“Año del Diálogo y la

Reconciliación Nacional”

TECNICAS DE SIEMBRA
Rosas Fretel Anthony Salazar Ortega Gian
Franco
PEDRO BARZOLA | Microbiología General
 Índice
INTRODUCCIÓN................................................................................................................ 0
I. OBJETIVOS................................................................................................................. 1
II. MARCO TEORICO......................................................................................................1
III. MATERIALES.......................................................................................................... 3
IV. PROCEDIMIENTO...................................................................................................4
V. CONCLUSIONES........................................................................................................ 5
VII. BIBIOGRAFIA.......................................................................................................... 6
 INTRODUCCIÓN
En biología, bacteriología y específicamente en microbiología, un cultivo es un
método para la multiplicación de microorganismos, tales como lo son bacterias en
el que se prepara un medio óptimo para favorecer el proceso deseado. Un cultivo
es empleado como un método fundamental para el estudio de las bacterias y otros
microorganismos que causan enfermedades en medicina humana y veterinaria.

Un microorganismo se puede sembrar en un medio líquido o en la superficie de un

medio sólido de agar. Los medios de cultivo contienen distintos nutrientes que van,
desde azúcares simples hasta sustancias complejas como la sangre o el extracto
de caldo de carne. Para aislar o purificar una especie bacteriana a partir de una
muestra formada por muchos tipos de bacterias, se siembra en un medio de
cultivo sólido donde las células que se multiplican no cambian de localización; tras
muchos ciclos reproductivos, cada bacteria individual genera por escisión binaria
una colonia macroscópica compuesta por decenas de millones de células
similares a la original. Si esta colonia individual se siembra a su vez en un nuevo
medio crecerá como cultivo puro de un solo tipo de bacteria.

Las técnicas de siembra son métodos que se utilizan para inocular por distintos
métodos sobre un medio de cultivo apropiado una muestra que contenga bacterias
con el fin de reproducirlas para su estudio.

Entre ellas tenemos diversas técnicas de siembra como: Siembra por aislamiento,
que consiste en la separación de un determinado microrganismo del resto de
macroorganismos que le acompañan. El método mas usual es la siembra por
estría sobre un medio de cultivo solido adecuado dispuesto en una placa de Petri.

Siembra por estria. La siembra

por estría, donde se inocula la
muestra sobre un extremo de la
placa con un asa y se extiende
formando estrías.

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 I. OBJETIVOS

 Manipulación de los materiales utilizados en la siembra de

bacterias, hablamos del asa de kolle, AGAR, mechero bunsen,
empaquetado de los materiales, etc.

 Aprender a diferenciar las diversas técnicas de siembra

aprendidas en clase, hablamos de siembra por estría, siembra
por difusión, siembra por disminución en superficie, y su
importancia de cada una.

II. MARCO TEORICO

Siembra
Sembrar o inocular es introducir artificialmente una porción de muestra (inóculo)
en un medio adecuado, con el fin de iniciar un cultivo microbiano, para su
desarrollo y multiplicación. Una vez sembrado, el medio de cultivo se incuba a una
temperatura adecuada para el crecimiento. Las reglas fundamentales para
efectuar la siembra exigen:


Que se efectúen asépticamente

Que los medios de cultivo y el instrumental a utilizar estén esterilizados

Que se realicen solo los manipuleos indispensables

Que se trabaje fuera de toda corriente de aire. De ser posible utilizando
un mechero o bien Flujo laminar.
Existen diferentes tipos de siembra de acuerdo al medio utilizado y los
requerimientos del microorganismo a estudiar.

Medios sólidos:
Siembra en agar en tubo inclinado o bisel: en este caso se colocan 5 ml de medio
de cultivo fundido y estéril, se inclina el tubo y se deja enfriar.

Siembra por inmersión: se coloca el inóculo en una placa o caja de Petri y sobre el
mismo se vierte el medio de cultivo previamente fundido. Este método se utiliza
para microorganismos aerobios.

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Siembra en doble capa: se procede de la misma manera que por inmersión. Una
vez solidificado el medio se vierte una cantidad extra de medio necesaria para
cubrir la capa anterior (generalmente 10 ml. aprox.). Este método se utiliza para
microorganismos anaerobios facultativos y microaerofílicos.

Siembra en superficie: se vierte sobre una placa de Petri el medio de cultivo

fundido, se deja solidificar y se coloca sobre la superficie el inóculo. Con ayuda de
una espátula de Drigalsky se extiende el inóculo hasta su absorción total por el
medio de cultivo. Este tipo de siembra se recomienda para microorganismos
aerobios estrictos.

Siembra en estría: se vierte sobre una placa de Petri el medio de cultivo fundido y
se deja solidificar.

Existen distintas técnicas para la siembra en estrías, el objeto es obtener colonias

aisladas.

 Técnica A: Consiste en cargar el ansa con la muestra y hacer estrías

paralelas en la cuarta parte de la superficie de la placa, se quema el
ansa, se enfría, se gira la placa a 90° y se vuelve a estriar tocando 3 o 4
veces el área sembrada inicialmente y cubriendo otro cuarto de la placa.
Por último, sin quemar el ansa, se estría el resto de la superficie sin
sembrar.

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Técnica de diluciones seriales
Mediante el uso de esta técnica se pueden evaluar diferentes grupos bacterianos según el
medio de cultivo que contenga el frasco. Es aplicable para evaluar bacterias heterótrofas,
aerobias obligadas, sulfobacterias y anaerobias heterótrofas obligadas.

La técnica de dilución por extinción consiste en inocular una serie de frascos que contengas
9 mL del medio de cultivo apropiado según el tipo de bacteria que se quiera evaluar.

Se obtiene 1 mL de la muestra usando una jeringa descartable, estéril, de 1 o 2 mL de

capacidad.

Se inocula el primer frasco, sin retirar la aguja se agita el mismo, se invierte y se retira 1
mL que se inocula en el segundo frasco.

Con una nueva jeringa, se retira 1 mL del segundo frasco, previamente agitado y se inocula
al tercer frasco y asi sucesivamente utilizando una nueva jeringa para cada frasco.

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 III. MATERIALES
 Placas Petri
 Pipeta
 Vaso Precipitado
 Papel Craft
 Pabilo
 Tijeras
 Cocinilla
 Balanza
 Mechero bursen

IV. PROCEDIMIENTO

PARTE EXPERIMENTAL
1.Lavar correctamente los materiales que se usara en el laboratorio y esterilizarlos.

2.En una luna de reloj pesar x g de Agar Plate Count en la balanza analítica. Luego en
un vaso Beaker mezclar con 100 ml de agua destilada.

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3.Utilizando la cocinilla se calienta hasta que cambie a un color más claro.

4.Con una probeta se mide 10 ml de la muestra y luego lo echamos en cada placa

Petri.

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5.Lo dejamos un cierto tiempo hasta que solidifique.

6.Para esta siembra se usó el yogurt Gloria. Calentar el asa bacteriológica en un

mechero de alcohol para después coger un poco de yogurt. Procedemos a sembrar
en las 7 placas Petri.

7.Después lo empaquetamos con papel craft. Por ultimo lo dejamos dentro de la estufa
por unos días.

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 Pasado los días obtendremos los resultados de la siembra en el cual
observaremos.

V. CONCLUSIONES
Hemos aprendido a reconocer un caldo a diferencia de un agar. El caldo es para muestras
liquidas y el agar para muestras sólidas.

Hay que ser minuciosos en la composición de los medios de cultivo porque el incorrecto
uso de ellos puede llevar al fracaso de nuestra experiencia de manipular microorganismos.

En la técnica de siembra por estría debemos calentar el asa de siembra a rojo vivo por 10 o
15 segundos y dejar que se enfríe, pero no se debe soplar para evitar reintroducir
microorganismos.

VI. BIBIOGRAFIA
 https://www.frro.utn.edu.ar/repositorio/catedras/quimica/5_anio/biotecnologia/practicoI
II.pdf
 http://www.mastgrp.com/IFUS/IFU342_SPA.pdf
 http://www.laboratoriomag.com.ar/sitio2/index.php/tecnicas-recomendadas/tecnica-de-
recuento-por-dilucion