OBJETIVO: Cómo influyen los parámetros operacionales en el proceso de separación

Cuando la RESOLUCIÓN es muy baja la exactitud cualitativa es difícil, conforme aumenta la

resolución aumenta la exactitud. Es un parámetro que nos dice lo bien que se ha llevado acabo la
separación.

LA RESOLUCIÓN DEPENDE: Eficiencia, selectividad y retención.

¿De qué manera influye la presión del gas portador?

El parámetro inmediato para caracterizar la presencia de un analito en un cromatograma es el

tiempo de retención.

CONCLUIR CON BASE A:

 Temperatura de la columna
 Presión del gas portador
 Modo de operación (Isoterma o gradiente)
 Temperatura inicial

No hay una relación directa ni cuantificable entre el punto de ebullición y la volatilidad del analito.

La temperatura de ebullición solo sirve de referencia para poder determinar la temperatura del
inyector.

Para utilizar isoterma se requiere conocer la composición de la muestra, y a parte estos deben ser
compuestos homólogos, es decir, tener una estructura similar con temperaturas de ebullición
similares. No se puede utilizar para muestras complejas.

Cuando aumentamos la velocidad de calentamiento los tiempos de retención disminuye

drásticamente lo que conlleva a una coelución por lo que la mayor parte sale al principio

Cuando aumentamos la presión disminuyen los tiempos de retención, aumenta la eficiencia, pero
es menos incidente que la velocidad de calentamiento, ya que los tiempos de retención disminuyen
más cuando aumentamos la velocidad de calentamiento.

¿A qué se debe que los picos salgan juntos en isoterma? Debido a que la temperatura de ebullición
de los primeros analitos está por debajo de 180 ° por lo tanto al llegar a esa temperatura los picos
coeluyen.

Plato teórico: es un segmento de la columna donde se llega al equilibrio.

EN MÉTODO 5: duplicamos la presión, disminuyen los tiempos de retención y la eficiencia en ciertos

analitos aumenta, sin embargo aunque aparentemente la resolución ha mejorado lo cual no es
verdad porque se ha perdido drásticamente la capacidad de fraccionamiento.

¿Y PORQUE SE HA PERDIDO LA CAPACIDAD DE FRACCIONAMIENTO? Porque hay coelucion

¿POR QUÉ HAY COOELUCION? Esto porque el incremento de presión ha hecho que muchos de los
coeficientes de distribución se iguale para que vayan saliendo juntos.
En conclusión: la resolución no mejora con el aumento de presión, puede aumentar la eficiencia
pero se pierde mucho la capacidad de fraccionamiento.

COEFICIENTE DE DISTRIBUCION:

MÉTODO 2: donde se aumenta la velocidad de calentamiento, aparentemente mejora la resolución

pero no es así porque perdemos picos (se pierde la capacidad de fraccionamiento), y los tiempos de
retención disminuyen. Pero pareciera que hay una contradicción porque si los tiempos de retención
disminuyen la resolución debería aumentar, esto sucede debido a que la resolución es
multiparamétrica, depende de 3 factores, no depende de uno solo: SELECTIVIDAD, RETENCION Y
EFICIENCIA, por lo tanto no hay contradicción, porque mejoramos uno pero empeoramos el otro.

¿QUE PARAMETRO DE LA RESOLUCION SE HA MODIFICADO PARA QUE SALGAN LOS PICOS JUNTOS?
La Selectividad

METODO 4: Isoterma. De acuerdo a lo que se observa, podemos deducir y decir que en este equipo
y con esta columna, no se podría separar estos componentes de la mezcla conocida con un
tratamiento isotérmico, pero eso no impide que se realice una isoterma, bajando la temperatura de
acuerdo a la temperatura de ebullición y observando cómo se comporta.

PARA QUE SE HA CONSTRUIDO EL MÉTODO DE PROSPECCIÓN: para conocer la mayor información

posible sobre la muestra en nuestro sistema de separación sin poner en riesgo los componentes del
equipo.

PICO FANTASMA: Señales que aparecen en cromatograma pero no aparecen en forma constante.

LO PRIMERO QUE SE DEBE AVERIGUAR ANTES DE INICIAR UN ANALISIS ES: INVESTIGAR EL

HISTORIAL DE LA MUESTRA.

CAPA FINA

Fase móvil: tolueno-acetato de etilo 3:1 es polar

Fase estacionaria: silica gel- muy polar

¿Porque en capa delgada con la muestra conocida solo aparecen pocos compuestos y en gases
hay más compuestos? Nadie garantiza que en un solo punto haya solo un compuesto, la selectividad
de la fase estacionaria no logra discriminar, y es por eso que los compuestos salen juntos.

¿Cómo se logra separar los compuestos que están juntos en la misma placa con la misma fase
estacionaria (silica gel)? Se cambiaría la fase móvil (menos polar)

Parámetro mas incidente en capa fina: composición de fase móvil.

HPLC

Con base a nuestros cálculos

La muestra con solventes fuertes es la que da una mejor separación.

Concentraciones iniciales de solvente fuerte mayores y tiempos de equilibrio menores, se obtiene
mejor resolución aparentemente, porque también hay superposición de picos.

Constante de retención o de reparto: Es cuando un soluto entra al sistema cromatógrafico,

inmediatamente se reparte o distribuye entre la fase móvil y la estacionaria. Esta dada por el
coeficiente K=concentración de fase estacionaria entre concentración de fase móvil.

CAMBIAR EN PRESENTACION:
NO OLVIDAR LAS CONSTANTES DE ELUCION EN LA
TABLA
ANILINA CAMBIAR A X