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Y BIOQUÍMICA
FARMACOGNOSIA
CROMATOGRAFÍA
R+X- + A- R+A- + X-
Resina intercambiadora
aniónica
R-X+ + C+ R-C+ + X+
Resina intercambiadora
catiónica
FILTRACIÓN EN GEL
Es llamada también Cromatografía de filtración en gel y se basa en la diferencia de tamaño
molecular, se usa para compuestos de PM > 2000.
La FM es el fluído que está fuera de la matriz del gel. Las moléculas más grandes de las
sustancias son incapaces de ingresar a los poros y son eluidas primero y las más
pequeñas son retenidas dentro de los poros del gel, requiriendo más tiempo y solvente
para ser eluidas .
El límite de exclusión es el tamaño máximo de una molécula ( peso molecular), que puede ser
retenida en los poros del gel .
AFINIDAD O BIOAFINIDAD
FASE LIGADA
La fase ligada está formada por un material de base: sílicagel, alúmina, agarosa
copolímero de estireno, que se une químicamente a un compuesto con un grupo
funcional determinado.
La unión más frecuente es un enlace covalente tipo siloxano (Si - O - R). Hay también
uniones tipo amino (SiNR2), tipo carbono (Si – CR3)
Químicamente la sílicagel es un óxido de silicio hidratado (SiO2.H2O), sus átomos
internos están ligados por oxígeno y los superficiales por –OH, es fuertemente
higroscópica, el agua es responsable de su inactividad, es insoluble en solventes no
polares y muy soluble en solventes alcalinos.
MODALIDADES DE CROMATOGRAFÍA
CROMATOGRAFÍA DE FASE NORMAL
El flujo de la fase móvil puede ser por capilaridad ( C. horizontal y ascendente) o por
capilaridad y Gravedad (C. descendente).
Cromatografía en Papel y Capa Fina (TLC)
Sembrado:
Puntiforme Banda
Cualitativa
x x x x x x
Identificación Pureza Ausencia
Cuantitativa Preparativa
x x x x
TLC o CCD
TLC
TLC (Cromatofolios)
DIFERENCIAS MÁS SIGNIFICATIVAS ENTRE TLC Y
HPTLC
TLC HPTLC
Distancias de desarrollo 10 – 15 cm 4 – 5 cm
Límites detección µg – ng ng - pg
CROMATOGRAFÍA EN PAPEL
CROMATOGRAFÍA EN COLUMNA
EMPAQUETADO APLICACIÓN
COLUMNA MUESTRA
ELUCIÓN Y RECOGIDA DE FRACCIONES
RESERVORIO
LECHO f. móvil
CROMATOGRÁFICO
f. estacionaria
COLUMNA MUESTRA
EMPAQUETADO
COLUMNA
FLUJO
gravedad
DIFUSIÓN
llave
SEPARACIÓN
CROMATOGRAFÍA EN COLUMNA
PERFIL DE ELUCIÓN
Espectrofotométrico
fracción
TERMINOLOGÍA Y PARÁMETROS CROMATOGRÁFICOS
ELUYENTE ELUATO
(entra) columna (sale)
(proceso de ELUCIÓN
CLBP 50 - 120 10 mg – 1 g 1 - 10 15 - 20
CLMP 25 - 40 100 mg - g 12 12
HPLC 10 1 – 50 mg 400 -
semiprep
HPLC anal 5 µg a 1 mg 20 10