nucleicos, Reacción o ausencia de genoma viral, Detecta virus no viables. contaminación y falsos
en cadena de la como herpesvirus en LCR Detecta genoma de ADN positivos.
polimerasa (PCR). después de largos periodos Su positividad no
Cuantitativa. Monitorización de conservación. significa virus vivo
de tratamiento en VIH, replicante.
hepatitis C, hepatitis B, CMV. Requiere de un
laboratorio con

infraestructura
destinada y personal
capacitado.
ACTIVIDADES.
Conteste las siguientes preguntas.
1.- Menciona los virus que más estragos provocan en la salud.
2.- Por su composición ¿Cómo se clasifican los virus?
3.- ¿Por qué es importante la epidemiología en esta área?
4.- ¿Cuáles son las características y funciones del medio de transporte universal viral
transport.?
5.- ¿Actualmente cuales son los métodos más utilizados para la detección de infecciones
virales?
6.- Menciona para cada sitio anatómico y enfermedad que se indican a continuación:
¿Cuál es la muestra de ideal para la detección de virus? y ¿Cuáles son los virus
patógenos habituales?
Tracto respiratorio, Tracto gastrointestinal, exantema maculopapular, exantema vesicular,

sistema nervioso central (meningitis aséptica, encefalitis), sangre.
7.- Menciona algunos ejemplos de técnicas que utilizan el método directo y el método
indirecto.
CONCLUSIONES.
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS (mínimo 2).

1.4 “LA BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO DE VIROLOGIA”
Los laboratorios de microbiología son lugares de trabajo especiales, que presentan

riesgos identificables de contagio de infecciones a personas dentro o cerca de ellos. A
pesar de que no hay sistemas organizados para la vigilancia de las infecciones adquiridas
en el laboratorio, la experiencia ha demostrado que las buenas prácticas de bioseguridad
reducen el riesgo de infección y el lugar de trabajo es más seguro y saludable. Para
reducir aún más el potencial de las infecciones adquiridas en el laboratorio, cada uno de
los laboratorios debe adoptar las Precauciones Universales como una guía mínima.
El termino bioseguridad es un concepto muy amplio y que dice: bioseguridad, es el

conjunto de normas diseñadas para la protección del individuo (personal de salud,
pacientes), de la comunidad y del medio ambiente contra el contacto accidental con
patógenos biológicos, químicos o elementos radioactivos.3
La Organización Mundial de la Salud (OMS) ha clasificado a los agentes biológicos de

acuerdo al riesgo que represente para el individuo que trabaja con ellos y para la
comunidad; por ello ha establecido 4 grupos de riesgo, y los ha clasificado en orden
creciente de peligrosidad.

Tabla 3. Niveles de bioseguridad de los Laboratorios. (BSL). (Guadalupe Carballal, 2014)
La clasificación de los agentes infecciosos se basan de acuerdo al riesgo que representan

para la salud humana y se debe aplicar en cada laboratorio según su capacidad para
manejarlos con seguridad, así mismo se puede decir: Grupo I, considerado de bajo riesgo
individual, Grupo II, de riesgo individual moderado, el Grupo III, de riesgo individual alto y
comunitario bajo y el Grupo IV de elevado riesgo individual y comunitario.
Los aspectos más importantes a tener en el procesamiento de las prácticas y técnicas de

laboratorio, debe de ser el cumplimiento estricto de las medidas de bioseguridad, tratar las
muestras y materiales que hayan tenido contacto como potencialmente infecciosos,
conocer el forma correcta de cómo se va a procesar, así como su disposición final.
Si el laboratorio donde se va a trabajar la muestra no tiene las medidas de seguridad

adecuadas lo recomendable es no procesar la muestra y enviar al laboratorio que cumpla
con los requisitos para su proceso.
ACTIVIDADES.
Contesta las siguientes preguntas.

1.- Menciona 3 ejemplos de virus que se puedan manipular en laboratorio de acuerdo con
el nivel de bioseguridad requerido.
2.- Escribe tu punto de vista del porqué es importante conocer los niveles de bioseguridad
en los laboratorios.
BIBLIOGRAFIA (mínimo dos)
1.5 “GENERALIDADES DE LOS VIRUS”
Los virus infectan a seres humanos, animales inferiores, insectos, plantas, bacterias y
hongos. Su clasificación y su nomenclatura son estandarizadas por el International
Committee on Taxonomy of Viruses. Los virus igual que las bacterias, se dividen en
género y especies. Los virus de importancia médica para los seres humanos comprenden
6 familias de virus de DNA y 14 familias de virus de RNA.4
Los virus son unos parásitos intracelulares obligados y para replicarse dependen de la
maquinaria bioquímica de la célula huésped. La replicación de los virus ocurre más por
ensamblaje de sus componentes individuales que por fisión binaria. 3
Los efectos que causan en el ser humano, se conoce desde la antigüedad,

particularmente porque son agentes transmisibles que han ocasionado grandes epidemias
y pandemias. Así, el primer aspecto que realza la importancia de los virus es medicina
humana es su patogenicidad, es decir la capacidad de producir enfermedades.
Los Virus
Propiedades Clasificación
 Son agentes filtrables  Estructura: tamaño, morfología y ácido
 Son parásitos intracelulares nucleico.
obligados.  Características bioquímicas: estructura y
 No son capaces de producir energía modo de replicación.
independientemente de la célula  Enfermedades: virus de la encefalitis y
huésped. virus de la hepatitis.
 Los genomas víricos pueden ser de  Modo de transmisión: insectos, aerosoles,
ARN o de ADN, pero no de ambos. contacto directo, entre otros.
 Los virus poseen una morfología de  Célula huésped: animal (ser humano,
cápside sin envoltura o con envoltura. ratón, pájaro), plantas, bacterias.
 Los componentes de los virus se
ensamblan y no se replican.
Tabla 4. Propiedades y clasificación de los virus, (Murray 2013)
El genoma de los virus está formado por ARN o por ADN. El ADN puede ser
monocatenario o bicatenario, lineal o circular. El ARN puede ser en sentido positivo (+)
(como el ARN mensajero [ARMm]) o de sentido negativo (-) (análogo al negativo de una
fotografía), de doble cadena (+/-) o de doble sentido (conteniendo regiones de ARN + y –
unidas extremo con extremo). Así mismo, el genoma del ARN puede estar segmentado o
en piezas (cada cuales codifica un gen específico). Existe otro grupo que requiere tanto
de ADN como de ARN en diferentes fases de su ciclo de replicación y en este grupo se
incluye a los retrovirus.
Los principales pasos de la replicación de los virus son los mismos para todos ellos, las
células actúan como una fábrica, proporcionando los sustratos, la energía y la maquinaria
necesaria para la síntesis de proteínas y la replicación del genoma. Durante la fase
precoz de la infección, el virus debe de reconocer la célula diana apropiada, adherirse a
ella, atravesar la membrana plasmática, ser captado por la célula, liberar su genoma
(desprenderse de él) en el citoplasma y si es preciso introducir el genoma al núcleo. 6 La
fase tardía empieza con el inicio de la replicación del genoma y la síntesis de
macromoléculas víricas, continuando con el ensamblaje, existiendo interacciones
continuas de las proteínas virales y celulares que son necesarias para dar lugar a la
infección productiva. En el ciclo replicativo se tiene el efecto citopático (ECP) es decir los
cambios bioquímicos, moleculares, morfológicos y de viabilidad celular visibles por
microscopía óptica, causados por el ciclo de la replicación viral. Los efectos citopáticos
que se pueden encontrar es: pérdida de adherencia al sustrato, agregación celular,
redondeamiento celular, formación de sincitios, cuerpos de inclusión citosólicos y
nucleares y cambios en la superficie celular.3 La naturaleza del material genético juega
un papel muy importante, como la replicación ocurre rápidamente ocasiona mutaciones y
puede llegar en ocasiones a la pérdida de la cobertura, esto ocurre durante la fase
replicación, ocasionando que el virus pierda carácter infeccioso y deja de ser una
estructura identificable y termina con la aparición de nuevos viriones tras el ensamblaje
del virus. En el periodo de latencia, durante el cual se detecta un virus infeccioso

extracelular incluye el periodo de eclipse y termina con la liberación de los virus, para
comenzar la enfermedad, también es posible que cada una de las células puede producir
hasta 100,000 partículas y tan solo del 1 al 10% llega hacer infeccioso.6
1.- Escribe las 6 familias de virus de ADN y las 14 familias de ARN asociadas a las
enfermedades humanas.
2.- Los dos mecanismos más frecuentes de penetración a la célula huésped son:
Conclusiones.
II.- DESARROLLO DE PRÁCTICAS.
2.1 PRACTICA NO. 1
“INFECCIONES RESPIRATORIAS DE ORIGEN VIRAL”
Las infecciones respiratorias agudas (IRAS) representan un problema para la salud

pública a nivel mundial; numerosos indicadores de mortalidad y morbilidad así lo
muestran. Las infecciones respiratorias virales son estacionales, pero en casos
esporádicos se pueden producir brotes nosocomiales durante todo el año. Las
enfermedades infecciosas de origen respiratorio representan un tercio de las causas de
muerte en el mundo y las infecciones respiratorias agudas ocupan el primer lugar dentro
de ellas. En México estas infecciones ocupan el séptimo lugar, al 14 de diciembre de
2015; la influenza la infección respiratoria más contagiosa que afecta nariz, garganta y
pulmones originando una enfermedad leve o grave que incluso, lleva a la muerte. Los
individuos en mayor riesgo de padecer IRA bajas son: los niños pequeños; ancianos;

pacientes con enfermedades crónicas e inmunosuprimidos, los datos oficiales indican que
más de 15 mil 700 pacientes pierden la vida al año por esta causa. 7
Las infecciones ocurren habitualmente por inhalación de aerosoles, secreciones

contaminadas, incluso la autoinoculación por manos contaminadas o por fómites. Los
virus respiratorios capaces de producir infecciones respiratorias son muchos como:
influenza, respiratorio sincicial, adenovirus, rinovirus, parainfluenza, bocavirus,
coronavirus HCo, entre otros.
Las IRA se clasifican en altas o bajas, según afecten al tracto respiratorio superior ó
inferior, las altas afectan los órganos ubicados por encima de la laringe y los cuadros
clínicos pueden ser rinitis, laringitis supraglótica, faringitis, sinusitis y otitis. Las IRA bajas
afectan los órganos ubicados por debajo de la laringe y los cuadros son: laringitis
subglótica, laringotraqueobronquitis, bronquitis, bronquiolitis y neumonía. 3,4
El diagnóstico de laboratorio de estas infecciones no permiten asegurar cuál es el agente

etiológico, ya que muchos de los virus pueden producir cuadros clínicos similares. El
diagnóstico y específico de las IRA de origen viral, disponible en la actualidad, tiene un
alto impacto en el manejo del paciente y en la prevención de la diseminación de estos
virus, es necesario el diagnóstico para:3
 Evitar el uso indiscriminado de antibióticos, que sean ineficaces, de alto costo y

que solamente contribuyen a aumentar la resistencia bacteriana.
 Para poder reducir hasta en un 50% el tiempo de estadía en el hospital.
 Reducir el empleo de otros procedimientos de diagnóstico innecesarios.
Actualemente existen diferentes métodos directos, entre ellos las pruebas rápidas de
distintas marcas; un ejemplo de ellas es la prueba rápida SD BIO LINE Antígeno de
Influenza, esta prueba es un ensayo inmunocromatográfico para la detección cualitativa y
diferencial de los antígenos del virus de la Influenza tipo A y tipo B obtenida directamente
de una secreción nasofaringea/nasal/garganta o de muestras nasofaringeas/nasales por
aspiración. El ensayo no está elaborado para la detección del antígeno del virus de la
influenza de tipo C. Las tiras de prueba de detección SD BIOLINE Antígeno Influenza
están recubiertas con anticuerpos monoclonales de ratón anti-influenza A y anti-influenza
B, respectivamente. Los anticuerpos especialmente seleccionados se utilizan como
materiales de detección los cuales permiten la detección de los antígenos de la influenza
de tipo A y tipo B directamente de la muestra nasal/garganta o muestras por aspiración
nasal/nasofaringeas, con un alto grado de precisión.8
Materiales.

 Prueba de un solo paso Antígeno de Influenza de tipo A & B. SD BIO-LINE

Influenza Antigen.
 Hisopos para la recolección de muestras.
 Diluyente.
 Equipo de seguridad.
Muestra.
Las muestras pueden ser:
 Hisopado faríngeo
 Hisopado nasofaríngeo
 Aspirado nasofaríngeo
 Hisopado nasal
 Aspirado nasal.
Metodología de trabajo.
1.- Todas las muestras con hisopo sin un medio de transporte deberán extraerse de
la siguiente manera:
 La tira de prueba y la muestra deben estar a temperatura ambiente, antes de

utilizar.
 Del diluyente extraer 300 µl y transferir a un tubo de ensayo limpio.
 Rotular el tubo con el nombre del paciente.
 Insertar el hisopo en el diluyente y homogeneizar varias veces, retirar el hisopo y
escurrir por las paredes del tubo.
 Insertar la tira de prueba en el tubo y esperar aproximadamente 15 min para
interpretar los resultados.
 Reportar el resultado de la prueba rápida.

Imagen1. Instrucciones de extracción de muestra con hisopo. Fuente: Instrucciones del kit de prueba SD
BIO-LINE Influenza Antigen.
2.- Muestras de aspirado nasal/nasofaríngeo ó que este colocadas en medios de

transporte por extracción directa.
 Tomar del diluyente 100µl de y colocar el un tubo de ensayo limpio.

 Rotular el tubo con los datos del paciente.
 De la muestra extraída tomar 100µl y colocar el tubo del diluyente, homogenizar
ambos.
 Insertar la tira de prueba en el tubo y esperar aproximadamente 15 min para
interpretar los resultados.
 Reportar el resultado de la prueba rápida.
Imagen 2. Instrucciones de extracción de muestra por aspiración. Fuente: Instrucciones del kit de prueba
SD BIO-LINE Influenza Antigen.
3.- INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS.

Imagen 3. Interpretación de los resultados. Fuente: Instrucciones del kit de prueba SD BIO-LINE Influenza
Antigen.
ACTIVIDADES.
 Realizar el diagrama de bloques de las indicaciones, las observaciones,

esquemas de todo lo realizado en el laboratorio.
 Realizar el esquema del resultado obtenido para el paciente analizado.
1.- ¿El virus de la influenza a que tipo de células afecta?
2.- ¿Cuáles son los datos epidemiológicos actuales del virus de la influenza?
3.- ¿Para la toma de la muestra es necesaria alguna condición del paciente?
4.- ¿Qué tipo de pruebas se pueden realizar para la confirmación del diagnóstico de la
influenza? Es decir métodos directos y métodos indirectos.
5.- Escribe el fundamento de los ensayo Inmunocromatográficos de tipo competitivo y de

tipo NO competitivo.
Conclusiones.
2.2 PRÁCTICA NO. 2
“INFECCIONES GASTROINTESTINALES DE ORIGEN VIRAL”

Las enfermedades diarreicas son conocidas desde la antigüedad como una de las causas
de morbi-mortalidad más frecuentes en humanos en todo el mundo. La Organización
Mundial de la Salud, reporta que las diarreas son responsables del 15 al 34% del total de
las muertes reportadas en los países en desarrollo, teniendo su mayor impacto en niños
menores de 5 de edad. El espectro clínico de la enfermedad diarreica es muy amplio,
abarcando desde infecciones asintomáticas hasta deshidratación grave y muerte. 3
Los virus identificados, denominados virus entéricos, incluyen además del virus Norwalk
(hoy conocido como norovirus) y rotavirus, a coronavirus, calicivirus, astrovirus y
parvovirus. Posteriormente se agregaron picornavirus, torovirus, picobirnavirus y el más
reciente es el bocavirus, sin embargo hasta el año 2010 son cuatro virus entéricos
universalmente reconocidos por su relevancia epidemiológica: rotavirus, calicivirus
humanos (norovirus), astrovirus y adenovirus entéricos.4
Los virus causantes de las enfermedades diarreicas presentan diferentes características

que pueden orientar y se observa en la siguiente tabla:
Tabla 5. Caracteristicas de las enfermedades diarreicas producidas por virus. (Guadalupe Carballal,
2014)
Rotavirus es la causa más frecuente de gastroenteritis severas en niños menores de dos

años y jóvenes, que ingresan en un centro hospitalario, también se ha observado en
adultos. Su mecanismo de transmisión es fecal-oral, sus principales síntomas de esta
gastroenteritis vírica son diarrea acuosa y vómitos. En ocasiones se presentan dolores de
cabeza, fiebre y dolor de estómago.4
Actualemente existen diferentes métodos directos, entre ellos las pruebas rápidas de
distintas marcas; Rota-Adenovirus Cassette es una prueba cualitativa
inmunocromatográfica para la determinación de Rotavirus y Adenovirus en muestras de
heces. En la membrana de la zona de resultados del test previamente se fijaron
anticuerpos monoclonales contra antígenos virales. Durante la prueba, la muestra
reacciona con los conjugados coloreados (anticuerpos monoclonales anti-rotavirus-
microesferas rojas y anticuerpos monoclonales anti-adenovirus-microesferas azules)

previamente secados en la tira de reactiva. Este complejo avanza por capilaridad a través
de la membrana del test. Para un resultado positivo de Rotavirus y/o Adenovirus los
anticuerpos específicos presentes en la membrana capturarán las partículas coloreadas
con antígenos. Pueden aparecer diferentes líneas de color en la zona de resultados
dependiendo del virus presente en la muestra. Estas líneas se usan para interpretar los
resultados de la prueba. Independientemente de que haya presencia o no de Rotavirus
y/o Adenovirus, la mezcla de conjugado va avanzando por la membrana hasta la región
de control donde se han inmovilizado anticuerpos y siempre aparecerá una línea de color
VERDE (línea de control). La presencia de esta línea se utiliza: 1) para verificar que el
volumen añadido ha sido suficiente, 2) que el flujo ha sido el apropiado; y 3) como control
interno de los reactivos.9
Materiales.
 Kit de diagnóstico para la detección de ROTA-ADENO.

 Diluyente de muestras.
Muestras.
 Materia fecal recolectada.

Preparación de las muestras.
1.- Materia fecal.
2.- Se debe desenroscar la cubierta y con ayuda del palito se toma una muestra de las
heces recogidas, si la muestra es líquida tomar 150µl de la misma con un pipeta e
introducir la muestra en el tubo para dilución.
3.- Cerrar el tubo que contiene la muestra y el diluyente. Agitar para facilitar la dispersión
de la muestra. No olvidar rotular el diluyente.
Preparación.
1.- Tener la muestra lista con el diluyente lista.

2.- Destapar la prueba rápida, colocar en un lugar plano.
3.- Rotular el cassette de prueba.
4.- Agregar 5 gotas de la muestra en el cassette de muestra para el diagnóstico de ROTA-

ADENO.
5.- Esperar aproximadamente de 10 – 15 minutos y leer los resultados.
Imagen 4. Instrucciones de uso del kit ROTA-ADENO. Fuente: Instructivo del Kit de Diagnóstico.
INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS.
Imagen 5. Interpretación de resultados del kit ROTA-ADENO. Fuente: Instructivo del Kit de
Diagnóstico.
ACTIVIDADES.

1. Describe las caracteristicas morfológicas y epidemiológicas de rotavirus, adenovirus,

astrovirus, HuCV (norovirus y sapovirus).
2. ¿Cuáles son los requisitos necesarios para aceptar una muestra para el diagnóstico
de Rotavirus y una vez aceptada como se debe almacenar?
3. Escribe las caracteristicas de los rotavirus de acuerdo al grupo en que se divide.
4. Describe el fundamento de la rotaforesis y ¿Quién la desarrollo?
5. ¿Cuál es el tratamiento de elección para las enfermedades gastrointestinales
causadas por Rotavirus.?
Conclusiones.
BIBLIOGRAFIA (mínimo dos) .
2.3 “INFECCIONES DE TRANSMISIÓN SEXUAL (RETROVIRUS VIH Y HEPATITIS

VIRALES)”

2.3.1 DETERMINACIÓN DEL VIRUS DE LA INMUNODEFICIENCIA HUMANA (VIH).
Los retrovirus son un ejemplo de la relevancia de los virus en medicina, porque

representan un problema prioritario de salud, son un modelo biológico particular, que ha
modificado el dogma de la biología molecular. La característica de la familia Retroviridae
es que son virus de ARN en sentido positivo y como parte de su estructura contienen una
transcriptasa reversa, enzima que le permite transcribir genoma de ARN a ADN. 3
Actualmente el VIH, es agrupado dentro del género Lentivirus, hasta el momento han sido
descritos dos tipos del virus de la inmunodeficiencia humana, el VIH-1 y el VIH-2. Ambos
se asocian con el SIDA, pero las infecciones por el VIH-1 se encuentran ampliamente
distribuidas y el VIH-2 se encuentra en la región de África Occidental, al sur del Sahara,
teniendo solo casos esporádicos en el resto del mundo. 3
El Síndrome de Inmunodeficiencia Adquirida (SIDA) representa la última etapa clínica de

la infección por el virus de la inmunodeficiencia humana. Según el resumen de la
Vigilancia epidemiológica del Registro Nacional de Casos de SIDA al 2do. Trimestres de
2015, en México, se tienen casos de SIDA notificados 176,730 en el periodo (1983-2015),
de los cuales el sexo que predomina es el hombre con un total de casos de 144,958
correspondiendo a un 82% y para las mujeres de 31,772 lo que corresponde a un 18% del
total de casos registrados.10
El curso de la infección viral por el VIH-1 tiene gran variación inter-individual, desde
meses a más de 10 años, el curso clínico de la infección se divide en tres fases: 1)
infección aguda primaria; 2) período de latencia clínica o fase crónica de la infección; 3)
fase sintomática del SIDA.
En la infección aguda primaria, una que el VIH-1 atravesó la piel y mucosas, las primeras
células blanco que encuentran son las células dendríticas de la mucosa epitelial, estas
van a transportar los virus a la región ganglionar. En el reclutamiento de las células T
CD4+ activadas, que simultáneamente y potencialmente son blancos de los virus,
teniendo diseminación local. Surgen una serie de eventos virológicos e inmunológicos que
reflejan la extensión de la diseminación viral. El periodo de la infección primaria abarca de
4 a 8 semanas. Durante las primeras semanas no se detectan anticuerpos específicos
contra el VIH-1 (periodo de ventana). Posteriormente se hace la detección de la respuesta
inmune humoral específica anti-VIH-1, durante la infección aguda primaria se produce una
caída transitoria de 10 a 100 veces el número absoluto de linfocitos T CD4 + en sangre
periférica eliminando a las células infectadas de la circulación. En general hay un drástico
descenso del virus en sangre periférica acompañado de un ascenso de linfocitos T CD4+.
También hay un aumento de linfocitos CD8+ en sangre periférica. Estos eventos
demuestran buena respuesta inmunológica pero sin lograr erradicar al virus. 4

Después de la seroconversión comienza el periodo de latencia clínica o periodo

asintomático, lo que antecede al inicio de la enfermedad o SIDA y llega a variar entre 1 a
15 ó más años. En esta fase el curso de la infección prosigue inadvertidamente,
sucediendo cambios virológicos y el gradual deterioro del sistema inmunitario. Durante el
periodo de latencia clínica se produce una reducción lenta y progresiva del número de
linfocitos T CD4+ y la carga viral en sangre se mantiene relativamente baja. En algunos
casos la reducción es más acelerada hasta el establecimiento del SIDA. 3,4 A medida que
progresa la infección viral la arquitectura ganglionar se va alterando y libera una mayor
cantidad de virus al torrente circulatorio. Cuando se produce este incremento de la
replicación viral con una marcada reducción de los linfocitos T CD4+ aparecen los
síntomas y signos, pasando a la etapa clínicamente sintomática.4
Las formas de transmisión del virus son las siguientes5:
 Transfusiones de sangre contaminada.

 Contacto sexual (heterosexual u homosexual).
 Intercambio de agujas hipodérmicas usadas por personas infectadas,
principalmente los drogadictos.
 Embarazo: la madre, si tiene el virus, lo trasmite al feto.
 Ingestión de la leche materna.
La determinación del diagnóstico de infección por retrovirus, en particular el del VHI en

adultos se basa en la detección de anticuerpos específicos en suero o plasma. Esto se
debe al tipo de infección que causa en el hospedador en la cual la presencia de
anticuerpos específicos anti-HIV no implican protección o resolución de la infección, si no
al contrario, infección presente. Existen diagnósticos específicos y sensibles para la
determinación del VIH, el kit SD. BIOLINE HIV-1/2 3.0, es una prueba rápida cualitativa
para la detección de anticuerpos para todos los tipo iso (IgG, IgM, IgA) específico a HIV-1
incluyendo el subtipo-0 y el HIV-2 simultáneamente en suero humano, plasma o sangre
total.
El antígeno HIV ½ recombinante (gp41, p24 y gp36), con el conjugado coloidal dorado y la
muestra se suero se desplazan a lo largo de la membrana cromatográficamente hasta
llegar a la región de prueba (T) y forman una línea visible del complejo antígeno-
anticuerpo-antígeno complejo coloidal dorado con un alto grado de sensibilidad y
especificidad. Las líneas de prueba y la línea controlen la ventana de resultados han sido
claramente etiquetados. La línea de control deberá aparecer siempre si se realiza el

procedimiento de prueba adecuadamente y si los reactivos de prueba en la línea de

control están funcionando correctamente.11
Materiales.
 Kit de diagnóstico para la detección de SD BIOLINE HIV-1/2 3.0

Muestras.
 Suero o plasma
 Sangre total.
1. Si la muestra está congelada, debe esperarse a que se descongele

completamente.
2. Si la muestra es suero o plasma, debe rotular con los datos del paciente.
3. Con cuidado se revisa el estuche de la prueba para verificar que este bien cerrada
así como la fecha de caducidad.
4. Antes de procesar las muestras deben de estar a temperatura ambiente.
5. Poner el cartucho de prueba en superficie plana y seca. Rotular con el número de
paciente y fecha.
6. Si la muestra es suero o plasma tomar con micropipeta la cantidad de 10 µl y
colocar en el pozo de muestra.
7. Adicionar 4 gotas del diluyente de ensayo (debe cuidar ponerlas verticalmente) en
el pozo de muestra.
8. Leer resultados en tiempo de entre 10 y 20 minutos, tras haber colocado el
diluyente. Nota el resultado lo puede leer después de los 10 minutos pero no
despúes de 20 minutos.

Imagen 6. Instrucciones para colocar la muestra de suero o plasma en el pozo de muestra

Fuente: Instructivo del Kit diagnóstico de SD BIOLINE HIV-1/2 3.0
Imagen 7. Instrucciones para colocar la muestra de sangre total en el pozo de muestra

Fuente: Instructivo del Kit diagnóstico de SD BIOLINE HIV-1/2 3.0
INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS.

Imagen 8. Interpretación de resultados. Fuente: Instructivo del Kit diagnóstico de SD BIOLINE HIV-1/2 3.0
ACTIVIDADES.


1.- ¿A cuál familia pertenece el VIH?
2.- ¿Qué tipo de material contiene el VIH?
3.- ¿Cuáles son las células blanco del VIH?
4.- Realiza el esquema del virus de inmunodeficiencia humana de tipo 1 (HIV-1), con
todos sus componentes virales.
5.- Explica ¿qué es seroconversión?
6.- Dibuja la curva natural de la infección por VIH-1.
7.- Menciona ¿cuáles son las técnicas que se pueden utilizar para el diagnóstico
confirmatorio de VIH y escribe una pequeña descripción de las técnicas?
Conclusiones.
BIBLIOGRAFÍA (mínimo dos).
2.3.2 DETERMINACIÓN DEL VIRUS DEL HEPATITIS B.

Los virus del Hepatitis son muchos, pertencen a varias familias y causan enfermedades
en los humanos. Se pueden transmitir de distinta forma y causar enfermedades con
distinta gravedad, la cual resulta de la destrucción de las células del hígado por la
replicación viral en este órgano blanco. En esta practica se raelizara la determinación del
virus hepatitis B, la envoltura del HBV es una estructura macromolecular compleja
constituida casi exclusivamente por lípidos deivados de la membrana interna de las
células afectadas, contiene carbohidratos y tres glicoproteínas virales relacionadas. La
proteína S, también conocida como antígeno de superficie del HBV (HBsAg) es una
proteína pequeña de 226 aa y es la más abundante de las tres casí en un 70%, de ahí su
importancia como antígeno principal, también contiene una fosfoproteína de 22 kDa que
constituyen el antígeno del core o HBcAg, asociada a la nucleocápside, donde se localiza
el DNA polimerasa viral. Su DNA es carácterístico e inusual, ya que se adopta una
configuración circular laxa, es parcialmente doble catenario y el más pequeño de los virus
de DNA. Su doble asimetria es lo que también lo distingue de la familia Hepadnaviridae 4,5
El virus de la hepatitis B (VHB) afecta a una gran parte de la población mundial,

actualmente es la causa principal de enfermedad hepática en el mundo, según datos
estimados de la OMS, existen más de 2 mil millones de personas es decir que 2 de cada
5 habitantes que estén infectados con el virus y alrededor de 300 millones son portadores
crónicos, se calcula que las secuelas producidas por este virus causan más de un millón
de muertes anuales. Recientemente, se demostró la importancia de la relación entre la
infección por VHB y la presencia de hepatitis crónica y carcinoma hepatocelular. También
se estima que el 20% de los portadores evolucionan hacia la cirrosis y alrededor de 0,5-
1% al cáncer hepatocelular primario.4
El diagnóstico de la hepatitis B por el laboratorio se basa en los criterios epidemiológicos,

clínicos y de laboratorio. El diagnóstico de certeza se obtiene mediante la detección de los
distintos antígenos virales y sus correspondientes anticuerpos: 1) HBsAG/ anti-HBs;
2)HBeAg/ anti-HBe y el 3) anti-HBc. Teniendo en cuenta que el HBc Ag sólo se puede
detectarse en los hepatocitos y no en suero porque no circula libre, sino rodeado de la
envoltura viral. Estos marcadores serológicos permiten establecer el estadio evolutivo de
la infección (aguda vs crónica).4,5
De los métodos que existen para la detección, están las pruebas rápidas como la SD
BIOLINE HBsAg, el cual es un análisis inmuno-cromatográfico de un solo paso diseñado
para la determinación cualitativa de HBsAg en suero o plasma humano. El Casete de
prueba contiene una tira de membrana que está pre-impregnada con anticuerpos de
captura de ratón monoclonales anti-HBs en la región de la banda de prueba. El conjugado
del oro coloidal de ratones monoclonales anti-HBs y la muestra del suero se mueve
cromatográficamente a lo largo de la membrana de prueba (T) y forma una línea visible
como una forma compleja de partículas de oro de anticuerpo-antígeno-anticuerpo. El
casete de prueba SD BIO-LINE HBsAg tiene una letra T y una C como línea de prueba y
línea control en la superficie. La línea de prueba se utiliza como control de calidad del
casete, esta deberá aparecer siempre si el procedimiento de la prueba se hizo
apropiadamente y si los reactivos están funcionando bien. La prueba SD BIOLINE HBs Ag
puede identificar HBsAG en muestras de plasma o suero con alto grado de sensibilidad.12
Materiales.
 Kit de diagnóstico para la detección de SD BIOLINE HBsAg

Muestras.
 Suero o plasma
 Sangre total.

completamente.
paciente y fecha.
7. Esperar 1 minuto antes de colocar el diluyente.
8. Adicionar 1 gota del diluyente de ensayo (debe ponerla verticalmente) en el pozo
de muestra.
9. Leer resultados a los 20 minutos, tras haber colocado el diluyente.

Imagen 9. Forma de color la muestra de suero o plasma. Fuente: Instructivo del Kit diagnóstico de SD
BIOLINE HBsAg
Imagen 10. Forma de colocar la muestra de sangre total. Fuente: Instructivo del Kit diagnóstico de SD
BIOLINE HBsAg
Imagen 11. Interpretación de resultados. Fuente: Instructivo del Kit diagnóstico de SD BIOLINE HBsAg

ACTIVIDADES.

1 ¿Cuáles son los 3 principales antígenos del virus del hepatitis B?
2 ¿Cuáles son los datos epidemiológicos actuales por el virus del hepatitis B?
3 ¿Porqué es importante conocer los diferentes antígenos virales?
4 ¿Cómo son las etapas de la infección?
5 ¿Cuáles son las técnicas más utilizadas en la actualidad para el diagnóstico del virus de
la hepatitis B?
Conclusiones.

2.4 PRÁCTICA NO. 4
“VIROSIS EMERGENTES Y RE-EMERGENTES DENGUE”
El dengue posee una extensión geográfica en zonas urbanas de los países tropicales
desarrollados, hoy en día, el dengue es considerado como una de las enfermedades
virales transmitidas más importantes en humanos en términos de morbilidad y
mortalidad.6 En México, una gran parte de la población se encuentra expuesta a la
infección, sobre todo en las zonas costeras, tanto del Golfo de México como en el Océano
Pacífico. Según los datos epidemiológicos al 4 de enero de 2016 de los casos de Fiebre
por Dengue y Fiebre Hemorrágica por Dengue, se registró que para la Fiebre por Dengue
casos confirmados fue de 21,201 y de Fiebre Hemorrágica por Dengue de casos
confirmados fue de 5,464, teniendo que el 50% de los casos confirmados corresponden a
Veracruz, Sonora, Jalisco, Guerrero y Michoacán. 13
Varios Flavivirus son transmitidos a los humanos por medio de mosquitos (vectores),
como en el caso del dengue, la fiebre amarilla, entre otros. La Fiebre del Dengue y el
Dengue hemorrágico (DH) son enfermedades febriles agudas, causadas por 4 tipos de
virus: DEN-1, DEN-2, DEN-3 o DEN-4, relacionados con los serotipos del género
Flavivirus de la familia Flaviviridae. En general, los Flavivirus poseen una estructura
uniforme, la envoltura del virion es ligeramente esférica y el nucleocápside contiene al
virion. La estructura de la partícula viral infecciosa del dengue es diferente; la superficie
viral es inusualmente lisa y la membrana está completamente lisa y la membrana está
cubierta por la proteína E. Su genoma está compuesto por RNA de cadena sencilla lineal,
de sentido positivo, de 10703 nucleótidos y de alta variabilidad genómica. El material
genético se encuentra protegido por una nucleocápside circular de simetría poliédrica, el
diámetro del núcleo es de 25-30nm. Entre la envoltura y el nucleocápside se encuentra
una bicapa lípidica, cuyos lípidos se derivan de la membrana celular del hospedero.
El virus se transmite a los humanos por el mosquito hembra denominado Aedes aegypti,
especie diurna, con mayor actividad al amanecer y durante la puesta de sol. Vive y
deposita sus huevos en los alrededores e interior de las casas, así como recipientes que
se utilizan para el almacenamiento de agua. 6
Las infecciones por Fiebre del Dengue o infecciones primarias, es el tipo más común de
las enfermedades del dengue. Se asocia con fiebre media o alta, dolor de cabeza, dolor
muscular y erupción cutánea. En cambio la Fiebre del Dengue Hemorrágico o infección
secundaria se presenta con fiebre alta y en muchos casos con eventos de hemorrágicos e
insuficiencia circulatoria. Los estudios de serología han demostrado que durante la
infección primaria, los anticuerpos IgM específicos del Dengue se muestran al quinto día
de la infección y permanece en circulación durante 30-60 días y los anticuerpos de IgG

aparecen desde los 14 días de la infección y permanecen de por vida. En cambio en la

Fiebre de Dengue Hemorrágica los niveles específicos de anticuerpos IgG e IgM
incrementan significativamente 1-2 días y al día 20 después de comenzar con la infección.
La importancia de estas diferencias permite hacer el diagnóstico diferencial.
Existen diferentes pruebas rápidas para la detección de los anticuerpos, el One Step
Dengue IgG/IgM Antibody test, es una de ellas y es un ensayo Inmunocromatográfico de
captura de anticuerpos para la detección simultánea y diferenciación de anticuerpos IgG e
IgM para el virus del dengue en muestras de suero humano, plasma y/o sangre entera,
antígenos específicos del virus del Dengue se conjugan con oro coloidal y se depositan en
la almohadilla de conjugado. Una combinación única de anticuerpos IgG e IgM anti-
humano se inmoviliza en la zona de prueba (T1 Y T2) de la membrana de nitrocelulosa,
como dos líneas de prueba individuales. La línea IgG (T1) en la ventana de prueba más
cerca del pozo de muestra y la línea de IgM (T2). Cuando se añade la muestra se
rehidrata el conjugado de oro-antígeno. Si anticuerpos de IgG y/o IgM de Dengue están
presentes en la muestra, interactúan con el antígeno conjugado de oro. El complejo
antígeno anticuerpo-oro va a migrar hacia la zona de prueba (T1 y T2), donde será
capturado por el IgG anti-humano (T1) y/o IgM anti-humano (T2) relevantes. Formando
una línea visible rosa, indicando un resultado positivo. Si los anticuerpos de dengue están
ausentes en la muestra, no aparecerá la línea rosa en la zona de prueba, teniendo un
resultado negativo. Como prueba de control interno debe solo aparecer la línea en la zona
(C) después de haber trascurrido el tiempo de lectura.14
Materiales.
 Kit de diagnóstico para la detección de ONE STEP DENGUE IgG/IgM Antiboby

Test.
Muestras.
 Suero o plasma
 Sangre total.


completamente.
paciente y fecha.
7. Adicionar 2 gotas (80µl) del diluyente de ensayo poner verticalmente en el pozo de
muestra.
8. Leer resultados a los 10 minutos, tras haber colocado el diluyente.
Imagen 12. Instrucciones para colocar la muestra Fuente: ONE Step Dengue IgG/IgM Antibody Test.
Imagen 13. Interpretación de resultados. Fuente: ONE Step Dengue IgG/IgM Antibody Test.

ACTIVIDADES.

Conclusiones.

BIBLIOGRAFIA.
1.- Scott, B. &. (2009). Diagnóstico Microbiológico . Buenos Aires: Panamericana.

2.- Murray. (2013). Microbiologia Médica. ELSEVIER.
3.- Guadalupe Carballal, J. R. (2014). Virología Médica. Argentina: Corpus.
4.- Luis Fidel Avendaño, M. F. (2011). Virología Clínica. Argentina: Mediterraneo.
5.- Ondarza, R. N. (2011). Virus y Enfermedad. México: Trillas.
6.- UNAM, D. d. (Agosto de 2013). Manuales Departamentales, Virología I. Mexico, DF.
7.- Página oficial de la OMS.
8.- Inserto de la prueba rápida SD Influenzae.
9.- Inserto de la prueba rápida de SD BIO LINE ROTA-ADENO.
10.- Vigilancia epidemiológica de casos de VIH/SIDA en México al 30 de junio de 2015, INEGI.
http://www.censida.salud.gob.mx/descargas/epidemiologia/RN_2do_trim_2015.pdf
11.- Inserto de la prueba rápida de SD BIO LINE VIH ½ 3.0
12.- Inserto de la prueba rápida de SD BIO LINE HBsAg
13.- Vigilancia epidemiológica de reporte de Dengue al 4 de enero de 2016.
http://www.epidemiologia.salud.gob.mx/doctos/panodengue/PANORAMAS_2015/Pano_dengue
_sem_52_2015.pdf
14.- Inserto de la prueba rápida de ONE Step Dengue IgG/IgM Antibody Test.

Manual de Virología

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Facultad QFB. Laboratorio de Microbiología IV.

AUTORES DEL MANUAL DE MICROBIOLOGÍA IV.

QFB. RICARDO VEGA TAVERA

MSP. PATRICIA YAZMÍN FIGUEROA CHÁVEZ

MC. JUDITH AYALA GARCÍA

PROFESORES TITULARES DE LA MATERIA.

QFB. JORGE OCTAVIO AVILA RAMIREZ.

QFB. RICARDO VEGA TAVERA

DC. JUAN MANUEL SÁNCHEZ YAÑEZ

QFB. ROSA EDITH ZAVALA VIVANCO

QFB. ODALINDA ARREYGUE MÉNDEZ

QFB. HÉCTOR MANUEL GALLEGOS LÓPEZ

QFB. TELLITUD HILARIO SOSA RUIZ

Fecha de última actualización: Agosto de 2017

Vega, R; Figueroa, P; Ayala, J Página 1

I.- INTRODUCCIÓN Página

Tabla 1. Contribuciones del diágnostico virológico. (Guadalupe Carballal, 2014) 6

Figura 1. Infección viral aguda: métodos directos e indirectos de diagnóstico. El día 0

Vega, R; Figueroa, P; Ayala, J Página 2

Vega, R; Figueroa, P; Ayala, J Página 3

1.1 NORMAS A SEGUIR EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA IV

1. El alumno debe llegar 5 min antes de la práctica y tendrá 5 minutos de

2. El alumno que falte a una sesión, no tendrá reposición a la misma. (Si se

3. El alumno debe traer el material según se haya indicado en la práctica anterior;

4. Antes de ingresar al laboratorio el alumno debe leer el texto de cada práctica a

7. Durante el desarrollo de la práctica, queda estrictamente prohibido la entrada

8. Dentro del laboratorio se debe guardar el comportamiento y vocabulario

Vega, R; Figueroa, P; Ayala, J Página 4

9. Por razones de Bioseguridad, queda estrictamente prohibido beber, comer,

10. Si al término de la práctica, se generaron diversos desechos biológicos, estos

11. El material que es reutilizable, será depositado en recipientes con

Vega, R; Figueroa, P; Ayala, J Página 5

1.2 OBJETIVO DEL LABORATORIO DE VIROLOGIA

El alumno conocerá el fundamento y desarrollará algunas técnicas aplicadas en

Vega, R; Figueroa, P; Ayala, J Página 6

1.3 LA IMPORTANCIA DEL LABORATORIO DE LAS INFECCIONES VIRALES

El laboratorio de Virología ha aumentado su demanda en los últimos años de manera

El diagnóstico es fundamental para decidir una intervención terapéutica, establecer el

La salud pública ha establecido que las enfermedades infecciosas representan un tercio

Tabla 1. Contribuciones del diágnostico virológico. (Guadalupe Carballal, 2014)

El diagnóstico virológico comprende la detección e identificación del agente etiológico de

Vega, R; Figueroa, P; Ayala, J Página 7

Para el diagnóstico se debe de tener en cuenta: la Historia clínica, la edad, los

El periodo de incubación es variado, en la mayoría de las infecciones virales es alredor de

1.3.1 SELECCIÓN Y OBTENCIÓN DE MUESTRAS.

La calidad de la muestra es crucial para el buen diagnóstico virológico, antes de realizar la

Vega, R; Figueroa, P; Ayala, J Página 8

representativo, incluso si este ya no es detectable, se tiene que evaluar la etapa de

Al momento de realizar la toma de muestra, todos los fluidos biológicos son

Los tipos de muestra más comunes son:

 Aspirados y lavados broncoalveolares.

1.3.2. MEDIOS DE TRANSPORTE MÁS UTILIZADOS EN EL LABORATORIO DE

Los medios de transporte de virus se utilizan para transportar volúmenes pequeños de

Los medios de transporte más utilizados en el laboratorio de virología son:

• Medio de Eagle con 2% de Suero Fetal Bovino. (Hisopados, Biopsias,

Vega, R; Figueroa, P; Ayala, J Página 9

• Universal viral transport. (sol. salina equilibrada, albumina bovina, cisteína,

1.3.3. CONDICIONES DE ALMACENAMIENTO.

El procesamiento de las muestras debe de ser dentro de las 24 horas de su obtención.

En todos los casos, la muestra debe de estar debidamente rotulada, es importante

1.3.4. MÉTODOS DE LABORATORIO MÁS UTILIZADOS PARA LA DETECCIÓN DE

Los virus se pueden identificar mediante diferentes estrategias como:

 Visualización directa en un fluido corporal o tejido a través de microscopia

Actualmente los métodos de diagnóstico virológico más usados en la actualidad se