EXTRACION DE ADN

Estudiantes de pregrado de la facultad de ingeniería agronómica de la catedra de genética

molecular. Grupo 1. Juan C. Arévalo, Yaciris R. Perez, Andrés F. Chacón, Leoncio J.
Gómez.
Universidad del Magdalena, Facultad De Ingeniería, Programa De Ingeniería
Agronómica. Santa Marta (Magdalena- Colombia).
Correo electrónico de contacto: juanraevalo0012@gmail.com, yacirisperez@gmail.com,
andriwraptor@gmail.com, Leonciogomez18@gmail.com
RESUMEN FALTA

INTRODUCCION
La célula es la base funcional y estructural de la vida pues todo ser vivo se compone, como
mínimo, de la célula. Dicho de otra forma, la célula es la unidad vital mínima. Dado que
ninguno de sus componentes individuales posee vida ni puede existir independientemente.
La célula vegetal posee numerosas características que permiten diferenciarlas
perfectamente de las células de otros seres vivos como una pared celular compuesta
mayormente de celulosa y organelos especializados.
Los ácidos nucleicos son polímeros de nucleótidos unidos por enlaces fosfodiéster. Por su
composición química, se han clasificado en dos tipos: ácido desoxirribonucleico (DNA) y
ácido ribonucleico (RNA). Los nucleótidos que forman al DNA están constituidos por el
azúcar 2′-desoxirribosa unido mediante enlace éster a ácido fosfórico y mediante enlace N-
glucosídico a una de las cuatro bases nitrogenadas (adenina, guanina, timina o citosina).
Los nucleótidos del DNA forman una hélice constituida por dos hebras antiparalelas que se
mantienen unidas mediante puentes de hidrógeno. Para empaquetarse, el DNA se une a
nucleoproteínas, denominadas histonas; y cuando se quieren separar estos componentes, se
aplica tratamiento con ácidos o con concentraciones altas de sales.
Los nucleótidos del RNA se encuentran formados por el azúcar ribosa, unida mediante enlace
glucosídico a una de cuatro bases nitrogenadas (adenina, guanina, uracilo o citocina),
formando moléculas de una sola cadena. (GAMBOA- GAITAN 2016)
Esta guia tiene como objeto:
 • Efectuar la técnica de separación de ADN de las fresas, para observar cada uno de los pasos
y documentarlos.
• Mostrar la presencia de ADN (indirectamente) en las fresas, a partir de una técnica de
separación común.
• Comprender que está técnica es solo el inicio de otras que se aplican en el ámbito científico
para resolver problemas relacionado al ADN, genética y mejoramiento.
MATERIALES Y METODOS
En este laboratorio #2 de genética molecular se utilizaron 4 tubos de ensayo, 1 agitador de
vidrio, 1 gradilla, 2 beaker de 250 ml, 2 Erlenmeyer de 100 ml, 1 Escobillón, 1 mortero,
1 colador pequeño, 1 embudo, 5 gr de Cloruro de sodio (sal), 125 ml de agua, -30 ml de
isopropanol (helado -4ºC), 30 ml de Etanol (helado -4ºC, 125 gr de fresas, 1 banano maduro,
20 ml de detergente líquido para traste. De los cuales se les hablara más adelante.
1. Se Retiraron las hojas verdes en la fresa, posteriormente se maceraron las fresas
durante 10 minutos en un mortero, comenzando a romperse las células y liberando el
ADN. en un Erlenmeyer se mezcló el líquido para la extracción de ADN, con 10 ml
de detergente, 5g de sal y 125 ml de agua. Se Agrego 30ml de líquido de extracción
de ADN con la fresa. Produciendo el rompimiento de las células Se Macero y mezclo
suavemente durante un minuto Evitando hacer demasiadas Burbujas, se Colocó el
colador sobre un embudo y se coló. Luego Se Virtio el líquido de fresa en el tubo de
ensayo, vertiendo una cantidad de etanol o isopropanol que el líquido de fresa,
realizando movimiento de un lado al otro la mezcla, El ADN se aislará del resto del
material contenido en las células de la fresa. se trituro o macero un pedazo de piña
del cual se extrajo su jugo y Con una pipeta Pasteur cogimos 1ml de zumo de piña y
lo añadimos a 5ml del extracto en un tubo de ensayo. Dejamos que actue el zumo en
la solución de 2 o 3’., se observa el desarrollo de una sustancia blanca turbia (ADN)
en la parte superior, por encima de la capa de extracto de fresas. Se Inclino el
recipiente y recogió el ADN utilizando un agitador.
2. Con el banano se hizo lo mismo, se tomo medio banano, se procedió a triturarlos.
Después aplastamos todos los trozos para formar una pasta más o menos homogénea
y se le agrego 30 ml de la mezcla de lisis, macerándolo durante 3 minuto, se coló y
se envaso en un tubo de ensayo, se procedió a agregarle vertiendo una cantidad de
etanol o isopropanol que el líquido de banano. Con una pipeta Pasteur cogemos 1ml
de zumo de piña y lo añadimos a 5ml del extracto en un tubo de ensayo. Dejamos que
actúe el zumo en la solución de 2 o 3’observando el desarrollo de una sustancia blanca
turbia (ADN) en la parte superior, por encima de la capa de extracto de banano.
3. Se tomo otra muestra con tomate realizando de igual manera los pasos anteriores.
RESULTADOS Y DISCUCION

A los pocos minutos de agregar el zumo de la piña fuimos capaces de observar

capaces de observar tres capas bien diferenciadas. Encima de todo estará el alcohol,
debajo de todo estarán los restos celulares (membranas, orgánulos) del plátano y de
igual manera de la fresa y los otros componentes de la solución y, en la interfase
observamos una especie de hilos blancos rodeados de burbujas. que era el ADN. En
el tubo de ensayo donde estaba el dl tomate se podía observar más claramente esta
membrana gruesa y blanca.
Lo que observamos en el laboratorio no es únicamente DNA sino una mezcla de
ácidos nucleicos (RNA y DNA). El producto filamentoso obtenido de la extracción
no es ADN puro ya que, entremezclado con él, hay fragmentos de ARN, como había
comentado anteriormente. El ADN se precipita en el alcohol fuera de la solución,
donde puede ser visto. Además de permitirnos ver el ADN, el alcohol separa el ADN
de otros componentes celulares, los cuales son dejados en la solución acuosa. El
proceso de extracción de ADN desde una célula es el primer paso para muchos
procedimientos (protocolos) de los laboratorios de biotecnología. Los científicos
deben ser capaces de separar suavemente el ADN de sustancias no deseadas que se
encuentran en las células, evitando que el ADN se desnatara (que se rompa). El
material que se necesita para ello es fácil de encontrar y el procedimiento es sencillo.
Cada uno de los ingredientes tiene su propia función. La solución de sal y jabón sirve
para romper la membrana plasmática y nuclear e incluso la pared celular. El líquido
de lentillas elimina las proteínas que degradan el ADN. El alcohol etílico sirve para
precipitar el ADN. El ADN constituye el material hereditario de un individuo. En él
están escritas las instrucciones que deben seguir las células para construir un
organismo y mantenerlo vivo. Todas las células que forman un individuo contienen
una copia idéntica de ADN. El DNA se encuentra en el interior del núcleo de las
células eucariotas rodeado de proteínas (histonas) que lo mantienen unido y
compactado. Para poder aislarlo y observarlo se deben deshacer la membrana
plasmática y la envoltura nuclear y también se precisa la desnaturalización de las
proteínas. Por esas razones se maceraron tanto el banano, la fresa y el tomate. Además
de los procedimientos anteriormente explicados se utiliza el detergente para romper
las capas de los lípidos
Trituración del plátano, las fresas y el tomate: Incrementar el área superficial del
plátano, fresas, y tomate ayuda a hacer la superficie de la membrana más fácil de
disolver y también permite una absorción más efectiva del calor y de las soluciones
que se añadirán.
Detergente: Las membranas de las células están formadas por dos capas de lípidos
con proteínas transmembrana a través de estas. El detergente ayuda a romper la bicapa
de fosfolípidos de las membranas plasmáticas y la envoltura nuclear. Los lípidos
de la membrana se descomponen debido al detergente que deshace las uniones que
mantienen la membrana junta. Cuando el detergente se pone en contacto con los
lípidos éstos se separan de la membrana rompiéndola. La estructura de los lípidos es
similar a la del detergente y eso hace que se combinen, formando una burbuja de
detergente y lípidos
Filtración: Este paso permite separar los restos de los tejidos del plátano y de las
células que hemos roto en los pasos anteriores. Ese maerial no nos interesa y quedará
retenido en el colador (los restos más grandes) o en el filtro (restos más pequeños).
El líquido filtrado que conseguimos es el que contiene el DNA libre de la membrana
nuclear.
Zumo de piña: Las moléculas de DNA están rodeadas de proteínas del tipo
histonas, y para obtener un extracto más puro de DNA es necesario eliminarlas. Para
ello hay que utilizar enzimas proteolíticos. El zumo de piña contiene bromelaína, una
enzima capaz de hidrolizar las proteínas y por tanto capaz de separar el DNA de las
histonas. Este proceso ayuda a que el DNA se desempaquete y es más fácil su
extracción.
Alcohol congelado: El DNA es una molécula polar, pero la reacción con el etanol a
muy baja temperatura hace que se vuelva apolar e insoluble en el etanol formándose
un precipitado justo entre la capa con etanol líquido y la capa con el extracto. El DNA
es el único componente de la solución que no es soluble en el etanol, y se hace visible
porque las diferentes cadenas se van aglutinando entre sí al precipitar debido a la
acción de fuerzas físicas. El alcohol es menos denso que el agua del extracto y por
eso flota sobre la capa del extracto.
Sal en la solución de extracción: La molécula de DNA es soluble en agua y por
tanto invisible, pero si se pone en contacto DNA que haya estado en un medio salado
y alcohol frío el DNA se vuelve insoluble y precipita. Por lo tanto, el agua salada
ayuda a la precipitación en el alcohol. La sal también ayuda a separar el DNA de las

Los resultados fueron satisfactorios debido a que se pudo observar a las hebras de
ADN suspendidas en la muestra, esto a causa que la ruptura de la membrana celular
fue exitosa gracias a la acción de la sal, y que al mezclar con el detergente y el etanol,
y el extracto de piña, se separó al ADN de los demás componentes celulares, como
lípidos y proteínas; finalmente el ADN se observó en la parte superior del tubo.

(FALTA)
Preguntas de actividad complementaria
1. ¿Por qué se deben usar cambios en los protocolos para extraer ADN en diferentes
organismos?
2. Consulte otras técnicas de extracción de ADN y explique el fundamento de
extracción,
especificando el uso de los reactivos claves
 4. ¿Qué conclusiones saca al comparar las diferentes técnicas de extracción de ADN?
histonas.

BIBLIOGRAFIA falta
LUQUE J &HERNANDEZ A, texto ilustrado de biología molecular e ingeniería genética,
conceptos, técnicas y aplicaciones en ciencias de la salud. Primera edición. Editorial
harcourt,S,A. Madrid. España, 2001,pags 132-136