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eficientes para separar las proteínas intactas. La cromatografía líquida de fluidez mejorada (EFLC)
implica la adición de CO2 licuado a las fases móviles líquidas convencionales. La adición de CO2
licuado aumenta la diffusividad y disminuye la viscosidad, lo que inherentemente conduce a una
separación más eficiente. En este documento, el EFLC se aplica a las fases estacionarias de la
cromatografía de interacción hidrofóbica (HIC) por primera vez para estudiar el impacto del CO2
licuado en el comportamiento cromatográfico de las proteínas. Los efectos del CO2 licuado en
las propiedades cromatográficas,
las distribuciones de estado de carga (CSD) y las eficiencias de ionización fueron evaluadas el
EFLC ofreció un mejor rendimiento cromatográfico en comparación con los métodos
convencionales de cromatografía líquida (LC), incluyendo un tiempo de análisis más corto,
mejores formas de pico y mayor números de placa. La adición de CO2 licuado a la fase móvil
proporcionó un reactivo ESI-friendly y "supercharging" sin sacrificar el rendimiento
cromatográfico, que se puede utilizar para mejorar la identificación de péptidos y proteínas en
aplicaciones a gran escala.
La cromatografía líquida (LC) es ampliamente utilizada para el análisis de biomoléculas. 4,5 las
proteínas se separan usando LC basándose en varias propiedades: carga, tamaño, interacción
bio-específica y polaridad. Se prefiere la LC con fases móviles volátiles compatibles con la
espectrometría de masas de electroaspersión (ESI-MS) para la separación de mezclas biológicas
complejas. La cromatografía de intercambio de iones (IEX) se puede acoplar directamente a la
EM para la purificación de proteínas. 6, 7 la cromatografía de exclusión de tamaño (SEC)
preserva la actividad biológica de una proteína porque no se produce ninguna interacción con la
fase estacionaria y el móvil acuoso tamponado se pueden utilizar las fases. 8 sin embargo, SEC
da la menor resolución entre las técnicas de LC. La cromatografía de afinidad separa las
proteínas basándose en sus interacciones reversibles con ligandos en la matriz de columna y, por
lo tanto, ofrece una especificidad extremadamente alta y una alta potencia de purificación. 9 a
pesar de esa promesa, el gasto de ligandos bio-específicos, complejos las técnicas de
acoplamiento del ligando y la fuga de ligandos obstacula este método de la separación de usos
rutinarios. Tanto la cromatografía de fase inversa (RPC)
utilizando un gradiente de sal. 12 obra reciente de Chen et. al. destacó la posibilidad de
acoplamiento en línea de HIC con MS usando acetato de amonio bajo condición de LC. El
mecanismo de retención de este método aparece a una interacción hidrofóbica de modo mixto
con la cromatografía de fase inversa. 13