Ecología Aplicada del suelo 113 (2017) 54 - 62

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Biológico nitrógeno fi jación en C 4 hierbas de diferentes estrategias de crecimiento de Sur America natural
pastizales

Anderson Cesar Ramos Marques una , * , Leandro Bittencourt de Oliveira segundo ,

Fernando Teixeira Nicoloso una , Rodrigo Josemar Seminoti Jacques do , Sandro José Giacomini do ,
Fernando Luiz Ferreira de Quadros segundo
una Laboratorio de Plant Fisiología, Departamento de Biología de la Universidad Federal de Santa María, Roraima Avenida 1000, CEP: 97105-900 Santa Maria, RS, Brasil

segundo laboratorio de Ecología y pastizales naturales, Departamento de Ciencia Animal de la Universidad Federal de Santa María, Roraima Avenida 1000, CEP: 97105-900 de Santa Maria, RS, Brasil

do Departamento de Suelos Ciencias de la Universidad Federal de Santa María, Roraima Avenida 1000, CEP: 97105-900 Santa Maria, RS, Brasil

INFORMACIÓN DEL ARTÍCULO RESUMEN

Artículo historia:
recibido el 14 de Aceptado el 18 de octubre de el En los pastizales naturales de América del Sur coexisten especies de C 4 Gramíneas, con un crecimiento más altas y las estrategias de especies con
año 2016 De enero de 2017 Disponible xxx en estrategias de crecimiento bajas. biológica de nitrógeno fi fijación (BNF) es muy importante para estas hierbas debido a que el suelo es pobre en nutrientes. La
línea comprensión de este proceso puede ayudar a explicar la dinámica de la vegetación y mejorar la gestión de estos pastizales. El objetivo de este trabajo fue
evaluar la asociación de cuatro hierbas nativas con tres género de bacterias diazotróficas menores de dos niveles de fertilización, y para determinar la

palabras clave: contribución de BNF. Los cuatro más abundante C 4 hierbas de América del Sur (pastizales naturales Axonopus af fi nis y Paspalum notatum, las estrategias de
Campos praderas Rizosfera alto crecimiento; Andropogon lateralis y laevis Aristida, estrategias de bajo crecimiento) se cultivaron en un invernadero en un diseño de bloques al azar con
asociativa bacterias naturales abundancia cuatro repeticiones. en un fi experimento primera, se ensayaron dos tratamientos de fertilización: 50 mg de P kg 1
de 15 norte

suelo + 100 mg N kg 1 suelo (N + P) y un control (sin N y PAG). El número de bacterias diazotróficas para el Azotobacter, Azospirillum y Herbaspirillum género
en la rizosfera, rizoplano y endorhizoplane eran cuanti fi ed. En un segundo experimento, se determinó la contribución BNF través naturales 15 técnica
abundancia N. Los resultados de este estudio señalan que el género de bacterias Azotobacter, Azospirillum y Herbaspirillum colonizar el sistema de
raíces de estas hierbas nativas, lo que contribuye a la nutrición nitrogenada de estas especies. Colonización aumentó con el tiempo, pero N y P
fertilización redujo la colonización. Nuestros resultados también demostraron que la N- fi potencial de fijación difiere entre especies con diferentes
estrategias de crecimiento. Aristida laevis ( bajo crecimiento de especies estrategia) es la hierba con la mayor aportación BNF. P. notatum ( alto
crecimiento especies estrategia) mostró una gran capacidad para absorber N del suelo, con un bajo aporte de BNF, siendo las especies con gran
respuesta a la fertilización.

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1. Introducción a través de una 15 N técnica de dilución de isótopos, Boddey et al. (1983)

demostrado que el ecotipo Batatais de Paspalum notatum hierba obtuvo 10% de su N (20 kg ha 1 yr 1) a
través de BNF. Esta asociación sería de gran importancia para la producción ganadera llevada a
Sur americano hierbas naturales ( Allen et al., 2011 ) Están adaptados para producir un signi fi hipocresía cantidad
de forraje para el ganado (principalmente ganado y ovejas) bajo condiciones de fertilidad del suelo cabo en estas áreas, debido a la adición de fertilizantes es en general baja o nula. Aunque, hay
restringidas. Nitrógeno estudios que apuntan hacia el uso de fósforo ( Gatiboni et al., 2000 ) Y nitrógeno ( Santos et al., 2008;
fi xing bacterias de la Azotobacter, Azospirillum y Herbaspirillum Siewerdt et al., 1995 ) Fertilización para aumentar la producción de forraje.
género puede contribuir al suministro de nitrógeno (N) requerido para nativo hierbas, donde BNF vida
libre microorganismos proporcionan la mayor cantidad de N entrar en estos sistemas ( Brasil et al.,
2005; Thompson et al., 1984 ).
En general, estos pastizales naturales se caracterizan por tener un gran número de especies de
gramíneas con diferentes estrategias de crecimiento. el género Andropogon y Aristida son
representativos de grupo con la estrategia de crecimiento lento. Por otra parte, Axonopus y

* Correspondiente autor.
Paspalum género tienen especies con estrategias de crecimiento rápido ( Machado
Email dirección: acrmarques@hotmail.com.br (ACR Marques).

http://dx.doi.org/10.1016/j.apsoil.2017.01.011
0929-1393 / © 2017 Elsevier BV Todos los derechos reservados.
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et Alabama., 2013 ). Las plantas con unas estrategias de crecimiento más altas y alta acumulación de N
en las hojas tienden a tener más rápidas capacidades de captura de recursos, cual permite a estas
plantas a dominar en húmedo y fértil áreas. Lento La estrategia de crecimiento de fi ne las especies que
son ef fi ciente en el conservación de recursos, permitiendo a la planta para reducir la pérdida de
nutrientes y aumentar su capacidad competitiva en nutrientes pobre ambientes ( Wright y Westoby,
2003 ). A pesar de la importancia de BNF para el crecimiento de los pastizales naturales, a nuestro sabemos,
ningún estudio ha sido llevado a cabo en el asociación entre estas hierbas y N fi bacterias xing, cómo el comunidad
de hierbas responde a los desequilibrios nutricionales y para fertilizantes aplicación, y lo que es un
verdadero aporte de BNF a la nitrógeno la nutrición de estas plantas.
UNA método que se ha utilizado ampliamente para determinar la contribución de BNF en leguminosa
correo plantas no leguminosas es la 15 norte natural método de abundancia. Fue desarrollado
inicialmente para estimar N 2 fi fijación por legumbres menores fi condiciones de campo ( Shearer y Kohl,
1986 ). Con este metodología, el éxito se ha logrado en la determinación de N 2 unión por bacterias
asociativas en hierbas, tales arroz ( Watanabe et al., 1987 ), El sorgo y el mijo perla ( Lee et al., 1994 ),
Kallar hierba ( Malik et al., 1991 ), Panicum maximum
( Yoneyama et al., 1993 ), Caña de azúcar ( Baptista et al., 2014 ), Género
Aristida ( Medina y Izaguirre, 2004 ) Y el pasto elefante ( Morais et Alabama., 2012 ). Entonces presente
en las plantas, absorbido desde el suelo, tiende a ser enriquecido en 15 N similar a la de la tierra. Sin
embargo, si el N de la plantas se originan en el BNF, el enriquecimiento en 15 N será menor, porque
viene de la ambiente, y 15 se produce dilución N ( Boddey et al., 2001 ). A determinar si hay dilución de
nitrógeno en el tejido, no fi plantas xing se utilizan como estándar.
Nosotros la hipótesis de que las especies con estrategias de bajo crecimiento debido a menores seca importar
producción tienen mayores contenidos de N de BNF. Sobre el otro mano, especies con estrategias de
crecimiento rápido, debido a la mayor producción de seca cuestión, tienen la capacidad de obtener una
mayor cantidad de N disponible del suelo. Embaucar fi rm la hipótesis, este trabajo busca (i) cuantificar el la
colonización de la Azotobacter, Azospirillum
y Herbaspirillum género en cuatro hierbas nativas de América del Sur, (ii) cuantificar el efecto de N y de
fósforo (P) de la fertilización en la colonización de bacterias en el endorizoplane, rizoplano y rizosfera
de cuatro con hierbas contrastar las estrategias de crecimiento, y (iii) estimación BNF contribución a la
nutrición N dentro de estas especies con diferente crecimiento las estrategias de la técnica de
abundancia natural de 15 N, y su relación a los patrones ecológicos y forraje producción.
2. materiales y métodos
2.1. suelo y plantas
Dos experimentos fueron llevado a cabo en el período comprendido entre mayo de 2012 hasta Mayo 2013, en
una de efecto invernadero en Santa Maria / RS, el sur de Brasil (29 de 45 0 S, 53 42 0 W; 95 ma.sl). Un Ultisol se
recogió en la superficie horizonte (0 - 20 cm de profundidad) y se analizaron: arcilla 180 g kg 1
( Día, 1965 ); total carbón orgánico 14,5 g kg 1 ( Walkley y Negro, 1934 ); el pH del suelo (Agua 1: 1) 4,6;
PAG 3.0 mg kg 1 ( Mehlich-1); K
76,0 mg kg 1 ( Mehlich-1), 1.9, 2.8 y 1.4 cmol do kg 3 de Al intercambiable, Ca y Mg (KCl 1M), respectivamente.dilución. 0,1 ml de la dilución en serie de 10 2 a 10 5 se inoculó en 9 ml de medio de cultivo semisólido
cuatro más abundantes C 4 pastos de las praderas naturales de América del Sur fueron seleccionados
en base a clasificación fi cación de tipos funcionales de plantas (PFT) ( Cruz et al., 2010 ). Axonopus af fi nis género, respectivamente ( Baldani et al., 2014 ). los Herbaspirillum género fue cuanti fi ed en sólo el
endorrizósfera, ya que se caracteriza principalmente por ser endófito ( Monteiro et al., 2012 ). Para
y Paspalum notatum fueron seleccionado como la especie representante del grupo con rápido crecimiento estrategias.
Andropogon lateralis y laevis Aristida como representante del grupo con las estrategias de crecimiento
lento. A. af fi nis es una hierba ese crece por estolones y se encuentra más comúnmente en las tierras
bajas áreas con suelo de alta humedad. P. notatum es el más abundante especies en el praderas de esta
región y su forma de crecimiento es basado en rizoma. A. lateralis es una matas de hierba-como erecto
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capaz de convertir a un hábito de crecimiento más decumbent con alta presión de pastoreo y bien
distribuidas por todo el paisaje. A. laevis es un pasto tussock encuentra con más frecuencia en zonas
de montaña con una menor humedad del suelo y de baja presión de pastoreo ( Cruz et al., 2010 ).
Las macetas (23 cm de diámetro y 15 cm de altura) eran fi llena con 5 kg de suelo homogeneizada y fi VE
se trasplantaron plántulas. Para ambos estudios, la humedad del suelo se mantuvo a 70% de
fi capacidad de campo con el peso diario de las ollas. El intervalo de cosecha se calcula la
temperatura necesaria para la expansión de
2,5 hojas (capacidad máxima expansión hoja), en días grado acumulados (DD). La suma térmica
utilizada era 832 DD (2,5 332.8) para A. laevis y 437 DD (2,5 174,8) para las otras tres especies.
332,8 y 174.8 es la suma térmica de la duración de la elongación de la hoja para una hoja. Los
detalles de este cálculo están en Machado et al. (2013) . La temperatura utilizada en el cálculo DD fue
la media entre el máximo y mínimo para cada día en el invernadero. Teniendo en cuenta que la
temperatura basal media fue superior a la temperatura mínima registrada, no se consideró. El
invernadero permitió 65% de fotosintética entrante radiación activa.
2.2. experimento I
Las especies de plantas fueron cultivadas en las macetas para la aclimatación de mayo a
septiembre de 2012 en un invernadero. Después, se hizo un uniforme 5 cm cortada de suelo sobre
las plantas y el tratamiento N + P se aplicaron (50 mg P kg 1 suelo + 100 mg N kg 1 suelo). P se añadió
como fosfato de potasio (KH 2 correos 4) y N como nitrato de amonio (NH 4 NO 3), tanto como una solución
acuosa. En el tratamiento de control, P y N no se aplicó y se añadió de potasio con cloruro de potasio
(KCl) en el mismo nivel a N + P tratamiento.
Las especies de plantas se dispusieron en un diseño de bloques completamente al azar con
doce repeticiones. Durante el experimento, el muestreo de las hierbas se realizó en tres veces con
cuatro replicación. A. af fi nis, P. notatum y A. lateralis se recogieron de octubre 27 10 de noviembre y
noviembre 27, 2012, lo que corresponde a 45, 60 y 76 días después del inicio del estudio.
A. laevis se recogió de noviembre 27, Diciembre 15, 2012 y enero 03, 2013, lo que corresponde a 76, 95
y 113 días después del inicio del estudio. Antes de las plantas que están siendo separados en brotes
y raíces, se recogieron muestras de raíces (aproximadamente 20 g de materia fresca) con tierra
adherida; las muestras se colocaron en cajas de poliestireno y se almacenan en el refrigerador
durante hasta siete días para determinar la colonización de bacterias diazotróficas.
Las muestras de suelo adheridas a las raíces fueron separadas en tres fracciones: rizosfera (10 g de
la tierra adherida a las raíces, la eliminación de la tierra por la pintura cepillo y se diluyeron en 90 ml de
solución salina solución al 1% por cada dos minutos en un agitador magnético), rizoplano (superficie de
10 g de raíces frescas se lavaron con agua destilada, y las bacterias se eliminaron por lavado con 90 ml
de solución salina solución al 1% por cada dos minutos en un agitador magnético) y endorhizoplane (10 g
de raíces frescas lavadas con agua destilada y desinfectados con cloramina-T por 30 min, y macerado
con 90 ml de solución salina al 1%). Después de 1 ml de la suspensión añadió a 9 ml de solución salina
varias veces para un 10 5
sin nitrógeno LG, NFb y JNFb para el aislamiento de la Azotobacter, Azospirillum y Herbaspirillum
determinar el número de nitrógeno fi xing bacterias, se utilizó el método de Número Más Probable
(MPN) ( Okon et al., 1977 ), Que es un método indirecto para el recuento de unidades formadoras de
colonias, a partir de una muestra mediante diluciones en serie y cada dilución se transfiere al medio
de cultivo. Se estima que el número de microorganismos viables en una población dada y ha sido
ampliamente utilizado en estudios con
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de asociación bacterias ( Baldani et al., 2014 ). NMP determinación de bacterias números fue realizado Como se describe en el fi experimento primera, la colonización de bacterias diazotróficas también
utilizando la tabla de tres McCrady diluciones de formando blanco fi lm en el medio de cultivo ( okon et Alabama.,
se determinó utilizando el método de NMP ( Okon et al., 1977 ). Las muestras de suelo adheridas a
1977 ). A remover la tierra del resto de las raíces, el suelo se tamizó y después de la raíces se las raíces y las raíces se separaron en tres fracciones: rizosfera, rizoplano y endorhizoplane, como
enjuagaron con agua destilada. Raíces y brotes de material estaba colocado en bolsas de papel y se se describe en el fi experimento primera. La dilución en serie de 10 2 a 10 5 se realizó. Se utilizó un
seca en un horno con circulación de aire a 65 C hasta peso constante con el fin de determinar la seca importar.
medio de cultivo semisólido sin nitrógeno LG, NFb y JNFb para el aislamiento de la Azotobacter,
Nitrógeno concentración en cada parte se midió por el Kjeldahl método. Azospirillum y Herbaspirillum género, respectivamente. los Herbaspirillum género fue cuanti fi ed en sólo
el endorrizósfera, ya que se caracteriza principalmente por ser endófito ( Monteiro et al., 2012 ).
muestras de brotes secos se molieron en un molino y se maceran en un mortero de porcelana. Para
evaluar la contribución BNF asociado con especies nativas, Se analizó 0,002 g de materia seca
rodaje para determinar la concentración de N y delta 15 N ( re 15 N), con el analizador elemental, Flash
Estadístico análisis del número de bacterias fue realizada por un comparación de significa usar EA 1112 modelo, por Thermo Finnigan, Milán, Italia. De acuerdo con la 15 N técnica de abundancia
una prueba de aleatorización, con valores previamente convertido en una logaritmo mediante el uso de natural ( Shearer y Kohl, 1986 ) El porcentaje de contribución de nitrógeno derivado de BNF para las
la distancia euclidiana como una métrica de similitud, donde en fertilización, el período y la fracción fueron especies de plantas se calculó utilizando la ecuación. (1) :
clustering factores, y Sólo se consideraron las diferencias cuando p < 0.05. Un análisis multivariante se
realizaron utilizando MultiV software ( Pilar, 2001 ). El análisis de varianza (ANOVA) para la raíz de las
variables materia seca (RDM), la tanda de materia seca (SDM), N contenido en raíces y contenido de N
en los brotes se llevó a cabo para cada planta especies después del período modelo de tratamiento.
Cuando los efectos de la tratamientos fueron signi fi peralte en 5% de probabilidad, las diferencias entre
los medios se compararon mediante la prueba de Tukey.

0@ 1A

% NFR ¼ re 15 N en la especie no fijación re 15 N en el ensayo de la planta

re 15 N en la especie no fijación B
100
2.3. experimento II
re 1 Þ

los mismo planta especies de la fi estudio primero fueron utilizados en el Experimento II. El estudio
En esta fórmula,% NFR es porcentaje de N fi tasa de fijación, re 15 N en el no fi xing especie es la media
se inició el 5 de febrero de 2013 y terminó en mayo 14, 2013. Las especies de plantas se consideraron
de re 15 de Raphanus sativus L., Bidens pilosa L. y Sida rhombifolia L., re 15 N en el ensayo de la planta es
los tratamientos, distribuidos en una completamente diseño de bloques al azar con cuatro
la re 15 de pastos nativos. El valor de B es una estimación de la abundancia natural de 15 N en fi xing
repeticiones. No nitrógeno fi plantas xing ( Raphanus sativus L., Bidens pilosa L. y Sida rhombifolia L.) se
plantas cuando crecen depende exclusivamente en el proceso BNF. Hay un valor de B sólo para las
cultivaron en las mismas condiciones y se usó como control por parte técnica 15 N técnica de
leguminosas. En el caso de las gramíneas, que aún no ha sido posible hacer crecer una planta en un
abundancia natural ( Shearer y Kohl, 1986 ) (Ec. (1) ). Según la técnica estas especies no tienen la
género fue cuanti fi ed en sólo el endorrizósfera, ya que se caracteriza principalmente por ser endófito. 56
suplemento de N depende exclusivamente de FBN. Por lo tanto, una magnitud del valor B no es
capacidad para llevar a cabo la asociación con bacterias diazotróficas.
conocido y actualmente en varios trabajos sobre un FBN en la caña de azúcar, arroz y pasto
elefante, el valor de B considera igual a cero ( Boddey et al., 2001; Kurdali y Al-Sama ' una de 2009 ).
Con la concentración de N y la re 15 se obtuvo valor N del N fi tasa de fijación (NFR; Eq. (1) ), Disparar N
concentración (SNC), y la concentración de N en el tejido derivado de BNF (NC-BNF). Multiplicando
los A. af fi nis, pag. notatum y A. lateralis especies fueron recolectadas en Abril 8 2013 y A. laevis se
la concentración de N por el rendimiento de materia seca se calculó la absorción total de N en el
recogió en mayo 14, 2013, respectivamente, 62 (4 437 GD) y 98 (4 832,5 GD) días después del inicio
tejido (TNU). Multiplicando la materia seca
de la experimentar. muestras Shoot se secaron horno en bolsas de papel de constante peso con aire circulación
a 65 C. Las muestras de raíz con suelo adheridas se recogida y almacenada en el refrigerador para
determinar diazotróficas bacterias colonización, como se describe anteriormente.

tabla 1
Logaritmo (log 10) del número bacterias diazotróficas encontrado en el experimento y usando medios selectivos NFb (Azospirillum), LG (Azotobacter) y JNFb (Herbaspirillum) en el control y N + P tratamientos, en el endorhizoplane (ED), rizoplano
(RP) y de la rizosfera (SR) fracciones de suelo para cuatro C 4 hierbas de América del Sur pastizales naturales.

Especies Tratamiento Período Las fracciones

Controlar norte + P 27 / 10-27 / 11 X 10 / 11-15 / 12 X 27 / 11-03 / 01 X ED RP SR

LG (Azotobacter)
Axonopus af fi nis 6.1 una 5.2 segundo 4.7 do 5.7 segundo 6.6 una 5.3 segundo 5.9 una 5.8 una

Paspalum notatum 6.0 una 5.2 segundo 4.7 do 5.5 segundo 6.6 una 5.4 segundo 5.8 una 5.7 una

Andropogon lateralis 6.6 una 5.7 segundo 5.7 do 6.1 segundo 6.8 una 5.8 segundo 6.4 una 6.3 una

Aristida laevis 6.1 una 5.4 segundo 5.1 segundo 5.4 segundo 7.0 una 5.5 segundo 5.9 una 6.1 una

NFb ( Azospirillum)
Axonopus af fi nis 6.1 una 5.3 segundo 4.4 do 5.3 segundo 7.2 una 5.4 segundo 5.9 una 5.8 una

Paspalum notatum 6.2 una 5.2 segundo 4.2 do 5.1 segundo 7.8 una 5.5 segundo 5.9 una 5.8 una

Andropogon lateralis 6.4 una 5.7 segundo 4.8 do 5.9 segundo 7.4 una 5.7 segundo 6.0 una 6.1 una

Aristida laevis 5.7 ns 5.9 4.9 do 5.7 segundo 6.9 una 5.4 segundo 6.0 una 6.1 una

JNFb ( Herbaspirillum)
Axonopus af fi nis 6.3 una 5.2 segundo 4.7 segundo 5.0 segundo 7.4 una - * - -
Paspalum notatum 6.6 una 5.6 segundo 5.1 segundo 5.3 segundo 8.0 una - - -
Andropogon lateralis 6.1 una 5.8 segundo 5.2 segundo 5.1 segundo 7.5 una - - -
Aristida laevis 5.3 ns 5.0 3.8 segundo 3.9 segundo 7.8 una - - -

Medio seguido por el mismo letra minúscula en la línea no difieren estadísticamente usando la prueba de Tukey al 5% de probabilidad; ns = no signi fi hipocresía. X Las fechas 27/11; 15/12 y 03/01 se refieren a la laevis Aristida especies; * Los Herbaspirillum
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producido por la N se obtuvo la concentración por BNF la acumulación N por BNF (NA-BNF). Restando
el N por BNF del N total acumulado en los tejidos de la planta se obtuvo el N absorbido del suelo (N-Soil).
Estadístico análisis del número de bacterias fue realizada por un comparación de significa usar
una prueba de aleatorización, con valores previamente convertido en una logaritmo mediante el uso de
la distancia euclidiana como una métrica de similitud, en el que las especies y fracción fueron
agrupando factores, y diferencias sólo se consideraron cuando p < 0.05. multivariante los análisis se
realizaron utilizando el software MultiV ( Pilar, 2001 ). Los análisis de varianza (ANOVA) para las otras
variables fueron interpretado por la comparación de las especies. Cuando los efectos de la tratamientos
fueron signi fi peralte en 5% de probabilidad, las diferencias entre los medios se compararon mediante
la prueba de Tukey.
bajo N + P la fertilización, el A. af fi nis, P. notatum, A. lateralis y
A. laevis especies mostró 164%, 90%, 126% y 62%, superior rodaje de materia seca (SDM),
respectivamente, en comparación con el control ( Tabla 3 ). En el tercer período de crecimiento, la
producción SDM fue de 146%, 129%, 509% y 174% más alto para la A. af fi nis, P. notatum, A. lateralis y A.
laevis especies, respectivamente, en relación con el fi período de primera.
concentración de N raíz para el A. af fi nis y P. notatum especies no alteró por los tratamientos de
fertilización. Sin embargo, con la adición de N + P para A. lateralis y A. laevis concentración raíz N fue
de 28% y 16% mayores, respectivamente, en comparación con el control ( Tabla 3 ). En el tercer
período de crecimiento, la concentración de la raíz N para todas las especies fue similar a los de la fi período
de primera, a excepción de A. af fi nis, que era 30% menor que la de la

fi período de primera.

3. resultados Disparar concentración de N para todas las especies aumentó con la adición de N + P ( Tabla 3 ).
Disparar la concentración de N de A. af fi nis, P. notatum y A. lateralis era 41%, 50% y 50% mayores,
3.1. Número de bacterias diazotróficas respectivamente, con la adición de N + P. En el tercer período de crecimiento el A. af fi nis, P. notatum, A.
lateralis y A. laevis especies mostró 57%, 37%, 33% y 23% menos concentración rodaje N,
los Asociación de Azotobacter, Azospirillum y Herbaspirillum respectivamente, en comparación con el fi período de primera.
género con las cuatro especies de plantas se con fi confirmado por nuestro estudio ( Las tablas 1 y 2 ). los colonización
de Azotobacter, Azospirillum y
Herbaspirillum cuanti fi ed de experimentar Y, en promedio de cuatro especies de plantas, estaba aproximadamente
un 13% inferior con la adición de N + P, en comparación con el planta de control. los colonización de Azospirillum
3.3. contribución BNF en el experimento yy

y Herbaspirillum en las raíces de A. laevis fue similar entre la fertilización tratos.
Para todos planta especie, la colonización de Azotobacter, Azospirillum y Herbaspirillum era de
media luna; demostrando 34%, 61% y 66% Más la colonización en promedio, respectivamente, en el
tercer período, cuando en comparación con el fi período RST ( tabla 1 ). Para todas las especies de
plantas, la la colonización de la Azotobacter y Azospirillum género fue 10% mayor en el rizoplano y rizosfera absorbido desde el suelo (N-Soil) y disparar materia seca fue mayor en los tejidos de alto crecimiento
cuando se compara con endorhizoplane.
Para el experimentar aa, la la colonización de la Azotobacter y
Azospirillum género fue similar para las cuatro especies de plantas ( Tabla 2 ). los Herbaspirillum género
mostró una mayor colonización para el A. laevis hierba. los Azotobacter y Azospirillum género demostró
mayor la colonización en el rizoplano y en el suelo de la rizosfera, en tanto experimentos.
concentración Shoot N (SNC) fue mayor para las especies de las estrategias de crecimiento lento
( A. lateralis y A. laevis) en comparación con las especies de las estrategias de crecimiento rápido ( A. af fi nis
y P. notatum) ( Figura 1 ). Tissue concentración de N de BNF (NC-BNF) y N fi tasa de fijación (NFR) para A.
laevis ( estrategia de crecimiento lento) fue mayor en comparación con las otras especies, y P. notatum mostró
los valores más bajos para NC-BNF y NFR ( Figura 1 ). La absorción total de N en el tejido (TNU), N
especies estrategias ( A. af fi nis y P. notatum) en comparación con especies de crecimiento lento
(estrategias A. lateralis y A. laevis). N absorbido desde el suelo (N-Soil) para P. notatum era 56% mayor
que el promedio para otras especies. SDM producido por P. notatum fue de 147% veces mayor que las
otras especies. SDM producido por A. lateralis fue similar a la de A. laevis ( Figura 1 ).

4. Discusión
3.2. Seco importar contenido de producción y nitrógeno
4.1. La colonización por bacterias diazotróficas
los producción de materia seca de la raíz (RDM) para la especie A.
af fi nis, pag. notatum, A. lateralis y A. laevis con la adición de N + P fue 45%, 43%, 45% y 81% más alto respectivamente,
En todas las hierbas estudiadas, encontramos bacterias asociadas a las raíces con una
en comparación con la de control ( Tabla 3 ). En el tercer período de crecimiento, la producción de RDM A. capacidad para transformar N 2 en asimilables formas por las plantas ( Las tablas 1 y 2 ). Esta
af fi nis, pag. notatum, A. lateralis y A. laevis era 144%, 128%, 272% y 319% respectivamente mayor en asociación puede ayudar a explicar la producción de biomasa de estas hierbas en suelos de baja
comparación con el fertilidad, así como el uso de estos pastizales como fuente de forraje sin utilizar la fertilización de
nitrógeno. biológica de nitrógeno fi fijación (FBN) aporte mostró diferencias entre las especies, siendo
fi primero período. menor para una rápida

Tabla 2
Logaritmo (log 10) del número bacterias diazotróficas encontrado en el experimento yy en medios selectivos NFb (Azospirillum), LG (Azotobacter) y JNFb (Herbaspirillum) en endorhizoplane (ED), rizoplano (RP) y rizosfera (SR) fracciones de suelo
para cuatro C 4 hierbas de América del Sur pastizales naturales.

Especies Las fracciones

Axonopus af fi nis Paspalum notatum Andropogon lateralis laevis Aristida ED RP SR

LG ( Azotobacter)
4.5 una 4.7 una 4.7 una 4.6 una 4.2 segundo 4.8 segundo 4.9 segundo

NFb ( Azospirillum)
5.1 una 5.2 una 4.9 una 5.2 una 4.5 segundo 5.5 segundo 5.2 segundo

JNFb ( Herbaspirillum)
5.3 segundo 5.2 segundo 5.1 segundo 5.9 una - * - -

Medio seguido por la misma letra en la línea no son estadísticamente diferentes utilizando la prueba de Tukey al 5% de probabilidad; *Los Herbaspirillum género fue cuanti fi ed en sólo el endorrizósfera, ya que se caracteriza principalmente por ser
endófito.
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Tabla 3
Raíz y disparar seca materia, y nitrógeno concentración en las raíces y retoños de materia seca, de cuatro C4 hierbas de América del Sur pastizales naturales, durante tres períodos de crecimiento bajo fósforo y nitrógeno fertilización (N + P) y testigo.

Especies

Axonopus af fi nis Paspalum notatum Andropogon lateralis laevis Aristida

materia seca Root (pot g )

Tratamiento
Controlar 4.0 segundo 7.6 segundo 5.5 segundo 3.8 segundo

norte + P 5.8 una 10.9 una 8.0 una 6.9 una

Crecimiento Período

27 / 10-27 / 11 X 2.9 do 5.7 do 3.3 segundo 2.1 segundo

10 / 11-15 / 12 X 4.7 segundo 9.1 segundo 4.7 segundo 5.2 una

27 / 11-03 / 01 X 7.1 una 13.0 una 12.3 una 8.8 una

signi fi nivel cance (P =)

El tratamiento (T) ** ** * *
Período (P) ** ** ** **
interacción TP ns ns ns ns
CV 1 (%) 13 8 23 35

Disparar materia seca (g olla )

Tratamiento
Controlar 8.5 una 15.1 segundo 4.9 segundo 8.3 segundo

norte + P 22.5 una 28.8 una 11.1 una 13.5 una

Crecimiento Período

27 / 10-27 / 11 X 9.3 do 12.7 segundo 2.2 do 5.1 segundo

10 / 11-15 / 12 X 14.2 segundo 24.1 una 8.5 segundo 13.7 una

27 / 11-03 / 01 X 22.9 una 29.1 una 13.4 una 14.0 una

signi fi nivel cance (P =)

El tratamiento (T) ** ** ** *
1 coef fi ciente de variación; X Las fechas 27/11; 15/12 y 03/01 se refieren a la laevis Aristida especies. 58
Período (P) ** ** ** **
interacción TP ns ns ns ns
CV 1 (%) 5 7 14 19

Nitrógeno concentración en materia seca de la raíz (%)

Tratamiento
Controlar 0.9 una 0.5 una 0.7 segundo 0.6 segundo

norte + P 0.9 una 0.6 una 0.9 una 0.8 una

Crecimiento Período

27 / 10-27 / 11 X 1.0 una 0.6 ns 0.7 una 0.7 ns

10 / 11-15 / 12 X 0.9 una 0.5 0.7 una 0.7
27 / 11-03 / 01 X 0.7 segundo 0.5 0.8 una 0.6
signi fi nivel cance (P =)
El tratamiento (T) ** ** ** **
Período (P) ** ns ** ns
interacción TP ns ns ns ns
CV 1 14 18 dieciséis 17

Nitrógeno concentración en materia seca rodaje (%)

Tratamiento
Controlar 1.2 segundo 1.0 segundo 1.2 segundo 1.0 segundo

norte + P 1.7 una 1.5 una 1.8 una 1.2 una

Crecimiento Período

27 / 10-27 / 11 X 1.9 una 1.6 una 1.8 una 1.3 una

10 / 11-15 / 12 X 1.5 segundo 1.1b 1.6 segundo 1.0 segundo

27 / 11-03 / 01 X 0.8 do 1.0b 1.2c 1.0 segundo

signi fi nivel cance (P =)

El tratamiento (T) ** ** ** **
Período (P) ns * ** **
interacción TP ns ns ns ns
CV 1 11 10 9 13

Medio seguido por la misma letra en la columna no son estadísticamente diferentes utilizando la prueba de Tukey al 5% de probabilidad; ns no signi fi peralte (p 0,05); ** signi fi no puede en 1% de nivel de probabilidad (p < 0,01); * signi fi peralte en 5% probabilidad (p < 0,05);

crecimiento strategie metálico pag. notatum, que tiene alta capacidad demostrada para N la absorción secretada por las especies nativas ( Tan et al., 2013 ). La composición de los exudados también puede
desde el suelo ( Figura 1 ), Lo que justifica su abundancia en el natural praderas de América del Sur. Así ser modi fi cado por la disponibilidad de nutrientes en el suelo ( Kaschuk et al., 2016 ). Es probable que
como un alto BNF contribución para A. laevis, que tiene una estrategia de crecimiento lento, lo que la fertilización con N y P altera los tipos de exudados que se liberan en la rizosfera, con un efecto
negativo sobre la colonización ( Grayston et al., 1997; Marks et al., 2013 ). plantas bien nutridas
podría ayudar a explicar su adaptabilidad a suelos de baja fertilidad ( Figura 1 ). Fertilización con N + P mostró
un efecto negativo sobre la colonización de la bacterias del género de tres diazotróficas, signi fi cativamente pueden producir exudados menos atractivos para los microorganismos, porque asociación no
la reducción la número de bacterias sin tener en cuenta el período de evaluación y la raíz fracción ( tabla 1 ). simbiótica puede no ser energéticamente favorable en tales casos ( Kaschuk et al, 2016.; Marks et al.,
la colonización bacteriana en alta la controlar planta puede estar relacionado con las cantidades de 2013 ). Aumento de suelo disponibilidad P también aumenta la concentración de fosfolípidos en las
exudados de la raíz células radiculares, lo que reduce la permeabilidad de membrana,
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Figura 1. Los parámetros relacionados con N en rodaje de cuatro C 4 hierbas de América del Sur pastizales naturales: la concentración de N (A), la concentración de N a través de BNF (B), N fi tasa de fijación (C), la absorción de N total (D), N acumulación a través de BNF (E), N absorbido desde

el suelo (F), materia seca (G) y la materia seca de la raíz (H). Las medias seguidas por la misma letra no son estadísticamente diferentes utilizando la prueba de Tukey al 5% probabilidad.
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sentido ese deposición de exudado de rizosfera también disminuye ( Graham et al., 1981 ), Que tiene un discutió anteriormente, la estrategia de crecimiento lento de esta especie permite que sea más adaptado para el

impacto negativo sobre la colonización de nitrógeno fi bacterias xing. N fertilización indirectamente cultivo en terrenos pobres. Por lo tanto, BNF es un mecanismo que también contribuye para esto, como una vía

puede inhibir la colonización por bacterias diazotróficas, ya que el aumento en N disponibilidad estimula importante para el suministro de N.

la producción de materia seca de las plantas. Por lo tanto, aumentar el uso de fotoasimilados en
estructural compuestos reduce rápidamente la disponibilidad de carbono (C) en la rizosfera, también la A. laevis tiene una alta concentración de N por BNF, producción de materia seca intermediario ( tablas
reducción colonización en esta región ( Kavadia et Alabama., 2011 ). Similar valores de colonización de 3 ; Figura 1 ), Esto resulta en alta N acumulados por el BNF. En los pastizales naturales con baja
la planta de control y N + P en fertilidad natural del suelo, A. laevis podría realizar un importante servicio de los ecosistemas, que
promueve la entrada de N en las praderas naturales de América del Sur, y con la descomposición de
material senescente, haría N disponible para otras especies, tales como especies de estrategias de
crecimiento rápido. Por lo tanto, hay una posibilidad de A. laevis, a través de su mayor BNF, siendo
A. laevis ( tabla 1 ) mayo indican que estas bacterias género son importantes en el adaptación de esta vinculado a un proceso de facilitación ( Connell y Slatyer de 1977 ), Creando una variedad de nichos
hierba en condiciones de baja disponibilidad de nutrientes. los Herbaspirillum género es que se pueden unir a una mayor diversidad de especies en entornos dominadas por pastos. Otras
principalmente caracterizado como endófitos, y esta forma de asociación es más favorable para la especies que ocupan estos nichos son capaces de explotar una mayor cantidad de recursos
nitrogenasa enzima actividad, y transferencia posterior de N a la planta ( Monteiro et al., 2012 ). teniendo disponibles y aumentar el uso del espacio en el nicho. Por lo tanto, aunque A. laevis tiene un bajo
en cuenta estos características relacionadas con la Herbaspirillum género asociado con A. laevis, y el más valor nutricional ( Machado et al., 2013 ), Su contribución a través de BNF hace que esta especie
grande en la colonización experimento II ( Tabla 2 ), BNF representa un signi fi hipocresía contribución al importantes para los pastizales naturales de América del Sur.
total de N en esta hierba ( Figura 1 ). los aumento de la colonización durante todo el período fue
evalution relacionado con planta el crecimiento y la efecto rizosfera. Durante la cosecha creciente temporada,
también hubo aumento en la producción de mucílago secretada por las células en la raíz ( Walker et
al., 2003 ). este rizosfera efecto es también posiblemente responsable del aumento de la actividad de Azotobacter
y Azospirillum en el rizoplano y rizosfera ( Las tablas 1 y 2 ). los raíz similares N concentración en el Este pastizales, en edades geológicas pasadas, se caracterizó por las condiciones climáticas de
control y N + P tratamiento (muestras Tabla 3 ) para A. af fi nis y P. notatum, puede que sea debido a la mayor
bajas temperaturas y baja precipitación ( Behling, 2002 ). En estas condiciones, única especie con
capacidad de estas especies para obtener un significante fi cantidad no puede de N del suelo, incluso características similares a las A. laevis sería adaptado ( Cruz et al., 2010 ). Hierbas como este pueden
en condiciones de baja disponibilidad ( Figura 1 ). Soil N la capacidad de captura presentado por A. af fi nis haber ayudado a otras especies que requieren una mayor cantidad de nutrientes para colonizar estas
y P. notatum, zonas. Por lo tanto, esta especie es importante para el ciclo biogeoquímico del nitrógeno en los
ecosistemas naturales, pastizales, así como otras especies con características de crecimiento
similares, pero aún no se ha estudiado. De acuerdo a Medina y Izaguirre (2004) , En las praderas de
América del Sur, Aristida sp. demostrado 25% de N acumulado por BNF. Es un C 4 hierba vía
metabólica, adaptable a N suelos pobres, y dominante en las sabanas de regiones tropicales,
posiblemente reforzada por la deposición de N a través de BNF, como se observa en A. laevis.

juntos con su rápida estrategia de crecimiento características, resultaron en una mayor producción de SDM
( Los cuadros 3 y 4 ), Así como la dilución N en la (tejidos Tabla 3 ). El más bajo capacidad de respuesta de A.
laevis a la fertilización se debe a su estrategia de crecimiento lento ( Tabla 3 ), Resultando en menor seco importar
producción y una mayor N acumulación en los tejidos, También en Florida influenciada por la entrada N de
BNF ( Figura 1 ).
4.2. Contribución del BNF y ecosistema trascendencia
los N más grande fi tasa de fijación medida por el 15 N abundancia natural técnica indica que A. laevis tiene
una asociación mayor con bacterias diazotróficas, en especial con Herbaspirillum, y el asociaciones es
más ef fi ciente ( Tabla 1 y 2 ). Como
los Tabla 4 mostró esta relación, con una aproximación calculada con los datos de otros autores,
por fi condiciones de campo, en la que la especie A. af fi nis y P. notatum, aunque tienen una menor
concentración de N por BNF ( Figura 1 ), Debido a su alta producción de materia seca mostró alta N
acumulado por BNF, independiente del período del año. Esta aproximación nombrar a valores de 15
a 37 kg de N ha 1 para las especies A. af fi nis y P. notatum debajo fi condiciones de campo ( Tabla 4 ).
Teniendo en cuenta el mineral N absorbido desde el suelo ( Figura 1 ), P. notatum
y A. af fi nis mostró la mayor acumulación de N, con fi confirmando la hipótesis de Cruz et al. (2010) , Que
son la captación de recursos

Tabla 4
La estimación de la BNF contribución de cuatro hierbas en los prados naturales de América del Sur durante tres estaciones del año.

Temporada forraje seco Especies z Contribución de la yN N

N total Ac- acumularse y norte de BNF
importar* materia seca de la concentración de
edad para- BNF

kg MS ha 1 (%) kg MS ha 1 (%) kg N ha 1 (%) Ha kg N 1

Primavera 1550 Axonopus af fi nis 6.3 98.0 0.9 88,2 33 29.1

Summer1247 Axonopus af fi nis 8.4 104.5 0.9 94.0 33 31.0

Autumn1608 Axonopus af fi nis 7.9 126,7 0.9 114,0 33 37.6

Primavera 1550 Paspalum notatum 5.1 79.1 0.9 71.1 22 15.7

Summer1247 Paspalum notatum 10.3 128,4 0.9 115,6 22 25.4

 CR M
especies ( Tabla 4 ). Esta característica hace P. notatum y A. af fi nis menos dependiente de Asociación
con microorganismos, teniendo en cuenta la capacidad de obtener mineral nutrientes en una condición
natural.
los estudio de BNF en relación con la ciclo biogeoquímico de N es esencial para natural praderas,
porque N es de gran importancia para todos organismos que depender de esta ecosistema, y ​es a
menudo un factor limitante para la crecimiento de pastizales. El conocimiento sobre las especies en
BNF del Sur América pastizales naturales es fundamental para comprensión la función del ecosistema,
y ​en la predicción de futuras respuestas a global cambio medioambiental ( Reed et al., 2011 ). El
aumento en atmosférico concentraciones de CO 2 la quema de combustibles fósiles y la deforestación
en los trópicos puede aumentar la fotosíntesis capacidad de gramíneas en praderas naturales. Esto
puede estimular la BNF de asociaciones Entre microorganismos y plantas, ya que su es la actividad limitado
por el suministro de energía en forma de azúcares solubles publicado por la planta huésped ( Reed et
al., 2011 ).
5. conclusiones
los BNF es muy importante para la nutrición de los pastos nativos en el sur America pastizales.
Nuestros resultados mostraron que la N- fi potencial de fijación diferir de entre las especies con diferentes
estrategias de crecimiento, lo que sugiere que el nivel de la dependencia del BNF en un prado dependen
del tipo de especies que componen estos pastizales, una vez que las especies con mayores tasas de
crecimiento son menos dependientes de FBN.
Nuestro resultados apoyen el hipótesis de que la fertilización con P y N reduce la colonización de
nitrógeno fi xing bacterias en pastos nativos, Aunque esta herramienta para gestionar aumentar la
producción de seca materia y N acumulación en estas especies, particularmente aquellos con rápido crecimiento,
como A. af fi nis y P. notatum. Entre los cuatro estudiados hierbas especies, A. laevis, que es una especie
de estrategia de crecimiento lento, mostró la más alto N fi tasa de fijación (36%). Por lo tanto, esta
especie, aunque tiene baja valor nutritivo para el pastoreo, tiene un importante ecosistema función, lo
que permite la entrada de N en formas orgánicas en el nativo sistema de pastizales. P. notatum, mostró
una gran capacidad de absorber N disponible del suelo, con un bajo aporte de BNF, ser un especies
con gran respuesta a la fertilización.
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