72 REACCIONES SECUNDARJAS PROVOCADAS POR EL ADSORBENTE c.

VIII
ALUMINA 73
ALUMINA
en un complejo aluminico filtrandolo en columnas de alumina y eluyen­
dolo con alcohol (Francis y col. 1019). , 0 o
Los derivados halogenados de los terpenos, especialmente 103 halu­ ".cf -C#
ros terciarios, son facilmente dehidrohalogenados en la alumina activada ' lL)c '1 \ 0
alcalina. Pueden obtenerse grandes rendimientos de los hidrocarburus /'-.: ~> ~LI 1

I 1--1
,/'-.V~
1/"Cp'
originales no saturados, a partir de los hidrohaluros (Zaoral 3666). I, )
Oroshnik y col. 24 20 han observado un reordenamiento prototr6pico del
== = = = = Ac 0 /
OH/" 'OCOCH 3 AcO~ 1 /oH
acetileno -C C-CH 2-C a aleno -C C C-C
lumnas de alumina alcalinas alcoh61icas 0 de florisil.
por Ja acci6n de co­
H 1I" /
Geissman y col. 1094 han observado la eliminaci6n de una molecula (1) (II)
1 de acido acetico de ]a xantinina Br o
I :"
1
(-C = C-C
1 1 1
= CR-CO) 1 RO , ,~I
1)1
/~
1 AI,O, _,
I/' ~\
,~
('V" '-.) )
i(
1
OCOCR, (X) '-./ /
COOCH3
ACO " ' ''~/
H COOCH 3
AcO'
I I I I I H
para formar xantatina (- C C- C = =
C - CO), sobre columnas de (III) (IV)
alumina. Una reacci6n amlloga provocada por la alumina activada ha
sido dcscrita por Hein 1356. CH 2 ·OH CH,'OH
I I ­
R OCOCR, CO CO
1 1
/'J/~ / __> ( 'J~ / LH -J/ ",OH
R,-C-C - R, ~ R, - C==C - R, ~(I ->
1 1
CNCN
1
CN
1
CN
o~l)~/J 0""")'-.) /­

H
",LI
11
Debe evitarse el uso de acetona como disolvente cuando se utilizan (V) (V I) (V II) (VIII)
columnas de alumina, debido a que se producen reac:ciones de condensa­
[. ci6n que provocan la formaci6n de sustancias oleosas 794.
En el terreno de los esleroides) se han mencionado muchas reacciones YICOCH
Br
Y"IC1
interesantes producidas por la alumina, tales como la saponificaci6n de '-.V " I
~~I
3 - .... I I COCH3
",,­
los benzoatos de los esteroides 487, la liberaci6n de una molecula de acido H H
acerico de un acetato de esterol, con la formaci6n de un doble enlace 220 0
(IX) (X)
(I -) II ), la debromuraci6n de esteroides 242G (III ..... IV ) y de lactonas 276\
y la inestabilidad de un cetoesteroide a~-no saturado 794. Reichstein y
HOCH 3 OH H3C OH
~hoppee 26uS han demostrado que las ~5-3-cetonas (V) suiren una isomeri­
/'J/~COCH3
I
' J ) (""O ' / 'J/ ) '",,0
zaci6n a il1 -3-cetonas (VI) por la acci6n de la alumina qne contenga
~
(
alcali, y C!ue esto no ocurre cuando esta alumina se neutraliza previa­
1
('V "("/ I .
(,lr-- 1 1
1\1,0, r /"r))'-. I

mente (d. Shoppee y Summers 2~7(}) .

Fieser 947 ha infotma:1o sabre la existencia de una migraci6n similar
HoAA / HOA/""'~ HO.....l/~
del doble enlace con alumina lavada con icido, Elks y col. 382 ha de­ (XIII) (XI) (XII)
mostrado que la migraci6n de doble enlace de los il 9 -7-cetoesteroides a
il s-7-cetoestcroides puede impedirse tratando la alumina con acido acetico
y reactivando por acci6n del calor. , /TI
( i l -:
OH
COCH 3
'VC"(jO
H3C OH

o",,(~l)

Al tO

O /'-. 0,/'-. 0"""""''')' --'

'I 1
8Y
0 ->
<~/
I~ (XIV) (XV) ; ,
74 REACCIONES SECUNDARIAS PROVOCADAS POR EL ADSORBENTE c. VIII ALUMINA 75

Se presentan a menudo perdidas considerables con hidroxicetonas
lib res de los tipos (VII, VIII) que pueden evitarse completamente utili­
zando alumina neutralizada; es preferible, sin embargo, cromatografiar
los 21-acetatos (Reichstein y Shoppee 2658).
Los mismos autores han descrito tambien la sustituci6n de bromo
series alifaticas, en las que, por ejemplo, un bromoleato se trasforma en eI
correspondiente ricinoleato. Los· mismos autores establecen que el bro­
muro de alilo, por sl mismo, no reacciona con alumina activada a ]a
Iy /'-V:'-./

I I

por cloro al cromatografiar el compuesto (IX) sobre alumina que habia

I )
;\eO/ OH"""/
:):
-,
HO/'Y"") RoJ:XXBr-;oJ:XXOH
sido neutralizada por tratamiento con acido clorhidrico diluido y des­ OAc
pues lavada abundantemente con agua.
Stavely 8085 ha descrito una isomerizaci6n muy interesante provo­
(XXI) (XXII) (XXIII) (XXIV) .!
cada por una columna de alumina: eI ~5-pregnanediol 3,17-ona-20 (XI) temperatura ambiente. Pero cuando se filtra una soluci6n en eter de
da eI is6mero (XII) , teniendo un anillo D hexadclico ; se produce un petr61eo de :3-bromociclohexeno a traves. de una columna de alumina,
compuesto ana logo (XIII) por la acci6n del hidr6xido de potasio sobre, el adsorbente se calienta y cambia su color al azul. .
(XJ) ; la 17 (a) -hidroxiprogesterona (XIV) sufre la misma isomerizaci6n, Cremlyn y Shoppee 654 han descrito la descomposici6n parcial del
pasando a (XV). Shoppee y Prins 2969 han confirmado estas observacio­ 7~-toluenO-p-sulfonil-oxicolestano (XXV) por la acci6n de la alumina
nes, anadiendo que la magnitud de la isomerizaci6n depende del tiempo
I I
/'-VI))
de contacto con la alumina.
/I--..::vH
'-VI )
. (~)"OH
Sarett 2820 ha observado dos reacciones interesantes de la cianhidrina AI,O,
~
l~1
<
del esteroide (XVI); cuando se hace pasar sobre una columna de alu­ I'./I'..AOTS
H H H
mina lavada con iciclo, el esteroide se deshidrata para dar un nitrilo
(XXVI) (XXV) (XXVII)
CH~R2 CHaR2 CH2 R a
I I I neutralizada en pentano, para dar colesteno-7 (XXVI), mientras que eI
CO HO-C-CN C-CN
I uso del 6xido de aluminio alcalino en pentano da colesteno-7a-ol (XXVII),
O",,/'-V ,
o~X~~ O~/P

R(~
AI 2 0 J U AI,Ol -+ I cuya formaci6n se debe a una inversi6n de Walden.
0(-

alkaline (I ( acid (II Fieser y Stevenson 940 han descrito una isomerizaci6n de 3-ceto-4­
R 1 ."""/1' ./ R ... './T'.../

cxOAe
1 H H / H l
'./
(XVIII) (XVI) (XVII)
o"'y )
--+ Acor' i'i
' 1( " /
no saturado (XVII), mientras que una columna de alumina alcalina pro­
o
voca la eliminaci6n de una molecula de icido cianhidrico, regenerando la (XXVIII) (XXIX)
cetona original (XVIII) con un rendimiento del 90 %.
acetato (XXVIII) a 3-acetil-4-cetoesteroide (XXIX) sobre la alumina
Heusser y col. 138~, han observado la hidrataci6n de un 5.6-6xido
considerando que se forma un acetal dclico como compuesto intermedio.
(XIX) a 5,6-diol (XX) sobre alumina, y Liebermann y Fukushima 2007 han
Los gluc6sidos cardiot6nicos acetilados se cromatografian mejor no
sobre alumina sino sobre silicato .de magnesio, para evitar la perdida de
grupos acetilo (Aebi, Schindler y Reichstein 19, 2842).
ACO£+) --~ Aca(D
~OH
EI ozonuro del colesterol no puede ser eluido de una columna de alll­
mina 193.
o
Muchas de las reacciones secundarias sobre la alumina pueden evi­
(XIX) (XX)
tarse eliminando el alcali libre por lavados, primeramente con icido y
informado sobre migraciones acilicas observadas al cromatografiar monoce­
despues con agua 0 bien lavado solamente con agua 92~ (ver tambien pa­
tatos de 3,4 dioles sobre alumina (XXI ~ XXII) y el reemplazo de bromo
gina 26).
por oxhidrilo en el bromuro alllico (XXIII) (Fukushima y col. 1Q63). Vease
Plattner y Pfau 2.526 han demostrado que los picratos de los hidrocar­
. tam bien la publicaci6n de Keverling-Buisman y col. 17{)5. Sutton y Dut­
buros aromaticos se disocian cuando se pasan sabre alumina, reteniendose
ta 31159 observaron una inestabilidad similar de los bromuros alilicos en las eI icido pic rico en el extremo superior de la columna mientras que el
 76 REAccrONES SECUNDARIAS PROVOCADAS POR EL ADSORBENTE c. VIn
4 CARBON
hidrocarburo pasa en el eluato. Este es un metodo pn'tctico para la 77
descomposici6n de estos picratos, tambien aplicable a los estifnatos y los ganeso. Meunier y col. 2196 describieron la descomposici6n oxidativa del
trinitrobenzobtos 1907. 1008 . Los picratos de los alcaloides, sin embargo, ~-caroteno y licopeno con bi6xido de manganeso.
son transformados en clorhidratos si se utiliza alumina activada con acido
clorhidrico 0 Wofatit M/ RCI (Karrer y Schmid 1643). De la misma ma­
nera, Wieland y col. % ·16 han transformado el ~-antraquinonsulfonato del 4. CARBON

alcaloide curare, en su clorhidrato, utilizando alumina activada con <ici­

do clorhidrico. Puede consultarse tam bien en la pagina 517 la prepara­ EI carbon puede provo car la amin61isis de los amino<icidos y tambien
la oxidaci6n completa a anhidrido carb6nico, agua y amoniaco (Wachtel
ci6n de <icidos inorganicos.
y Cassidy 3433) . Estas oxidaciones pueden evitarse utilizando pequeiias
cantidades de cianuro de potasio 0 agua saturada con <icido sulfhidrico

! 2. SiLlCE Y SILICATOS

Arbuzov e I saeva 72 han informado sobre la isomerizaci6n de .Ios

hidrocafburos terpenicos por cromatografia en silicage'.
Borgstrom 317 ha observado la isomerizaci6n de los 2-monogliceridos
a 1-monogliceridos durc.nte la cromatografia sobre <icido silicico.
Los esteroles pueden sufrir isomerizaciones en silice activada en pre­
sencia de solventes halogenados 3295.
Soloway y col. 3047 han observado la isomerizaci6n del ep6xido del
esteroide (XXX) a la metilcetona (XXXI), por calentamicnto 0 bien
(Tiselius 321)6; Schramm y Primosigh 2880). A menudo son inevitables al­
gunas perdidas en el transcurso de la eluci6n de sustancias adsorbidas
en carb6n (Tisclius y col. 3Z68) . Consultese tambien el capitulo sobre
"adsorben tes modificados".
Pueden descomponerse los picratos de los aminoacidos por adsorci6n
sobre carb6n, y los clorhidratos son eluidos con <icido clorhidrico diluido
(Robson y Selim 2708). Los picratos de bases, pOl' ejemplo del indol, pue­
den descomponerse por cromatografia sobre sulfato de calcio (Henbest
y col. MG3).
5. POLARIZACION POR ADSORBENTES

CH
I
3
Weitz y col. 3498, 3499 han descrito la polarizaci6n provocada por los
O-G-OAc OAc OAc o adsorbentes. Sustancias incoloras no polares, tales como los triarilme­
--.lA .. ·OAc
~ ~ . j'i'g-CH "(5,0~
3

./ J-~
(XXX' (XXXI) (XXXII) (XXXIII)
por cromatografia en silicagel; Leeds y col. 1047 han informado sobre una
conversion anruoga de (XXXII) a (XXXIII), por calentamiento 0 bien
mediante el silicagcl.
Los adsorbentes <icidos (tierra de fuller, Jagolita, Superfiltrol) con
un octeto electr6nico incompleto,. adsorb en carotenoides y vitamina A
para dar una coloraci6n verde 0 azul. Meunier 2105 ha comrarado este
fen6meno a la reacci6n de Carr-Price (vease tambien Zechmeister y San­
doval 3689). Meunier y Vinet 2199 describieron con detalle los aspectos
te6ricos de la a:lsorci6n de formas mesomericas de vitamina A, de ~-ca­
tanos, pueden polarizarse sobre alumina 0 silicagel, con formaci6n de zo­
nas coloreadas. Por eluci6n con solventes polares, los compuestos incolo­
ros pueden recuperarse inalterados. Este fen6meno ha sido investigado
tambien por Buu-Hoi y Cagniant 490, en relaci6n Con los derivados del tri­
fenilmetano, y por Cruse y Mittag 6G8, 61)9, para el di- y trinitrobenC'eno.
Schonberg y col. 2872 seiialaron series 'de antronas, nitrotoluenos, espiropi­
ranos y xanthidroles que dan adsorbatos fuertemente coloreados con alu_
mina activada 0 con silicagel. En el caso del "adsorciocromismo" de
las hidroxinaftOfjuinonas descrito por Green y Dam 1210, es posible una
explicaci6n a traves de la formacion de una sal alcalina.
6. RESINAS DE INTERCAMBIO rONIoo

roteno y vitamina D.
El talco pueae provocar la formaci6n de acetales de aldehidos de la Las reacciones secundarias en las resinas de intercambio i6nico se
consideran en la pagina 112.
serie porfirinica en presencia de metanol (Fischer y Conrad 967).

3. moxIDo DE MANGANESO

Wald 3447 ha descrito la "oxidaci6n cromatogrMica" de la vitarnina A

a retineno (-CR 2 RO --+ -CHO) en una columna de bi6xido de man­
 · (
CAPiTULO IX

INTRODUCCI6N

Los trabajos fundamentales de separaciones cromatograficas que uti­

lizan resinas de intercambio ionicD, derivan principalmente de los estudios
efectuados sobre energia atomica en Estados Unidos de Norteamerica.
Laseparacion de I" mezcla de Jos productos de Ja fision pfesento
serios problemas de tipo analltico, especialmente en las mezclas de Lan­
tano, Samario, Europio, Ytrio, Cerio, Praseodimio, Neodimio y Prometio,
as! como en mezclas de Cesio y Rubidio, Estroncio y Bario, Zirconio y
Culombio, existentes en cantidades del orden de las trazas.
Para resolver estos problemas se utilizaron resinas sinteticas de in­
tercambio cationico en combinacion con las tecnicas de la elucion croma­
togrMica. La separacion de los elementos de las tierras raras se logro
mas tarde en gran escala y precisamente en este terreno es donde las
tecnicas cromatograficas har. hecho la mayor contribucion a! campo de
la quimica inorganica. En el transcurso de estas separaciones, se eneon­
tro que las tierras raras, previamente consideradas espectrogrMicamend
puras, contenian muchos componentes. En un caso, Spedding 30.9 encon­
tro, determinando el coeficiente de extincion en un supuesto standard
espectrogrMicamente puro, que la muestra obtenida por cromatografia
daba 120 %.
La separarion de sustancias organicas se considera en el Capitulo XIV.
El tema del intercambio ionico ha sido desarrollado, en las mono­
grafias de Nachod 2332, Walton 8471 , S-I72, Samuelson 2799, Kunin y Myers 18~8,
Martin 2J59 Cassidy 530 Osborn 2420. y Austerw.eiI108. as! como tambien
en los artic~los de Tompkins 328\ Kunin 1832-1835, Pepp~r 2488, Boyd 350, Ga­
pon 108\ Applezweig 71, Myers 2328-23311, Bauman y col. 163, D'Ans y col. 696,
Juda y col. 1607 y Davies 712. Deuel y Hostettler'rM efectuaron una revision
historica sobre las resinas de intercambio ionico.
Las resin as de intercambio ionico se emplean tambien en numerosos
procesos industriales, tales como el ablandamiento del agua, refinacion
del azucar, concentracion de metales y catalisis de reacciones, en procesos
globales y no en combinacion con columnas de eJuci6n. Estas aplicacio­
nes no se consideraran en este libro.
Los prim eros intercambiadores cationicos fueron silicatos, tanto como
 c. IX
INTRODUCC16N
82
productos nal:urales -tales la montmorilonita 0 tierra de fuller-, 0
bien como aluminosilicatos sinb~ticos preparados con aluminio y silicato
de sodio.
La aplicaci6n de estos intercambiadores inorganicos esta limi.tada a
una escala de pH muy estrecha, ya que se peptizan en so!uciones alcali­
nas y se disuelven en acidos. La Jagolita, tierra del grupo de la montmo­
rilonita, ha sido utilizada para la adsorci6n de vitamina E 2m y tambicn CAPiTULO X
para cc,rotenoides .2 197; la tierra de fuller, para la vitarnina K 2G8i2 Y para
azucares 1995; el decalso (silico alumina to sintl~tico), para la vitamina K 246, RESINAS SINTETlCAS DE INTERCAMBIO IONICO
vitamina B1812 y pigmentos urinarios 884; la Permutita (otro alumino sili­
cato sintctico) para antibi6ticos 1342, 1650 Y tambien para la hormona go­ 1. PROPIEDADES
nadotr6pica 16,19.
·1 La alumina lavada con icido actua como intercambiador ani6nico 3549
y la alumina que contiene iones sodio, como intercambiador ' cati6nico
La primera sintesis de una resina de intercambio i6nico fue efectuada
por Adams y Holmes en 1935 14, quienes obtuvieron un producto de con­
(vease pag. 27). . densaci6n del <icido fenolsulf6nico con el formol; Liebknecht 2009 y
Recientemente Kraus y col. 1778" han utilizado sales de zirconia illlSO­
t lubles, tales como los tungstatos y los fosfatos, para separaciones de inter­
Smit 3013 prepararon sustancias similares por sulfonaci6n del carb6n.
Todas las resinas poseen grupos reactivos OH y COOH y ademas
cambio i6nico de los metales alcalinos. los grupos de intercambio SasH que son mas importantes.
Para preparar una resina que tenga solamente una clase de grupo
reactivo, D'Alelio GS3 procedi6 asulfonar un polimero hidrocarbonado
que contenia anillos bencenicos (estireno con 10 % de divinilbenceno).
Puede prepararse una resina analoga con grupos basicos, haciendo reac­
cionar el polimero con el. eter clorometilico:

-CH-CHc -CH-CH.­
,. A A­
IJ + CH 3 0CH,Cl .... yl+ CHaO fl

1·
~ "'" CH,CI

y haciendo reaccionar despues los grupos cloro con aminas terciarias,

-CH-CH z­ -CH-CH,­
r
A,.
I~ + R3 N -+ ~. I
Y YCH,NR
+
CHzCI 3 + Cl­

Pueden consultarse los detal1es de las sintesis de resinas de intercambio

i6nico en la publicaci6n de Craig ~42.
Los grupos fun cion ales iicidos (0 basicos) de un intercambiador esta­
ran siempre ocupados por los iones de carga opuesta. Cuando la resina
{;J
retiene hidrogeniones se dice que esta en su forma "hidrogenica" 0 acida,
de la misma manera que cuando retiene iones sodio se dice que esta en
su forma "s6dica", etcetera.
Cuando se forma un polimero que contiene grupos activos -por
ejemplo el sulf6nico-, la ionizaci6n de los grupos respectivos no se altera,

1
 C.X 3 GRANULOMETRIA 85
RESlNAS SlNTETlCAS DE INTERCAMnlO lONICO
84
En u~ folIeto comercial de la Dow Chemical Co. 807 se enumeran
y por 10 tanto se produce una estructura similar a una esponja, cuyp.s
algunos efectos de enlace. "Los copolimeros de estireno que contienen
propiedades son identicas a las del mon6mero 162, 164. Las resinas que
tienen grupos sulf6nicos 0 grupos' pequenas cantidades de divinilbenceno (1-4 %) se caracterizan por las
amino cuatemarios estan muy ioni­ siguientes propiedades:
PH
zadas, aun cuando son insolubles y 1. Alto grado de permeabilidad.
2
J::~ '\
4 ,
~ reaccionan enteramente. Las resinas
que contienen grupos fuertemente
2. Cbntienen gran cantidad de humedad.
3. En base a su volumen sus capacidades son pequenas. .j
;
\ ,
,
ionizables -como el sulf6nico y el 4. Los valores de equilibrio son elevados.
\0
" '\
E cuatemario-, se denominan inter­
cambiadores energicos, y aquellas
5. La estabilidad fisica es p equena.
6. Disminuyc la selectividad para distintos iones, pero aumenta la

J1A B \
I
resin as que contienen grupos s610 capacidad para acomodar grandes iones."

\ \ ' f,
-
1
I parcialmente ionizados -tales como
el carboxilo, el hidroxilo y el ami­ Los copolimeros del estireno que contienen gran des cantidades de di­

4 6 8 o 110---:, se denominan resin as de in­ vinilbenceno (12-16 %) exhiben caracteristicas opuestas. Puede tomarse

2
2 N NaOH, MGJ5 G.Resin como termino medio de contenido de divinilbenceno la Dowex Fine Mesh

tercarobio debil. Puede demostrarse

Fig. 24. - Curvas de titulaci6n de el grado de ionizaci6n, asi como Resins, que contiene 8 % de divinilbenceno, y los terminos superiores 0

varios grupos funcionales intercam­

tambien la similitud con el mon6­ inferiores se refieren precisamente a ese contenido del 8 %. La relaci6n

biadorcs cati6nicos: A) fen6lico OR; entre el grado de enlace y la croma tografia de sustancias organieas puede

B ) metilensulf6nico CH,SO,H; C) mero, titulando, por ejemplo, la

carboxilo COOR; D ) y E) grupos forma hidrogenica de una resina consultarse en los capitulos sobre aminoacidos y peptidos.

sulf6nicos nucleares SO,H (Tomp­ acid a, tal como la. Dowex-50. Se

kins 3282).
logra una curva de titulaci6n iden­
titula un acido fuerte con una base 3. GRANULOMETRIA
tic a a la que se obtiene cuando se
fuerte I( fig. 24). La Tabla 19 da la conversion de numero de tamiz a diametro de

Existe una analogi a similar cuando se titulan resinas de intercam­ particula.

bio debiles, que dan entonces curvas de titulaci6n tipicas de acidos de­
biles y bases debiles. Puede consultarse el traba jo de Topp y Pepper 3258 TABLA 19.-Conversi6n de numero de mallas a diametro de particula 807 .
para las curvas de titulaci6n.
Ditim.etro de las partieulas
2. ENLACES
Mallas Pulgadas mm Mieron es
- - ­ - ­-
Pueden obtenerse distintos grados de enlaces polimerizando distin­ 20-50 0,0331-0,0117 0,84-0,297 840-297
tas cantidades de divinilbenceno con polistireno. En las resin as Dowex 50-100 . 0,0117-0,0059 0,297-0,149 . 297-149
el grado de enlace se expresa en terminos del porcentaje de divinilben­ 100-200 0,0059-0,0029 0,149-0,074 149-74
200-400 0,0029-0,0015 0,074-0,038 74-38
ceno, ya que no se dispone todavia de un metodo para su determinaci6n > 400 < 0,0015 < 0,038 < 38
directa.
Por ejemplo, la Dowex-SO-X4 se prepara con una mezcla de estireno
y divinilbenceno que contiene 4 % de divinilbenceno. Cuando disminuye el tamano de la particula de una resina de inter­
cambio i6nieo (50-100 mallas 0 mayor aun), se observan los siguientes
.. , _CR-CHeCH-CHeCR-CHe .,. efectos 807 :
CH=CH z CH=CHz

6 A
+ IY II
--+

6 Q 6 CH>CH-CT-l'

1.
2.
.3.
Disminuye el tiempo necesario para obtener el equilibrio.
Disminuye el flu jo.
Aumenta el gradiente de presion en la columna.
CH=CHz I' (t 4. La expansi6n del con junto durante el cido de regeneracion es
Divinilbenceno ... -CHeCH CH-CHc ., .
Est;reno mayor.

6 6 5. La eficacia de un determinado volumen de resina aumenta 0 el

 86 RESINAS SINTETIGAS DE INTERGAMBIO IONICO C.X 4 GARACTERlSTICAS DE ALGUNAS RESINAS DE IN.TERGAMBIO IONIGO 87
volumen de resina necesario para llevar a cabo una operacion es­
pedfica disminuye. b) Resinas complejantes
La preparaClon dt resinas que contengan grupos complejantes en
+. GARAGTERiSTICAS DE ALGUN AS RESINAS DE INTERGANlBIO IONIGO vcz de grupos de intercambio ionico ha sido ideada por Skogseid 3009 me­
diante la adicion de grupos. dipicrilamina (vease la formula) para Ja fija­
a) ProJ)iedades de las resinas
... -CH-CH,-··.
De las consideraciones teoricas efectuadas se puede deducir que para
la sclcccion de una resina con fines analiticos deben conocerse algunas (~ .
caracteristicas import antes de las ' mismas. En la mayor parte de los casos o,N/Y "l\02
1 esta informacion se obtiene en los cat;§Jogos de los fabricantes de las resi­
nas. En las Tablas 20 a 23 se tabulan un cierto numero de resinas de las
N-H
02N" ¢/N02
que mas se utiJ izan en la actualidad. !/
,I
I TABLA 20. - Intercambiadores i6nicos tipo Duolite (Tompkins 3231).
"­
NO,

c. c, A, A3 ci6n del potasio. Las mismas ideas fueron utilizadas y ensayadas por Me­
llor 2181 y por Dwyer y col. 844. .

Composici6n qui mica Tipo fenol-formaldehido

Grupos activos . . . icido sulf6nico amina alifa.tica c) R esinas de intercambio electronico
I
Densidad (humedo)
1,07 1,13 1,07 1,08
Cassidy 52U, 3351 ha descrito Ja preparaci6n de resinas de intercambio
Color . . . . . .
blanco a ro~ado amarillo claro electronico mediante la polimerizacion de la vinilhidroquinona ya sea
Capacidad en mEq/ g secada a 80' C
2,75 3,44 9,35 6,65 sola 0 bien mezclada con estireno. En publicaciones posteriores, Ezrin
Capacidad en Eq/l volumen hiimedo
0,5 1,2 2,25 2,0 y Cassidy ~31 comentan algunas de las propiedades de estas resinas. Sus
Estabilidad quimica
incstable a los agentes oxidantes
curvas de titulaci6n (voltios sobre porcentaje de oxidaci6n) son lfneas
Estabilidad fisica ...... .
estable a perlodos de calentamiento relati­
casi rectas desde 0,24 voltios a 0,4 voltios. Por 10 tanto, pueden considerarse
vamentc breves a 77-100' C, peTo no abso­
como un sistema redox insoluble que tiene un valor E" = 0,32 voltios.
lutamente estable a csas tcmperaturas

Rasta ahora no se han descrito aplicaciones cromatograEicas para estos

intercambiadores electr6nicos. Sin ' embargo, se han efectuado algunas
reacciones haciendo pasar las soluciones a traves de estas columnas, como
TABLA 21. - Intercambiadores i6nicos tipo Permutita (Tompkins 3281). por ejemplo en la reduccion cuantitativa del dicromato 0 bien en la
Permutita Q De Acidit.
oxidacion 0 en la reduccion de la mezcla yoduro-yodo. Para estas reac­
Zeo Karb Zeo Rex
ciones se han utilizado tambien en otras formas ya sea dispcrsas en papel
de filtro 0 precipitadas en tierras diatomaceas.
Color.
negro imbar amarillo anaranjado
Forma . .
granular granular esferica granular
Densidad seca gil
735 925 900 610
Composici6n quimica general
sulfonada sulfonada sulfonada alifitica
carb6n fen61ica hidrocarburo amina
Grupos de intercambio .
COOH y S03H SO,R R,N
SO,H

t Anilisis
Capacidad en mEq/g
.. S=6%
1,8
S = 8,5 %
3,0
S = 16 %
5,0 6,7
 4
88 RESINAS SINTETICAS DE INTERCAMBIO H'lNfCO c.x 1 cARACTERISTICAS DE ALGUNAS RESfNAS DE JNTERCAMmO J6NICO 89

T p. BLA 22. - Resinas de intercam'bio i6nico tipo AmberIite,

(Resumen de sus propiedades segun sus fabricantes.)

Amberlite Amberlite Amberlite Amberlite Monobed

Amberlite Amberlite Amberlite Amberlite Monobed Monobed
IRA-410 IRA·41I IR-4B IR-45 MB·]
Resina lR-120 IRe-50 IRA·400 IRA.-401 MB-2 .MB-3

Fuertemente Mas Debilmente D€bilm ente Mezcla

Tipo Fuertemente D6bilmente Fuertemente Mas Mezcla Mezcla
acido acido basico poroso blisico poroso basico basico de de de
intercambiador analogo a intercambiador intercambiador Amberlite
intercambiador intercambiador in tercambiador analogo a Amberlite Amberlite
cati6nico ani6nico Amberlite ani6nico ani6nico IR·120
cati6nico ani6nico Amberlite IR-120 IR-120
IRA-400 lRA-41O y y y
Amberlite Amberlite Amberlite
IRA·400 IRA-410 IRA-410
con
indicador

Amina Amina Poliamina Poliamina

Grupo activo Acido sulf6nico Acido Amina Amina EI mismo que sus componentes
cuatcrnaria cuaternaria
nuclear carboxiIico cuaternaria cuatcrnaria

GI6bulos Gl6bulos Gl6bulos Granular Gl6bulos GI6bulos

Formas Gl6bulos Gl6bulos Gl6bulos GI6bulos GI6bulos con
CI CI CI CI OH OH H
Na H H indicador
OR OR R
OR

Densidad (Iibras pie 3 ) 53 43 42 42 44 42 35 42 44 44 44

Humedad 44-48 45-55 40·50 55-60 35-45 53-63 40-45 37-45 EI mismo que sus componcntes

Granulometria (mm) * 0,45-0,6 0,33-0,5 0,35·0,45 0,40·0,55 0,35·0,45 0,35-0,50 0,4-0,55 0,35-0,50 El mismo que sus componentes

Capacidad dc intercambio to­

tal kg como CO,Ca por pie 3 41,5 71,0 22,0 17,5 26,0 15,0 65,0 43,0 9,0 11,0 11,0
mEq/ml resina hUmeda 1,9 3,5 1,0 0,8 1,2 0,7 3,0 2,0 0,4 0,5 0,5
mEq/g resina seca 4,25 10,0 2,5 3,0 3,0 3,0 5,23 5,0

Temperatura inaxima (OF) 250 250 140 140 105 105 105 212 140 105 105
(forma OH) (forma OR) (forma OR) (forma OR)

Rango de pH efectivo 1-14 7-14 0-12 0-12 0-12 0-12 0-7 0·7 0-14 0-14 0-14

Aumento maximo de 5 100 5 10 5 10 25 15 EI mismo que sus componentes

volumen % ** Na-'> H H-'> Na CI-'> OH CI-'> OH Cl-'> OR Clc.. OH OH-'> HCI OH-'> HCl

" Malia que retiene el 90 % de la muestra .

.>*% de aumento de volumen intercambiador cuando varia su forma.

TABLA 23. - Resinas de intercambio i6nico tipo Do~ex (segun sus fabrieantes).

NombTe,____________________________ D~o~w_e_x__5_0________~----~---D--o-w-e-x--1__-----------------D--o-w-e-x--2~--------------~-D--o-w-e-x-.-3.-------
Intercambiador ani6nico Intercambiador ani6nico Intercambiador ani6nico
Tipo Intercamolador cati6nico debilmen'te basico
fuertemente acido fuerte basico fuertemente basico

7,5 % No definido
Enlace - Standard % 8% 7,5 %
DVB
45 45 45
Densidad aproximada 53
(libras/pie 3 ). Material
standard
Trimetil-bencil-amonio Dimetil-etanol-bencil­ Poliamina
Gn.:.po activo Acido nuclear sulf6nico
,;- amonia

CI CI OH
Forma Na (20-50 mallas)
H (todas)
Esferas Esferas Esferas
Forma Esferas
20-50 20-50 20-50
Malia standard 20-50
Aproximadamente Aproximadamente Aproximadamente
Capacidad total (seca) 5 mEq/g
3 mEq/g 6 mEq/g
forma H+ 0 CI-
3 mEq/g

Aproximadamente
Aproximadamente Aproximadamente
Capacidad total (humeda) 1,8 mEq/ml
1,1 rnEq/ml 3 rnEq/ml
forma H+ 0 CI-
1,1 mEq/ml

40 % (forma CI-) 30 % (forma basica)

Humedad 55 % (forma H+)
45 % (forma CI-)

forma H+ 0 CI­
OH OR OH
Variaci6n de volumen
/),.V
Na

=-8%
{).V = + 24 % /),.V = + 14 % {).V =-20 a -30 %
CI
CI CI
H

TABLA 23. - Re'sinas de intercambio i6nico tipo Dowex (segun sus fabricantes) (Cont.)

Nombre Dowex 50 Dowex 1 Dowex 2 Dowex 3

Selectividad _ e. g. KNa Na CI CI
H K H = 1,2 K OH= aproximadamente K OH = aproximadamente

Orden de selcctividad Ag > Rb > Cs > K > I> N03 > Br > CI > Ace- I > NO, >Br > CI > OH
para los iones NH. > Na > H > Li tato> OH > F > Aceta to > F

Rotura < 15 % < 25 % < 25 % < 25 %

Expansi6n < 40 % a una velocidad
2
de < 35 % a una velocidad de < 35 % a una velocidad de < 35 % a una nlo­
flujo de 4 gpm/pie 'flujo de 2 gpm/pie 2 flujo de 2 gpm/pie 2 cidad de flujo de
2 gpm/pie 2

Caida de presi6n aproxirnadamente 0,5 libra/ aproximadamente 0,5'libra/ aproximadamente 0,5 libra/ aproximadamente
pie a 5 gpm/pie 2 pie a 5 gpm/pie 2 pic a 5 gpm/pie 2 0,5 libra/pie a
5 gpm/pie 2

Mallas especiales (se- 50-100, 100-200, 200-400, 50-100, 100-200, 200-400, 50-100, 100-200, 200-400,
cas) --400, coloidal -400 ' ---400

Enlaces especiales 1 % -16 o/dDVB 1 % - 10 % 1 % -10 % No definida

Estabilidad - termica Buena hasta 150 C 0

forma OH- regular hasta forma OH- regular hasta En un prinClplO li­
50 0 C 30 0 C mitada a 65 0 C
forma CI- buena hasta forma CI- buena hasta Son necesarios mas
150 0 C 150 C 0
datos

Estabilidad - solvente Muy buena Muy buena Muy buena Muy buena

Estabilidad - oxidaci6n Disoluci6n lenta en HNO~ Disoluci6n lenta en HN03' Disolucr6n lenta en HN03 Buena

15 % en caliente 15 % en caliente 15 % en ealiente

Estabilidad - red ucci6n Muy buena Desdoblamiento ante agentes reductores azufrados Desconocida
 EQUILIBRIO DE INTERCAMDlO ENTRE VARIOS JONES 93

La hidrataci6n de los iones disminuye la afinidad, tal como 10 de­

mostr6 Jenny J573 y, por otra parte, las experiencias de Wiegner 3:;44, 354:;
indican que en distintas mezclas de alcohol y agua las afinidades del
cesio y del sodio se hacen mas parecidas a medida que disminuye la
diferencia en la hidratacion.
Boyd, Schubert y COp53 han efectuado una investigacion completa
CAPITULO XI de las afinidades relativ as de distintos cationes para las resinas de inter­
cambio cationico. Este trabajo tiene una importancia especial en la
EQUILIBRIO DE INTERCAMBIO IONICO identificacion de isotopos radiactivos de elementos desconocidos. En la
Tabla 24· pucden observarse los valores de la energia libre de "formacion
de la sal", y el radio ionico de algunos metales est udiados con Am­
Cuando se sumerge en una solucion de doruro de sodio una resin:!
berlite IR-1.
de intercambio i6nico en su forma hidrogenica, los hidrogeniones de la
resina son reemplazados · por el sodio, y el cloruro de sodio se convierte
asi en acido clorhidrico. TABLA 24. - Energia libre de "formaci6n salina" y radio i6nico para algunos metaJes
Esta reaccion de intercambio ionico puede ser considerada ya sea (Boyd y col. 353) .
COIDO un sistema de adsorcion que siga las isotermas de Langmuir 353, 337
o las de Freundlich, 0 bien como una reacci6n que siga la ley de acci6n Energia libre /:J.Fo
de masas 353; tam bien puede considerarse COIDO un tipo de equilibrio
Donnan entre el interior de las particulas. de resina y la soluci6n que 'Ion (298,1°) cal/mol Cristal radio i6nico
hay en su parte exterior 164, 1211, 1218. Coinciden todas estas teorias en que
H+ 0
\a cantidad de un ion en el interior de la particula de resina aumenta
Li+ -60 0,78
cuando. 10 hace la concentraci6n de ese ion en la soluci6n. Sin em­ Na+ 320 ·0,98
bargo,s6lo la teoria de Donnan explica correctamente la variacionde NH.+ 410
volumen al reemplazar una especie i6nica por otra. En su aplicaci6n K+ 530 1,33
Rb+ 615 1,49
del equilibrio Gibbs-Donnan a las resinas de intercambio i6nico, Gre­ Cs+ 860 1,65
gor 1211, 1218 destaca que se alcanza un equilibrio entre la presion osmotica Ba++ 1680 1,43
del ion hidratado y la presion en sentido contrario que ejerce la red y+++ 1830 1,06
elastica de los enlaces del polimero. La+++ 2110 1,22
Por 10 tanto, la afinidad de los iones existentes en la fase resina
o la "energia Jibre de la reacci6n del intercambio" esta directamente rela­
cionada con la variaci6n de volumen de las particulas de la resina durante Se demostro de esta manera que las afinidades de adsorci6n quedan
la reaccion. EI grade de polimerizacion influye sobre la "elasticidad" determinadas principalmente por la magnitud de la carga y del radio de
de la resina v, por 10 tanto, sobre el equilibrio entre los iones, tal como los iones hidratados en la soluci6n, Por otra parte, Russell y Pearce 2757
10 demostraron Reichenberg, Pepper y McCauley 2654. hallaron, en contraposicion con los resultados anteriores, que los iones del
Duncan y Lister 831 sugieren que la adsorci6n secundaria podria ex­ grupo de las tierras raras de mayor radio eran retenidos menos fuerte­
plicar la dificultad que existe para evaluar la actividad en el interior de mente que los iones mas pequenos, habiendo sido confirmada esta obscr­
la fase resina. vaci6n por Kozak y Walton 1776, Ketelle y Boyd 1702. J703 hallaron tambien
que cuando se eluyen mezclas de metales del grupo de las tierras raras
con soluci6n de citra to, la secuencia de la adsorbibilidad relativa es la /
1. EQUILIBRIO . DE INTERCAMBIO ENTRE VARIOS IONES
misma que la del radio ionico, esto es: Lantano, Cerio, Praseodimio, Neo­
dimio, Prometio, Samario, Europio, Gadolinio, Terbio, Disprosio, Ytrio,
a) Cationes inorgcinicos Holmio, Erbio, Tulio, Yterbio y Lutecio, El Ytrio se encuentra compren­
Walton 847V ha efectuado una revisi6n de los valores de la afinidad dido entre el Dispro~io y el Holmio en estas series, Utilizando esta obser­
de los cationes para distintos intercambiadores, hallando que en los grupos vacion, Marinsky y col. 2134 pudieron Jlegar a comprobar la existencia del
IA y 2A de los metales la afinidad aumenta con el peso at6mico. elemento 61 en una mezcla de tierras raras.
 EQUILIBRIO DE INTERCAMBlO IONICO c. XI 3 EL FACTOR DE SEPARACION
94 95
NH.R la resina am6nica
b) Aniones inorg6nicos y organicos MR, el compuesto de resina con tierra rara y
Kunin y Myers 1&37 han estudiado el equilibrio de intercambio de M(H,Cit) n3+n(x- 3 ) el complejo citrico de la tierra rara.
aniones con Amberlite IR-4B. La capacidad de intercambio relativa de los '
El coeficiente de distribuci6n 1<." depende de la concentraci6n del
aniones estudiados cs: .

hidr6xido > sulfato > cromato > citrato > tartrato > nitrato > arse­
ion am6nico, de la concentraci6n total de metales del grupo de las tierras
raras y del pH.
niato > fosfato > molibdato > acetato = yoduro = bromuro ~ cloru­

ro > fiuoruro. La reacci6n entre la forma clorurada de la resina con

Determinando el valor de 1<.a para un ion en condiciones conocidas,
el borato de sodio readsorbe todo d cloruro sin adsorci6n de borato. de­
es posible calcular las constantes de disociaci6n de los complejos y los
bido a la pequefilsim~. ionizaci6n de! acido b6rico. Los acidos organicos.
coeficientes de actividad de los iones. Para los detalles de este procedi­
siguen la siglliente secuencia: benzoico < oxaiico < f6rmico < acetico =
miento pueden consultarse los trabajos de Schubert y coI.2891.2896.Vanse_
low 3377, 3378 Y 613,830,2177, 281)8, 28')9, Y tambien la Parte V de este libro.
·1 citrico < salidlico.

2. ELUCION 3. EL FACTOR DE SEPARAcrON

La eluci6n de los iones unidos a la resina puede hacerse, ya sea Como medida de la posible separaci6n cromatografica entre dos iones,
por desplazamiento con un ion mas fuertemente adsorbido 0 bien con se utiliza la relaci6n entre dos constantes de equilibrio que se denomina
soluciones muy concentradas de otros iones; tambien puede disminuirse . f.actor de separaci6n u.
la concentraci6n del ion adsorbido en la soluci6n por el agregado de un
agente complejante. Ka
1
=a
Por ejemplo, en una soluci6n equimolecular de iones lantano e hi­ KG'
dr6geno, el lantano es adsorbido casi completamente en la resina; sin
embargo, en presencia de iones citrato se forma un complejo, citrato Para un equilibrio entre un citrato complejo de un ion del grupo
de lantano, disminuyendo de tal manera la concentraci6n de iones lantano de las tierras raras se usa el ion y su compuesto con la resina (par ejemplo
Ce+++ + H 2Cit-, etc.).
libres que practicamente no queda lantano en la resina.
( Tompkins y col. 3284 usaron por primera vez soluciones de acido
\ citrico con este sistema para la eluci6n de los iones del grupo de las [<.~K intercambio· K complejo • (NH'R_) a (~) a
K3,Cit NH.+ H,Cit
tierras raras. El pH de las soluciones desempefia un papel importante,
ya que influye sobre las proporciones de H 3Cit y de los iones H 2Cic, (Para la derivaci6n vease 1702 . ) AI tomar las relaciones entre dos
HCit- y Cit~-. valores de K Il, se anulan las .variaciones debidas a la concentraci6n de ion
La constante de equilibrio de la distribuci6n de un ion entre la am6nico, concentraci6n de hidrogeniones, etcetera.
soluci6n y la resina se representa por Kd POl' 10 tanto el factor de separaci6n depende unicamente del inter­
cambia y de la constante complejante:
K _ M./masa de resina _ - M. Volumen de soluci6n
-- X - - - - - - -­
,I - M ./volumen de soluci6n ­ M. Masa de resina K1 intercarnbio /(1 complejo
a- - .. - - - - ­
- K2 intercarnbio K2 complejo
en la que M. y M. son las fracciones del cati6n M en las fases resina
y liquida. Puede meJorarse una separaclOn en particular variando ya sea la
La reacci6n entre la resina amomca y el complejo citrato en los resina 0 el agente complejante. En Ia Tabla 25 se pueden observar los
metales del grupo de las tierras raras esta dada por el siguiente equili­ efectos de distintos acidos complejantes sobre el valor de u.
brio quimico: En la Tabla 26 se compara la eficacia de distintas resin as de inter­
cambio i6nico.
M3+ + 3 NH.R ~ MR, 3NH.++ (1 )
M3+ + nH,Cit 3 ;::± M(H,Cit) n3+" ('-3'
X
-
(2)
en el que 'M3+ representa el .ion de la tierra rara
96 EQUILIBRIO DE INTERCAMBIO IONlCO c. XI 5 CONDICIONES DE DESEQUILIBRIO
97
TABLA 25. -- Efecto de los icidos complejantes en e1 factor de separaci6n (Tomp­ En soluciones de concentraci6n mayor de 0,1 M, la difusi6n a traves
kins y Mayer 3285) de la particuIa determina la reaccion de intercambio para un tamano
determinado de particula de la resina. En soluciones muy diluidas, 0,003 M
Compuesto complejante pH al cued el Kd Cl
de Eu es 21, q KaPm/KaEu y menores, la veiocidadlimite. es la difusi6n desde el exterior a la super­
- - - ._ . _ - - - _. -----------~------ ficie de la particula de la resina. La difusion en el interior de la particula
Acido citrico . 3~5 1,45 de la resina depr,nde de la afinidad del ion para la resina; un ion
Acido tartarico ~85 1,94 fuertemente unido difunde mucho mas lentamente a traves de un poro
Acido lactico .
Acido sulfosalicilico
~40
~
1,71
1,49 en cuya superficie esten situados los grupos activos que uno que este ,j
Acetoacetato de etilo 7~ 1,33 menos fuertemente unido. Este retardo esta equilibrado por la mayor difu­

Acido oxalico 1,7 1,32 si6n de los iones mas fuertemente adsorbidos en Ia fas~ aeuosa. La velo­

Acido citrico en 50 % EtOH ~O 1,31 eidad de adsoreion de un ion en la partkula de la resina depend era todavia

Acetilacetona ~2 1,91
de las constantes de equilibrio, ya que eIlas determinan el gradiente de

eoneentraci6n en el interior de los poros de la resina. Esto fue demos­

trado por Gapon y Gapon 1083, al examinar la seeci6n de granulos de

TABLA 26. -- Comparaci6n de la eficacia de distintas resinas para la separaci6n del

grupo de las tierras raras (Europio y Prometio) (.Tompkins y Ma­ resina de intercambio sumergidos en una soluci6n que con tenia dos iones

yer 3285). coloreados. Generalmente los valores de la difusi6n a traves de una resina

son 5 a 10 veces menores que en el agua.

Dowex-50 Dowex-30 Duolite-C Amberlite JR-1 Hale y Reichenberg 1275 han estudiado la cinetica del intercambio

J(.Pm ](d Pm ](a Pm J(d Pm de una resina de polistireno sulfonada, en la ,cual el "proceso quimico

de intercambio" demostr6 ser el proceso de control de velocidad, siendo

pH Ka Eu Ka Eu pH J(d Eu J(a Eu pH Ka Eu KaEu pH KaEu K",Eu la velocidad de intercambio independiente del tamano de la partkula.

2,9 ' 92 1,45 2,61 118 1,56 2,40 230 1,65 2,42 39 1,32 Kressman y Kitchener 1790 estudiaron las resinas de fenol sulfonado­

3,08 18,8 1,44 2,82 13 1,57 2,55 85 1,60 2,58 19 1,24 formaldehido y sus equilibrios Con iones amonio y amonios cuaternarios

3,25 5,2 1,41 2,80 27 1,62 2,83 8,3 1,30 sustituidos. Hay dos mecanismos que controlan la velocidad: la difu­

3,00 3,1 1,52 si6n en las particulas y la capa limite de Nernst, tal como 10 demostraron

m
Boyd y co1. , Puede consultarse tambien la publicaci6n de Baumann

y Eichhorn 164.
4. DIFUSION EN LAS RESINAS DE IN,TERCAMBIO IONlCO La energia de activaci6n para la difusion depende del tamano rela- .

tivo de los poros de la resina y de los cationes, variando desde unas

De acuerdo con Boyd y col. 35\ la cinetica de una reacci6n de 5 kcaljmol, para iones pequenos, a 8 kcal/mol, para iones grandes 17n9,

intercambio i6nico puede dividirse en cinco etapas: como, por cjemplo:

I) Difusi6n de A + a traves de la soluci6n, hasta la partkula de ,- CH 3

_ r

l C>-~-CH"-{JI
la resina.
II) Difusi6n de A + en la particula de la resina.
III) Intercambio quirnico ent're A + Y BR (BR es la resina R, con CH 3

el cati6n B), en las posiciones de intercambio en el interior de la partkula.

En el capitulo escrito por Thomas para la obra "Ion Exchange",
IV) Difusion del ion desplazado B+ desde el interior del intercam­
editada por Nachod 2332, puede consultarse el tratamiento matematico
biador. de la cinetica de intercambio ionico.
V) Difusi6n del ion desplazado B+ a traves de la solucion.
Si se agita vigorosamente I y V, pueden despreciarse, y III --0
5. CONDICIONES DE DESEQUILIBRIO
sea el intercambio quimico- es instantaneo, 0 bien de acuerdo con Gre­
gor 1217,1218, inexistente. Por 10 tanto, si mediante el uso de marcadores
Puede llevarse a cabo un intercambio ionico volcando una solucion
radiactivos se puede medir el intercambio en soluciones agitadas, pueden
de un ion sobre una columna de resina saturada con otro' ion en forma /
conocerse los valores de la difusi6n en el interior de las partkulas. analoga al analisis frontal.
96 EQUILIBRIO DE INTERCAMllIO 16NICO c.XI 5 CONDICIONES DE DESEQUILIBRIO
97
TABLA 25. - Efeclo de los acidos complcjantes en el factor de scparaci6n (Tomp­ En soluciones de concentracion mayor de 0,1 M, la difusi6n a traves
kins y Mayer 3285) de la particula determina la reacci6n de intercambio para un tamano
determinado de particula de la resina. En soluciones muy diluidas, 0,003 M
Compuesto complejante pH al cual el Ka a.
de Eu es 21,9 Kd,Pm/Kd,Eu y men ores, la velocidadlimite es la difusi6n desde el exterior a la super­
--------. --~----- ficie de la pai\lcula de la resina. La difusi6n en el interior de la particula
Acido citrico 3,05 1,45 de la resina depende de la afinidad del ion para la resina; un ion
Acido lartarico 2,85 1,94 fuertemente unido difunde mucho mas lentamente a traves de un poro
Acido lactico . 3,40 1,71
Acido sulfosalicilico 5,4
7,4
1,49 en cuya superficie esten situados los grupos activos que uno que este
menos fuertemente unido. Este retardo esta equilibrado por la mayordifu­

j
Acetoacetato de etilo 1,33
Acido oxaJico 1,7 1,32 si6n de los iones mas fuertemente adsorbidos en la fas~ acuosa. La velo­

Acido citrico en 50 % EtOH 3,0 1,31 cidad de adsorcion de un ion en la particula de la resina dependera todavia

Acetilacetona 7,2 1,91

de las constantes de equilibrio, ya que ellas determinan el gradiente de

concentraci6n en el interior de los poros de la resina. Esto fue demos­

TABLA 26, - Comparaci6n de la eficacia de dis tin tas resinas para la separaci6n del
trado por Gapon y Gapon 10S3, al examinar la seccion de grimulos de

grupo de las tierras raras (Europio y Prometio) (.Tompkins y Ma­ resina de intercambio sumergidos en una soluci6n que con tenia dos iones

yer 3285). coloreados. Generalmente los valores de la difusi6n a traves de una resina

son 5 a 10 veces menores que en el agua.

Dowex-50 Dowex-30 Duolite-C Amberlite JR-! Hale y Reichenberg 1275 han estudiado la cinetica del intercambio

K.Pm K.Pm KaPm Kd,Pm de llna resina de polistireno sulfonada, en la .ellal el "proceso quimico

de intercambio" demostr6 ser el proceso de control de velocidad, siendo

pH KaEu KaEu pH KaEu KaEu pH Ka Eu Kd,Eu pH Ka Eu Ka Eu la velocidad de intercambio independiente del tamano de la particula.

2,9 . 92 1,45 2,61 118 1,56 2,40 230 1,65 2,42 39 1,32 Kressman y Kitchener 17V9 estudiaron las resinas de fenol sulfonado­

3,08 18,8 1,44 2,82 13 1,57 2,55 85 1,60 2,58 19 1,24 formaldehido y sus equilibrios con iones amonio y amonios cuaternarios

3,25 5,2 1,41 2,80 27 1,62 2,83 8,3 1,30 sustituidos. Hay dos mecanismos que controlan la velocidad: la difu­

3,00 3,1 1,52

si6n en las particulas y la capa limite de Nemst, tal como 10 demostraron

Boyd y co],351. Puede consultarse tambien la publicacion de Baumann

y Eichhorn 164.
4. DIFUSI6N EN LAS RESINAS DE IN·TERCAMllIO rONICO La energla de activaci6n para la difusi6n depende del tamano rela- .

tivo de los poros de la resina y de los cationes, variando desde unas

De acuerdo con Boyd y col. 351, la cinetica de una reacci6n de 5 kcaljmol, para iones pequenos, a 8 kcal/mol, para iones grandes 1709,

intercambio i6nico puede dividirse en cinco etapas: como, por ejemplo:

I) Difusi6n de A + a traves de la soluci6n, hasta la particula de

,- CH J~
3

O~-CH~-o
l CH
la resina.
II) Difusi6n de A + en la particula de la resina.
III) Intercambio qUlmico entre A + Y BR (BR es la resina R, con J

el cati6n B), en las posiciones de intercambio en el interior de la partlcula.

En el capitulo escrito por Thomas para la obra "Ion Exchange",
IV) Difusi6n del ion desplazado B+ desde el interior del intercam­
editada por Nachod 2332, puede consultarse eI tratamiento matematico
biador. de la cinetica de intercambio i6nico.
V) Difusi6n del ion desplazado B+ a traves de la soluci6n .
.Si se agita vigorosamente I y V, pueden despreciarse, y III - 0
5. CONDICIONES DE DESEQUILIBRIO
sea el intercambio quimico- es instantlneo, 0 bien de acuerdo con Gre­
gor 1217 , 1218, inexistente. Por 10 tanto, si mediante el uso de marcadores
Puede lIevarse a cabo un intercambio ionico volc"ando una solucion
radiactivos se puede medir el intercambio en soluciones agitadas, pueden
de un ion sobre una columna de resina saturada con otro ion en forma I
conocerse los valores de la difusi6n en el interior de las particulas. analoga al anal isis f ron tal.

 98 EQUlLInRIO DE INTERCAMBIO lONICO c. XI 6 CROi\IATOGRAFIA CON SOLVENTES ORGANICOS 99

Si la vclocidad de flujo y el tamano de la particula es tal que se
logre un equilibrio perfecto, se obtendra una curva tal como la repre­ 6. CROMATOGRAFIA DE INTERCAMBIO IONlCO
sentada en Ja fig. 25. Dicha curva fue lograda con velocidades muy CON SOLVENTES ORGANlCOS
pequenas por Ekedahl y co1. 875 • Es, sin embargo, una condici6n ideal a

,~ I
r- . ­
Recientemente se han efectuado diversas investigaciones sobre la elu·
ci6n de iones con solventes organicos 0 mezclas de los mismos. Car·

'~I
o
iJ
1.0 ~
I
", l
:::
-"c c
0.8
~
1 ~
" 0.6
M-4
0.4

I I
0.2
o Volumen eluido

Fig. 25. - Equilibrio de eluci6n (esquematico). 1000 t, minutos

Fig. 27. - Adsorci6n que muestra condicion es de desequilibrio (Boyd y col. 3~2).
la cual no se llega generalmente en Ja practica. Debido a la velocidad
de-flujo y al tamano de particulas generalmente muy grande, se obtienen
casi siempre curvas tales como las representadas en la fig. 26.
Boyd y col. 352 han estudiado las condiciones de desequilibrio desde
1.0.. o O<Q ""
00

0
0

"!
'0
'0
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SN -13

~
0.6
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Q,

"c 80
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~
" 0
OAf \l
0

o.2f \ %
o Volumen eluido
\.,
Fig. 26. - Desequilibrio de eluci6n (esquematico). 100 1000 10000
t. milluloJ

Fig. 28. - Desorci6n cn condiciones de desequilibrio (Boyd y col. 352) .

el pun to de vista de un equilibrio incompleto y sin considerar la difusi6n
I
) ,
vertical que tiene el mismo efecto. Sus resultados experimentales, usando
is6topos radiactivos en una columna saturada con el mismo ion, pero leson 506 ha desarrollado metodos para la separaci6n de zinc, cobre, niquel,
inactivo, se pueden observar en las figuras 27 y 28 para la adsorci6n y la cobalto, manganeso y hierro sobre Dowex-SO con disolventes tales como
desorci6n; y en la figura29 para una banda eluida cromatogrificamente. la metil n-propil cetona que con tenia agua y icido clorhidrico. Tanto en
 EQUILIBRIO DE INTERCAMBIO romco
100
este trabajo como en el que se efectu6 con papel de filtro impregnado
con resina 1937, parece ser que esta desempeii.aba el papel de fase estacio­
naria inerte, sosteniendo el acido clorhidrico y el agua. La presencia de
acido clorhidrico parece ser que disminuye las propiedades de intercam­
bio i6nico.
---n--.
,~
Wi:son 35Dl Y DeVault 7:;9 bosquejaron una teorla matematlca sobre
Fig. 29. - Banda eluida, mostrando en el frente y en el final condiciones
de desequilibrio (segun Boyd y col. 352) .
Kember y COP679 investigaron la separaclOn de cobre y niquel en
Zeo K arb 225 y recomiendan utIlizar acetona que contenga 4 % de acido
clorhidrico y 10 % de agua como disolvente. En este caso, las propicdades
de intercambio i6nico de la resina parecen interferir, ya que en otras
mezclas de acetona-acido clorhidrico no se puede obtener una separacion
nitida . Vease el trabajo de D'Ans y col. on.
Carroll 513, que examino la secuenciad e elucion de los acidos orga­
nicos de la resina Dowex-1 con alcohol, llega tambien a la conclusion
de que la secuencia de elucion parece verse influida por los coeficientes
de particion asi como por los valores de pK. Pueden consultarse tam bien
en este sentido los trabajos de Kornberg y Pricer 17GD, Kennedy 1'688 y
Savary y Desnuelle 2833 .
c. XI
I
CAPITULO
TEORIAS SOBRE LA ELUCION CROMATOGRAFICA
XII
EN COLUMNAS DE INTERCAMBIO IONICO
la adsorci6n cromatogrifica, que fue posteriormente ampliada por Gluec­
kauf 1142-11J<;', 592, por Weiss y sus colaboradores 2399 y otros. Dicha teoria
ha prestado grandes contribuciones a la cromatografia practica ' y, en
realidad, se ha utilizado principalmente para el calculo de las isotermas
de adsorci6n a partir de los datos de eluci6n. La teorla de los procesos
que tienen lugar en las columnas fue desarrollada primeramente por
Martin y Synge 215S, haciendo la ana10gia con la destilacior, fraccionada,
y sus principios y resultados se comentan en d Capitulo Xv. Utilizando
un procedimiento similar, Mayer y Tompkins 2176 obtuvieron una ecua­
cion que reJaciona el volumen del disolvente necesario para eluir el pico
de una banda con la constante de equilibrio:
Fn"x = C (vease tambien pag. 120 ) ( 1)
en la que F m• x es el numero de veces que V ha pasado a traves de
la columna cuando se ha eluido la banda.
v = volumen de la soluci6n en la columna.
e= distribuci6n del soluto en cualquier placa, esto es, la constante de equilibrio
corregida para la relaci6n entre e1 volumen de la resina y el volumen del disolven te.
Beukenkamp y col,237 expresaron la ecuacion:
U'= ev (2 )
en la que UX es el volumen que ha pasado a traves de la columna
cuando la concentracion del soluto es maxima, esto es, cuando el pico
se eluye. Dado que prefieren medir el volumen que se recolecta hasta
que el pico queda eluido, que es el volumen agregado a la columna mas
el volumen que csta ya con tenia, expresan:
U" = ev + V
ecuaClon en la que UX queda definido como volumen eluido cuando la
concentraci6n del soluto es maxima.
 - ~,

I
104 ELUCION CROMATOGRAFICA EN COLUMNAS c. XII

constantes de la sustancia, puede tambien calcularse las condiciones del

eluyente 6ptimo.
A pesar de 10 antedicho, para la separaci6n 0 para la identificaci6n
de sustancias desconocidas, se utilizan mas los datos obtenidos sobre las
bases empiricas habituales.

CAPITULO XIII

PAPELES DE INTERCAMBIO rONICO

EI papel de filtro comun contiene generalmente una cierta can tid ad

de grupos carboxilo cuyo efecto puede ser importante en cromatografia,
por 10 menos en ciertos casos, tal como 10 han demostrado Schonfeld y
Broda 2873 Burma 458 Bosrott 32-5 Schute 290-7 y tambicn Ultee y Harte! 3344
quienes d~terminaro~ cro~atogr~ficamente el contenido en grupos carbo:
xilo del pape!.
Sin embargo, si se quiere utilizar el pape! para cromatografia de in­
tercambio i6nico, es aconsejable aumentar su capacidad en tal sentido.
Wieland y Berg 3558 10gra!'On la formaci6n de grupos carboxilo en
el papel, por oxidaci6n con N 2 0 4 , segun Yackel y Kenyon 30-10, produ­
ciendo asi un papel que con tenia hasta 5 % de grupos carboxilo. Este
papel es facilmente soluble en alcalis y debe utilizarse s610 con disolventes
acidos. Wieland y Berg emplearon este pape! para la separacion de
aminoacidos e iones inorganicos (Ag + Pb-Bi-Hg y Sb-As-Sn), asi como
tambien para los alcaloides de! curare. Strole 3153 continuo este traba jo es­
ttidiando detalladamente las variables (pH, reguladores, contenido de car­
boxilos) para la separaci6n de los a:minoacidos basicos. Puede utilizarse
para la cromatografia de peptidos la oxicelulosa comercial (vease Capitu­
lo XXXI). En el trabajo de Lautsch y col. 188G pueden consultarse las tec­
nicas de preparaci6n de papeles carboxilicos, sulf6nicos y piridinicos. Sober
y Peterson 3043 prepararon una carboxil-celulosa tratando celulosa fuerte­
mente alcalina con acido cloroacetico. Pueden separarse protein as sobre
esta celulosa, en columnas, utilizando reguladores de fosfatos como elu­
yentes (vease figs. 91 y 92).
Varios investigadores han descrito los papeles fosforilados (por ejem­
plo Walravens y Chantrenne 34G9) de los cuales proveen en la actualidad
los fabricantes del pape l ''''hatman. Kember y Wells 1(;S~ llcvaron a
cabo separaciones inorganicas - por ejemplo, de hierro-cobre-niquel-,
utilizando cloruro de sodie. 2 N como solvente. Para separaciones de
intercambio ani6riico, tales como las de oro-platino-paladio-rodio, reali­
zadas con acido clorhidrico 2 N como revelador, se puede utilizar un papel
obtenido a partir del algod6n, que haya sido tratado conacido 2-amino­
. etilsulfurico.
 106 PAPELES DE INTERCAMBIO IONICO c. XIII
,Jermyn y Thomas 1587 prepararon papel basico, por oxidacion con
peryodato y condensacion con 2-aminoctilhidrazina. Micheel y Albers 2203
prepararon, por su parte, un papel hidrof6bico que contenia grupos car­
boxilo libres.
( ' Un metodo simple para preparar papeles de intercambio ionico con­
siste en sumergir tiras de papel en las suspensiones coloidales de la~
respectivas resinas Dowex. Estos papeles han demostrado comportarse 1937
como las columnas de resina correspondientes. De esta manera pueden
seoararse Jas mezclas de tierras ra ras con' soluciones de citrato mediante
soluciones de Dowex-50, y mezc1as de cobre-hierro-cobalto con icido c1or­
hidrico, en papel de Dowex-2 . EI mismo trabajo se ha hecho con la
! Zeo Karb 225 0 la Amberlite IRA-400, incorporadas al papel tal como 10
./' ha descrito Hale 1273 .
Lederer y Kertes 1942a suministran algunos datos te6ricos de un pa­
pel de resina Dowex. EI valor de RJf de un ion (para su definicion. vease
la pif,. 133 ) varia directamente con el pH cuando se utiliza un <icido
acuoso como eluyente. Esta re!aci6n permite el cilculo de las condicio­
nes 6ptimas para la separaci6n. Se ha estudiado detalladamente el com­
portamiento de los iones selenito y telurito para confilmar tales obser­
vaClOnes.
CAPITULO XIV
COMPORTAMIENTO 'DE LOS COMPUESTOS ORGANICOS
EN LAS COLUMNAS DE INTERCAMBIO I6NICO
En este capitulo vamos a considerar algunas caracteristicas de la
separaci6n de sustancia,s organicas en columnas de intercambio i6nico.
Estas separaciones se han llevado a cabo con numerosas sustancias
ionizadas, tales como los aminoacidos, las purinas, las pirimidinas, los
necle6tidos y los complejos b6ricos de los hidratos de carbono.
1. EFECTOS DE ADSORCION
Con los aminoacidos, el equilibrio invoJucrado en la reaCCIon de
intercambio es e1 que corresponde al de las formas no ionizadas, a las
ionizadas y a las denominadas de "intercambio". Davies 711 estudi6 el
mecanismo de ese intercambio, y pudo demostrar que la adsorci6n mo­
lecular era muy grande y que aumentaba con eI peso molecular. Este
mismo investigador, en colaboracion con Thomas 71\ ha demostrado que
tambien los icidos y las bases organicas se pueden ad sorber en su forma
no ionizada (vease, tambien, pag. 109 ) .
Las sustancias aromaticas se adsorben mas fuertemente que las ali­
faticas, fenomcno que fu e estudiado deta'ladamente por Davies y Tho­
"mas 714 para los icidos benzoico y fenilacetico, en comparacion con los
acidos dtrico y tartirico. La cantidad adsorbida es, independiente del
tamano de la particula, exceptuando eI caso de las . moleculas muy
grandes.
La afinidad de los icidos grasos de cadena recta para la Duolite A-2
(intercambiador anionico) ha sido estudiada por Robinson y Mills 2703,
quienes demostraron que aumenta segun el disolvente y segun el siguiente
orden: Acetona ~ agua ~ solvente Shell.
Weiss MD3 e Idler 1400 observaron la adsorcion molecular de indicado­
res sobre resinas de intercambio ionico; Idler utilizo como indicador
fenolftaleina adsorbida, para localizar una banda de <icido aspartico en
la columna.
 /
.i

COMPUESTOS ORGA N ICOS EN COLUMNAS c.XIV <)

108
2. CROMATOGRAFIA DE ADS{)RCrON EN RESINAS DE INTERCAMBIO JONICO
En una serie de investigaciones llevadas a cabo en los laboratorios de
investigacion de la Dow Chemical Company se estudi6 la posibilidad de
separaciones que dependieran mas de la adsorci6n que del intercambio
i6~ico producido en la superficie de resinas de esta. Tales separaciones
pueden dividirse en dos grupos: I ) Separaci6n de sustancias organicas de
sales inorganicas, denominada exclusi6n i6nica, y II) separa-ci6n de dos
o mas sustancias organicas no ionizadas. Tal como se ha demostrado en
el trabajo con intercambio i6nico, las resinas ' tienen una superficie muy
grande, son completamente permeables y penniten as! una adsorci6n
reversible .
f.
C!lOMATOGRAFiA DE ADSORCION EN RESINAS
109
La Dow Chemical Company BOB recomienda; para las operaciones de
exclusion i6nica, resina Dowex-SO, con eI 4-12 % de enlaces. Se han
llevado a cabo operaciones en escala experimental con columnas de
3S galones de capacicad, obteniendose las siguientes separaciones en pro­
cesos "dclicos", esto es, semicontinuos (vease fig. 31): acido clorhi­
drico, de :icido acetico; :icido c1orhidriw, de :icido dicloroacetico; :icido
tricloroacetico, de icido dicloroacetico; cloruro de sodio, de etilenglicol y de
gEccles superiores; cloruro de sodio, de alcohol etilico, de formaldehido,
e-o-oHCI
~HAc
- - - - --teorico

~ 1.2

a) Exclusion i6nica '----1

, ,
"'" ,
En su trabajo referente a los productos de la fision, Tompkins y
col. 3284 demostraron que una resina de intercambio cati6nico permite "
~
~
::::.,1.0

0.8 '­
/'\
/:Ie
que la atraviese el ' acido clorhidrico 0 el icido yodhidrico sin que se pro­
duzca ninguna adsorci6n. Por su parte, Wheaton y Bauman 3525 demos­ ""
~
~ 0.6
traron que los icidos organic os debilmente ionizados, como el icido ace­
i:
tico, 0 bien moleculas organicas neutras, tales como los alcoholes polihi­
dricos, se adsorben con mas 0 menos fuerza y, por 10 tanto, si una mezcla
~ 0.4

0.2 1­
:! He!
1.024.--,- - - - - - - - - - - - -----,
c L20.
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Fig. 32. - Exclusi6n i6nica: separaclOn completa.

1.000?--) ~v:,:o..O'/ o-/~ J';"o'-q} v7\,

Resina: Dowex-50 X 8 %, 50-100 {l1allas. Alimentaci6n: IS ml acido

clorhidrico 1,17 Ny acido acetico 0,66 N (Wheaton y Bauman 3525) .

i6nico

o 20 40 60 80 100 120
Tiemp o de eluci6n (min)
Fig. 31. - Exclusi6n i6nica: cic\os semicontinuos. Flujo : 0,62 gpm/
pie cuadrado, 1 volumen de llenado: 3 volumenes d e lavado
(Whea ton y Bauman 3525).
de acido clorhidrico y de icido acetico ~~ hace pasar por una columna de
Dowex-50 H+ , el acido clorhidrico se eluye primeramcnte, y luego la
sustancia organica, dependiendo la separaci6n de la afinidad de adsor­
ci6n de la sustancia organica en la superficie de la resina.
Con la forma s6dica de la resina Dowex-50, son posibles separaciones
tales como la del alcohol del cloruro' de sodio, y sc han sugerido posibles
aplicaciones industriales para este proceso.
140 160 180 200 de alcanolaminas, de etilendiamina, de aminas superiores y cloruro de
amonio, de aminoacidos. En la figura 32 se representa una separacion
ti~ica.
b) Separaciones no ionicas con resinas de in,tercambio ionico
Dado que se ha demostrado que Jas sustancias no ionizadas 0 debil­
mente ionizadas son retenidas sobre los intercambiadores i6nicos, es evi­
dente que podran ser separadas unas d:! las otras. Wheaton y Bauman 362·/
estudiaron minuciosamente el efecto del enlace y de la granulometria en
la adsorci6n de numerosas sustancias. Para ilustrar las posibles separa­
ciones se ieproduce una tabla con los valores de Kd (vease pag. 94) de
sustancias organicas en resinas Dowex (Tabla 27). Los po cos ejemplos I
),
='

",!,

c.XIV 4 OCLUSION
110 COMPUESTOS ORGANICOS EN COLUMNAS 111

establc~cidos hasta ahora indican que la cromatografia de adsorcion sobre gan tamano de porb grande , puede ocurrir tarito la reaccion como el
intercambio con los polimeros.
resinas de intercambio ionico tiene un futuro muy promisorio tanto en el
laboratorio como en la industria. La propiedad que poseen ' las 'resinas de intereambio de ad sorber
grandes moleculas ha sido utilizada pOl' Richardson 2678 para purificar
TABLA 27. _ Constantes de distribuci6n de sustancias organicas en resinas Dowex colorantes de aigodon directos. Pueden eliminarse todas las sales inorga­
(Whea ton y Bauman 3524) CO SO = 0,05. nicas por pasaje a traves de intercambiadores cationicos y anionicos.
Las moleculas proteicas, aun los peptidos de elevado peso molecular,
Soluto (en soluci6n acuosa) Resina Kd pueden no pasar los poros de resinas que tengan suficientes enraces (vease
Gilbert y Swallow 11Q5, Thompson 3236 y Partridge 24U5).
Dowex-50-X8 H+ 0,67 El xantato de cclulosa (viscoso)' no es adsorbido en intercambiadores
j. Etilenglicol 0,24 anioi1icos y, por 10 tanto, puede asi ser Iibrado de los ' aniones inorganicos
,I 5acarosa 0,22
que 10 contaminan (Samuelson y Gartner 2803) •
v-glucosa . 0,49
Glicerol 0,74 '
Trietilenglicol 3,08
Fenol . 0,71
Acido acetico . 1,20
4. OCLU'SJON
Acetona 0,59
Formaldchido . 0,61 AJ considerar la relacion entre el tamafio molecular y el tamafio
Metanol
Dowex-J-X 7,5 CI- 1,06 de los poros, debieramos mencionar, los efectos que se han observado con
Formaldehido 1,08 zeolitas porosas. UtiHzase aqui el termino "oclusion" ypudo observarse
Acetona 1,12 diferenciacion entre moIeculas relativamente pequefias. La chabacita,
GJicerol 0,61
Metanol por ejemplo, adsorbe todo eI n-heptano de una mezcla de heptano y to­
17,7
Fenol . lueno, mientras que el tolueno, no penetra en los poros del mineral
Dowex-l-X850.-- 1,02 (vease .530) •
FormaJdehido 0,66
Acetona
Dowex-50-X8 Na + 0,45
Xilosa. 0,56
Glicerol
5. RESIN AS ESPEciFJCAS DE INTERCAMIlIO JONICO
0,39
Pen taeri tri tol 0,63
Etilcnglicol 0,67 Se han propuesto modificaciones de los grupos activos de las resinas
DietilenglicoJ 0,61 sinteticas de intercambio ionico, para obtener resinas mas 0 menos selec­
T rictilengJicol .
,.! Etilendiamina .
Dietilcntriamina
0,57
057
0:64
tivas especificas"
La mercuraci6n de un polimero fenol-forrnaldehido produce una re~
T rieti\entetramir{a. 0,66 sina que elimina selectivamente, los mercaptanes de las soluciones acuosas
Tetraeti\cnpentamina. "" "
(Miles y col. 2214). El glutation reducid6 y la cisteina son retenidos cuan­
titativamente por la resina Y 'Pueden ser recuperados por elucion con
3. COMPORTAMJENTO DE LAS GRANlJES MOLlicULAS
2-mercapto-etanol. La coenzima A tam bien se retiene y puede ser eluida
Deuel y col. 755,756 estudiaron el comportamiento diferencial de poli­ con sulfuro de potasio 0,1 M a pH 7,7. . La infl uencia del pH en la
retencion de compuestos diferentes por parte de la resina, aSl como tam­
meros y monomeros; la eupleina, el acido poligalacturonico, el acido poli­
bien las distintas efectividades de los diversos agentes eluyentes, ofrece
manuronico y el icido !Jolimetafosforico no son intercambiados, dado que
una interesante posibilidad para la separacion ' cromatografica de II1er~
sus moleculas son demasiado grandes para penetrar en los poros del in­ captanes.
tercambiador (Amberlite IR-4B), mientras que los monomeros corres­
pondientes se intercambian f<i.cilmente. La hidrolisis catalitica de esteres Grubhofer y Schleith 1235 trataron la Amberlite XE-64 con qumma;
y disacaridos (con Amberlite' IR-120) progresa por sus pequenas molecu­ mediante la "columna asimetrica", 'y obtuvieron de esta manera la reso­
luci6n de los antipodas 6pticos del acido mandelico.
Jas tal ' como sucede con las del acetato de etilo, maltosa y ester metil­
gaJacttironico, pero no con los correspondientcs poJinieros: glucogeno, Estos mismos autores 1234 han diazotado los grupos amino de una
pollvinil-acetato y ester metil-poligalacturonico. Sobre resinas que ten­ resina basica, copulandola despues con proteina. Sostienen que las enzi­
 "1 1
.'

112 COMPUESTOS ORGANICOS EN COLUMNAS c.XIV 6

mas conservan su actividad despues de haber sido fijadas de esta manera
a la resina.
Isliker 1522 describio la purificacion de anticuerpos mediante antige­
nos unidos a resin as de intercambio i6nico; y mediante la fijacion del
estroma: de eritrocitos en resinas de intercambio ani6nico, Se obtienen
columnas que adsorben espedficamente la isoaglutinina. De una manera'
similar, es dable transformar las resinas de intercambio cationico en sus
cIoruros icidos, y estos se pueden hacer reaccionar con la seroalbumina,
con 10 que la resina modificada fija espedficamente el anticuerpo homo­
logo. Pueden tambien fijarse los virus sobre resinas carboxiIicas en la
forma de cIoruro icido, las que, de esta manera, se hacen espedficas
para la fijacion de los correspondientes anticuerpos de dichos virus. Se
puede lIevar a cabo la elucion de los anticuerpos adsorbidos ya sea modi­
ficando el pB 0 mediante la accion de otras hidratos de carbono que ten­
gan afinidad especial para los anticuerpos.
Manecke y Gillert 2120 han preparado, por metodos similares, resi­
nas inmunologicamente espedficas, diazotando el poIiaminoestireno y co­
pulando la sal dediazonio con anticuerpos (suero anti-leche de vaca)
las resinas obtenidas acsorben espedficamente el antigeno hom6logo.
6. REACCIONES SECUNDARIAS DE LOS COMPUESTOS ORGANICOS
SOBRE LAS RESIN AS DE I NTERCAMBIO IONICO
REACCIONES SECUNDARIAS DE LOS COMPUESTOS ORGANICOS
113
me 26;7 hallaron que hasta las' resinas de intercambio anlonico debil­
mente basicas, tales como la De-Acidite G, reaccionan en su forma hidroxi­
lada con los azucares, dando diversos <icidos, entre ellos el acido glicerico.
Este inconveniente puede eliminarse utiIizando la De-Acidite G en su forma
de acetato (para la separaci6n de icidos de aZtlCares en extractos vegeta­
les libres de aininoa.cidos).
Los nucle6sido s y nucle6tidos pueden hidrolizarse parcialmente por
la accion de las resinas de intercambio cationico; Anderson y col. 54 han
inform ado que la resina Dowex-50, aun en la forma amonica, produce
una profunda hidro!isis del enlace glucosidico de los desoxirribonucleosi_
dos; particularmente en el adenina-desoxirrib6sido, que es el que la co­
lumna retiene durante mayor tiempo. Esta hidrolisis no se presenta con
las resinas de intercambio anioniw (Dowex-2 en la forma de formaio).
Lund y col. 2000 informaron la hidr6Iisis parcial del ATP a ADP can re­
sinas deintercambio cationico, y Stadtman y Kornberg 3081 la descom­
posicion de la coenzima A sobre Dowex-50. Por su parte, K enner y
col. 1602 senalaron la destruccion de los nucle6tido s de uridina sobre las .
resinas de intercambio anionico.
La azaserina, que contiene grupos diicidos aliHticos debiles se des­
truye (0 se ad~orbe irreversiblemente) sobre Dowex-50 (H+), Zeo Rex
(H+),. Amberlite IRA-400 (OH-), XE·97 (H+) y XE.98 (OH-) (Fu­
sari y col. 1065) .

Cuando se opera con resinas de intercambio i6nico, debe tenerse

en cuenta que son icidos 0 bases insolubles y que pueden provo car por
este motivo un gran numero de reacciones sobre los compuestos orgi­
nicos: hidrolisis de esteres (Bernhard y Hammett 227) ; hidr61isis 0 sintesis
de gluc6sidos (Mowery 2296); hidrolisis de enlaces peptidicos (Paulson y
col. 24.72; Dixon 788); aldolizacion, cetoIizacion, crotonizacion y condensa­
ci6n de aldehidos y cetonas (Durr 836; Mastagli y Durr 2Hl7; Austerweil
y Pallaud 1\)4); hidratacion de enlaces acetilenicos (Heilmann y Gle­
na t 1354), etcetera.
Los hidratos de carbono son especialmente susceptibles a la accion
de las resinas fuertemente bisicas; Phillips y Pollard 2513, Woolf 3625 y
Hulme 1478 han demostrado la destruccion de azucares sobre Amberlite
IRA-400 (OH) 0 bien Dowex-2 (OH), con formacion de acidos lictico
y glic6Iico. Rebenfeld y Pacsu 2038, Turton y Pacsu 3336 y Sowden 305'[
han observado la isomenzacion de la D-glucosa sobre la Amberlite IRA­
400, formandose fructosa y manosa en proporciones aproximadamente
iguales a las que se forman cuando la D-glucosa se pone en presencia de
soluciones acuo:;as diluidas de hidroxido de sodio.
Buhler y col. 447 estudiaron la epimerizaci6n y fragmentacion de la
glucosa por resinas de intercambio anionico del tipo de bases am6nicas
cuaterparias mediante el uso de la glucosa-2-14C. Richardson y Hul­

CAPiTuLO XV

INTRODuccrON
1
Mal~tin 2148, 2149-, 216\ Boulanger y Biserte 3S3 y Synge 31S3 han pu­
blicado revisiones generales sobre la cromatografiade partici6n, y en 10
referente a ' la cromatografla sobre papel pueden mencionarse las si­
guientesmonograflas y. articulos de actualizaci6n: Balston y Talbot 131,
Block, LeStrange y Zweig 282, Block y col. 28la, Cramer 643, Hais' y Ma­
cek 1269, Linskens 2031 y Schoen 2871. Beriingozzi 215, Consden 015, E. Lede­
rer 1903, 19M, M. Lederer 1922,1941, Macheboeuf y col. Z()83, Martin 2152,
Partridge 2445, Pahm y Wichtl 2632 y Wankmliller 34715.
Cuando se agita la soluci6n de una sustancia con un disolvente irimis­
cible, eI soIuto se distribuye entre las dos fases, y cuando se I1ega al

!
.
equilibrio, la relaci6n
concentraci6n en el disolvente A
.
concentraci6n en el disolvente B
es una constante

U, que se denomina coeficiente de partici6n (0 de reparto).

Para poder separar una mezcla de aminoicidos, Martin y Synge 2155
utilizaron la diferencia de los coeficientes de partici6n mediante una ba­
ter5a de extractores. Aun cuando , este trabajo de extracci6n con disol­
ventes (distribuci6n c6ntra-corriente) ya era conocido y habia sido em­
pleado principalmente por Craig 641, . Martin ySynge 2156 demostraron
que era posible una extracci6n m~s eficaz mediante co1umnas de silicagel
que contenian SO % de agua, colocando en elIas la soluci6n de la mezcla
y.reveIando con disoIventes inmiscibIes con el agua, como por ejempIo el
c1oroformo con pequenas cantigades de butanol. EI liquido retenido en
la columna se denomina fase estacionaria y eI eIuyente fase m6vii. Existen
otros materiales capaces tambien de retener eI agua como fase estaciona­
ria; entre ellos, el almid6n, eI poIvo de ceIuIosa, la borra de aIgod6n, eI
amianto e inclusive eI vidrio.
Este procedimiento ha recibido eI nombre de cromatografia de parti­
cion, y es esencialmente diferente a La cromatografia de adsorci6n.
Consden, Gordon y Martin 618 demostraron que en Ia cromatografia
de partici6n podian utilizarse hojas 0 bien tiras de papeI filtrocomo so­
jJortes de Ia fase estacionaria. Esta tecnica, denominada cromatografia
.sobre papel (otros nombres propuestos son papirografia 741 y partogra­
118 INTRODUCCION
fia 2726) es probablemente el metodo que mayores apIicaciones tiene en
el trabajo analitico en microescala.
Sc utilizan general mente el agua 0 bien disolventes polares hidroxi­
lados como fase estacionaria, y disolventes mas 0 menos no polares como
fase m6vil.
Cuando se investigan sustancias Iiposolubles con pequefias solubili­
.dades en disolventes hidroxilados (acidos grasos superiores, esteroides de­
bilmente polares, etc.), es preferible retener la fase lipoidica como esta­
cionaria sobre materiales tales como el latex de goma (Boldingh 30(}), el
vidrio pulverizado (Partridge y Chilton 244u) , el kieselguhr tratado con
silicona 1460 y el papel de filtro tratado con vaselina 0 con silicona 3600.
La fase m6vil utilizada en este tipo de cromatografia, denominada cro­
matograffa de fas e invertida, es general mente un solvente hidrofilico.
~4
• La teoria de la cromatografia de partici6n, desarrollada
-
por Martin y col. 2106, la considera como analoga a la destilaci6n fraccio­
nada con reflujo total. Utilizando el concepto de una placa teorica, des­
arroI'an los autores una ecuaci6n que correlaciona la velocidad de des­
plazamiento de una zona con el coeficiente de partici6n:
R,= ~­
AL + crAs
. . . ., concentraciDn en fase acuosa
en que (). es e1 coehclente de partlclOn ., f j' 'd '
concentraclOn en ase IpOI Ica
As = area de 1a secciDn ocupada por la fase cslacionaria'
AL = area de Ia seccion ocupada porIa fase mDvil
R d istancia recorrida poria zona
radiometrico" de Lindner 2022 y unos centenares para
Y F = distancia recorrida por el frente liquido.
las columnas de intercambio i6nico (Nachod 2332)_.
Los valores del RF de los aminoacidos coinciden con los que pueden
calcularse a partir de los coeficientes de partici6n determinados mediante
metodos estaticos. Puede tambien calcularse el grade de separaci6n de
dos sustancias de coeficientes de partici6n conocidos, para una longitud
determinada de columna 0 de tira de pape!.
Eli una publicaci6n posterior, Martin 2150 desarroll6 la teo ria de los
cromatogramas de partici6n por desplazamiento, sobre una linea similar
a su teoria original, IIegando a la siguiente ecuaci6n para el desplaza- '
miento de zonas en colwnnas reguladas:
R= T no tienen la misma energia, algunas estan mas tiempo
M + ns( + :r" )
1 produciendo as! una banda con la curva caracteristica
en laque R es la relacion del movimiento de las zonas dividido por la velocidad de
desplazamiento del liquido revelador en e1 tubo correspondiente a la parte superior
de la columna;
c . XV
INTRODuccrON 119
T = area de la seccion del area total de la columna;
M = area de la seccion de la fase movil de la columna;
cr = coeficiente dc particion del acido no ionizado;
S = fu'ca de la seccion de ' la fase estacionaria en la columna y
K. = la constante de disociacion del acido.
Mediante estas relaciones, el pH 6ptimo para la separaclOn de dos
acidos A y B con coeficientes de partici6n, respectivamente a y ~, viene
dado como sigue:
Cuando ~/a < 1 y Kb/Ka < J, es aconsejable un pH elevado.
Cuando ~/a < Ka/Kb < 1, es aconsejable un pH bajo.
Cuando Ka/Kb < ~/a < 1, es aconsejable un pH alto .
Los mismos autores han considerado tambien los facto res que inci­
den sobre el enriquecimiento pOl' pasajes de una fase a otra.
Martin y Synge 2156 nan caIculado el numero de placas teoricas en
una columna de silicagel, hallando la altura equivalente de la placa te6­
rica en 0,002 cm. Los ultimos caIculos efectuados indi­
can solamente 0,02 cm (Verzele'31jJ1). Por 10 tanto,
lI,
una columna de unos pocos centimetros de altura tiene
centenares de placas te6ricas en comparaci6n COn las
20 placas que tienen las mejores columnas de destila­
ci6n -20 para una columna de alumina, en el "analisis
Hi sido tam bien establecida una relaci6n similar i I
a la de la ecuaci6n (1) para las columnas de intercam­ ~! I
bio i6nico (vease pag. 101). ~ 1\
Puede concebirse un aspecto cinetico sencillo y sin ~ '1 11111111'1'111'11111
<; f
complicaciones matematicas mediante los razonamien- '
tos de Cremer y Miil!er '650. Es necesaria una imagen
cinetica del proceso cromatogrMico: las moleculas de
un soluto detenninado estan continuamente pasando y
JII
de la fase estacionaria a la fase m6vil, y viceversa, y,
'segun el coeficiente de partici6n, estan un cierto tiempo
promedio en cad a fase. Dado que todas las moleculas
I
1
que el promedio en la fase m6vil y otras menos tiempo, Fig. 33.
de concentraci6n, similar a las curvas de distribuci6n normal.
Considerese la columna 0 bien la tira de papel de la figura 33 y dcno­
minemos x la distancia que se ha desplazado el centro de una banda
de soluto y x + y la distancia que se ha desplazado el disolvente.
 .-~-=~~~~-~~~"
--~ ~
,
.. i:

120 INTROD UCCION C.XV

Entonces x es proporcional a la solubilidad del sol uto en la fase movil

eyes proporcional a su solubilidad en la fase cstacionaria,
x 1
esto e.s a: - (ex es la particion 0 en forma mas general eI coeficiente de equilibrio),
y ex

y­
x
= ~a k en la que k es una constante
.
relacionada con eI radio de la secci6n
J'
de las fas es movil y estacionaria; tambien tenemos que:
. x I x+y y Ct C"PlTULO XVI
RF=--; y - - = - - = I +-=1 + ­
x+y Rp x x k
A CROMATOGRAFIA DE PARTICI6N EN COLUMNA
en la que /, en forma similar a la ecuacion de Martin y Synge es
1

As

As 1.
por 10 que -
1
RF
- =I + (l--
AL
= AL+aAS
AL
v Rp =--­AL
AL + ex A.
SILICACEL

Ccn los nombres de silicagel 0 acido silicico se denomina en esta

Y puede as! obtenerse un a expreslOn identica a la que se logra con
la teori a de la destilaci6n fraccionada .
De una manera similar puede obtenerse tambien el volumen nece­
sario para el uir el pico de una banda de soluto. Consideremos en la
Figura 33 a x como la longitud de una columna ' con el pico de la banda
justamente en el momento de efluir. Supongamos que y sea otra secci6n
de la columna que se utiliza para recolectar el efl uente.
1 Tal como antes ka = 2. pero y es ahora proporcional al volumen
x .
que tiene que nuir para eluir el pico de la banda y x es proporcional
al vo!umen retenido en la columna; por 10 tanto:
Volumen de efluente en el pico *
Se agrega "-cido c1orhidrieo ION, en chorro fino y con agitaeion energiea, dete­
________ _____ ~ ko. del volumen cfl uente 0 pico = Ko.
niendo a intervalos regulares la agitaeion y continu{mdola dcspues para obtener
Volumen de la columna
Mayer y Tompkins 2176 hanobtenido una expreslon equivalente en
la que se elimina K, expresando el volumen en terminos del contenido de
la columna (vease pag. 101).
* Volumen de efluente en eI pico = Fm" (ver pagina 10 I).
obra a los precipitados de silice hidratada cuyas propiedades pueden va­
riar ampliamente seglm los metodos utilizados para su precipitaci6n y
purificaci6n.
EI silicagel ,e prep:: ra gene,::llmentc prccipitando silicato de SOQIO
(vidrio liquido, vidr.o w: ub!e) con acido clorhidrico 10 N lavando abun­
dantemente el precipitado con agua y secandol o despues (Gordon y
col. 1168, y M artin 2118). Para la preparaci6n de las columnas se mezc'a
esta sust(!ncia con cl 53 % de agua y se vierte en el tubo en forma de
pasta mezclada con la fase movil. EI mctod6 exacto descrito por GOlt.
don v col. 11G~ es el siv,uien te:
"EI vidrio Iiquido eomercial (140° Tw. Jos. Crosfield, Ltd., Warrington) se
diluye a 3 volumenes en agua destilad~ que con tenga algo de anaranj ado de metilo.
una buena mezc1a. La soJueion se va transformando, primero Ienta y dcspues r'api­
damente, en una pasta espesa, debiendo destruirse los grumos por agitacion. Cuando
la rnezcla es permanentemente acida al azul de timol, se detiene d agregado de
;icido c1orhidrico y se deja en reposo durante tres horas. Se filtra en un embudo
de Buchner y se lava con agua destilada, utilizando aproximadamente 2 litros por
cada 250 gramos de gcl seeo, sin permitir que eI precipitado se resquebraje. EI gel
se suspende entonces en :icido c1orhidrieo N15 y se deja dos dias a la temperatura
ambiente, se filtra nu evamente y se lava de la misma manera con agua· destilada
(aproximadamente 5 litms por cad a 250 gramos de gel seco), hasta que los Hquidos
de lavado esten librcs de anaranjado de metilo. Finalmente, eI gel se seca a 110°
en la estufa. Con esta preparacion debe dar buen resultado eI agregado de 53 %
(pip) de la solucion de indicador al gel sew Con mezclas de bu tanol-c1oroformo
o propanol-ciclohexano. El gel seco se conserva bien en recipientes cerrados durante
mucho tiempo."
El gel preparado de esta manera eontiene nitrogeno. Si quiere utilizarse para !a
adsorcion de bases hexonieas, es neccsaria otra purificaci6n 1004 de la manera siguien •
te : Se tratan 100 gramos de silieagel durante 48 a 55 horas con 500 rnl de :iciclo
acetico al 20 %. Despues de filtrar por un embudo de Buchner, se lava el gel con
200 ml de acido aeetico al 20 % y dcspues con agua hirviente hasta que el filtrado
tenga pH 6. Se seca despues a 110° durante 6 horas. El gel contiene entonecs unos

 t
j:
l
122 CROMATOGRAF1A DE PARTICION EN COLUMNA C. XVI
20 microgramos de nitrogcno por gramo. La eliminacion total d e las sustancias
nitrogenad as se consigue tratando el silicagel en la columna en la que va a ser usado
cor. 200 m! dc acido clorhidrico 0,111' y deSplltS con 200 ml de agua.
Las columnas que contienen demasiada agua pueden dar lugar a un
fen6meno similar al de water logging en los cromatogramas · sobre papel,
y una sola sustancia puede dar mas de una banda, ya que una parte de
la bandase desplaza en la columna y la otra es retenida en la zona
"humeda", en la parte superior (Lester Smith 3025 y Ovenston 2.128).
El poder de adsorci6n del siIicagei varia considerablemente segun la
preparaci6n, y es necesario proceder a ensayarlo con mezclas standard
de sustancias conocidas.
Kay y Trueb!ood 1.665 han estudiado eI papel del agua en el com­
portamiento cromatogrMico del icido silicico llegando a la conclusi6n
de que, seg{m la cantidad de agua retenida, el acido silicico puede actuar
como adsorbente 0 bien como soporte para la partici6n. En general,
ambas propiedades contribuyen a los distintos tipos de separaci6n que
se obtienen.
Tristram 33Q\ ISherwood 1512 y Harris y 'Wick 1315 han descrito tam­
bien. otros metodos de preparaci6n del siJicagel para la cromatografia
de partici6n,
Para hacer que zonas de sustancias acidas (acetil-aminoacidos, aci­
dos grasos) se visualicen en la columna, pueden incorporarse indicadores
a la fase acuosa. Primeramente se utiliz6 el anaranjado de metilo, pero
esta sustancia es demasiado soluble en la fase m6vil. Mejores resultados
se obtienen con antocianinas y tambien con 3,6-disulfo -~-n aftaleno -azo­
N-fenil-a-naftilamina 2005.
El silicagel comercial puede purificarse de la manera siguiente:
"Se suspenden 50 gramos de silicagel (80 a 120 mallas) en 300 ml de acido
c1orhidrico concen trado, y se dejan en reposo durante la noche. El liquido sobre­
nadantc amarillo se decanta ; se agrega nuevo icido clorhidrico concentrado, se
agita y se deja nuevamente en reposo. Este proceso se rcpite hasta que la solucion
sea incolora. Entonces se filtra por succion en filtro de vidrio poroso. El residuo
que queda en el filtro sc suspende en agua y se lava por decantacion hasta que
este libre .de cloruro. Sc fil tra como antes y se suspende en alcohol etilico de 95·.
Sc filtra y se lava con 200 ml de alcohol etilico en el mismo filtro de vidrio poroso.
Sc lava .cn tonces con 200 ml de alcohol etilico absolu to; sc suspcnde en etcr anhi­
dro, sc filtra y se lava con 500 ml de cter anhidro. .Sc calienta el gel durante
24 horas a lOa· C y, finalmente, se seca durante 24 horas en un desecador sobrc
pentoxido de fosforo, en el vado. .
"EI silicagel grado 70 de la Daviso71 Chemical Corp., purificado y desecado
de esta manera, absorbe su peso de agua, permaneciendo 10 suficientemente seco
para formar cl 'gel' con cloroformo. Es aconsejable que tcnga esta propiedad, ya
que asi se podra fijar soluciones de acidos. organicos con pequefias cant idades de
gel. La mezcla de gel y ;\.cido puede colo carse en la parte superior de la columna
en una zona compacta que permite fracciones de eluidQ nitidas.
"Es ncccsario .eI tra tamiento con :\.cido clorhidrico para e!iminar los cationes
inorganicos que forman sales , insolublcs con los acidos organicos ; el lavado incom­
pleto con acido clorhidrico provoca rccuperaciones bajas de los . :icidos. Las ·.pro.
2 "KIESELGUHR" 123
piedwes adso';tivas que presentan a v'eces algunos silicageles qucdan tambien elimi­
nadas con el proceso de purificaciOn." (Resnik y col. 2670.)
El acido silicico (Merck 0 Mallinckrodt) puede purj[icarse de la m.'l­
nera siguiente:
"Sc mezclan 500 gramos de :lcido silicico ( Merck 0 Mallinckrodt) de pureza
analitica con 800 ml de elanol acido (+00 ml de acido clorhidrico c. p. diluido a
2.400 ml con etanol 95 'Yo.). La mezcla se filtra en un Buchner y se rcpite este
lavado 3 veces por 10 menos. El filtrado del lavado final debe ser incoloro. Se
lava entonces eJ acido silicico 3 veces, de la misma manera, con porciones de 700 ml
de etanol 95·% y, finalinente, 3 veces con porciones de 800 ml de cter dietilico. Se
extiende entonces sobre un pape! blanco limpio i se seca durante 24 a 48 horas.
Se hace pasar despucs por un tamiz de 80 mallas ·' y se deseca en un secador de
vado." (Morrison y Stotz 228<1 a.)
Para Ii separaclOn de icidos grasos o . de penicilina se utilizan co­
lumnas de silicagel reguladas (vease Capitulos XXII y XXXVII). Pueden
visualizarse las bandas con indicadores 0 bien titular las porciones eluldas
con · alcali. Estos geles pueden prepararse de la manera siguiente:
"Silicagel regulado (para la purificacion de penicilin a, segun Levi · y T er­
jesen 1988): 30 g de silicagel preparados segun Martin y Synge 11GS se mczclan en
un mortero con 15 a 20 ml de una solucion de fosfato de potasio de pH 6,6 (el
rrgulador se prepara titulando una solucion de 25 partes de hidr6xido de potasio
en 100 ml de agua con una solucion acuosa de :lcido fosforico al 30 'Yo , hasta que
tenga pH 6,6 medido potenciometricamente). De esta manera, se obtiene un polvo
seco que se coloca en la columna con aceta to de amilo (disolvente utilizado para
la adsorcion de la penicilina); 100 g de este gel SOn suficientes para la adsorcion
de 3,2 g de la sal calcica de la penicilina."
2. "KIESELGUHR"
La preparaclOn de columnas de kieselguhr (Martin 2150) exige la
compresi6n de la pasta en la columna.· D ebido a la naturaleza mas com­
pacta de la silice en el kieselguhr, practicamente no se produce adsorci6n·.
3. ALMIDON
Moore y Stein 2265 (vease Capitulo XXX) utilizaron column as de al­
mid6n para aminoacidos. En estas publicaciones 3093 se describe detalla­
damente la preparaci6n de dichas columnas. En capitulos aparte men cio­
nare!TIOS otrps usos de las columnas de almid6n.
4. CELULOSA
Hough Y col. 1458 utilizaron para la separaclOn de macror. antidades
de azucares columnas de celulosa. Burstall y col. 468 las utilizaron para
 j
.. -i:

5 CAUCH'O 125
124 CROMATOGRAFIA DE PARTICION EN COLUMNA c.XVI
zada ("Mealorub", Andresen Corp., Chicago) para la separacion de es­
sepa:ar macrocantidades de cationes inorgamcos. Estos ultimos autores tr6genos.
emplean tubos de vidrio tratados con dicloro-dimetilsilano, para evitar el
Partridge y Swain 2462 han desarrollado un rromatograma de fase
deslizamiento del di.solvente sobre la superficie del vidrio.
invertida utilizando goma comercial clorada ("Allopreno", I. C.L Ltd.;
Hough y COl. 14~S recomiendan el siguiente ensayo para comprobar
viscosidad extra superior grado E) para la separacion de los 2,4-dinitro­
la eficacia de Ja columna: "Puede observarse el comportamiento de la
fenil dcrivados de los aminoacidos (can butanol como fase estaciona­
columna, colocando una mezcJa adecuada de distintos colorantes en ella ria y reguladores acuosos como fase m6vil ) .
y observando su aparicion y su separacion a medida que avanzan. Se ha
demostrado que distintos colorantes se mueven con distintas velocidades
en los cromatogramas wbre papel filtro. Los valores de R.:; para un numero
de estos colorantes se han determinado en cromatogramas sobre papel,
utilizando la capa superior de una mezcla de n-butanol (40 %), etaEol
1 °
(1 %), agua (50 %), como fase movil. Los valores obtenidos para Rg
son los siguientes: auramina 1,00, amarillo dimeti·o 0,95. azul de bromo­
timol 0,83, verde brillante cresilo 0,73, amarillo metanilo 0,48, rojo de
cresol, 0,41 , rojo de metilo 0,38, verde de bromocresol 0,30, azul de bro-.
mofenol 0,26 y anaranjado de metilo 0,23. Si .los colorantes se desp!azan
en la columna en forma de bandas horiwntales regulares se considera que
la columna es satisfactoria, pues ello indica la uniformidad de la misma.
I Estos colorantes pueden ser utilizados tambien, como localizadores, ya
I que puede incorporarse un colorante que se desplace un poco mas rapi­
damente que el componente de desplazamiento mas rapido de la mezcla
de azucares, y entonces es solamente necesario examinar el eluato despues
que este colorante emerge de la columna".
Las coilimnas, tanto de almid6n como de cellilosa, tienen esencial­
mente el mismo comportamiento general que las tiras de papel; sin em­
bargo, en general se utilizan disolventes con valores elevados de R F ) para
columnas, con el objeto de mantener el volumen de elucion necesario
dentro de Hmites razonables. Puede consultarse el trabajo de Levi 1D87
para el analisis por desplazamiento en columnas de partician. Para la
separaci6n de aminoicidos, Carter y co!. 521 han utilizado columnas de
ce1ulosa Sojka-Floc. Fischer y Behrens 963 utilizaron columnas de celu­
losa con re velado ascendente para la separacion de los derivados deJ
indo!.
Bos::ott 325 ha propuesto el acetaio de celulosa para la separacion de
feno'cs y de icidos aromiticos.

5. CAUCHO

Pueden utilizarse columnasde caucho para la cromatografia de par­

ticion de "fase invertida", en la separaci6n de sustancias lipofilicas.
Boldingh 300 ha utilizado una columna de goma moderadamente vul­
canizada saturada con benceno para la separacion de los acidos grasos
superiores (elucion con metanol acuoso).
Nyc y col. 2391 y Bosch 823 han utilizado go rna vulcanizada pulveri­
 ~ 'I
l

CROMATOGRAFiA DE PARTICION GAS-LlQUJDO

127
que cualquier diferencia de densidad entre ambas corrientes provoque una dife­
renda de presi6n y, por 10 tanto, un flujo de gas a traves del canal de conexi6n.
Este canal contiene un medidor de flujo formada par un pequeno filamento, calen­
tado electricamente, colocado por debajo y equidistante de dos uniones termicas.
Cualquier flujo de gas provoca una corriente de convexi6n caliente desde eI fila­
mento, que se dirige indistintamente a cualquiera de las uniones termicas calen-

N, Gas
CAPITUJ.O XVII /Agua
,
Dos columnns '-..11/1
CROMATOGRAFIA DE PARTICION GAS-LfQUIDO

Recientemente, Phillips 2~05a ha publicado una monografia sobre "Cro­ Cnmisa

matografia gaseosa". de vapor
EI factor mas irnportante entre los que limitan la eficacia de la cro­
matografia de partici6n Hquido-liquido es la difusi6n en las dos fases·
liquidas de las moleculas que tienen que separarse. La eficacia maxima
de las. columnas se obtiene llevando a cabo su operaci6n en la forma mas
lenta posible. James y Martin 1'53'1 introdujeron el empleo de un gas per~
manente como fase m6vil, de tal manera que la difusi6n fuera mucho D. C. amplificador
mas rapida y pudieran, por 10 tanto, utilizarse mayores velocidades de -El condensado retorna
flujo, aun con columnas de gran longitud. La tecnica ha sido aplicada al balon
G G
por primera vez a la separaci6n e identificaci6n de acidos y bases volatiles '@
(vease pags. 200 y 223), empleando la ti tulaci6n con una bureta de registro
automatico como medio de localizar los materiales en la corriente gaseosa;
en su conjunto, el procedimiento es automatico y rapido. Se han obte­
nido eficacias muy elevadas, desde 750 a 1.250 placas te6ricas, para co­
'
oI~GnIUanOmeIT; 0
lumnas de 1,20 m, habiendose obtenido para una de 3,60 m una dicacia , . d ..J . BiIlanz
. a d edenS/dad
correspondiente a 2.000 placas te6ricas.
James y Martin 153U han ampliado despues este metodo para separar gaseosa
"todas aquellas sustancias capaces de ser destiladas inclusive a presiones de
solamente unos pocos milimetros de mercurio". La conquista tecnica mas
,eg'SITad~)~ .

importante en este tipo de trabajo fue la de obtener un instrumento ca­ ~&'"

. paz de localizar cualquier sustancia eluida en corriente gaseosa (fig. 34) .
.Tames y Martin desecharon las medidas de conductividad termica por ser
inadecuadas y desarrollan un metodo de medici6n de la densidad ga­ Fig. 34. - Representaci6n esquematica del aparato de cromatogra_
seosa 2152a. fia de partici6n gas-Ifquido, utilizando la densidad gaseosa para la
localizaci6n y valoraci6n de ias· zonas (James y Martin 1530).
El instru.mento aludido mide la diferencia entre la densidad del efluente

gaseoso de los cramatagramas y el de una columna de comparaci6n a travcs de la

cual pasa solamente nitr6geno, estando las dos columnas constantemente a la misma

temperatura y con la misma presi6n de nitr6geno. El aparato est" farmado esen­

tando una 0 enfriando I~ otra. La fuerza electromotriz termica producida se dirige
cialmente por una serie de tubos perfora:dos en un bloque de cobre (mantenido
a un amplificador de corriente continua' cuya salida se conecta a· un galvan6metro
a la misma temperatura que las columnas), canectado de una manera similar a
registradar. La deflexi6n del galvan6metro esta relacianada en forma lineal a la
la de un puente de Wheatstone, de tal manera que una diferencia de fluja de las
diferencia de densidad. de las dos corr-ientes gaseosas y, a diferencia del metodo
dos corrientes gaseosas del blaque no provoque diferencias de presi6n entre dos
;'> de conductibilidad tI~rrnica (usando un catar6metro), no es afectado por variacio­
puntos del sistema. Existen . dos series de canales, intercanectados de tal manera
nes de flujo gaseoso. El instrumento es muy sensible, pudicndbse localizar cantidades
del orden de 1/]6 microgramos de alcohol arnllico por rn] de nitr6geno.
 ,
: - j:

128 CROMATOGRAFiA DE PARTICIO N GAS-LiQULDO c. XVII CROMATOGRAFiA DE P ARTICION GAs-LiQumo 129

. De csta manera, pueden ser separados no sol amente los acidos y las
bases titulables, sino tambien los hidrocarburos, los cloruros alquHicos, .10s
alcoholes, los aldehidos, los esteres, . los eteres y las cetonas 1538, 153fi. La
separ'acionde isomeros se lie va a cabo de una manera mucho mas com­
pleta que con los metodos cromatogra.ficos habituales.
noo
1000
,/I so-yoduros
y aquellas que permitan enlaces hidrogeno, tal como en el caso de las
aminas primarias y secundarias en columnas de poliher. Cada serie
hom6loga. representada con volumenes de retencion en una fase wmo
abscisa y en la otra como ordenada, da una linea recta cuya pendiente de­
pende de la cantidad de enlaces hidrogeno. "De esta manera puede defi­
nirse muy aproximadamente la naturaleza de una amina desconocida."
James y Marti n 1639 han estudiado un gran numero de compuestos
alifaticos (las series CoHll-X ) estableciendo que la secuencia en una fase

900
// -'"
"
~~
-->
~ o.
AIl. idrocarburos aronllilicos
..,
1 800 c
u

700

600

500
""1"""'' '"'''''''",#"'""/'C,'""
H ...
c
~
10 15 20 25
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\. 4.r;; ., .
o
100 200 300
.. ' , ' , , ' ,
400 500 600 700 800 900 1000 1100

Fig. 35. - Rcpresentaci6n grMica de las fuerzas de interacci6n relativas en dos

tipos de fases estacionarias: parafina liquid a (ordenadas) y bcncildifenilo (abscisas)
(J ames y Martin 1539 ) .
Existen ya numerosas ·aplicaciones anaiiticas de este metodo. Little­
wood y col. 2038 han separado hidrocarburos aromaticos, esteres y alcoholes.
Cropper y Hcywuod 662 han utilizado cristales de cloruro de sodio, como
soporte de una fase estacionaria (grasa de silicona), en separacioncs a
elcvada temperatura de ·alcoholes y esteres grasos de elevado peso molecu­
lar, y Annison ~8 y Van de Kamer y col. a;wa han separado tam bien acidos
grasos por este metodo.
La teoria de la cromatografia gas-liquido ha sido desarrollada por
James y Martin 1536, y difiere de la teoria de la cromatografla Hquido­
liquido en que la fase m6vil es compresible y produce as) un gradiente de
velocidad gaseosa en la columna. Es posible efectuar observaciones muy
interesantes, cornparando fases estacionarias que retengan las moleculas
disueitas solamente por fuerzas de Van der Waals (0 dipolos inducidos)
10 20 30 35 Min utos
Fig. 36. - Eluci6n medi an te nitr6geno a 20· de c1orometanos en
columnas de 38 cm. a) Kieselguhr (6,3 ml/min); b) Kieselguhr
agua (6,3 ml/min ); c ) Agua "Teepol"-kieselguhr (7,7ml/min)
(.purnell y Spencer 2603).
aromiitica estacionaria (benci l difenilo ) es, · en orden creciente de interac­
cion: H < Cl < Br < I < NH2 < N0 2 < OR < COCH 3 < CN, mien­
tras que las columnas de parafina liquid a 0 polieter dan la secuencia:
R < OCE 3 < Br, Cl < I < N0 2 < COCH 3 < NH2 < CN < OH. En
este caso, el enlace hidr6geno desempeiia un papel mas importante que
en la columna aromatica.
James y Martin destacan la utilidad de estas secuencias, as) como
tam bien el comportamiento regular de las series homologas, para aplicar
este metodo a la determin aci6n de sustancias desconocicias.

. ~
, ,
i ;' \ .
. .-
130 CROMATOGRAFlA DE PARTICION GAS-LiQUIDO c. XVII
En la figura 35 se, representa un grafico tipico de los resultados ob­
tenidos.
Purnell y Spencer 2603 han demostrado las ventajas de agregar agen­
tes activos superficiales a la fase estacionaria, representandose sus resul­
tados en la figura 36; otras aplicaciones' pueden consultarse en las publi­
caciones de Ray 2636, Harvey y Chalkley 1321 y Pollard y Hardy 2537.
Evans y Tatlow Q25~ y Ambrose y Collerson 46a describieron la aplica­
ci6n de la cromatografia gas-liquido en escala preparativa.
En las Actas del VafJour Phase Cromatography Symposium organi­
zado por el Instituto del Petr6leo (Grupo de Investigaci6n en Hidrocar­
buras) en Londres (mayo, 1956), se describen los ultimos adelantos obte­
nidos en la cromatografia en fase vapor. Son asequibles en la actualidad
los siguientes modelos comerciales y aparatos para la cromatografia gas­
liquido: "Griffin vapour phase chromatographic apparatus", Griffin y
Tatlock (Londres); el "Vapor Fractometer", de Perkin-Elmer Corporation
(Norwalk, Conn., U. S. A.), el "Kromo-tog", Burrel Corporation (Pitts­
burgh 19, Pa., U. S, A.), el "Fisher Gulf Partitioner", Fisher Scientific
(Pittsburgh 19, Pa., U. S. A.), el "Chromacon", Podbielniak Inc. (Chicago
11, IlL, U. S, A.), etc, Estos aparatos utilizan generalmente catar6metros
para la localizaci6n de las sustancias eluidas, tal como fueron descritos
par primera vez por Ray 26 06.
-~
\' .
CAPiTULO XVIII
CROMATOGRAFIA SOBRE PAPEL
1. MECANISMO
EI papel de filtro color ado en una atm6sfera saturada con vapor
acuoso absorbe aproximadamente un 22 % de agua 1a73, Consden, Gordon
y Martin 618 consideraron al papel de filtro como un soporte inerte de
una fase acuosa estacionaria, explicando las separaciones 'que se obser­
vaban, por una partici6n continua de las sustancias entre la fase acuosa
estacionaria y el disolvente organico, inmiscible con el agua, que fluia por
el pape!. Esta interpretaci6n fue criticada posteriormente por numerosos
investigadores 468, 641, 1297, 22U5. Craig 611 imagin6 que no podia estable­
cerse un equilibrio 10 suficientemente rapido en un sistema sin agitaci6n
y, por 10 tanto, que las separaciones no podian ser explicadas ,a base de
la simple extracci6n de disolvente-disolvente. Martin 2151 destaca, sin em­
bargo, que cuando se calcula la efic;o,cia de los cromatogramas sobre papel,
basandose en las constantes de difusi6n conocidas, los resultados son
carrectos.
, Otra objeci6n importante es la siguiente: si las separaciones obte­
nidas se debieran a la partici6n entre dos disolventes, resultada imposible
emplear C1isolventes miscibles con el agua, pues en ellos solamente ex.iste
una fase y, por 10 tanto, no seria posible la partici6n. Sin embargo, nume­
rosos investigadores han efectuado separaciones de aminoacidos y otras
sustancias con disolventes hidrosolubles tales como el propanol, la acetona,
el etanol y aun el agua pura 190, 1925, 2215,2265,2322, Antes de poder tomar
partido por alguna de estas teodas, es necesario examinar detalladamente
el estado en que se encuentra el pape! de filtro saturado con agua.
Si se expone celulosa seca al vapor de agua, se adsorbe una cantidad
de esta, cerca de un 6 %, con un gran calor de adsorci6n, densidad apa­
rentemente elevada y baja velocidad de difusi6n.
A medida que se adsorbe mas agua, estas propiedades varian y se
hacen mas parecidas a las del agua liquida, especialmente la velocidad
de difusi6n. Martin 2151 compara la fase acuosa en e! pape! con una
soluci6n concentrada de un hidrato de carbono: "La fase estacionaria en

 : ~ -t .!;; :
I ,.
I
132 CR0MATOGRAFIA SOBRE PAPEL c. XVIII
un cromatograma de celulosa debe compararse con una soluci6n concen­
trada de glucosa 0, mejor aun, de alglIn polisaca.rido soluble, mas bien
que el agua saturada con la fase organica. No es sorprendente, por 10
tanto, que puedan utilizarse solventes miscibles con el agua. Una solu­
ci6n concen trada de glucosa formarn dos fases COIl propanoi acuoso; la
fase rica en hidratos de carbono contendra una proporci6n relativamente
mayor de agua, mientras que la otra fase contendre'! una proporcion rela­
tivamente mayor de disolvente organico."
Hanes e Isherwood 1297 han adoptado un punto de vista anidogo a la
teoria de Martin; consideran la fase estacionaria como un complejo agua­
celulosa. Una sustancia en soluclon se retendra mas 0 menos fuertemente
1
en este complejo segun sus propiedades hidrofllicas.
I Por 10 tanto, en rcalidad, todo gira alrededor de una cuesti6n de
tcrminos; sobre si cl mecanismo de la cromatografia de papel se define
como una adsorci6n 0 como una partici6n en el "complejo agua-celulosa".
Horner y col. 1448 han estudiado refractometricamente la distribuci6n
de agua entre el papel y el disolvente, con mezclas distintas de agua-disol­
vente; puede tambien consultarse la revisi6n efectuada por Moore y
Stein 2269.
Existe tambien una verdadera adsorci6n en el pape! aSl como un in­
tercambio i6nico con los grupos carboxilicos libres. Y estos fen6menqs
han sido estudiados por Schonfeld y Broda 2'873 , mediante indicadores ra­
diactivos, hallando que la adsorci6n de iones es similar a la que corres­
ponde a un intercambiador c2.ti6nico d6bi1. V ease tambien el trabajo de
Giles y col. 11~7 y la pagina ' 105. . '
Rutter 2758 pudo medir el potencial de flujo por centimetro para el
I agua pura, cuando fluia a traves de papel de filtro comun, demostrando
I' que era del orden de 10mV, 10 que indicaria una adsorci6n; vease tam bien
el trabajo de Epshtein 903.
Burma y Banerjee 160 cromatografiaron un gran numero de amino­
acidos y de azLlcares utilizando cl agua como disolvente. Hallaron que en
mtichos casos no se produce un retardo en las manchas (Rp = 1). Tal
cosa demostraria la ausencia de adsorci6n. Sin embargo, en numerosos
colOl'antes y otras sustancias puede demostrarse una adsorci6n conside­
rable.
"Cromatograjfa de fla1·tici6n real" . .
Tschesche y col. 3308 denominan "cromatografla de partici6n real" el
revelado en el papel que ha sido humedecido completamente con fase
estacionaria y que, por 10 tanto, no adsorbe su fase estacionaria de la atmos­
fera 0 del disolvente revelador. Esta tecnica tiene ventajas cuando la fase
I. estacionaria es organica y la fase acuosa es m6vii, tal como se utiliza para
la separaci6n de los gluc6sidos cardiacos. Can esta tecnlca sostienen estos
investigadores que desaparecen las estelas que se obtienen en la separaci6n
de estas sustancias' con otros metodos.
I'
2 CONSTlTUCION QUiMICA Y VALORES DE Rp 133
2. RELACION ENTRE LA CO NSTITUCION QUIMICA Y LOS VAL0RES DE Rp
Tal como hemos visto, los valores de Rp dependen del coeficiente de
partici6n y de las cantidades relati vas de las dos fases en contacto. Para
una columna dada 0 un papel, depende solamente dr:l coeficiente de parti­
ci6n, que es una propiedad termodin amica de una especie molecular de­
terminada, tan especifica y caracteristica como otros puntos de transici6n,
tales como el punto de ebullici6n y el punto de fusi6n .
Mientras que para la identificaci6n mediante el punto de fusi6n
o el de ebuUici6n es necesaria una muestra pura, el valor de RF no se
ve influido por la presencia de muchas impurezas, y, ademas, son necesa­
rias solamcnte cantidades microscopicas para una identificaci6n en cro­
matografi a sobre pape!. Para identificar una sustancia se mide general­
mente el valor Rp cor: un numero de disol ventes adecuados, como tam bien
los valores de RF de sustancias de referencia que se cromatograflan en el
mismo pape l al mismo tiempo. No es posibie, sin embargo, identificar una
sustancia desconocida por el valor de RI'. Numerosas mezclas 'de is6me­
ros, por ejemplo:
CH 20H CH 2 NH2
I
I
CHNH 2 y CHOH
I I
CH R CH 3
producen solamente una mancha con todos los disolventes utilizaclos ln9o.
EZ valor de R M .
Bate-Smith y WestaJJ 1;;8 han propuesto un nuevo valor para R 1,,:
IOg '( ~ -
Ru = J )
RF
que es proporcional a la energia libre del desplazamiento de un a molecula
de una rase a la otra ; tanto Bate-Smith y Westall 158 como Martin 2150
han demostrado que el valor de RM esta formado por la . suma de los
valores que representan los grupos en la molecula, y que es una constante
para un sistema disol vente dado: papel, etc. En el Capitulo XXXI, pue­
den consultarse las rclaciones entre los val ores de Ru para los peptidos,
comparados con los de sus amino:icidos constituyentes y para los fenoles
puede consultarse el Capitulo XX. Mas recientemente se ha intentado uti­
Iizar los valores RJ,f para calcular los valores R I " de compuestos determina­
dos 2~>a y tainbien para determinar las estructuras a partir de un valor
determinado de Rp en distintos disol ventes 283Ga. Con este fin , deben calcu­
larse "constantes del grupo" para el sistema disolvente a partir de valores
RIo' de compuestos conocidos, as! como tambien de las constantes del sistema
disolvente (Grundkonstan te ) .

 .- .. :!~ :
,

134 CROMATOGRAFlA SOBRE. PAPEL c. XVIII 2 CONSTITUCION QUiMICA Y VALORES DE Rp 135

Puede citarse un ejemplo de Reichl 2655a:

Disolventc: alcohol amiIico-acido f6rmico 5 N

Diso.luente 1 Disoluente 2
Pape!: Whatman NQ

Metodo asccndente
1 COOH Rp -R JJ Rp -R'l tlR..,
Glicocola 0,41 -0,17 0,24 -0,49 0,32
Acido lactico 0,76 0,50 0,52
Constantc para cI sistema disolvente (Grundkonstante ) 0,97 0,04 0,46
Cada ,\tomo de carbono 0,12 2COOH
Cada cadena lateral 025
Acido aspartico 0,39 -0,19 0,06
Hidr6xilo primario . -0,73 -1,20 1,01
» secundario Acido fumarico 0,86 0,78 0,14 -0,79
-050 Acido oxalico
1,57
» tcrciario -(,:58 0,40 -0,17 0,04 -1,33 1,16
Grupo carboxilico -0,63 3COOH
Grupo amino -1 ,65
Ccto grupo . Acido aconitico 0,82 0,65 0,02 -1,62
-0,39 2,27
Acido citrico 0,59 0,16 0,01 -1,92 2,08
\:

Valore s de R y Es evidente, asi, que el valor de !lRJ[ varia con el numero de grupos
carboxi!o y que, por 10 tanto, puede estimarse el numero de estos grupos
Calculado por adici6n
presentes. Con el mismo metoda,
·de las constantes
Macek y Vejdelek 2078. han deter­
Fenol + 0,1 Nfl, _
anteriores transformando

RM en R, minado los sistemas glicoles Iibres -G-~~ ..

~~
Hallado
en los alcaloides del veratrum.

Acido adipico
Acido citrico
0,75
0,23
0,73
0,23 Series homolog-as. <:: . ~~fl-14 28
17_

Acido g1ic61ico 0,43 0,41 j" 18 \ -~

Los acidos grasos y sus deri­ ', \
"
(.)
\ Qj
vados tienen un aumento regular
en sus valores de RF cuando au­ \ \\
En numerosos casos, por ejemplo en los peptidos, esta relaci6n no es \ "

satisfactoria. Para la determinaci6n de las estructuras, Schauer y Bur­ menta el numero de atomos de \ Q6
lisch 283~ proponen el d.lculo utilizando determinantes. Esto exige los
valores de Rp en un numero suficiente de sistemas disolventes, y un ana­
!isis del numero de unidades de cada grupo presente.
carbono. En la cromatografia de
partici6n de aminoacidos sobre pa­
pel, esta re~aci6n entre la estruc­
o f.\
~\5~
0.?~

El metodo de tlR!rI.
tura quimica y el coeficiente de
particion se evidencia claramente
"
......... 0..... . . A rtl11l0aCl'dOSbaS1COJ
-- - - - - - A minoacidos dicarboxilicos
" t>
I

por cierta regularidad que se ob­ - ' - ' - ' - ' - Aliftiticos normales
Sustancias tales como los acidos y las bases pueden ser cromatogra­ serva en la posici6n de las man­ -00-00-00­ Isoalifaticos
fiadas en su forma ionizada 0 no ionizada, segiln el disolvente utilizado. -- -- - I:lidroxialifa.ticos
chas. La figura 37 de Polson 2552
Si se utiliza un par de disolventes en los cua'es la mayor parte de los otros ilustra claramente esta relacion. Fig. 37. - Cromatograma bidimcnsional

grupos, distintos a los ionizables, tienen constante de grupo baja, la dife­ En un cromatograma bidi­ de una mezcla de aminoacidos. Las man­

rencia en los valores de Ru sera proporcional al numero de form as ioni­ mensional (pOl' ejemplo, fenol y chas debidas a acid os de composici6n si­

zables en la molecula. Reich12G55b utiliza este principio como base de milar se encuentran situadas en la misma
coli dina ), los acidos monoamino­ cUrVa (Polson 2552) .
. un metodo para determinar el numero de grupos carboxilo. Utilizando el alifaticos (glicocola, alanina, acido
sistema acetato de etilo-acido acetico-agua (2: 1 : 1), como disolvente aci­
a-aminobutirico, valina y leucina) aparecen sabre una curva; las bases
do, y acetona-acetato de amonio 0,5 N, como disolvente neutro, obtiene
leis sii{Uientes resultados: ' hex6nicas, conjuntamente, y los acidos dicarboxilicos, muy vecinos el uno
del otro (Consden y col. G1 8) . La posici6n de una mancha desconocida
permite, dentro de ciertos limites, extraer conclusiones sobre la estructura
qui mica de esa sustancia.

. I·
 . - j;>.
..
'

136 CROMATOGRAFiA SOBRE PAPEL . c. XVIII 3 EL DISOLVENTE ORCANICO 137

Los coeficientes de particion de los miembros de una serie homologa
son suficientemente diferentes para permitir una separacion concreta.
EI hecho de que las variaciones en la constitucion de la cadena car­
bonada tengan soJamente pcqueiios efectos en el coeficiente de particion
queda dcmostrado por la dificultad que se encuentra en Ja separacion de
leucina, isoleucina y norleucina y, tambien, en la de valina y norvalina.
Si se comparan los valores R.lf , por ejemplo, con el ntlmero de atomos
de carbono, se obtienen lineas rectas para todaslas series homologas. Esto
haec posible el calculo exacto de los valores de RF de terminos desconoci­
dos de esa seric, t:J.I como 10 muestra el ejemplo siguicnte:
Hidrazidas de los i>.cidos grasos (Satake y Seki 2824).
1 que el valor I1R;)I para un grupo metileno aumenta regularinente cuando
Rr caLculado del promedio
Numero de dtomos Rr hallados grdfico de La linea
de C R. r - CH,
1 0,11 0,10
2 0,18 0,18
3 0,37 0,33
4 0,54 0,52
5 0,70 0,70
6 0,77 0,83
Se prescntan regularmente ciertas inexactitudes cerca del frente del
disolventc, debidas probablemente a variaciones del disolvente en esa re­
gion, Ja que general mente contiene menos agua.
En los trabajos de Van Duin 3367-3372 y en los de Serchi 21)45 puede
consultarse el comportamiento de otras series hom610gas.
Cuando se observa que cl comportamiento de una sustancia en una
cromatografia de particion no correspondc al que se podria predecir de
sucodiciente de particion, puede sospecharse que la adsorci6n desempeiia
un papel importante en este caso. . .
Moore y Stein 226 5 han comprobado esto en el caso de la separacion
de aminoacidos en almid6n (vease Capitulo XXX). EI trabajo de Bur­
ma 458 contiene un estudio detallado del papel de la adsorcion en la ('[0­
matografb sobre pape!.
Para los pcptidos, Martin 215() (Capitulo XXXI) calculo teoricamentc
los valores de R].') y Levy 1993 (Capitulo XXVIII) efectuo 10 mismo para
los azucares.
3. EL DISOLVENTE ORGANICO
Los primeros disolventes utilizados en la cromatografia sobre pape!
fueron la colidina, el fenol, el butanol y el alcohol bencilico. La coli dina
y el fenol deben purificarse previamente por dcstilaci6n (vease Draper
y Pollard 81G). EI fenol puede tam bien purificarse por extracci6n con eter
de petrole'o y subsiguientes lavados con agua (Mars 2108). Debido a que
lit colidina· es un compuesto dificilmente asequible en no pocos paises, mu­
chos investigadores pre£ieren utilizar la mezcla de lutidina-colidina.
Se utilizan tambien disolventes miscibles con agua, tales como el pro­
panol, el alcohol furf urilico, la acetona, la piridina y el tetrahidrofurano.
Bentley y Whitehead 190 han estudiado los disolventes miscibles con
el agua, para la separaei6n de aminoacidos, hallando que, a medida que
aumenta el numero de ,ltomos de carbono en los alcoholes alifaticos, dis­
minuye el valor de R p • Este decto, en una serie que contenga la misma
cantidad de agua en cada disolvente, indicaria que la polaridad del al­
cohol tiene ace ion sobre el valor R F . Lederer 1925 hizo la mlsma observa­
cion para et caso de los iones inorganicos. Puede tam bien demostrarse
aumenta ei numero de ,l.tomos de carbono en el disolvente, cuando se usan
alcoholes (M. Lederer, en prensa). Por 10 tanto, cuando el nivel de los
valorcs de RF sea adecuado, un alcohol de cievado peso molecular dara
mejor separacion, para una diferencia de un grupo metileno, que uno de
bajo peso molecular.
Bentley y Whitehead 190 demostraron, ademis, que cuando aumenta
la cantidad de agua en el alcohol furfurilico, el valor de R 1, de los amino­
acidos tam bien alimenta. Lacourt y col. 1851 han publicado, igualmente,
experiencias con disolverites no saturados con agua, obteniendo la misma
relacion entre la polaridad y cl valor RF que se obtiene con disolventes
saturados con agua. Walker y Lederer 3461 estudiaron mezcIas de disolven­
tes organicos, hallando que el valor RJI de un ion metalico en una mez­
cIa 1: 1 de dos alcoholes es algo inferior al valor promedio de los dos
alcqholes.
a) Agregado de acidos al disoluente
Cuando una molecula puede existir en forma ionizada y en forma no
ionizada (acidos y bases debiles), eI valor RJI de la forma no ionizada
cs generalmentemayor que el de la forma ionizada. En un disolvente
inmiscible con agua (por ejemplo, bu tanol-acido acetico-agua) , un aumento
en la concentracion de <icido suelo aumentar la solubilidad del disol­
vente para el agua, y losvalores de RJI aumentan por 10 general en ese
disolvente. Algunos iones metalicos alteran sus valores RJI considerable­
mente cuando se cambia la concentraci6n de acidos, debido a la forma­
ci6n de complejos entre los metales y el icido mas coneentrado.
Las variaciones de pH tienen una acci6n muy importante sobre jas
sustancias polares organicas, tales como los aminoacidos y algunos investi­
gadores (Landua y col. 1878, McFarren 2074 ) han demostrado que si se re­
gula adecuadamente el papel, sumergiendolo, por ejemplo, en soluciones
reguladoras de fosfatos y secandolo, se obtiene una mejor separacion.
Para acidos debiles y para cationes inorganicos es necesaria una mi­
nima eoncentraci6n de icido, para ·evitar la formaci6n de estelas (vease
mas adelante).
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138 CR()MATOGRAFfA SOBRE PAPEL c. XVIII 4 FORMAcrON DE COMPLE]OS \.

b) Formaci6n de estelas
Guando se cromatografian acidos organicos y bases con disolventes
neutros, en vez de obtener las manchas redondas habituales, se forman lar­
gos trazos (colas, cometas, estelas). Este fen6meno fue observado por pri­
mera vez por Lugg y Overell 20~7, 2058 en la cromatografia de acidos orga­
nicos, y se debe a la disociaci6n de esos acidos. Como cada forma tiene
un valor de RF diferente, esta disociaci6n produce una deposici6n continua
de materiales desde la mancha que esta desplazandose sobre el papel.
.1I DiJoLuenle
Constante de disociacion
de fa bau
I Forma de las manchas
Neutro
,~
139
antimonio trivalente) 0 por red'ucci6n (por ejemplo, oro trivalente e iri­
dio tetravalente ) , for!TIar estelas. En el primer caso, un aumento en la
concentraci6n de acido evita ese fen6meno, mientras que en el segundo
puede evitarse este proceso por agentes oxidantes 1921 .
Con los colorantes se observan frecuentemente estelas debidas a la
adsorci6n (Zahn 3660).
\.
c) Manchas multiples
Un caso que puede considerarse como extrema en la formaci6n de
estelas es la presencia de dos 0 mas manchas (manchas multiples ) para
Oburuaciones una sustancia. Las manchas multiples pueden ser provocadas porun
desequilibrio entre formas ionizadas y complejadas, tal como 10 ha de­
mostrado Gurry 676 para los fosfatos mono y diacidos y Erdem y Erlen­

~ meyer 91Q para las aminas complejas. Hassall y Magnus 1332 han obser­
Debe UsaT!t la sal
,>,,' Acido
~ I? de ta base con el cicido
cont.tnido en el diso/venlt vado tamhien manchas multiples de adsorci6n en la monamicina y en
Alfalino ' ®~ ciertos colorantes, y Waldron-Edw.ard 3449 observaron identico fen6meno
~ en sustancias inorganicas (pag. S7S ) .

N.eut T ,? %G Las manthas son rcdondos,

J
~,-.~ ~
peT~ RF es casl siempre 4. FORMAcroN DE COMPLE]OS
Alcalino
•
~ . ~' '
vtclnoa.J

~~~';;'
Acido :; ~ Trdte;e de at/mentar Los aminoacidos y otras sustancias organicas son capaces de formar
-;: ~ . la cone. de acido y
t: E ~
lr t.tlilizar un dcido cuya
conSlanlt de diso,ia,ion "
vt,ina a Ja de 10 blUe
complejos con las trazas de iones cupricos presentes en, los papeles de filtro
comerciales y dar manchas dobies, es decir, otra mancha correspondiente
~ cone, de acido al complejo cuprico. El agregado de 8-hidroxiquinolina 0 de acido cian­
hidrico inhibe por completo esta interferencia G18. Para la cromatografia

~
'l Los result ados son
Neutro ·
~ siemp re buen~~ inorganica se utilizan disolventes que contienen benzoilacetona 2{;41, dimetil­

«~. ~
Selecci6na nse las
glioxima 58 0 bien otros agentes complejantes que mejoran a menu do las
~
Alcalino condicione.! en que
haya mas di/erencia separaciones en las que los iones libres no muestran diferencias en los
entre los valous de
Acir!.a
~ R, entre.li y respecto
q ta unidad
valores R F • Los detalles de estos procedimientos se veran en la croma­
tografia inorganica.

Fig. 38. - Forma de las manchas de bases dCbiles, con disolventes de

difcrentes pH ( Munier 2318) ..
La adici6n de un acido al disolvente puede evitar la formaci6n de este­
las, al inhibir la ionizaci6n, y Machebopuf y Munier 2323 han observado
el mismo fenomeno en alcaloides y otrdS bases debiles (K, comprendido
entre 10- 3 Y 10-1°) (fig. 38).
Existen tambien otras reacciones, ademas de ' la disociaci6n, que pue­
den dar por resultado la formaci6n de estelas. Hanes e Isherwood 1297
consideran que son las trazas de calcio y de magnesia en forma ' i6nica las
responsables de las estelas y de los valores de RF baj05 para muchos aci­
dos. Emplean, por elIo, papeles lavados con acido para eliminar tal in.
conveniente 11517. Los iones inorganicos pueden, por hidr6lisis (por ejemplo;
S. EFECTO DE _LA TEMPERATURA
; j
Wark 3477 demostr6 que el coeficiente de partici6n varia con la tem­
peratura, de acuerdo con una isowra del tipo de Van't Hoff. En la cro­
matografia sobre papel, deben ser considerados no solamente los efectos
de la temperatura sobre el coeficiente de partici6n sino tambien sobre
la composici6n de las fases, ia hidrataci6n de la celulosa y el equilibrio
de adsorci6n.
Gonsden y col. 618 demostraron desde un principio que el factor prin­
cipal que influia sobre eI. valor de RF,cuando variaba la temperatura, era
la modificaci6n deI .c ontenido 'acuoso ,de la fase organica, que para algu­
nos disolventes, por ejemplo el fenol, varia muy pow, pero que para

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