DETERMINACIÓN DEL CONTENIDO DE NITRÓGENO POR EL MÉTODO

MICROKJELDAHL

Alexis chiran chuquizan

alexis.chiran@correounivalle.edu.co
Lina Fernanda Jurado Torres
lina.jurado@correounivalle.edu.co
Paola Andrea Realpe
​paola.realpe@correounivalle.edu.co

Facultad de Ciencias Naturales y Exactas, Departamento de Química, Universidad del Valle

sede Yumbo, Colombia.

Resumen
La práctica consistió en la determinación del contenido de nitrógeno en un alimento, mediante
la utilización del método de Kjeldahl, para ello se tomó una muestra, la cual se digestó en
medio ácido, después la muestra se dejó enfriar, y se le agrego una solución alcalina, formando
amoniaco. El amoniaco formado se destila hacia una solución de ácido con indicador mixto.
Seguidamente la solución formada se titula con ácido clorhídrico estandarizado, obteniendo
2.4% de 𝑁 y 12,79% de proteína en la muestra.

DATOS, CÁLCULOS Y RESULTADOS agita y a su vez se le adiciona agua para

Determinación del contenido de una
proteína en un alimento
Se pesa 0,0300- 0,0500 g de muestra (Soy
Plus con 18% de proteína), adicionando en
un matraz microkjeldahl seco, se añade 0,1
g de una mezcla 3:1 de CuSO​4- MgO y 2g
​ se sumerge la manguera adaptada al
de sulfato de potasio (​K​2​SO​4​) ó 1,6 g de
sulfato de sodio anhidro (Na​2​SO​4​).
Posteriormente se agrega 2,5 mL de H​2​SO​4
concentrado, se inclina el matraz a unos 30
a 40 ° del digestor, y con la boca del balón
junto a uno de los orificios de extracción.
Se calienta la muestra hasta que ebulle,
evitando así que la espuma se vaya por el
cuello del recipiente.
Se continúa la ebullición hasta que el líquido
se torne incoloro ó ligeramente amarillo, sin
partículas en suspensión. (30 minutos
aproximadamente a 2 horas)
posteriormente se deja enfriar el matraz, se
disolver los sólidos (sin sobrepasar los 5
mL).
Se trasvasa la muestra al equipo de
microdestilación y se hacen lavados con
agua destilada, sin superar los 10 mL. Se
conecta el condensador a la llave de agua y
extremo del Erlenmeyer de 125 mL con 10
mL de H​3​BO​3 4%
​ más 5 gotas de indicador
mixto.
Se adiciona 15 mL de solución alcalina (250
g de NaOH + 50 g ​Na​2​S​2​O​3 tiosulfato de
sodio/L), se tapa para evitar la evaporación
de la solución, se calienta y se incrementa la
temperatura de forma gradual para evitar
que la solución hierva de manera violenta. Al
cambiar de color se destila por 10 minutos
más.
Se retira el Erlenmeyer al terminar la
, destilación, se lava el extremo del
condensador con agua destilada, luego se
1
titula la muestra con HCl 0,02 estandarizado 6 2,47 14,23
y se realiza un blanco 7 2,24 12,79
8 3,62 15,14
Tabla N°1 Estandarización de HCl.
x 2,71 14,39
s 0,54226 1,90553
IC 2,71 ± 0,45 14,39 ± 1,59
%RSD teór 1,08 4,32
%RSD exp 19,9913 13,2386
T crít 2,36 2,36
T cal 2,29 5,36
% Error 13,89 20,03
(Ec N°1)

Tabla N° 2 Titulación muestra de soya.

ANÁLISIS

Contextualización de la técnica:
El porcentaje de nitrógeno en la muestra de El método más común para determinar
leche de soya (soy plus) se calculó de la nitrógeno orgánico es el método de Kjeldahl,
siguiente manera: el cual está basado en una valoración de
neutralización. El procedimiento es sencillo,
no requiere equipo especial y es fácilmente
adaptable a los análisis rutinarios de un gran
número de muestras. El método de Kjeldahl,
(Ec N°2) o alguna de sus modificaciones, es el
procedimiento estándar para determinar el
%𝑃𝑟𝑜𝑡𝑒𝑖𝑛𝑎 = %𝑁 ∗ 5,71(𝑓𝑎𝑐𝑡𝑜𝑟 𝑝𝑟𝑜𝑡𝑒𝑖𝑐𝑜) = contenido de proteínas en granos, carne y
2,24% ∗ 5,71 = 12,79 % materiales biológicos [1]
Se observa que se obtuvo menos proteína En el método de Dumas, la muestra se
que la reportada en el empaque que es de mezcla con polvo de óxido de cobre(II) y se
18%. enciende en un tubo de combustión para
Tabla N°3 Resultados de los 8 grupos de formar dióxido de carbono, agua, nitrógeno y
analistas. pequeñas cantidades de óxidos de
nitrógeno. Esta técnica es relativamente
%Nitrógeno en % Proteína en nueva y emite radiación visible. [1]
Grupo muestra de soy plus (leche
Dado lo anteriormente citado, la técnica de
soy plus de soya)
kjeldahl (microkjeldahl en este caso por el
1 2,64 15,07 equipo utilizado) es la más confiable por su
2 2,63 15,02 bajo costo en los equipos, además de que
3 3,14 14,3 los analistas no se exponen a radiaciones
4 1,91 11,03
que afecten gravemente su salud a mediano
plazo como sí lo hace la del método Dumas.
5 3,05 17,57

2
Según los datos suministrados en la tabla N°
3 los % de N fueron bastante cercanas al
valor real, lo que demuestra que la técnica
es muy confiable, a pesar de que se usa
desde el año de 1883 y puede utilizarse por
técnicos muy poco experimentados.
Contextualización de la muestra:
8 grupos de analistas aplicaron la técnica en
una muestra comercial de harina de soya de
marca Soy Plus con 18% de proteína, al
analizar la tabla N° 3 se evidencian
promedios muy cercanos al valor
suministrado en la tabla nutricional del
producto.
De acuerdo a información suministrada por
la tabla nutricional del empaque, los valores
presentan datos verídicos para los
consumidores
Durante las tres últimas décadas se ha
utilizado el envasado en atmósfera
modificada, un método seguro, probado,
comprobado y consolidado de lucha contra
los mecanismos de deterioro de alimentos
sin el uso de conservantes no deseables (o
al menos con una reducción sustancial de
los mismos). Algunas veces es conocido
como "MAP" o "inyección de gas" [2].
Se cree que el nitrógeno en el alimento se
usa para conservación del mismo, ya que al
leer la guía nos indica que este no aporta
nutrientes al organismo.
Análisis de Precisión
Para determinar %RSD teórica se utilizó la
ecuación para propagación del error, y se toma
este resultado como valor real para s del
nitrógeno, teniendo en cuanta cada masa o
volumen y el instrumento utilizado en el proceso
de medición con su respectiva incertidumbre.
3
%RSD teórico = 4,32
%RSD exp = 13,24.
Al calcular % RSD teórica << %RSD expe son
valores alejados entre sí, lo cual demuestra que
el procedimiento y sus resultados no son
precisos.
Análisis de exactitud
% error =13,89 Nitrógeno en Proteína
% error = 20,03 Proteína en soya
Con la técnica utilizada se
tiene un % de error relativamente alto, por lo
tanto las mediciones no son exactas, esto
posiblemente se deba a múltiples factores como,
exceso de volumen del titulante ya que cada
observador percibe el cambio de color en un
instante en tiempo diferente, como también al
escape de el amoniaco al ambiente al momento
de comenzar la destilación
Al hacer una prueba de contraste t student para
el resultado del Nitrógeno se obtiene:
t crítico = 2,36
t calculado = 2,29
t calculado < t crítico a un nivel de significancia (p
=0.05) por lo tanto no hay evidencia de error
sistemático.
Con el Nitrógeno se halla la cantidad de proteína
presente en la muestra, al hacer prueba t para la
proteína se obtiene:
t crítico = 2,36
t calculado = 5,36
t calculado > t crítico por lo tanto hay evidencia
de error sistemático, lo cual es en cierta forma
contradictorio con el resultado anterior de prueba
t para nitrógeno, ya que los dos resultados
están relacionados directamente. Esto se deba
posiblemente al cálculo final para pasar de
Nitrógeno a proteína, cada grupo utilizó un factor
proteico diferente, en este informe se uso 5,71
pero la literatura reporta varios valores que
van desde 5,1 hasta 6,7 para alimentos.
PREGUNTAS
Explique claramente porque la titulación final
debe realizarse con HCl Y NO CON NaOH.
● La literatura reporta diferentes
La solución obtenida, luego de “burbujear”
amoniaco gaseoso en ácido bórico es una
solución que contiene ion amonio (𝑁𝐻4 + ) y el
ion borato (𝐻2𝐵𝑂3 − ), la fuerza ácida del ion
amonio es despreciable, ya que es el ácido
conjugado de una base débil el amoniaco, razón
por la cual en solución este no tiende a ceder
protones por otro lado, se encuentra el ion borato
es la base conjugada del ácido bórico, un ácido
débil, que es más fuerte que el ácido conjugado
del 𝑁𝐻4 + , lo cual significa que su base
conjugada posee una fuerza básica suficiente
● En la adición de la solución alcalina a
para reaccionar con el ácido clorhídrico
completamente, gracias a esto, es que
principalmente se debe utilizar 𝐻𝐶𝑙 en vez de
𝑁𝑎𝑂H
● El producto indica un % de
proteína, el cual se comprobó a
través de la técnica, esto se hace
con el fin de demostrar que los
valores nutricionales no tienen
valores adulterados para los
consumidores
factores proteicos para alimentos, el
más general es 5,71, para el cálculo
de la proteína los grupos
posiblemente utilizaron valores
distintos por lo que el resultado final
de proteína tiene una variación
significativa, esto explicaría porque
no hay evidencia de error sistemático
para el % de Nitrógeno pero si para
el % de proteína.
la muestra, sucede la formación de
amoniaco en forma gaseosa, que es
de olor desagradable, la fuga de
este gas al no sellar correctamente
el recipiente puede ocasionar errores
en el resultado final.

CONCLUSIONES BIBLIOGRAFÍA

● La baja exactitud se debe [1] SKOOG pp 388, 389

posiblemente a la falta de extrema
[2] ​https://www.parker.com
precaución, al momento de trasvasar
la muestra al balón, si se deja enfriar
mucho, la muestra se coloca muy
densa, por lo que quedan residuos
en que son casi imposibles de
trasladar de un instrumento al otro.
● Otra causa de la baja exactitud
puede suceder a causa de la
inclusión de nitrógeno no proteico
como parte de la proteína como
también la pérdida de nitrógeno
durante la digestión incompleta
de la muestra.
4