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Experimento:
1- Un fragmento de DNA lineal de 2000 bp se circulariza por tratamiento con ligasa.
a) Calcular Lk y Tw si el plásmido está relajado y suponiendo que una vuelta de hélice
tiene 10 bp.
a) Tw=2000 pb/10 pb por vuelta= 200 como está relajado Wr= 0 lk=200.
b) Si ahora introducimos 10 super vueltas negativas calcular Lk, Tw y el nº medio de pares
de base por vuelta.
b) Tw= 200+10= 210 Lk= 200 Pb por vuelta= nº pb/ Tw= 2000/210= 9,5.
Si al fragmento inicial quitamos 10 vueltas de hélice antes de tratar con ligasa, calcular Lk,
Tw y el nºc) Lk= 190 Tw=190 Pb por vuelta= 200/190= 10,52.
TRATADO CON GIRASA Lk= 190-2= 188 porque la girasa Hace que Lk- Lkº= -2
Tw=200 Wr= -12 T
RATADO CON TOPOISOMERASA I Lk= 191 ; Tw= 201 ; Wr= -11. Pero al soltar se
relaja y Lk= 191; TW=200; Wr= -9
El plásmido pGJ se aisló por centrifugación en gradiente de ClCs. Una alícuota se linearizó y
ligó formándose un DNA circular covalentemente cerrado. Ambas formas se juntaron,
trataron con distintas concentraciones de bromuro de etidio y corrieron en electroforesis
obteniéndose el resultado mostrado en la figura. Interpretar el resultado.
BIBLIOGRAFÍA
García, A. (2017). Dinámica de la topología del dna durante la replicación. Tesis doctoral.
Facultad de ciencias Biológicas. Universidad Complutense de Madrid.