CORPORACIÓN TECNOLÓGICA DE PRESENTADO POR:

BOGOTÁ LIZET MILLAN

INFORME N° 1 MANEJO Y OPERACIÓN DE NATALY CHACON
ESPECTOFOTÓMETRO

1. TÍTULO:
MANEJO Y OPERACIÓN DEL ESPECTROFOTÓMETRO

2. OBJETIVOS:

General:

Dar a conocer el paso a paso para el manejo del espectrofotómetro con una sustancia a
diferentes concentraciones a previas diluciones de la misma

Específicos:

● Identificar los componentes que integran un espectrofotómetro y su función

correspondiente.
● Establecer algunos parámetros de validación y verificación de un espectrofotómetro
Genesys.
● Cuantificar la concentración de una muestra problema por interpolación de la absorbancia
en la curva de calibración.

3. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL OBSERVACIÓN Y CÁLCULOS:

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Preparación de soluciones

Dicromato de potasio o con permanganato de potasio

SOLUCIÓN STOCK
250 mg
0,25 L
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SOLUCIONES DE TRABAJO

● A partir de la solución stock y utilizando el material adecuado (balones aforados de 50 mL)

realizar las diluciones necesarias para tener soluciones de diferente concentración que se
encuentren entre 10 ppm y 100 ppm. Marcar de manera adecuada las soluciones y calcular
con exactitud sus concentraciones.

1. 1mL / 100 mL = 10 ppm

2. 5 mL / 100 mL = 50 ppm
3. 2 mL / 50 mL = 40 ppm
4. 1ml / 50 mL = 20 ppm
5. 5mL / 50 mL = 100 ppm
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3. RESULTADOS:

Tabla 1: Datos para la realización de la ecuación de la recta

X: Concentración Y: Absorbancia

10 ppm 0,137

20 ppm 0,243

40 ppm 0,444

50 ppm 0,545

100 ppm 1.050

ECUACIÓN DE LA RECTA:

Y= bx+a

Y= 0,010 X + 0,039

CONCENTRACIÓN MUESTRA PROBLEMA REPETIBILIDAD MUESTRA PROBLEMA

Y= 0,010X + 0,039 [88-96]

0,948 = 0,010X + 0,039

Resultados obtenidos experimentalmente:
0,948 - 0,039 = X
0.010 abs: 0,948
0.948
0,909 = X 0,952
0,010
sx . 100 = 0,243
91 ppm = X x

4. ANÁLISIS DE RESULTADOS.

4.1 Concentración de la muestra: La concentración de la muestra X, se calculó por medio

de la ecuación de la recta generada por la curva de calibración (Tabla 1), obteniendo el valor
de 91 ppm, hallados por la ecuación, teniendo en cuenta los resultados de las absorbancias,
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obtenidos del tratamiento estadístico, es posible establecer que los datos de concentración, se
encontraran cercanos al valor esperado, el valor de la desviación estándar de la muestra es
bajo 0.243.
Se prepararon 5 soluciones de concentración conocida con el fin de producir una recta más
confiable, donde fuera posible descartar los puntos desviados, por otra parte también se debe
señalar que la solución patrón se preparó con una concentración de 250 ppm, con el fin de
que la muestra problema entrara en la curva de calibración ”el éxito de la curva de calibrado
depende, en gran medida, de la exactitud que tengan la concentración de los patrones y de lo
que se parezca la matriz (componentes que constituyen una muestra analítica) [skoog] ”.
Finalmente, las variables que afectaron la determinación de la concentración de la muestra,
se relacionan con las desviaciones inherentes a la Ley de Beer, ya que el método tiene como
fundamento la relación directa que existe entre la concentración del analito y la absorbancia
del mismo. De tal manera que a continuación se mencionan las desviaciones a dicha ley.

4.2 Desviaciones de la Ley de Beer: “A concentraciones altas, generalmente mayores de

(0.01M), la distancia media entre las moléculas responsables de la absorción disminuye hasta
el punto en que cada molécula altera la distribución de carga de las moléculas vecinas”
Teniendo en cuenta la tabla 1, es notable que las concentraciones se encuentran varios
órdenes de magnitud por debajo, de las cuales se presenta este inconveniente, aunque es de
mencionar que en algunas moléculas o iones se presentan desviaciones, estas se asocian a
sustancias orgánicas.

El efecto de la disociación o asociación del analito con otras estructuras puede generar un
cambio en el espectro de absorción de la muestra, sin embargo este es un fenómeno que se
presenta cuando se trabaja con indicadores ácido base.

4.3 Importancia del blanco: El blanco reactivo es una muestra más que contiene todos los
componentes utilizados para la determinación (por ejemplo agua, reactivos, entre otras)
excepto el compuesto a medir. La cantidad de luz transmitida por este blanco no debe ser
detectada por el aparato. Para ello, el espectrofotómetro se ajusta manualmente de forma tal
que esta cantidad de luz no sea medida. Este procedimiento se conoce comúnmente como
“calibración del cero”, es decir, la cantidad de absorbancia del blanco es reconocida o
cuantificada como cero por el aparato. En el caso, es necesario asegurarse de que no existan
otras fuentes de luz cercanas cuando se hace la medición. Además, se deben utilizar celdas
certificadas. Por último, es necesario asegurarse de que el compuesto a medir se encuentre
en solución de forma pura o en presencia de otros compuestos que no absorben a la misma
longitud de onda.

5. CONCLUSIONES:
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● Se reconoce y se da utilidad en análisis de sustancias al equipo de espectrofotometría

adecuadamente, se conoce la muestra blanco y su importancia.
● Respecto a los parámetros estadísticos del equipo y su capacidad de respuesta los
valores de absorbancia y sensibilidad del método, indican que el instrumento tiene
bastante precisión frente a las determinaciones
● La curva de calibración se realizó con 5 datos de concentración y absorbancia,
mostrando unos valores de desviaciones estándar para la regresión lineal, la pendiente,
el punto de corte en el eje de las abscisas y la concentración demostrando que los
valores de la regresión lineal no tienen una dispersión considerable, hecho que le da
validez a la determinación.

BIBLIOGRAFÍA

● HARVEY D. Química Analítica moderna. Ed. McGraw Hill. Madrid. 1202.

● HARRIS D. Análisis Químico Cuantitativo. Ed. Reverté. 2007.
● AGREDA J., Duarte M y Henao L., "Guía de laboratorio Química Analítica II",
Universidad Nacional de Colombia- Dpto Química, Bogotá, 2000
● SKOOG D, Holler F, Nieman T. "Principios de análisis instrumental 5a ed". Madrid-
España. McGraw-Hill. 2001.
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ANEXO 1: PROCEDIMIENTO ESTANDAR (POE)

I. OBJETIVO

Describir los pasos a seguir para el manejo del equipo espectrofotómetro Genesys 20.

II. ALCANCE

Este instructivo es de aplicación para todo los estudiantes que manejen en el

laboratorio el equipo para realizar espectrofotometría.

III. DEFINICIONES

· Espectrofotómetro: Equipo que tiene la capacidad de proyectar un haz de luz

monocromática a través de una muestra y medir la cantidad de luz que es
absorbida por dicha muestra

· Columnas de Cuarzo: Son recipientes de plástico, vidrio o cuarzo que se utiliza

para realizar lecturas espectrofotométricas a líquidos. Para que una Celda o
Cubeta para Espectrofotómetro funcione adecuadamente requiere estar
completamente limpia y sin ralladuras.

· Fuente de luz: La fuente de luz que ilumina la muestra debe cumplir con las
siguientes condiciones: estabilidad, direccionabilidad, distribución de energía
espectral continua y larga vida. Las fuentes empleadas son: lámpara de
wolframio (también llamado tungsteno), lámpara de arco de xenón y lámpara
de deuterio que es utilizada en los laboratorios atómicos.
· Monocromador: aísla las radiaciones de longitud de onda deseada que inciden
o se reflejan desde el conjunto, se usa para obtener luz monocromática.
Está constituido por las rendijas de entrada y salida, colimadores y el elemento
de dispersión. El colimador se ubica entre la rendija de entrada y salida. Es un
lente que lleva el haz de luz que entra con una determinada longitud de onda
hacia un prisma el cual separa todas las longitudes de onda de ese haz y la
longitud deseada se dirige hacia otra lente que direcciona ese haz hacia la
rendija de salida.

· Compartimiento de Muestra: Es donde tiene lugar la interacción, R.E.M con la

materia (debe producirse donde no haya absorción ni dispersisón de las
longitudes de onda). Es importante destacar, que durante este proceso, se
aplica la ley de Lambert-Beer en su máxima expresión, en base a sus leyes de
absorción, en lo que concierne al paso de la molécula de fundamental-
excitado.
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· Detector: Es quien detecta una radiación y a su vez lo deja en evidencia, para

posterior estudio hay de dos tipos: 1. Los que responden a fotones y 2. Los
que responden al calor.

IV. DESCRIPCIÓN DE LA ACTIVIDAD

ACTIVIDAD
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Medición de Absorbancia

1. Ubique el instrumento sobre una superficie plana que este tan lejos como sea
posible de cualquier campo eléctrico o magnético y de cualquier dispositivo
eléctrico que pueda generar campos de alta frecuencia. Libre de polvo, gases
corrosivos y fuertes vibraciones Remueva cualquier material que puedan
obstruir el flujo de aire por debajo, detrás o alrededor del instrumento. Conecte
el terminal hembra del cable de poder al conector en la parte posterior del
instrumento. Conecte el cable de poder a un enchufe con descarga a tierra con
el voltaje apropiado. Oprima la tecla de encendido a ON (∗ =ENCENDIDO,
±=APAGADO). La secuencia de encendido toma cerca de dos minutos para
completarse.
2. Oprima A/T/C para seleccionar el modo absorbancia o %transmitancia. El
modo elegido aparece en pantalla.
3. Oprima nm or nm para seleccionar la longitud de onda. Nota: Mantener
apretada la tecla hará que la longitud de onda cambie más rápido.
4. Inserte su blanco en el porta celdas y cierre la puerta del compartimiento de
muestras. Nota: Ubique la celda de forma que la luz (indicada por la flecha en
el dibujo) pase a través de las paredes claras.
5. Oprima 0 ABS/100%T para llevar el blanco a 0A o 100.
6. Remueva el blanco e inserte la muestra en el portaceldas. La medición de la
muestra aparece en pantalla.

Mediciones de Concentración usando un estándar:

1. Oprima A/T/C para seleccionar el modo concentración. El modo elegido

aparece en pantalla.
2. Oprima nm or nm para seleccionar la longitud de onda. Nota: Mantener
apretada la tecla hará que la longitud de onda cambie más rápido.
3. Inserte su blanco en el portaceldas y cierre el compartimiento de muestras.
Nota: Ubique la celda de forma que la luz (indicada por la flecha en el dibujo)
pase a través de las paredes claras.
4. Oprima 0 ABS/100%T para llevar a cero el blanco, luego remuévalo, e inserte
su estándar.
5. Oprima la tecla de función Estándar y use las teclas qyp y para entrar la
concentración del estándar, luego oprima la tecla de función Fijar C para
calcular y ver el factor para el estándar selección.
6. Inserte su muestra en el portaceldas. La concentración de la muestra aparece
en pantalla.
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V. ANEXOS

F-SGA-OM-01 Solicitud de actualización de documentos

VI. DOCUMENTOS RELACIONADOS

SGA-OM-01 Gestión de Normalización