UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DEL ESTADO DE MORELOS

De DE MORELOS

ESCUELA DE TÉCNICOS LABORATORISTAS

MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO

DE LA ASIGNATURA DE

BIOQUÍMICA

GRUPOS del 4to Semestre

SEMESTRE ENERO-JUNIO 2019

REALIZADO POR: PROFESORES DE BIOQUÍMICA-ETL-UAEM.

ENERO 2019
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Práctica No. 1. Propiedades químicas e identificación de carbohidratos.

Pre-Laboratorio

 Investigar la utilidad de las pruebas de Molisch–Udransky, Fehiling, Tollens y Barfoed para

los carbohidratos.

Materiales Instrumento
 1 Balanza digital
 20 Tubos de ensaye de 12 x 75 Aparato
 3 Vaso de precipitados de 50 ml
 2 Gradilla para tubos  1 Baño maría eléctrico
 2 Vaso de precipitados de 100 ml  1 Parrilla de calentamiento
 2 Pipetas de 5 ml

Reactivos y HDS

5 ml de ácido sulfúrico concentrado 2 gotas de manosa al 2%

4 gotas de formaldehído 5 ml de hidróxido de sodio 10 %
6 gotas de fructosa al 2% 6 ml de reactivo de Fehling
8 gotas de glucosa al 2% 6 gotas de reactivo de Molisch
6 gotas de sacarosa al 2% 4 gotas de reactivo de Tollens
4 gotas de lactosa al 2% 8 gotas de reactivo de Barfoed
4 gotas de almidón al 1 %
2 gotas de acetona
2 gotas de maltosa al 2%
Procedimiento y anotaciones de resultados

1. PRUEBA DE BARFOED:

Colocar 2 gotas del reactivo en tubos de ensaye limpios y secos. Adicionar 1 gota de la solución
por analizar y colocar los tubos en baño maría hirviendo. Anotar el tiempo que tarda en aparecer
precipitado en cada tubo y marca con cruces la cantidad de precipitado formado (en su caso).

TUBO COMPUESTO OBSERVACIONES TIEMPO

1 SACAROSA

2 LACTOSA

3 GLUCOSA

4 MANOSA

2. PRUEBA DE MOLISCH:
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En tubos de ensayes limpios y etiquetados, colocar 4 gotas de la muestra por analizar y agregar
2 gotas de reactivo de Molisch–Udransky, con cuidado adicionar resbalando por la pared del tubo 5
gotas de ácido sulfúrico concentrado sin mezclar ni agitar el tubo y esperar algunos segundos para
observar cambios. En caso necesario calentar ligeramente el tubo en baño maría.

TUBO COMPUESTO OBSERVACIONES RESULTADOS

1 FORMALDEHÍDO

2 GLUCOSA

3 FRUCTOSA

4 SACAROSA

5 LACTOSA

6 ALMIDÓN

3. PRUEBA DE FEHLING:
En tubos de ensaye limpios y etiquetados, colocar 2 gotas de la solución por analizar y adicionar
2 gotas del licor de Fehling, mezclar el contenido de los tubos y calentar en baño maría durante 5
minutos. Observar los cambios.

TUBO COMPUESTO OBSERVACIONES RESULTADOS

1 GLUCOSA

2 FRUCTOSA

3 MALTOSA

4 SACAROSA

5 ALMIDÓN

4. PRUEBA DE TOLLENS:
En tubos de ensaye colocar 4 gotas de la solución por analizar y 2 gotas del reactivo de
Tollens, colocar los tubos en baño maría durante 1 minutos y observar los cambios.

TUBO COMPUESTO OBSERVACIONES RESULTADOS

1 FRUCTOSA
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2 FORMALDEHÍDO

3 ACETONA

4 GLUCOSA

Disposición de residuos

 Los residuos de los tubos utilizados para la prueba de Molisch se depositan en contenedor
etiquetado como soluciones orgánicas no halogenadas.
 Los residuos de las pruebas de Fehling y Barfoed se depositan en contenedor de soluciones
acuosas inorgánicas.
 Los residuos de los tubos de la prueba de Tollens se depositan en contenedor para soluciones
acuosas de metales pesados y posteriormente se desactivan con solución de HCl. Si los tubos
quedaran manchados después de lavarlos, agregar 3 a 5 gotas de ácido nítrico para limpiarlos.

CUESTIONARIO

1.- ¿Qué tipo de productos se forman durante la prueba de Molisch?.

2.- ¿Qué significado tiene que la prueba de Fehling sea positiva para un azúcar?.

3.- ¿Qué grupo de azúcares dan positiva la prueba de Tollens?.

4.- Durante la prueba de Barfoed. ¿Qué azúcar resultó más reductor y cuál o cuáles fueron no
reductores?.

5.- Explica a qué se debe que un azúcar sea no reductor.

6.- En la reacción de hidrólisis del papel: ¿Cuál fue el producto final de esta reacción?.
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Práctica No. 4. Propiedades físicas de los lípidos.

Pre-Laboratorio

1. Investigar las propiedades físicas de los lípidos

2. Principales fuentes naturales de los lípidos y su importancia para el ser humano.

Materiales Instrumentos

 22 Tubos de ensaye de 13 x 100  1 Balanza granataria digital

 2 Gradilla  1 Picnómetro
 1 Vaso de precipitados de 50 ml  1 Refractómetro de Abbe
 1 Probeta de 50ml

Aparato
Reactivos y HDS
 1 Baño maría eléctrico
 2.5 ml de etanol
 2.5 ml de éter etílico
 2.5 ml de hexano
 3 ml de colorante Sudán III Material que debe traer el alumno

 30 ml de aceite de olivo  1 Porta objetos

 30 ml de aceite de maíz
 1 g de manteca de cerdo
 1 g de mantequilla
 1 g de margarina o manteca vegetal
Procedimiento y anotaciones de resultados

Observar las muestras de lípidos (5 a 7 gotas). Determinar su aspecto, color y olor. ESTADO DE
AGREGACIÓN A TEMPERATURA AMBIENTE.

MUESTRA ASPECTO COLOR OLOR

Aceite de olivo

Aceite de maíz

Manteca de
cerdo

Mantequilla

Margarina
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1. SOLUBILIDAD
Determinar la solubilidad en frío, a temperatura ambiente y en caliente de las diferentes
muestras. Anotar observaciones en las tablas.

Temperatura ambiente ------(5 a 7 gotas) de solvente. Colocar al final un tapón pequeño de algodón.

AGUA ETANOL ÉTER HEXANO

MANTEQUILLA

ACEITE DE OLIVO

MARGARINA

ACEITE DE MAÍZ

MANTECA

Temperatura (35 – 40) ºC

AGUA ETANOL ÉTER HEXANO

MANTEQUILLA

ACEITE DE OLIVO

MARGARINA

ACEITE DE MAÍZ

MANTECA

2. DENSIDAD
Pesar el picnómetro vacío en balanza granataria digital. Proceder a llenar el instrumento con
agua destilada, cuidando que no queden burbujas de aire en el interior del mismo, revisar la temperatura
y ajustar a 25 ºC. Pesar. Vaciar el PICNÓMETRO dejarlo secar y llenarlo con el aceite que se desea
analizar, ajustar la temperatura a 25ºC y pesar.

La densidad relativa se calcula de la siguiente forma:

Densidad de la muestra

Densidad relativa = _________________________

Densidad del agua

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DENSIDAD DEL AGUA DENSIDAD DE LA MUESTRA DENSIDAD RELATIVA

3. ÍNDICE DE REFRACCIÓN

Calibrar el refractómetro con agua destilada siguiendo las indicaciones del profesor. Limpiar el porta
muestras del aparato y proceder a colocar sobre el porta muestras el aceite que se desea analizar.
Tomar nota de la lectura que le corresponde. Limpiar perfectamente el porta muestras con ayuda de
papel seda y apagar el instrumento. Anotar los resultados.
OBSERVACIÓN DEL CAMPO VISUAL OBSERVACIÓN DEL CAMPO VISUAL
DURANTE LA LECTURA DEL AGUA DURANTE LA LECTURA DE LA MUESTRA

ÍNDICE DE REFRACCIÓN DEL AGUA ÍNDICE DE REFRACCIÓN DE LA MUESTRA

4. TINCIÓN DE LAS GRASAS

-Colocar en 2 tubos aceite.

-Añadir a 1 tubo azul de metileno y a otro tubo colorante Sudán III
-Agitar y Anotar observaciones.
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Disposición de residuos

 Los residuos de los tubos de la prueba de solubilidad se depositan en el contenedor de

soluciones orgánicas no halogenadas, con excepción de los que contienen agua; estos últimos
se separan por decantación desechando el agua en la tarja y la fase orgánica se deposita en
contenedor de sólidos orgánicos.
 El aceite de la prueba de densidad se puede devolver a su frasco orginal para ser reutilizado.
 No se genera residuo en cantidad importante en la determinación del índice de refracción.
 Los portaobjetos de la prueba de tinción de las grasas pueden ser lavados con agua y jabón para
ser reutilizados.

CUESTIONARIO

1.- ¿Qué aspecto y textura presentan los lípidos en forma general?.

2.- ¿Cuál fue el mejor solvente de grasas que utilizaste durante la práctica?.

3.- ¿A qué se debe la diferencia de resultados en la solubilidad de los lípidos con la variación de la
temperatura?.

4.- En forma general: ¿Cómo es a densidad de los lípidos en comparación con el agua?.

5.- ¿Qué significado tiene el índice de refracción en los aceites?

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Práctica No. 2. Determinación de ácidos grasos totales.

Pre-Laboratorio

1. ¿Por qué es importante conocer el contenido de ácidos grasos totales en una muestra de lípidos?
2. ¿Qué es el índice de saponificación?
3. Escribe las principales propiedades químicas de los lípidos saponificables.

Materiales  20 ml de solución de ácido clorhídrico 0.2

N, previamente valorada
 2 Matraces erlenmeyer de 125 ml Instrumentos
 1 Vaso de precipitados de 50 ml
 1 Bureta de 25 ml  Balanza digital
 1 Soporte Universal
 1 Pinza para bureta
 1 Probeta de 25 ml Aparato
 2 Pipetas de 5 ml
 Parrilla eléctrica con agitador magnético
y magneto
Reactivos y HDS
Material que debe traer el alumno
 5 ml de hexano
 10 ml de solución de hidróxido de potasio  5 ml de una muestra de aceite vegetal
0.2 N previamente valorada.  1 g de Mantequilla o margarina

 4 gotas de indicador fenolftaleína.

Procedimiento y anotaciones de resultados

Colocar en un matraz Erlenmeyer 2 ml de la sustancia grasa que se desea analizar, agregar 5 ml de

hexano para disolver la muestra y en caso necesario calentar el matraz ligeramente. Agregar 10 ml de
solución de hidróxido de potasio 0.2 N previamente valorada y agitar el matraz en forma enérgica durante 5
minutos (puede ser con agitador magnético).
Aforar una bureta con solución valorada de ácido clorhídrico 0.2 N previamente valorada y realizar la
neutralización del exceso de hidróxido de potasio contenida en el matraz problema usando fenolftaleína como
indicador. Correr en forma simultánea un matraz testigo.

Disposición de residuos

 El contenido de los matraces se deposita en contenedor de soluciones orgánicas no halogenadas.

 El sobrante de la bureta se devuelve al frasco inicial para ser reutilizado.

OBSERVACIONES

CÁLCULOS:
A.G.T. = (m.t. – m-p-) (N del ácido clorhídrico) (miliequivalente del ácido palmítico)(100) / (0.88)(v)
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Donde:
m.t. = volumen de ácido gastado en el matraz testigo
m.p. = volumen de ácido gastado en el matraz problema
v = volumen de la muestra.

CUESTIONARIO

1.- De forma general, ¿que tipo de reacción es la saponificación?.

2.- ¿Cuál es a razón de haber utilizado solución alcohólica de hidróxido y no acuosa?.

3.- ¿Cualquier muestra de lípidos puede saponificarse?.

4.- ¿Por qué se debe hacer un matraz testigo?.

5.- ¿Qué indica desde el punto de vista químico el índice de saponificación?

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Práctica No. 3. Pruebas de identificación de proteínas.

Pre-Laboratorio

 Investigar los fundamentos de las siguientes pruebas: Biuret, Millón, Xantoproteínas, reacción de
Hopkins Cole y Ninhidrina.


Materiales Reactivos y HDS

  8 Tubos de ensaye de 12 x 75  1 ml de reactivo de Biuret
  1 Gradilla metálica  1 ml de reactivo del millón
  1 Gradilla plastificada  1 ml de ácido nítrico concentrado
  1 Pinzas de disección  1 ml de hidróxido de sodio al 10 %
  1 Vidrio de reloj  1 ml de reactivo de Hopkins Cole
  1 ml de solución de ninhidrina 0.5 % en butanol
Material que debe traer el alumno
Aparatos
 1 Agitador de vidrio
 1 Baño maría eléctrico a 80 ºC
 1 Trozo de papel filtro
 1 Horno a 100 ºC
 1 Clara de huevo cruda (por grupo).
 1 g de grenetina natural (polvo)

Procedimiento y anotaciones de resultados

Preparar una solución con la clara de huevo midiendo 5 ml de la misma y agregando 45 ml de agua destilada.
Preparar una solución de gelatina midiendo 1 g de grenetina natural y disolviéndola en 50 ml de agua
destilada.

1. PRUEBA DEL MILLÓN

Colocar por separado 5 gotas de la sustancia por analizar (grenetina y albúmina) en un tubo de ensaye
limpio y seco. Agregar 3 gotas de reactivo del millón, agitar cuidadosamente el tubo y en caso necesario
calentar ligeramente en baño maría 1 minuto a 80 °C. Observar.

SOLUCIONES OBSERVACIONES
PROBLEMA
GRENETINA

CLARA DE HUEVO
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2. PRUEBA XANTOPROTEICA

A 5 gotas de la solución por analizar, se adiciona 3 gotas de ácido nítrico y se mezcla el contenido del
tubo. Se calienta cuidadosamente el tubo durante 3 minutos en baño maría hasta aparición de color amarillo.
Se deja enfriar el contenido del tubo y se adiciona 10 gotas de solución de hidróxido de sodio 10%. La
aparición de color anaranjado indica que la muestra es positiva.

SOLUCIONES PROBLEMA OBSERVACIONES

GRENETINA

CLARA DE HUEVO

3. PRUEBA DE BIURET

En un tubo de ensaye limpio y seco colocar 5 gotas de la solución por analizar y agregar 5 gotas de
reactivo de Biuret. Agitar cuidadosamente el tubo y observar.

SOLUCIONES PROBLEMA OBSERVACIONES

GRENETINA

CLARA DE HUEVO

4. REACCIÓN DE HOPKINS COLE

En un tubo de ensaye limpio y seco se colocan 5 gotas de la solución por analizar y se agregan desde
8 a 13 gotas del reactivo. Sin mezclar el contenido del tubo, agregar 3 gotas de ácido sulfúrico concentrado
que resbale por la pared interna del tubo, de manera que se formen dos fases. Después de algunos segundos
se forma un anillo de color violeta en la interfase, lo cual indica que la prueba es positiva.

SOLUCIONES PROBLEMA OBSERVACIONES

GRENETINA

CLARA DE HUEVO

5. PRUEBA DE LA NINHIDRINA

Humedecer un trozo de papel filtro en la solución por analizar con atomizadores, con ayuda de pinzas
de disección se coloca el papel sobre un vidrio de reloj y se colocan 1 ó 2 gotas de solución de ninhidrina 1%
en butanol. Se seca en horno a 100º C por aproximadamente 5 minutos y se retira del horno. Se observará
la aparición de una mancha de color violeta si la muestra es positiva.
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SOLUCIONES PROBLEMA OBSERVACIONES

GRENETINA

CLARA DE HUEVO

Disposición de residuos

 Los residuos de los tubos de la prueba del millón se depositan en contenedor de soluciones de
metales pesados.
 Los residuos de los tubos de la prueba Xantoproteica se depositan en soluciones acuosas inorgánicas
para ser neutralizados.
 Los residuos de la prueba de Biuret se depositan en soluciones acuosas inorgánicas.
 Los residuos de los tubos de la prueba de Hopkins Cole se depositan en soluciones acuosas
inorgánicas para ser neutralizados.
 Los trozos de papel filtro de la prueba de la ninhidrina se depositan en residuos de papel y vidrio con
residuos químicos.
 Las soluciones de clara de huevo y grenetina pueden desecharse en la tarja.

CUESTIONARIO

1.- ¿Qué prueba indica la presencia del aminoácido triptofano?.

2.- ¿Cuáles de las pruebas realizadas durante esta práctica se consideran generales por indicar la presencia
de cualquier proteína?.

3.- ¿Alguna de estas pruebas puede utilizarse no solo para identificar sino para cuantificar proteínas?.

4.- Menciona 3 productos que no fueron utilizados en esta práctica y se pueden usar para identificar
aminoácidos y proteínas por éstas técnicas.

5.- ¿Cuál de las pruebas realizadas es específica para aminoácidos azufrados?.

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Práctica No. 4. Hidrólisis de leche por pepsina.

Pre-Laboratorio

1.- ¿Qué es una reacción de hidrólisis?.

2.- ¿Cómo se clasifican las enzimas según su actividad biológica?.


Materiales Reactivos y HDS

  4 Tubos de ensaye de 13 x 100 2 ml de solución de pepsina al 0.5% en solución buffer
  1 Gradilla metálica de pH 3
  2 Pinzas para tubo de ensaye
  2 Pipetas graduadas de 1 ml
 Aparatos

Material que debe traer el alumno
 Baño maría eléctrico a 40 ºC
 20 ml de leche (LALA ENTERA)
 1 Agitador de vidrio
 1 Reloj con cronómetro

Procedimiento y anotaciones de resultados

 Preparar una serie de tubos de ensaye como se indica en la tabla siguiente:

TUBO 1 TUBO 2 TUBO 3 TUBO 4

SUSTRATO (LECHE) 5 ml 5 ml 5 ml 5 ml
AGUA 0.8 ml 0.6 ml 0.4 ml 0.2 ml
PRE INCUBACIÓN 40 ºC 5 MINUTOS
PEPSINA 0.5% EN BUFFER PH 3 0.2 ml 0.4 ml 0.6 ml 0.8 ml
INCUBACIÓN A 40 ºC

 Después de agregar la pepsina se agitan los tubos para re disolver los grumos que se pudieran haber
formado.
 Con cronómetro medir el tiempo desde el momento en que se agrega la enzima hasta la aparición de
grumos, lo cual indica la acción de la pepsina.
 Graficar los resultados, colocando la inversa del tiempo en las ordenadas y la concentración de la
enzima en las abscisas.

TUBOS OBSERVACIONES TIEMPO

1
2
3
4
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Disposición de residuos

Los residuos de los tubos no representan ningún peligro de contaminación por lo que pueden desecharse en
la tarja con suficiente agua.

CUESTIONARIO

1.- ¿Los resultados de la práctica concuerdan con lo esperado para este experimento?.

2.- ¿Qué factores pudieron alterar el resultado de este experimento?.

3.- ¿Cuál es la razón de graficar con la inversa del tiempo?

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Práctica No.5. Extracción de ADN vegetal.

Pre-Laboratorio

1.- ¿Cuáles son los ácidos nucleicos?.

2.- ¿Qué importancia tienen los ácidos nucleicos?.
3.- Principales diferencias entre el ARN y ADN.
Materiales Reactivos y HDS

 2 Tubos de ensaye para centrífuga  Cloruro de sodio

 1Vaso de precipitados de 50 ml  Bicarbonato de sodio
  Alcohol isoamílico muy frío (0ºC)
 2 Tubos de ensaye de 16 x 150

 1 Pipeta de 5 ml

 1 Pipeta de 10 ml
 Agua Destilada

Material que debe traer el alumno Aparatos

 1 Acelga o espinaca  1 Centrífuga clínica
 Detergente líquido  Refrigerador
 1 Batidora
 1 Agitador de vidrio
 1 Coladera

Procedimiento y anotaciones de resultados

1. Preparar el tampón con los siguientes ingredientes y mantener en la nevera o en un baño de hielo triturado:
o 100 ml de agua destilada. No usar agua del grifo.
o 1,5 g de cloruro de sodio.
o 5 g de bicarbonato sódico.
o 5 ml de detergente líquido o champú.
2. Elegir la muestra que va a proporcionar el ADN entre los vegetales que pueda haber en la cocina (cebolla,
ajo, tomates, etc.) y cortarla en cuadraditos.
3. Triturar la muestra con un poco de agua en la batidora accionando las cuchillas a impulsos de 10
segundos. Así se romperán muchas células y otras quedarán expuestas a la acción del detergente.
4. Mezclar en un recipiente limpio 5 ml del triturado celular con 10 ml del tampón frío y agitar vigorosamente
durante al menos 2 minutos. Centrifugar a baja velocidad 5 minutos y después pipetear el sobrenadante.
5. Retirar 5 ml del caldo molecular a un tubo de ensayo y añadir con pipeta 10 ml de alcohol isoamílico
enfriado a 0 ºC. Se debe dejar escurrir lentamente el alcohol por la cara interna del recipiente, teniendo
éste inclinado. El alcohol quedará flotando sobre el tampón.
6. Se introduce la punta de una varilla estrecha hasta justo debajo de la separación entre el alcohol y el
tampón. Remover la varilla hacia delante y hacia atrás y poco a poco se irán enrollando los fragmentos de
mayor tamaño de ADN. Pasado un minuto retirar la varilla atravesando la capa de alcohol con lo cual el
ADN quedará adherido a su extremo con el aspecto de un copo de algodón mojado.

Disposición de residuos: El contenido de los tubos de ensaye que contienen alcohol se depositan en
recipiente para solventes orgánicos no halogenados. La muestra triturada se cuela, el filtrado se desecha en
la tarja y el sólido en la basura municipal.