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JUSTIFICACIÓN

Colombia es un país con gran biodiversidad, es considera como la segunda nación más biodiversa del
mundo en plantas y por lo anterior es necesaria la identificación y reconocimiento de los vegetales,
además sabemos que como científicos tenemos la obligación de contribuir a la investigación.
También podemos no solamente conocer sobre nuestras especies si no aprovechar los beneficios que
contienen. El estudio de los metabolitos secundarios de la planta Jagua (‘Genipa americana’) permite
aumentar los conocimientos que tenemos de ella y ofrece la oportunidad de encontrar avances en
diferentes industrias como en la alimentaria, farmacológica, cosmética, entre otras. Además estos son
estudios que van de la mano con la química verde y que sobre todo buscamos la protección de las
especies.
OBJETIVOS GENERALES Y ESPECÍFICOS
Objetivo general
Conocer la forma de investigación de la fitoquímica (estudio de las plantas) y saber cómo se pueden
detectar los metabolitos secundarios que se encuentren presentes en ellas, además de profundizar
específicamente en la especie ‘Genipa americana’ verificando que se encuentre una gran variedad de
metabolitos secundarios y hacer una ‘confirmar’ de lo que dice la teoría.
Objetivos específicos
 Realizar un trabajo amigable con el medio ambiente sin generar daños a la planta de
donde se recolecten las hojas.
 Obtener el extracto vegetal de la planta mediante procesos de extracción.
 Realizar cromatografía de columna en donde se extraigan los diferentes metabolitos
que sean recogidos por los solventes de diferente polaridad.
 Al momento de correr las placas y observar en la luz UV, realizar una correcta mezcla
de los extractos de los respectivos viales.
METODOLOGÍA
Materiales y métodos:
 Trituradora.
 Tamiz solido-solido.
 Balanza analítica.
 Espátula.
 Varilla de agitación.
 Montaje para sistema reflujo.
 Sistema de filtración a vacío.
 Capsula.
 Beakers (2 L, 1L, 500 mL, 100 mL).
 Bureta (100 mL).
 Pipetas graduadas (5 mL).
 Pera de succión.
 Viales.
 Columnas para cromatografía.
 Placas de vidrio [(10 x 10) cm; (10 x 20) cm].
 Vidrio reloj.
 Estufa.
 Horno.
 Cabina de UV.
 Cámara para cromatografía en placa delgada.
 Frascos Ámbar
 Rotavaporador
Reactivos:
 Material vegetal macerado y seco (aproximadamente 100 g).
 Solventes (cloroformo, acetato de etilo, metanol).
 Silica gel para placa y columna.
 Etanol rectificado
 KMnO4
 H2SO4
 Ácido oxálico
Parte 1. Recolección de las hojas
Inicialmente se seleccionó una planta que estuviera presente en la universidad del Quindío,
puesto que allí es el lugar de la investigación y nos pareció muy interesante realizar el estudio
de una plan presente allí, vimos que la planta Jagua es un árbol reluciente frente a la facultad
de ciencias básicas y tecnología, la altura de la planta es de aproximadamente entre 5 y 6
metros por lo que con ayuda de una varilla especial para cortar ramas, estas se empezaron a
cortar y a seleccionar las hojas que debían cumplir con una apariencia agradable y no tener
huecos, con el fin de realizar un mejor estudio.
Parte 2. Rectificación del etanol
Se tomaron 1000 mL de Etanol y se dejó en un reflujo constante en un lapso de tiempo de
aproximadamente 1 hora y media con el fin de rectificarlo y eliminar cualquier rastro presente
de metanol y así poder concentrar la mayor cantidad de extracto en este solvente y alcanzar
una buena y correcta detección de los metabolitos secundarios.
Parte 3. Preparación del material vegetal para obtener el extracto
Las hojas recolectadas se añadieron en sobres de papel periódico, y se llevaron a un horno
con el fin de que retirar toda el agua presente en ellas, después se llevaron a un trituradora
que se le incorporó un tamiz sólido-sólido con el fin de obtener las partículas de hoja más
pequeñas posible con el fin de facilitar el proceso de reflujo, adicionalmente, después de ese
primer tamizado, se volvió a realizar ese proceso en un tamiz que deja pasar partículas de
menor tamaño aún y el resultado final fue prácticamente un polvo de las hojas recolectadas
de Jagua
Parte 4. Reflujo
Teniendo el material vegetal listo, se procede a realizar un reflujo de 10 horas utilizando
como solvente el etanol rectificado.
Parte 5. Lavado y filtrado
Después de realizar el reflujo, se recogió la planta del balón y se realizó una filtración al
vacío obteniendo un extracto que se llevó al rotavaporador para eliminar el solvente presente
ahí (etanol rectificado), obteniendo así un extracto más puro y este líquido recogido se añadió
en un crisol para proceder a la extracción del extracto puro. Por otra parte con el solvente
recolectado se volvió a lavar los residuos de planta que quedaban en el papel filtro y se repitió
todo lo anterior, es decir, se volvió a filtrar y se llevó nuevamente al rotavaporador, donde
finalmente se mezclaron el extracto inicial con el segundo en el crisol y seguidamente se
procedió a obtener el extracto puro. En caso de que haya evidencia de más residuo en el papel
filtro de planta o de que se tenga más material al que se le haya realizado reflujo se repite el
procedimiento cuantas veces sea necesario debido a que entre más extracto se recolecte es
mucho mejor.
Parte 6. Obtención del extracto puro
Una vez obtenido el extracto en el crisol, se pone a calentar en baño María a fuego lento de
manera que se vaya evaporando el solvente que quede presente en la planta y así el extracto
se va concentrando más y se encuentra más puro.
Parte 7. Preparación de la columna y obtención de los extractos en los viales
Se procedió a medir la distancia que había del menisco de la bureta hasta dos cm antes del
orificio de arriba, con dicha medida se realizaron los respectivos cálculos para saber la
cantidad de silica que se debía tomar, ya sabiendo la cantidad de silica necesaria se procedió
a mezclar dicha silica con poca cantidad de cloroformo para que esta se disolviera, se formara
una sustancia líquida para que así la pudiésemos agregar a la columna, posteriormente
tomamos cierta cantidad del extracto recolectado del batería vegeta (Jagua) y le añadimos
silica y un poco de cloroformo, lo llevamos a un poco de calentamiento para que se
disolvieron estas tres sustancias y ya al estar disueltas se procedió a introducir dicha sustancia
en la columna, logrando así tener la columna preparada para la cromatografía respectiva,
cabe resaltar que se tuvo en cuenta una distancia prudente entre el orificio de entrada y la
sustancia ya vertida en la columna para el momento de agregar los respectivos solventes
hubiera un espacio suficiente.
Antes de iniciar la recolección de los viales estos fueron lavados, se adicionaron en KMnO4
y se calentó a fuego lento, después de un tiempo se añadió H2SO4 y se dejó calentar durante
algunos minutos, después los viales se retiraron de esta mezcla y se les añadió ácido oxálico,
se dejaron enfriar y se secaron con aire uno por uno.
Después se añadimos el extracto cloroformo y empezamos a dejar correr hasta llenar 10
viales, igualmente sucedió con acetato de etilo y metanol, este proceso de llenar 30 viales se
llevó entre 25 y 30 horas.
Parte 8. Preparación de placas (cromatografía en placa delgada)
Las placas de silica gel se prepara de manera tal que por cada 100 cm2 de placa de vidrio, se
deben utilizar 3,5 g de silica para placa y disolverlas en 8 mL de agua. Estas se dejan secar
por 24 h y antes de utilizarlas se deben activar en el microondas por 20 o 25 min a (120-130)
°C.
Una vez listas las placas se siembran 10 puntos uno por cada vial, en este orden de ideas se
realizan 3 placas de 10 por 10, una por cada solvente, se añaden en la cámara para placa y se
dejan correr con el respectivo solvente con el que se realizó la extracción en la cromatografía
de columna.

Parte 9. Visualización de las placas en el UV y mezclas de los extractos de los viales


Una vez corridas las placas se llevaron a una cabina de luz UV en donde se pudo evidenciar
que siembra tenía similitud con otra y cuales eran diferentes, teniendo en cuenta esto, se
mezclaron los viales que se observaron igual en la luz UV obteniendo así menor cantidad de
viales a los cuales se les iba a realizar pruebas para metabolitos secundarios.
Parte 10. Preparación de los reactivos
Entre todos los grupos de laboratorio se prepararon 50 reactivos para la determinación de
metabolitos secundarios, sin embargo por cuestiones ajenas a estudiantes y profesor las
pruebas no se pudieron realizar.