2.2. Proyección de termotolerantes Rhizopus spp.

para la producción de ácido L-láctico a

40odo
el cribado primario de las cepas de Rhizopus para la producción de ácido de alta L-

láctico se llevó a cabo en placas de medio de agar de almidón que consisten en 3 g / l de extracto

de levadura, 10 g / L de agar, 0,04 g / L de bromocresol

almidón de yuca verde y 20 g / L o almidón de yuca licuado obtenida por tratamiento con amilasa

(Termamyl®Clásico; Novozymes, Bagsvaerd, Dinamarca) a 95-100 ° C durante 2 h. Una pieza 5

mm de diámetro de la esterilla micelial de cada cepa, que se cultiva durante 5 días en una placa de

PDA, se obtuvo usando un perforador de corcho estéril y, a continuación inoculó en cada placa de

medio de agar de almidón y se incubó a 40oDO.

Los diámetros de las zonas de crecimiento y la formación de ácido, como se determina por el

cambio de color de bromocresol de verde a amarillo, se midieron después de 24 h de

incubación. Las cepas que muestran un alto crecimiento y la formación de ácido se eligieron

para una segunda evaluación de la producción de ácido L-láctico en medio líquido a 40oDO.

2.3. Identificación de cepas termotolerantes Rhizopus productoras de ácido L-láctico

PCR de amplificación y secuenciación de ADN de la región ITS de los aislados

seleccionados también se realizó de acuerdo a White et al. [20]. La mezcla de reacción PCR (50 l)

contenía: 1- 20 ng de ADN total, el 10? M de cada cebador, 0,5 Taq ADN polimerasa l, 2,5 mM

cada uno de dATP, dGTP, dCTP y dTTP, MgCl 2 mM2Y 10 x tampón de PCR en agua

desionizada. La reacción de PCR se llevó a cabo en un termociclador (modelo TC9610; Labnet

Internacional, Edison, NJ) en las siguientes condiciones: desnaturalización inicial a 95 oC durante 2

min, 30 ciclos de desnaturalización a 95oC durante 1 min, hibridación a 55oC durante 1 min y

extensión a 72oC durante 2 min, y elongación de la cadena a 72oC durante 10 min. Las secuencias

se compararon dos a dos por la búsqueda BLASTN

6
programa [21], y montados y alineados utilizando MEGA7 (Molecular Evolutionary Análisis

Genética versión 7.0) [22]. Un árbol filogenético fue construido usando el programa

proporcionado en el paquete de software MEGA7. análisis Bootstrap de los niveles de

confianza de los clados se llevó a cabo con 1000 repeticiones [23].

2.4. La selección de la más alta productora de ácido termotolerantes L-láctico cepa

Rhizopus

Para el cribado secundario, el medio de fermentación modificado a partir de

Praneetratananon et al.

[24] se utilizó, y constaba de 100 g / L licuado almidón de mandioca, 3,2 g / L (NH4)2ASI QUE4,

0,3 g / L KH2correos4, 0,75 g / L MgSO4· 7H2O y 0,04 g / L ZnSO4· 7H2O. El medio se sometió

a autoclave a 121 ° C durante 15 min. Cada 250 ml de matraces de agitación que contenían 50 ml

de medio estéril se inoculó con 1 ml de una suspensión de esporas (107 esporas / ml) y se

incubaron en un agitador rotatorio agitó a

200 rpm. muestras de caldo recogidos a las 72 h fueron analizados para el ácido láctico y la

cepa DMKU 33 con la producción de ácido láctico más alta se seleccionó para un estudio

adicional.

2.5. Caracterización de la cepa Rhizopus DMKU 33

La cepa de Rhizopus DMKU 33 se cultivó en agar de malta utilizando el método de

cultivo de diapositivas

[19] a 35oC durante 2 días para investigar sus características morfológicas. La longitud de

la esporangióforo, tamaño de esporangio y esporangiosporas, y la disposición rhizoid eran

medido y fotografiado con un microscopio óptico (Eclipse Ci-L; Nikon, Tokio, Japón). El pH

de crecimiento se investigó entre 1 y 7 en caldo de dextrosa de patata, y se evaluó la

temperatura de crecimiento entre 30 ° C y 55 ° C en PDA placas. El efecto de la temperatura

sobre la producción de ácido láctico a partir de almidón de yuca licuado se investigó a los 33,

35, 40, 43 y 45
o
C en 250 ml de matraces agitados que contienen cada uno 50 ml de medio de fermentación, se

inoculó con 107 esporas, y se incubaron en un agitador rotatorio a 200 rpm.

La capacidad de DMKU 33 para asimilar y producir ácido láctico a partir de diversas

fuentes de carbono también se investigó en el medio optimizada que contiene 5 g / L (NH4)2ASI

QUE4, 0,6 g / L KH2correos4, 0,3 g / L MgSO4· 7H2O, 0,04 g / L ZnSO4· 7H2O, y ~ 100 g / L

de una fuente de carbono. Cada matraz que contenía 50 ml de los medios de comunicación se

inoculó con 1 ml de suspensión de esporas (107 esporas / ml) y se incubaron a 40 oC durante 3

días en un agitador rotatorio se agitó a 200 rpm. Durante la fermentación, 2 g de CaCO estéril3

Se añadió polvo (2 g) para neutralizar el ácido láctico producido en cada matraz a 24 h.

2.6. Optimización de sales minerales para la producción de ácido L-láctico a partir de almidón
de yuca licuado

Las concentraciones de sales minerales en el medio de fermentación se optimizaron para

la producción de ácido láctico a partir de almidón de yuca licuado a 40 oC en matraces de

agitación. La optimización se realizó un factor a la vez, en el orden siguiente: (NH4)2ASI QUE4,

KH2correos4, MgSO4· 7H2O, y ZnSO4· 7H2O. Cada matraz que contenía 50 ml de los medios de

comunicación se inoculó con 1 ml de suspensión de esporas (107 esporas / ml) y se incubaron a

40 oC durante 3 días en un agitador rotatorio se agitó a 200 rpm. Para evitar la caída del pH

dramático debido a la producción de ácido láctico, 2 g de CaCO estéril3 Se añadió polvo a cada

matraz a las 24 h.

2.7. la producción de ácido L-láctico a partir de almidón de yuca licuado en un biorreactor

de tanque agitado

la producción de ácido láctico a partir de almidón de yuca licuado por DMKU 33 se estudió

en un biorreactor de 5-L-tanque agitado (Biostat B; Sartorius, Göttingen, Alemania) que contenía 2,5

L del medio optimizado en 40oC con pH controlado por la adición de 10% (w / v) de solución de
NaOH. El biorreactor se aireó a 0,75 vvm y se agitó a 200 rpm. cinética de carga de fermentación se

estudiaron primero con ~ 100 g / L licuado almidón de yuca a pH 5, 5,5, 6, y 7, respectivamente,

para evaluar el efecto del pH. A continuación, el efecto de la concentración de almidón en la

fermentación se estudió a pH 5,5 con una mayor concentración de almidón de ~ 150 g / L, que fue

hecho por cualquiera de la adición de todo

almidón
de
yadicional,
L.48
El h,
láctico
min, en
alimentación
concentraciones
medio, caldo
las el
seguidos
a de inicio
llevarde
con
yrespectivamente,
etanol.
muestrascultivocomo
discontinua.
laalmidón
lafue eniniciales
adición
cantidad
Después la
Dos
cuando fermentación
elfermentaciones
de
total
tomada
de retirar
fueron-almacenaron 500
la de
de
cada ml
12~ de
h100
almidón
almidón
biomasaenpor
medio
gaella
para lotes
/el
caldo
celular
congeladas ode
fed-batch
análisis°en dos
se
Laconcentración
fresco
y-20
~por
130 que
del veces
g /llevaron
contiene
L, como
inicial
fermentación
almidón
centrifugación
C hasta su de
fue en
aalmidón
cabo
respectivamente,
~de
150
residual,
a 16.800
análisis. lade
con gfermentación
menosdiferentes
/en
yuca
2adurante
l,de
glucosa,
rpm Llicuado
las
70de36
g / 5h
ácido
2.8. métodos analíticos

Glucosa, ácido láctico y etanol presente en las muestras se determinó utilizando una

cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC) sistema (Shimadzu Scientific Instruments,

Columbia, MD, EE.UU.) equipado con un detector de índice de refracción (RID-10A) y un Bio-

Rad HPX columna orgánica -87H análisis de ácidos (Richmond, CA, EE.UU.) a 45 ° C. La fase

móvil fue 0,005 MH2ASI QUE4en 0,6 mL / min. La pureza óptica del ácido láctico se determinó

por HPLC con un detector espectrofotométrico (Shimadzu SPD-20A, Japón) a longitud de onda

de 230 nm. La separación se realizó en una columna Shodex ORpak CRX-853 en 50oC

utilizando CuSO 2 mM4como la solución de fase móvil a un caudal de 1,0 ml / concentración

min.El de almidón (como el azúcar reductor total) se determinó utilizando el método de fenol-

ácido sulfúrico [25]. El peso seco del micelio en el caldo de fermentación se determinó pesando

la biomasa micelial después de lavar con HCl 6 M y secado a 100oC durante la noche. El

rendimiento de ácido láctico y la productividad se calcularon basándose en la concentración

final de ácido láctico, azúcar reductor total consumida, y el tiempo de fermentación.

9
3. Resultados y discusión

3.1. La detección y la identificación de termotolerantes Rhizopus spp.

Entre las 17 cepas de Rhizopus ensayados, 10 cepas mostraron un alto crecimiento y

ácido

producción (basado en los diámetros de la colonia y zona amarilla en placas de agar) de licuado

almidón de yuca en 40oC (véase la Tabla S1). Entre ellos, DMKU 33 produce la mayor cantidad
de

ácido láctico en medio de almidón de yuca licuado a 40oC (Tabla 1). DMKU 33 y otros tres

cepas (DMKU 1, DMKU 5, y DMKU 17) también fueron capaces de crecer en almidón de yuca.
Residencia en

las regiones ITS del operón ribosómico, se construyó un árbol filogenético para estas 10 cepas

y se muestra en la Fig. 1. DMKU 33 fue identificado como R. microsporus mientras que todos
los otros 9 cepas

eran R. oryzae. Entre ellos, sólo DMKU 34 estaba estrechamente relacionada con R. oryzae
IFO4716

(AB097300), una cepa productora de ácido láctico, mientras que los otros 8 cepas (DMKU 1,
DMKU 5,

DMKU 6, DMKU 7, DMKU 17, DMKU 20, DMKU 29 y DMKU 35) estaban estrechamente
relacionados con

R. oryzae CBS 406.51 (AB181330), una cepa productora de ácido fumárico. En general, R. oryzae
puede ser

divididos en dos grupos basados en el ácido orgánico primario producido cuando se cultivan en
glucosa

[26]. Un grupo produce principalmente L - (+) - ácido láctico, mientras que el ácido fumárico y

ácido L - (+) - ácido málico son los principales productos del otro grupo. El ITS secuencia de la

región de ADN del ARN que codifica ribosomal podría ser utilizado para clasificar Rhizopus

oryzae en relación con la producción de ácido orgánico [27]. Sin embargo, nuestros resultados

mostraron pobre correlación entre la SU clasificación secuencia y cepas de producción de ácido

fumárico (véase la Tabla 1 y Fig. 1). R. microsporus DMKU 33, el más alto
cepa productora de ácido láctico, estaba estrechamente relacionada con R. microsporus var.

oligosporus (AY803941). No hay diferencia genética entre diversas cepas de R. microsporus pudo

detectarse utilizando diversos marcadores de ADN conocidos [28-30]. En este estudio, R.

microsporus mostraron un gran ácido-productor láctico de R. oryzae cepas debido a que la detección

se realizó a 40oC, que era el crecimiento preferencia

10
temperatura para R. microsporus [31], como puede verse a partir de la producción de biomasa

(Tabla 1). Por lo tanto, R. microsporus producen ácido láctico mayor que R. oryzae a 40oC.

Kitpreechavanich et al. [19] también informaron que R. microsporus TISTR 3518 produjeron

más alto de ácido L-láctico a partir de almidón a temperaturas más altas que R. oryzae TISTR

3523.

3.2 Caracterización de R. microsporus DMKU 33

R. microsporus DMKU 33 se cultivó en una placa de agar PDA. La colonia cubría la

superficie de agar con un crecimiento denso algodonosa que inicialmente era blanco y luego se

volvió a gris marrón sobre una incubación adicional. La caracterización morfológica de DMKU

33 bajo un microscopio óptico mostró rhizoid con una longitud media de 64,58 ± 4,23 m. Los

diámetros medios de esporangióforos, esporangios y esporangiosporas fueron 366,94 ± 8,35! M,

110 ± 2,10 m, y

4.17 ± 0.53 m, respectivamente. Los sporangiospores eran lisas para estriado ligeramente, y

casi redonda para alargadas ligeramente. Estas características morfológicas fueron

consistentes con otros miembros del grupo microsporus [32-33].

R. microsporus DMKU 33 cultivaron en PDB exhibió crecimiento a un pH de 2-7, pero

no a pH 1. Claramente, DMKU 33 es una cepa de ácido tolerantes con la capacidad de crecer

bien a pH 5,5 o por debajo, lo que favorecería la producción de ácido láctico en la forma no

disociada deseable para su separación mediante extracción con disolvente [2]. DMKU 33

creció en PDA a temperaturas que van desde 30 ° C a 50 ° C, pero no se observó crecimiento

en 55oC. Este resultado fue consistente con un estudio previo que muestra que R. microsporus

exhibió crecimiento máximo a 45 ° C [33]. La Fig. 2 muestra el efecto de la temperatura en el

intervalo de 33-45oC en la producción de ácido láctico a partir de 100 g / L licuado almidón de

yuca en matraces de agitación. Excepto para 45oC, buena ácido láctico se obtuvieron (46,3 a
56,1 g / L) y la producción de biomasa (8,17 a 9,53 g / L) en 96 h con la producción máxima a

40oC (Fig.

11
2). Una gran cantidad de etanol (10-15 g / L) se produjo también en estas fermentaciones. Sin
embargo, la baja utilización de azúcar inferior a 20 g / L y la mala producción de ácido láctico

de solamente 4,1 g / L se obtuvieron a la temperatura superior de 45oC. Se hace notar que se

observaron grandes cantidades de micelios bien dispersadas en 40oC, mientras que un menor

número de micelio en 43 y 45oC y los grupos grandes en 33 y 35oC estaban presentes en estas

fermentaciones en matraz agitado. Por lo tanto, 40oC se determinó como la temperatura óptima

para la producción de ácido láctico a partir de almidón por R. microsporus DMKU 33.

El análisis de la asimilación de carbono es útil para la caracterización adicional de

Rhizopus spp. [19]. Dieciséis fuentes de carbono diferentes se ensayaron para R. microsporus

DMKU 33 y los resultados se muestran en la Tabla 2. La glucosa y la fructosa dieron el mejor

crecimiento en 12.3 g / L y 14,5 g / L de biomasa en 48 h mientras la lactosa, rafinosa y la

celulosa podría no ser utilizado. Como era de esperar, glucosa y fructosa también dieron la

producción de ácido láctico más alta de más de 100 g / L en 48 h por R. microsporus DMKU 33

se cultivaron en matraces de agitación. Entre los sustratos de almidón de bajo coste analizadas,

el almidón de yuca licuado también dio una producción de ácido láctico alta de 81 g / L con

11,7 g / L de biomasa en 72 h. Además, el 100% de pureza óptica de ácido L-láctico se obtuvo

de R. microsporus DMKU 33 desde que se detectó ácido solamente L-láctico a partir de la

columna de HPLC (Shodex

ORpak CRX-853)que puede ser distinguir la D y la forma L [34]. R. microsporus DMKU 33

se selecciona de este modo para la producción de ácido láctico en un proceso de SSF.

3.3. Optimización de sales minerales para la producción de ácido láctico a partir de

almidón de yuca licuado

Para optimizar las concentraciones de diversas sales minerales, incluyendo (NH4)2ASI

QUE4, KH2correos4, ZnSO4· 7H2O y MgSO4· 7H2O, en el medio de fermentación, sus efectos

en la producción de ácido láctico a partir de 100 g / L licuado almidón de yuca como sustrato
fueron estudiados en matraces de agitación y los resultados se resumen en la Tabla 3.

(NH4)2ASI QUE4se estudió primero, ya que proporcionan la fuente de nitrógeno requerido

para la germinación de esporas, crecimiento micelial, y el mantenimiento de células [35].

(NUEVA HAMPSHIRE4)2ASI QUE4

12
También se informó como la mejor fuente de nitrógeno para la producción de ácido láctico por

Rhizopus sp. [36]. En general, el aumento de su concentración de hasta 5 g / L también se

incrementó la biomasa celular y la producción de ácido láctico. Sin embargo, aumentando aún

más su concentración a 6 g / L no aumentar la producción de ácido láctico, aunque la biomasa

celular se incrementó aún más. En general, una relación más baja de C / N dio un mayor

crecimiento celular y las tasas de fermentación [10], pero el rendimiento de ácido láctico a

partir de azúcar consumido se reduciría cuando había demasiado fuente de nitrógeno presente

en el medio [37].

KH2correos4 contiene fosfato requerido para la generación de ATP, la biosíntesis de

ácido nucleico, y

de esporas fúngicas germinación [38], y sus efectos sobre el crecimiento celular y la producción
de ácido láctico eran

estudiado en el medio con el optimizado (NH4)2ASI QUE4concentración de 5 g / L. Como era de

esperar, la mala

el crecimiento celular y poco utilización de azúcar y la producción de ácido láctico se observaron

en el medio

sin KH2correos4. La biomasa más alta (12,3 g / l) y producción de ácido láctico (86,5 g / L) eran

obtenido en 0.6 g / L KH2correos4, Que era coherente con un informe anterior de que el aumento
de la

KH2correos4 concentración de 0,1 a 0,6 g / L dio lugar a la producción de ácido láctico más alta
de 85 g / L (vs.

71 g / L) [39]. Sin embargo, aumentando aún más KH2correos4 a 0,9 g / L disminuyó tanto la
biomasa y láctico

la producción de ácido.

Los efectos de ZnSO4· 7H2O y MgSO4· 7H2O fueron estudiados en medios con
optimizado

(NUEVA HAMPSHIRE4)2ASI QUE4 y KH2correos4concentraciones (5 g / L y 0,6 g / L,

respectivamente). Las adiciones de Zn++

y Mg++ tuvo un efecto mínimo sobre el crecimiento celular pero eran beneficiosos para la
producción de ácido láctico, con
la máxima producción de ácido láctico obtenido a 0,30 g / L MgSO4· 7H2O y 0,04 g / L

ZnSO4· 7H2O. Zhang et al. [36] informó de que MgSO4 fue requerido para la producción de
ácido láctico por

Rhizopus. Sin embargo, aumentar MgSO4· 7H2O en el intervalo de 0,45 hasta 0,90 g / L tuvo un
efecto negativo

en la producción de ácido láctico (datos no mostrados). El medio optimizado último dio la más
alta láctico

la producción de ácido de 91,93 ± 1,51 g / L de 100 g / L licuado almidón de yuca.

13
 El contenido de sal mineral también afectaron a la morfología de los micelios de hongos

cultivados en matraces de agitación. En general, se observaron micelios bien dispersos en

medios que contienen cantidades apropiadas de sales minerales. Sin embargo, cantidades

excesivas de (NH4)2ASI QUE4 (6 g / L), KH2correos4 (0,9 g / L), y ZnSO4· 7H2O (0,06 g / L) dio

como resultado grandes acumulaciones de micelio, que eran desfavorable para la producción de

ácido láctico debido a la masa limitada (oxígeno) de transferencia [15].

3.4. biorreactor de producción de ácido láctico a partir de almidón de yuca licuado en un 5-

L agitó-tank

El proceso SSF para la producción de ácido L-láctico a partir de almidón de yuca

licuado tratado con α-amilasa por R. microsporus DMKU 33 se amplió a partir de matraces de

agitación a una 5-L biorreactor de tanque agitado. El proceso se ha optimizado en el pH y el

almidón de concentración, y los resultados se discuten a continuación.

3.4.1. Efectos de pH

Los efectos de pH en el intervalo de 5,0-7,0 se estudiaron en la fermentación por lotes

con una concentración de almidón inicial de ~ 100 g / L. Como puede verse en la Fig. 3, hubo

poca producción de ácido láctico en las primeras 24 h, que era el período en que la germinación

de esporas, crecimiento celular, y la sacarificación de almidón por glucoamilasa segregada

ocurrieron. En, buen crecimiento de las células en general en forma de pequeños gránulos de

1,44 ± 0,35 mm y una buena producción de ácido láctico de 83,1 a 84,3 g / L con un rendimiento

total de 0,84 g / g de azúcar total consumida y la productividad de 1.15 a 1.17 g / L / h se

obtuvieron en fermentaciones a pH 5,0-6,0 (Tabla 4). Aunque el pH en el intervalo de 5,0-6,0 no

afectó significativamente la producción de ácido láctico, la producción de etanol se redujo de

16,5 g / L a pH 5,0 hasta 9,4 g / L a pH 6,0.

Una producción significativamente menor de ácido láctico de 54,8 ± 0,66 g / L

(rendimiento: 0,78 g / g,
productividad: 0,76 g / L / h) junto con algunos grumos grandes miceliales mullidas unidos a la
agitación

14
se observaron eje y pH sonda a pH 7. La morfología grupo mullido causó problemas en la

mezcla y la transferencia de masa obstaculizada en el biorreactor de tanque agitado, resultando

en la producción de ácido láctico bajo [37]. La fermentación a pH 7 también puede estar limitada

por la sacarificación de almidón, como se indica por los niveles de glucosa bajos de 0,43 g / L a

las 12 h y 1,83 g / L a las 24 h, probablemente porque glucoamilasa tenía la actividad óptima a

pH 4.5 a 5.5 [ 40-41]. Además, la fermentación de ácido láctico a pH 7 mostró mayor biomasa

final que los obtenidos de 5,0-6,0 pH (Tabla 4). Sin embargo, un pH por debajo de 5,0 inhibiría

el crecimiento celular y las reacciones bioquímicas que participan en la producción de ácido

láctico [42]. Claramente, un pH entre 5,0 y 6,0 sería más favorable para la fermentación, que era

consistente con el intervalo de pH óptimo reportado para R. oryzae y R. arrhizus [7,43].

3.4.2. Efectos de la concentración de almidón

Es deseable producir ácido láctico a una concentración superior para facilitar su

recuperación en el procesamiento aguas abajo. Un rendimiento de ácido láctico total más alta

podría obtenerse mediante la extensión de la fermentación por lotes con sustratos adicionales ya

que el consumo de sustrato inicial era principalmente para el crecimiento celular con poca

producción de ácido láctico, mientras que el rendimiento de ácido láctico después de la primera

24 h fue mucho mayor en ~ 0,93 g / g (vs. el rendimiento total de 0,84 g / g). Por lo tanto, la

fermentación con una mayor cantidad de licuado de almidón de yuca (concentración total: ~ 150

g / L) se estudió en los modos de lote y lote alimentado a pH 5,5 (Fig. 4). Con la concentración

de almidón inicial de 153,4 g / L, ácido láctico / L 91,8 g fue producida en 72 h (Fig. 4A), con

una productividad de 1,28 g / L / h y el rendimiento de 0,76 g / g (véase la Tabla 4) , que era aún

más bajo que el rendimiento de 0. 84 g / g obtenido en la fermentación con ~ 100 g / L licuado

almidón de yuca. El rendimiento de ácido láctico inferior podría ser debido a la alta

concentración de sustrato inicial, que podría causar inhibición de sustrato como

15
reportado para las bacterias del ácido láctico [44]. fermentación Fed-batch De este modo se

utiliza a menudo para aliviar la inhibición de sustrato mediante el mantenimiento de la

concentración de sustrato por debajo de su nivel de inhibición. la fermentación de alimentación

discontinua con una 102.7 g / L licuado almidón de yuca inicial y 41.4 g / L adición a las 36 h

produjo ácido láctico 105,3 g / L en 84 h y 118,8 g / L en 108 h (Fig. 4B), con un total

productividad de 1,25 g / L / h y el rendimiento de 0,93 g / g. la fermentación de alimentación

discontinua con una 131.3 g / L licuado almidón de yuca inicial y la adición de 26,1 g / L a las

48 h dio producción de ácido láctico comparable (104,2 g / L en 84 h y 116,2 g / L en 96 h, la

productividad: 1,25 g / L / h, rendimiento:. 0,90 g / g) (Fig 4C). Claramente, la fermentación

discontinuo alimentado dio una significativamente mayorácido láctico rendimiento en

comparación con la fermentación por lotes con la misma cantidad total de sustrato.

La concentración de almidón inicial más alto de ~ 150 g / L usado en fermentación

discontinua podría haber reducido la transferencia de oxígeno y el nivel de oxígeno disuelto

(OD) debido al aumento de la viscosidad de caldo. Un nivel bajo o sub-óptimo DO podría

reducir la producción de ácido láctico y rendimiento como se ha informado de que un alto hacer

era necesario nivel de la tensión de oxígeno de 70-90% para el rendimiento de ácido láctico de

alto y la productividad [37]. También se informó de productividad de ácido láctico y el

rendimiento que se correlaciona con la tasa de transferencia de oxígeno (OTR) y en general

coeficiente de transferencia de masa kLunaen un biorreactor de transporte aéreo [45], en el que

una concentración de almidón inicial de 120 g / L dio la más alta producción de ácido láctico

(rendimiento: 0,87 g / g; productividad: 2,51 g / L / h) por Rhizopus sp. MK-96-1196 en la

fermentación por lotes. rendimiento de ácido láctico disminuyó 12% a 0,77 g / g y la

productividad disminuyó 21% a 1,98 g / L / h cuando la concentración inicial de almidón

aumentó a 150 g / L, lo que provocó una reducción de OTR debido a la reducción kLuna. Sin

embargo, en nuestro estudio con ~ 150 g / sustrato total L, tanto por lotes y lotes alimentados
fermentaciones dieron una productividad similar de 1.24 a 1.28 g / L / h, que era más alto que el

(1,17 g / L / h) obtenida en el fermentación por lotes con 113 g / L de almidón aunque la biomasa

sedimento final de lote y lote alimentado fermentaciones mostró casi la concentración. (Véase la

Tabla 4)

dieciséis
3.5 Comparación con otros estudios

Se ha informado de que el termotolerantes R. microsporus TISTR 3518 produjo más

glucoamilasa con estabilidad térmica más alta que la TISTR mesófila 3523 a 40 ° C [19,46].

Peixoto et al. [47] informó de un alto nivel de amilasa termoestable de termotolerantes R.

microsporus, que era ventajoso utilizar en la sacarificación de almidón. Uso de la

termotolerantes DMKU 33 para la producción de ácido láctico a partir de almidón a 40oC ofrece

varias ventajas sobre las cepas de Rhizopus mesófilas. En comparación con 30 o 35oC, SSF a 40

° C dio una mayor eficiencia en la sacarificación de almidón, lo que podría limitar la

fermentación y el ácido láctico de producción [19]. A la temperatura más alta, la mayor

solubilidad del almidón y de menor viscosidad de la solución también condujo a un aumento de

la conversión de sustrato a ácido láctico. R. microsporus con altas actividades de amilasa

también podría ahorrar costes al eliminar la necesidad de añadir glucoamilasa o una cepa

amilolítica suelen ser necesarios cuando un LAB se utiliza en el proceso de SSF [48].

Tabla 5 compara la producción de ácido láctico a partir de materiales ricos en almidón

por diversas cepas de Rhizopus. El termotolerantes R. microsporus DMKU 33 dio un

rendimiento de ácido láctico de alta de 0,93 g / g de almidón de yuca licuado a 40oC, que fue

superior a los reportados para Rhizopus (0,67-0,90 g / g) y comparable a la que se obtiene

generalmente a partir de glucosa con bacterias de ácido láctico (0,85-0,95 g / g de glucosa) [8].

Una concentración de ácido láctico final de alta de ~ 120 g / L también se obtuvo con DMKU

33 en la fermentación de alimentación discontinua. A la producción de ácido láctico mucho

mayor de 145 g / l en la fermentación por lotes y 231 g / L en la fermentación discontinuo

alimentado se obtuvieron a partir de glucosa con R. oryzae NRRL 395 inmovilizado en cubos

similares a esponjas de espuma de poliuretano., En la que el lactato de calcio fue producido y

formó cristales (precipitados) que alivian la inhibición del ácido láctico y por lo tanto una

mayor producción de ácido láctico [49]. Cabe señalar que la inmovilización de células para
controlar la morfología de hongos también se puede mejorar la mezcla, transferencia de masa,

y por lo tanto la productividad de la

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la fermentación de hongos aeróbicos, logrando una alta productividad de 2,5 g / L / h [37]. La productividad de 1,25 g / L / h obtenida con

sedimentos celulares DMKU 33 podría mejorarse aún más mediante el aumento de la densidad celular a través de reciclaje celular o

inmovilización [1].

4. Conclusiones

El termotolerantes R. microsporus DMKU 33 pueden producir ácido L-láctico a partir de almidón de yuca licuado tratado con α-amilasa

a 40 oC con un alto rendimiento de 0,90 hasta 0,93 g / g de almidón, la productividad de 1,25 g / L / h, y título final de 105,3 a 118,8 g / L en un

proceso de SSF, que ofrece una forma prometedora para la producción de ácido láctico. La fermentación fúngica con las ventajas de utilizar

sustratos de bajo coste con almidón sin la adición de la glucoamilasa y la producción de ácido ópticamente puro L-láctico debe ser capaz de

proceso de fermentación industrial alternativo para la producción de ácido láctico.

nosotros cepas identificadas por ITS secuenciación región y su capacidad de producir los ácidos láctico y fumárico de licuado