UNIVERSIDAD NACIONAL JORGE BASADRE GROHMANN

ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA

PRACTICA N° 06:

RECONOCIMIENTO DE PROTEINAS Y DEMOSTRACION DE ACTIVIDAD

ENZIMATICA

I. INTRODUCCION:

Las proteínas son polímeros de alto peso molecular, conformadas C, H, O, N y puede tener S.
Sus unidades monoméricas básicas son los aminoácidos, de los que 20 son biológicamente
importantes. La unión entre aminoácidos se forma mediante la interacción del grupo carboxilo
de un aminoácido con el grupo amino de otro para formar un enlace peptídico. Siendo así que
la adición secuencial de aminoácidos origina un péptido y finalmente una proteína. Las
proteínas cumplen funciones importantes en las células de todos los seres vivos. y la función
enzimática es una de las más importantes.Las Enzimas son biocatalizadores muy potentes y
altamente específicos y la gran mayoría son de naturaleza proteica.
Para poder actuar necesitan de un sustrato a partir del cual formaran productos y ellas salen
libres sin sufrir ningún cambio. Aunque se trata de proteínas muchas requieren, para ser
activas, un componente no proteico llamado cofactor. La estructura de este componente no
Proteico va a variar desde un ion (Ca++, Mg++, y otros) hasta moléculas complejas como NAD+,
FAD y NADP+ y la actividad enzimática puede ser afectada por la temperatura, pH, etc.
La enzima -amilasa, presente en la saliva, inicia la degradación del almidón, la principal
fuente de carbohidratos de la dieta humana. Esta enzima hidroliza a los enlaces  (14). Por
la acción de esta enzima activada por iones cloruro, en la boca la longitud de la cadena del
almidón se reduce de varios miles a unas ocho unidades de glucosa.
El almidón y dextrinas complejas al ser tratados con una solución de yodo dan un complejo de
coloración azul, mientras que las dextrinas más simples, la maltotriosa y maltosa no dan una
reacción positiva. Así, la acción de la -amilasa sobre polisacáridos puede ser seguida
midiendo la decoloración del complejo azul hasta alcanzar el punto acrómico (solución
incolora). La maltosa y otros carbohidratos reductores producidos en la reacción pueden ser
detectados por el test de Fehling.
La catalasa es una enzima común encontrada en los organismos vivos, donde funcionan
como catalizadores en las reacciones de descomposición del peróxido de hidrógeno (H2O2)
en agua y oxígeno.
La presente práctica tiene como:

OBJETIVOS:
- Reconocimiento cualitativo de proteínas mediante la reacción de Biuret.
- Reconocimiento de proteínas mediante la reacción xantoproteica y de la cistina.
- Determinar la acción enzimática de la catalasa sobre el peróxido de hidrogeno.
- Comprobar la acción de la temperatura sobre la actividad de las enzimas.
- Comprobar la acción enzimática de la amilasa salival en el proceso de digestión del
almidón.

II. MATERIALES Y METODOS:

 a. Reconocimiento cualitativo de proteínas:
 Materiales:
Material biológico: Solución de ovoalbúmina, suero sanguíneo.
Material de vidrio: tubos de ensayo, pipetas, vaso de precipitados .
Reactivos: CuSO4, NaOH 40%, tartrato de sodio y potasio, HNO3 cc, acetato de
plomo al 10%,
Otros: goteros, piceta, mechero, pinzas.
 Métodos

 Reacción de Biuret:
TUBOS DE ENSAYO
COMPONENTES
I II
- Suero o albúmina 2, 5 m -
- Agua destilada - 2, 5 ml.
- NaOH 20% 2, 5 ml. 2, 5 ml.
- Dejar reposar 3 min.
- CuSO4 5 gotas. 5 gotas.
- Observar lo que sucede en cada tubo
- La reacción positiva, se manifiesta con la aparición de un color azul
violeta.

 Reacción xantoproteica: Esta prueba caracteriza a los aminoácidos aromáticos.

- Medir 0.5 ml de muestra examen (suero sanguíneo, albúmina, etc.)
- Añadir 4 o 5 gotas de ácido nítrico concentrado
- Observar la formación de un precipitado blanco lechoso.
- Llevar al calor del mechero
- Agregar 6 a 8 gotas de NaOH al 30%
- La reacción positiva, se manifiesta por la aparición de un color anaranjado.

 Reacción de la cistina: Permite identificar proteínas que presentan aminoácidos

azufrados.
- Medir en un tubo de ensayo 0.5 ml de muestra examen (suero sanguíneo,
albúmina, etc.)
- Agregar 5-8 gotas de acetato de plomo al 10%.
- Observar la formación de un precipitado blanco lechoso.
- Añadir la solución saturada de NaOH, en cantidad suficiente para disolver el
precipitado.
- Calentar el tubo hasta ebullición.
- La reacción positiva, se manifiesta por la formación de un color pardo oscuro.

b. Demostración de la actividad enzimática

 Materiales
Material de vidrio:
Vaso de precipitados, tubos de ensayo, pipetas, termómetro, matraz,
Material biológico: papa, saliva, sangre
Reactivos: peróxido de hidrógeno, Fehling, solución de almidón al 1%, lugol.
Otros: cocinilla, piceta, goteros
 Métodos:
 Demostración de la acción enzimática de la catalasa:
 - En un tubo de ensayo colocar un trocito de papa o sangre diluida.
- Agregar 2 ml de H2O2 y dejar en reposo por un minuto.
- Observar e interpretar los resultados.
 Efecto de la temperatura sobre la catalasa:
- Hacer hervir pequeños trozos de papa. Hacer lo mismo con la sangre diluida.
- Agregar 2ml de H2O2 y dejar en reposo por un minuto.
- Observar e interpretar los resultados.
 Reconocimiento de la actividad enzimática de la amilasa:
 Sistema de incubación:
- En dos tubos de ensayo (I y II) agregar 2 ml. de solución de almidón al 1%. y
luego 2 ml. de agua destilada.
- Incubar los tubos en baño María a 37°C por 2 minutos.
- Agregar al tubo I 3 ml. de amilasa salival.
- Incubar los tubos por 15 minutos a 37°C.
- Observar e interpretar los resultados.
 Control por el sustrato residual (almidón no transformado):
- De los tubos I y II incubados transferir 2 ml. a otros dos tubos, luego añadir 0.5
ml. de lugol diluido.
- Mezclar, observar e interpretar los resultados.
 Control por los productos formados:
- De los tubos I y II incubados transferir 1 ml. a otros dos tubos previamente
rotulados.
- Agregar a cada tubo 2 ml. de reactivo de Fehling.
- Colocar en baño María hirviendo por 5 minutos.
- Observar e interpretar los resultados.
III. RESULTADOS
IV. DISCUSION
V. CONCLUSIONES
CUESTIONARIO:
1. Puede una proteína desnaturalizada dar reacción positiva a la reacción de biuret?
Si/No Justificar.
2. Cuáles son las principales proteínas presentes en el plasma sanguíneo de perros y
cuáles son sus valores normales?
3. Mencionar ejemplos de otras enzimas digestivas e indicar en donde son producidas
y la función de cada una de ellas.
VI. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS