UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA

LA MOLINA

FACULTAD DE CIENCIAS
DEPARTAMENTO ACADÉMICO DE BIOLOGÍA
CURSO: MICROBIOLOGÍA - LABORATORIO

INFORME DE PRÁCTICA N°7

Título: TÉCNICAS DE CULTIVO DE MICROORGANISMOS
Integrantes:

ALUMNO CÓDIGO FIRMA

Fuentes Guevara, Dennisse Yeriot 20161438

Huachaca Vilca, Erick Bryan 20161444

Méndez Reyes, Yoselin 20170265

Yalta Aliaga, Anderson Alexsander 20161468

Ciclo: 2018-II
Especialidad: Ingeniería en Industrias Alimentarias
Horario de práctica: Lunes 11:00 am - 1:00 pm (B*)
Profesor de laboratorio: Juscamaita Morales, Juan Gabriel
Fecha de la práctica: 15/10/18
Fecha de entrega del informe: 22/10/18

LA MOLINA - LIMA - PERÚ

 1. INTRODUCCIÓN

Para el estudio de los microorganismos, se han diseñado diversos métodos que permiten
cultivar los microorganismos bajo condiciones artificiales, en los que es posible cultivarlos
bajo condiciones experimentales.
Una de las técnicas más usadas en el laboratorio de microbiología consiste en captar una
muestra microbiológica de un ambiente determinado a un medio de cultivo, lo que nos
permitirá obtener cultivos microbianos. Al efectuar este procedimiento, es necesario
considerar que en el ambiente, existen muchos otros microorganismos; debido a esto, es
necesario tomar precauciones para impedir que éstos penetren y contaminen los cultivos en
estudio. Por otra parte, para considerar no sólo el aspecto nutricional, sino también las
condiciones ambientales de su hábitat natural, por lo que en el medio de cultivo se debe
ajustar el pH, concentración de sales y durante la incubación condiciones tales como la
temperatura, aireación, luminosidad. La aplicación de estos procedimientos ha permitido
propagar a los microorganismos en cultivos mixtos, así como su aislamiento y la obtención de
cultivos puros, facilitando de este modo, el estudio, caracterización, aplicación y control de
los mismos. La forma de sembrarlos y cultivarlos depende del tipo de microorganismo y
propósito específico del estudio.

2. OBJETIVOS

● Observar las características de crecimiento de los microorganismos al trasplante en medios de

cultivo líquido y sólido.
● Aislar colonias individuales a partir de una muestra líquida utilizando técnicas de aislamiento
y
3. RESULTADOS

3.1. Crecimiento de Staphylococcus sp. en tubo con agar nutritivo inclinado

Figura 1. Staphylococcus sp. en tubo con agar nutritivo inclinado

3.2. Crecimiento de Staphylococcus sp. en tubo con agar nutritivo vertical

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 Figuras 2 y 3. Staphylococcus sp. en tubo con agar nutritivo vertical

3.3. Crecimiento de Staphylococcus sp. en tubo con caldo nutritivo

Figuras 4 y 5. Staphylococcus sp. en tubo con caldo nutritivo

3.4. Cultivo de microorganismos provenientes de refresco de carambola

comprado en un restaurante por la técnica de aislamiento por estrías en
diferentes medios de cultivo

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 Figura 6. Aislamiento por estrías en Agar Nutritivo

Figura 7. Aislamiento por estrías en Agar Manitol Salado

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 Figura 8. Aislamiento por estrías en Agar Mac Conkey

3.5. Cultivo de microorganismos provenientes de refresco de carambola

comprado en un restaurante por la técnica de aislamiento por diluciones
en agar licuado

Figura 9. Placa con dilución 1/10 (10-1)

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Figura 10. Placa con dilución 1/100 (10 -2)

Figura 11. Placa con dilución 1/1000 (10 -3)

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 Figura 12. Placa con dilución 1/10000 (10 -4)

4. DISCUSIONES

● El mayor crecimiento de Staphylococcus sp. se dio en el tubo con agar nutritivo inclinado
(Figura 1), esto se debe a que la superficie inclinada del agar les da a las bacterias una mayor
superficie donde pueden crecer dentro del tubo de ensayo, según la página web Microbiología
(s.f.). Además, esta página web indica que los medios de agar inclinado pueden usarse para
cultivar e identificar células bacterianas, así como que es difícil intentar identificar bacterias
desde una muestra muy grande, ya que estas son pequeñas y pueden ser difíciles de encontrar;
sin embargo, cuando se colocan sobre el agar inclinado, las células bacterianas se dividirán
rápidamente y en varias horas habrán producido suficientes células que pueden ser examinadas
en el microscopio.
● Zapata et al. (2014) afirma que los medios líquidos de cultivo favorecen el crecimiento
bacteriano ya que las bacterias poseen una gran libertad de movimiento y al difundirse por
todo el medio encuentran su componente nutritivo y requerimiento de oxígeno más óptimo.
Además indica que las bacterias aerobias estrictas crecen los primeros 10-15 mm de la
superficie del medio, las microaerofilas ligeramente por la superficie del medio, las anaerobias
en los 10-20 mm del fondo y las facultativas por todo el medio. En nuestro caso, la bacteria
Staphylococcus sp. se desarrolló en la parte inferior del tubo con caldo nutritivo (Figura 5),
pero en el tubo con agar nutritivo vertical (Figura 2 y 3) tuvo un desarrollo a lo largo del corte
vertical y en la parte superficial del tubo; por lo que comparando con la literatura, podemos
decir que esta bacteria es de tipo anaerobio facultativo, que puede desarrollarse en presencia o
no del oxígeno.
● En el caso de la muestra del refresco de cocona respecto a la técnica de aislamiento por estrías
en tres tipos de agares (Agar nutritivo, Agar Mac Conkey y Agar Manitol Salado), la presencia
de microorganismos fue mínima, llegando a desarrollarse unas pocas colonias de levaduras de
color blanco cremoso brillante que pertenecerían a la especie Saccharomyces cerevisiae en el
Agar nutritivo y no se pudo apreciar la presencia de estas en el Agar Mac Conkey y Agar
Manitol Salado. De la misma forma, en la técnica de aislamiento por diluciones con la muestra
de refresco de cocona, la presencia de microorganismos fue casi imperceptible. Solo en la
placa de dilución 1/10 se pudo apreciar una pequeña colonia de levaduras de la especie

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 Saccharomyces cerevisiae, mientras que en las demás diluciones no hubo presencia de estas ni
de otros microorganismos. Estas levaduras, que ayudan a la fermentación, estarían presentes
en el refresco de cocona tomado como muestra debido a la presencia de azúcares fermentables
en el refresco.

5. CONCLUSIONES

● Luego de las 24 horas, en el tubo de agar nutritivo inclinado el cultivo trasplantado se

desarrolló hasta aproximadamente la mitad del tubo base con Staphylococcus sp. del cual se
extrajo la muestra. Por otro lado, en esa misma cantidad de tiempo en el tubo de agar nutritivo
vertical se observó un crecimiento a lo largo de todo el camino de la picadura profunda y en el
de caldo nutritivo se apreció a nivel inferior del líquido la presencia del inóculo.
● A partir de los 2 mL de la muestra de carambola, luego de las 24 horas mediante el
aislamiento por estrías en diferentes formas, se apreció en el agar nutritivo dos colonias de la
levadura Saccharomyces cerevisiae. En el aislamiento por diluciones se observó muy poca
presencia microbiana, apenas en la placa con dilución 1/10 (10-1) se apreció una pequeña
colonia de la misma levadura.

6. CUESTIONARIO

6.1. TÉCNICAS DE CULTIVO DE MICROORGANISMOS: CARACTERÍSTICAS

DE CRECIMIENTO EN MEDIO DE CULTIVO

● Por qué algunos microorganismos desarrollan en caldo un característico

crecimiento tipo película. ¿Qué factores ambientales podrían alterar la
formación de una película superficial?

El crecimiento tipo película es la acumulación de los microorganismos que se están

cultivando en la superficie del medio de cultivo, en este caso del caldo nutritivo. Los
microorganismos se acumulan allí por tener respiración tipo aerobia. Al ser el oxígeno
poco soluble en agua no penetra en la totalidad del tubo, y se concentra en la
superficie del medio donde se agrupan los microorganismos, formando la película.

La concentración del oxígeno ambiental que disipará la acumulación de

microorganismos en la superficie del medio o factores como el aumento de
temperatura pueden también causar la muerte del microorganismo.

● Cuando utiliza tubos de agar inclinado para el estudio de las características de

crecimiento es preferible inocular con aguja de kolle y no con asa. ¿Por qué?

La aguja de Kölle, a diferencia del asa, facilita el sembrado del inóculo en el agar
debido a que es necesario hacer la estría sobre éste, la cual debe realizarse desde la
base hasta el borde del medio, asegurando de este modo el crecimiento de los
microorganismos. Además, la cantidad de inóculo debe ser moderada y el asa tiende a
recoger muestras abundantes.

● ¿Qué factores influencian en la abundancia del crecimiento en caldo, agar

inclinado y agar vertical?

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El desarrollo adecuado de los microorganismos en un medio de cultivo se ve afectado
por una serie de factores de gran importancia y que, en algunos casos, son ajenos por
completo al propio medio.

a) Disponibilidad de nutrientes adecuados

Un medio de cultivo adecuado para la investigación microbiológica ha de contener,

como mínimo, carbono, nitrógeno, azufre, fósforo y sales inorgánicas. En muchos
casos serán necesarias ciertas vitaminas y otras sustancias inductoras del crecimiento.
Siempre han de estar presentes las sustancias adecuadas para ejercer de donantes o
captadores de electrones para las reacciones químicas que tengan lugar. Todas estas
sustancias se suministraban originalmente en forma de infusiones de carne, extractos
de carne o extractos de levadura. Sin embargo, la preparación de estas sustancias para
su aplicación a los medios de cultivo provocaba la pérdida de los factores nutritivos
lábiles.

Actualmente, la forma más extendida de aportar estas sustancias a los medios es

utilizar peptona que, además, representa una fuente fácilmente asequible de nitrógeno
carbón ya que la mayoría de los microorganismos, que no suelen utilizar directamente
las proteínas naturales, tienen capacidad de atacar los aminoácidos y otros compuestos
más simples de nitrógeno presentes en la peptona (Madigan et al, 2009).

Consistencia adecuada del medio:

Partiendo de un medio líquido podemos modificar su consistencia añadiendo

productos como albúmina, gelatina o agar, con lo que obtendremos medios en estado
semisólido sólido.

Los medios solidificados con gelatina tienen el gran inconveniente de que muchos
microorganismos no se desarrollan adecuadamente a temperaturas inferiores al punto
de fusión de este solidificante y de que otros tienen la capacidad de licuarla.
Actualmente los medios sólidos son de uso universal, por su versatilidad y
comodidad, pero hay también gran cantidad de medios líquidos cuyo uso está
ampliamente extendido en el laboratorio.

b) Presencia (o ausencia) de oxígeno y otros gases

Gran cantidad de bacterias pueden crecer en una atmósfera con tensión de oxígeno
normal. Algunas pueden obtener el oxígeno directamente de variados sustratos. Pero
los microorganismos anaerobios estrictos sólo se desarrollarán adecuadamente en una
atmósfera sin oxígeno ambiental. En un punto intermedio, los microorganismos
microaerófilos crecen mejor en condiciones atmosféricas parcialmente anaerobias
(tensión de oxígeno muy reducida), mientras los anaerobios facultativos tienen un
metabolismo capaz de adaptarse a cualquiera de las citadas condiciones.

c) Condiciones adecuadas de humedad

Un nivel mínimo de humedad, tanto en el medio como en la atmósfera, es

imprescindible para un buen desarrollo de las células vegetativas microbianas en los
cultivos. Hay que prever el mantenimiento de estas condiciones mínimas en las
estufas de cultivo a 35-37ºC proporcionando una fuente adecuada de agua que

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 mantenga la humedad necesaria para el crecimiento de los cultivos y evitar así que se
deseque el medio.

d) Luz ambiental

La mayoría de los microorganismos crecen mucho mejor en la oscuridad que en

presencia de luz solar. Hay excepciones evidentes como sería el caso de los
microorganismos fotosintéticos.

e) pH

La concentración de iones hidrógeno es muy importante para el crecimiento de los

microorganismos. La mayoría de ellos se desarrollan mejor en medios con un pH
neutro, aunque los hay que requieren medios más o menos ácidos. No se debe olvidar
que la presencia de ácidos o bases en cantidades que no impiden el crecimiento
bacteriano pueden sin embargo inhibir o incluso alterar sus procesos metabólicos
normales.

f) Temperatura

Los microorganismos mesófilos crecen de forma óptima a temperaturas entre 15

y43ºC. Otros como los psicrófilos crecen a 0ºC y los termófilos a 80ºC o incluso a
temperaturas superiores (hipertermófilos). En líneas generales, los patógenos
humanos crecen en rangos de temperatura mucho más cortos, alrededor de 37ºC, y los
saprófitos tienen rangos más amplios.

g) Esterilidad del medio

Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente estériles para evitar la
aparición de formas de vida que puedan alterar, enmascarar o incluso impedir el
crecimiento microbiano normal del o de los especímenes inoculados en dichos
medios. El sistema clásico para esterilizar los medios de cultivo es la autoclave (que
utiliza vapor de agua a presión como agente esterilizante.

6.2. TÉCNICAS DE CULTIVO DE MICROORGANISMOS: AISLAMIENTO Y

RECUENTO DE PLACAS

● ¿Qué procedimiento seguiría a continuación del desarrollo en estos ejercicios

para obtener el cultivo puro de cada cepa contenida en la mezcla? ¿Cómo
podríamos comprobar que estas cepas obtenidas finalmente corresponden a las
colonias aisladas?

Luego de tener las colonias aisladas, éstas deben transferirse con el filamento a un
tubo que contenga agar nutritivo estéril para cultivar esa colonia aislada; este
procedimiento se conoce como trasplante. Para garantizar la pureza del cultivo
obtenido, es conveniente, a partir de cada tipo de colonia aislada, repetir el proceso de
aislamiento antes descrito. Se considerará que se ha obtenido un cultivo puro, cuando
al realizar este proceso, todas las colonias obtenidas presenten las mismas
características. El medio de cultivo utilizado en el proceso de aislamiento dependerá,
entre otros factores, de los requerimientos nutricionales de los microorganismos que

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 se espera aislar y de la presencia de microorganismos que, por sus características y/o
por la cantidad en que se encuentren en la muestra, dificulten la obtención del
microorganismo objeto del aislamiento. En este último caso, se deben utilizar medios
de enriquecimiento y medios selectivos que inhiben el desarrollo de gérmenes
contaminantes.

La temperatura y otras condiciones de incubación, variarán según los

microorganismos, usualmente la temperatura óptima de los microorganismos
patógenos para el hombre oscila entre 30 y 40ºC. Cuando el microorganismo que se
intenta aislar es anaeróbico, deben tomarse las precauciones necesarias a fin de
eliminar la presencia de oxígeno en el ambiente donde se desarrollará el mismo.
Basándose en el origen y naturaleza de la muestra se pueden inferir los posibles
microorganismos que se encuentran presentes en la misma, y ese conocimiento
ayudará en la selección del medio y las condiciones de cultivo adecuadas. Para iguales
fines, es de gran utilidad el conocimiento de la procedencia de la muestra analizada.

● ¿Qué factores limitan el tamaño de las colonias en una placa de cultivo?

Existen diversos factores que limitan el tamaño de las colonias en una placa de
cultivo; una de ellas es el pH, dependiendo del rango de pH del medio; el contenido
de agua, influenciar en la forma y tamaño de la colonia; el potencial de óxido
reducción; el contenido nutricional presente en el medio cultivo; los constituyentes
antimicrobianos y las estructuras biológicas

● Supongo que recibe una muestra de la leche en polvo y se le pide determinar el

número total de colonias por gramo. Plantee una metodología cuantitativa
basada en diluciones sucesivas para resolver el problema

El método de recuento en placa consiste en sembrar por duplicado 1 ml de la muestra

líquida o 1 ml de la dilución madre en placas Petri estériles. Se repite esta operación
en cada una de las diluciones decimales preparados. Verter 15 ml de agar VRBL a
45ºC, mezclar y dejar solidificar, preparar de la misma manera una placa testigo, para
controlar la esterilidad del medio, cubrirla con 4 ml del mismo medio a 45ºC. Dejar
solidificar e incubar a 30ºC durante 24 a 48 horas. Se contabiliza las colonias de
diámetro mayor o igual a 0.5mm en las placas que contengan 150 colonias
características o de 30 a 300 colonias. Por medio de la densidad se podrá hallar el
número de colonias por gramo.

● ¿En qué consiste la técnica del número más probable y que usos tiene?

La estimación por el método del Número Más Probable (NMP) es muy adecuado para
determinar bacterias anaerobias, porque permite mantener un ambiente anaerobio
dentro de los tubos, sin necesitar de sistemas anaerobios más complejos como
cámaras o jarras anaeróbicas.

El método del número más probable fue descrito por McCrady en 1915 y actualmente
sigue siendo ampliamente utilizado. En un principio este método fue empleado para
estimar el número de microorganismos en muestras de alimentos y aguas. Sin
embargo, se ha demostrado que también puede ser aplicado para la determinación de
microorganismos aerobios y anaerobios en lodos, sedimentos marinos y suelos

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 contaminados. El método consiste en la estimación del número de microorganismos
viables a partir de diluciones sucesivas (1/10) partiendo de 1 g de suelo o sedimento
en base húmeda o 1 ml de agua; posteriormente, de tres o más de las diluciones se
inocularon tubos con medio de cultivo con sustratos y aceptores de electrones
específicos. En este método se asume que en las series de diluciones los
microorganismos se encuentran distribuidos al azar y que al menos un
microorganismo generará crecimiento produciendo una respuesta positiva (turbidez,
cambio de color, producción de algún metabolito específico). Esta técnica se basa en
la estimación de la densidad bacteriana por el método estadístico de máxima
probabilidad, utilizando la teoría de diluciones. Para realizar la estimación microbiana
se utiliza un mínimo de tres diluciones y un intervalo de 3 a 10 réplicas (“n” tubos de
medio para crecimiento) por dilución; el número de diluciones y réplicas utilizadas
estará en función de la precisión requerida. Actualmente, existen tablas estándar como
las publicadas por la FDA o NACE para estimar el número de microorganismos más
probable. Estas tablas están limitadas artes diluciones y a 3, 5 y 10 réplicas por
dilución; sin embargo, también existen programas de computadora (MPN Calculator
TM, “Chem SW”) para obtener la estimación microbiana empleando más de tres
diluciones y un número mayor de réplicas (Rojas, 2011).

● ¿De qué manera se pueden preservar cepas puras por largos periodos?

Existen varios métodos para la conservación de los microorganismos-, todos buscan

que las células sufran el daño mínimo y se preserven por el máximo periodo posible.
Los cuatro procedimientos generales son:

a) La siembra o el subcultivo:

Este método consiste en sembrar el microorganismo en determinado medio de cultivo

y, luego, conservarlo en refrigeración. El procedimiento se debe repetir cada cierto
tiempo. Se lleva a cabo en tubos de ensayo con agar inclinado, o en botellas
especiales que contienen un medio de cultivo sólido y estéril. Una de las desventajas
del método es que los tubos guardados en refrigeración se deshidratan y, entonces el
microorganismo muere, por esta razón, es necesario repetir el procedimiento
periódicamente.

Una variación del método consiste en adicionar aceite mineral estéril al tubo o a la
botella con el microorganismo en crecimiento, de tal forma que cubra al agar hasta
una altura de un centímetro y medio, para reducir el metabolismo del
microorganismo y la deshidratación del medio de cultivo (Rojas, 2011).

b) La desecación:

El método consiste en remover el agua celular e impedir la rehidratación de las células

de los microorganismos. Para llevarlo a cabo se inocula una muestra de cultivo en
tierra húmeda estéril (material de soporte), se separa hasta que haya crecimiento
(vatios días) y, luego se seca con aire a vacío. Después, el cultivo se guarda en una
atmósfera seca o en refrigeración. Otros materiales de soporte pueden ser sálica gel,
discos de gelatina y tiras de papel. Entre las ventajas del método se puede mencionar
que no necesita equipo especial ni mucho personal para ejecutarlo y, si no sufre daños
durante la desecación, el cultivo puede continuar viable por muchos años.

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 c) La congelación:

La congelación es, al igual que la liofilización, uno de los métodos de mantenimientos

más utilizados, porque se logran los periodos de conservación más largos (superiores
a veinte años, cuando se utiliza nitrógeno líquido). En el proceso de congelación lo
más importante es controlar la velocidad de disminución de la temperatura, porque, si
es muy lenta, los cristales que se forman a partir del líquido contenido en las células
serán muy grandes y pueden romper la membrana celular. El proceso de congelación
se puede clasificar, con base en la temperatura en la que se lleva a cabo, en:
Congelación ordinaria: Se mantienen temperaturas de -5 a -20°C.Congelación ultra
fría: Se efectúa en congeladores mecánicos entre -50 y -80°C.Congelación con
nitrógeno líquido: Se logran temperaturas de -150 a -196°C.

d) La liofilización:

Es la remoción de agua de las células congeladas (sólidas) a presión reducida

(sublimación). Para llevar a cabo este procedimiento, se toma una muestra de cultivo
por conservar y se suspende en algún medio con crioprotectores, como leche, suero o
glutamato de sodio. Se transfieren unas gotas de la muestra a una ampolla, se congela
y se somete a alto vacío hasta que el agua celular se sublima (pasa de estado sólido al
gaseoso). Una vez liofilizada la cepa, la ampolla que la contiene se sella para impedir
que el microorganismo se altere por el contacto con el medio ambiente.

● ¿Qué técnicas de cultivo se emplean para aislar microorganismos anaeróbicos?

El aislamiento de bacterias anaeróbicas por método de siembra en placa plantea

problemas especiales. Siempre que los organismos en cuestión no mueran
rápidamente al ser expuestos al oxígeno, las placas pueden prepararse de la manera
usual y luego incubarse en recipientes, de los cuales se elimina el oxígeno bien sea
por absorción química o por evacuación. Para los anaeróbicos más sensibles al
oxígeno, es preferible una modificación del método de siembra por vertido,
denominado cultivo por dilución y agitación. Un tubo con agar fundido y enfriado se
inocula y se mezcla, aproximadamente la décima parte de su contenido se transfiere a
un segundo tubo el cual se mezcla a su vez y se utiliza para inocular un tercer tubo de
la misma manera. Después de haber preparado de 6 a 10 disoluciones sucesivas, los
tubos se enfrían rápidamente y se encierran herméticamente una forma es verter una
capa de vaselina y parafina, con el fin de evitar el acceso del aire a la columna de
agar.

En esto cultivos, las colonias se desarrollan en profundidad dentro de la columna de

agar, y, por lo tanto, no son tan fácilmente accesibles. Para hacer una transferencia de
colonias se elimina el cierre de vaselina-parafina con una aguja estéril y la columna de
agar se extruye del tubo soplando suavemente una corriente de gas libre de oxígeno a
través de una pipeta capilar introducida entre la pared del tubo y el agar. La columna
extruida se recoge en una placa Petri estéril y se secciona en discos con una cuchilla
estéril, a fin de permitir el examen y transferencia de las colonias. Muchas bacterias
mueren al ser expuestas, aunque sólo sea momentáneamente al aire; por lo tanto, el
cultivo con éxito de estos anaerobios estrictos exige medidas extraordinarias para
excluir, en todo momento, incluso trazas de oxígeno. Habitualmente se utilizan dos

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 técnicas principales para el cultivo de bacterias incompleta ausencia de oxígeno; son
las técnicas de tubo rodante y las de la cámara anaeróbica con guantes.

El procedimiento del tubo rodante, desarrollado por R. E. Hungate, se usa para

obtener cultivos puros de anaerobios estrictos distribuyendo células en una fina capa
de agar depositado en la pared de un tubo de ensayo, en donde se desarrollan como
colonias aisladas. El tubo de ensayo contiene unos pocos mililitros de medio con agar
fundido que ha sido reducido químicamente para eliminar el oxígeno disuelto; el tubo
es cerrado herméticamente con un tapón de goma de butilo. El agar fundido se inocula
con diluciones apropiadas de la fuente de baterías, introduciéndose a través de los
tapones de goma con una jeringa estéril. Los tubos se depositan luego tumbados sobre
hielo y se los hace rodar hasta que el agar se solidifique formando una capa fina en la
pared del tubo. Después de un periodo de incubación, cuando las colonias son ya
visibles, se quita el tampón y las colonias aisladas se recogen con una aguja o con un
tubo capilar. Siempre que se destapa un tubo, se impide la entrada de aire pasando
continuamente una corriente libre de O2 (normalmente CO2 o N2) al interior del
tubo. Para asegurarse de que no ha penetrado algo de aire inadvertidamente, se suele
incluir en el medio el colorante sensible al redor sacarían, que vira de incoloro a rojo
cuando el Eh alcanza un valor de -0.042 También pueden aislarse anaerobios estrictos
utilizando técnicas convencionales de siembra por estría en placa, si se realizan todos
los procedimientos dentro de una cámara anaeróbica, que contiene una atmósfera
reductora. (Hernández, 2003).

7. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

● CBTIs 128. s.f. Patrones de crecimiento en agar inclinado (en línea). Disponible en:
http://labdemicrobiologia.wixsite.com/scientist-site/patrones-de-crecimiento-en-agar-inclinad
● Hernández, A. 2003. Microbiología industrial. 1ra ed. San José, Costa Rica, EUNED.
● Madigan, M; Martinko, J; Bender, K; Bucley, D; Stahl, D. 2009. Brock. Biología de los
microorganismos. 12 ed. Madrid, España, Pearson-Prentice Hall.
● Rojas, A. 2011. Conceptos y práctica de microbiología general. Universidad Nacional de
Colombia. Palmira.
● Zapata, S; Zapata, M; Cartagena, C. 2012. Cultivo y aislamiento de bacterias (en línea).
Disponible en: https://es.slideshare.net/carolinacartagenad/cultivo-y-aislamiento-de-bacterias

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