1.

Identificación de flavonoides con actividad antioxidante en la hoja de

Annona muricata L
2. Planteamiento de estudio
2.1 Descripción del problema
Con el incremento exorbitante de radicales libres productores del estrés
oxidativo, se ha producido también patologías asociadas como diabetes,
enfermedades cardiacas, cáncer, etc; por lo cual el interés se inclina en
la búsqueda de antioxidantes que disminuya la exposición prolongada a
oxidantes.
Los antioxidantes en su mayoría provenientes de especies vegetales
presentan propiedades redox y como donadores de hidrogeno que
pueden prevenir y reducir el desarrollo de enfermedades degenerativas.
Específicamente los flavonoides poseen la capacidad para captar
radicales causantes del estrés oxidativos.
2.2 Formulación del problema
¿Cuáles son los flavonoides presentes en la especie vegetal?

2.3 Delimitación de los objetivos

2.3.1 Objetivo general
Evaluar e identificar la presencia de flavonoides con actividad
antioxidante en la hoja de Annona muricata L.
2.3.2 Objetivo específico
Obtención del extracto de hoja Annona muricata L.
Realizar un tamizaje fitoquímico
Identificar cualitativamente los metabolitos secundarios presentes en la
hoja de Annona muricata L.

2.4 Justificación e importancia del estudio

En el contexto actual el incremento exorbitante de patologías asociadas a
enfermedades degenerativas provocadas por radicales libres, presenta
relevancia en la salud pública ya que de acuerdo con la OMS estas
enfermedades representan proporciones epidémicas. Existe una relación
entre la producción de radicales libres y el estrés oxidativo por lo cual se
busca especies vegetales con capacidad antioxidante que reduzca la
disminución de estos radicales libres, ya que estos compuestos
productores de la oxidación de biomoléculas la cual están relacionadas
fundamentalmente con procesos degenerativos.
Los antioxidantes actúan como captadores de radicales libres
produciendo la reducción de la exposición prolongada de oxidantes que
provocan deterioro de las células. Muchos de estos antioxidantes
provienen de especies vegetales tales como la Annona muricata L. que
es una especie ampliamente estudiada debido a su potencial terapéutico
y a la cual se ha atribuido posee alrededor de 400 compuestos que
exhiben actividad citotóxicas y antitumorales.
 La presente investigación pretende identificar los metabolitos secundarios
presentes en la hoja de Annona muricata, por lo cual el interés se centra
en la identificación de flavonoides. Ya que las cualidades medicinales de
Annona muricata L se han convertido en insumos esenciales de la
industria farmacéutica.
3. Marco teórico
3.1 Antecedentes
La Annona muricata L. es una especie de fruta tropical que es
frecuentemente consumida como fruto fresco, debido a su sabor dulce
característico. Sin embargo no solo el fruto presenta importancia, ya
que actualmente los estudios se han orientado a las hojas, raíces, y
tallos en investigaciones de fitoquímicos. De acuerdo con Jiménez la
pulpa presenta importancia por su contenido de compuestos fenólicos,
específicamente 16 compuestos fenólicos por el cual fueron
separados mediante extracción en fase sólida, siendo la primera
elución realizada con agua y el HCl al 0.01% y el segundo con acetato
de etilo. Los compuestos fenólicos que se atribuyeron provenían de
derivados de ácido cinámicos y ácidos coumáricos, los cuales
presentan actividad antioxidante. 4
La Annona muricata pertenece a la familia annonaceae, el cual se le
proporciona importancia por su actividad antitumoral y actividad
antioxidante en varios extractos de Annona muricata. Por lo cual la
actividad antioxidante se realizó a través de2, 2'-azino-bis (3-
etilbenzotiazolina-6-sulfónico) (ABTS), férrico
reducir antioxidante potencial (FRAP) y 2,2-difenil-1-
picrilhidracilo (DPPH) ensayos de barrido de radicales. Conforme a la
metodología empleada se determinó que la mayor actividad
antioxidante se encontró en el extracto de hoja de metanol. 5
Se han atribuido alrededor de 200 compuestos fitoquímicos,
principalmente alcaloides, fenoles y acetogeninas, por el cual los
extractos se han caracterizado como antimicrobianos,
antiinflamatorios, antiprotozoarios, antioxidantes, insecticida, etc. Los
cuales han sido corroborados mediantes estudios clínicos que apoyan
la actividad antiglucemiante de los extractos etanólicos. Así mismo se
está evaluando el efectos neurotóxico in vitro e in vivo para así definir
la toxicidad de sus componentes.6
La guanábana al ser considerada un fruto tropical se le ha atribuido
potencial antioxidante, siendo los antioxidantes capaces de disminuir
los radicales libres productores de la oxidación de las células, ya que
muchos estudios corroboran la importancia en los estudios
epidemiológicos asociados a enfermedades degenerativas tales como
enfermedades coronarias, cáncer, diabetes y obesidad.7
Flavonoides
Los flavonoides poseen un bajo peso molecular con un esqueleto de
difenilpiranos, el cual está compuesto por dos anillos fenilos
ligados a un anillo de pirano (hetereocíclico). Su estructura permite
patrones de sustitución y variación en el anillo, de acuerdo a esta
estructura pueden clasificarse como:
A) Flavanos: Con un grupo OH en la posición del anillo
B) Flavonoles: Representado por la quercetina que presenta un grupo
carbonilo en la posición 4 y la presencia de un grupo OH en
posición del anillo
C) Flavonas: Como diosmetina con un grupo carbonilo en posición 4
del anillo y de carecer el grupo OH
D) Antocianidinas, que tienen unido el grupo -OH en posición 3 pero
además poseen un doble enlace entre los carbonos 3 y 4 del anillo
C
Entre sus principales características resaltan la presencia del anillo de
la estructura catecol u O-hidroxi, la presencia de un doble enlace en
las posiciones 2, 3; asimismo al presentar los grupos hidroxilos en
posición 3 y 5.
Los derivados del flavonol se encuentran presentes en la familia de las
Annonaceae tales como quercetina, Kaempferol e isorhamnetina,
además se han identificado acetogeninas, alcaloides, diterpenos,
polifenoles; aislados principalmente en hojas. La aparición de
derivados de flavonol como los principales flavonoides podría confirmar
que la familia representa un estado evolutivo basal.
La Annona muricata es usada frecuentemente en medicina tradicional,
que han sido asociadas al control diabético, prevención de ulceras,
cáncer. Para evaluar el potencial antidiabético, mediante la
identificación de fitoquímicos se realizó una extracción etanólica en un
reparto líquido-líquido, básicamente se caracteriza las fracciones
fenólicas por lo cual se identificaron varias moléculas con efecto
Antioxidante tales como: ácido clorogénico, cafeíco, procianidinas,
catequina, quercetina, quercetina-hexósidos y kaempferol. Estos
resultados fueron corroboraron con el análisis de HPLC que
evidenciaron varios compuestos fenólicos en EtOAc y BuOH.8

Origen e historia
La guanábana es una especie frutícola que pertenece a la familia
Annonaceas, originaria de América subtropical y tropical por lo cual se
encuentra en los países de Colombia, Brasil y Perú. Es característico
en el fruto su dulzor y aroma, por ende es empleada como fruta fresca
y como procesada. En Perú la presencia de guanábana data desde
1200 a.c, donde era representada en cerámicas.
Distribución geográfica
En el Perú habitan 20 especies de las cuales 4 de estas son
endémicas. Sin embargo se reconocen 3 especies endémicas,
deominadas Annona asplundiana R. que se encuentra en las regiones
Amazonas y Loreto; Annona deminuta R. que habita en las regiones
Loreto, Madre de Dios, Pasco y San Martín y Annona iquitensis R. que
crece principalmente en las regiones Loreto y Madre de Dios.

Taxonomía
Nombre común: “Guanabana”,”catuche” “zapote agrio” (español),
“graviola”,”coracao-de rainha (portugués)”sour-sop” (inglés).
Nombre científico: Annona muricata
Reino: Plantae
Subclase: Magnoliidae Novák ex Takht.
Superorden: Magnolianae Takht.
Orden: Poales Small
Familia: Annonaceae
Subfamilia: Annonoideae Raf.
Género: Annona L.
Categoría: Especie
Clasificación superior: Annona
Especie: A. muricata; L., 1753

Descripción
Planta de tallo grueso, con altura aproximada de cuatro a ocho metros
con pocas ramas.
Adaptación: Climas tropicales y subtropicales, con suelos profundos
de textura mediana.
Descripción botánica
Árbol de porte pequeño, de cuatro a ocho metro, tronco recto, copa
que puede tener pocas ramas o ramificaciones bajas casi verticales. El
árbol de guanábana, presenta una altura variable que oscila entre los
7 y los 11 m, aunque dependiendo de su manejo puede alcanzar altura
superiores. Un árbol producido por semilla (vía sexual) presenta los
siguientes partes: LA COPA así se denomina al sistema aéreo de la
planta conformado por el tronco, el sistema de ramificación y el sistema
foliar.
Las hojas presentan hojas alternas simples, brillantes en el has y
amarillentas en el envés, oblongas a aovadas, sub coriáceas, 5 a 15
cm de largo por 2 a 6 cm de ancho, ápice acuminado y base aguda.
Sus flores solitarias o en pares que nacen a lo largo de la rama o del
tronco, amarillas, tres sépalos y seis pétalos en dos verticilos; los tres
pétalos externos de 2 a 3 cm de largo y muy ancho (2 a 4cm) y
coriáceos. Los tres pétalos internos grandes también alternos con los
primeros. El receptáculo es grande y pubescente, con numerosos
estambres en la base y ovario en la parte superior. Las flores se abren
al amanecer cuando las anteras están iniciando la expulsión del polen;
los pétalos externos caen algunas horas después y los internos pueden
caer juntos o durar algunos días más.
 El fruto es un sincarpo ovoide, de aspecto asimétrico (encorvado)
debido a la polinización deficiente de los carpelos en el lado cóncavo),
presenta entre 15 a 40 cm de largo por 10 a 20 cm de diámetro, pesa
de 3 a 4kg. En cuanto a la parte exterior del fruto presenta una cáscara
verde oscura brillante, delgada, con areolas que presentan un pequeño
apículo carnoso en el centro, aunque existen variedades de frutos casi
lisos. La pulpa es blanca, jugosa, aromática, sabor agridulce. Las
semillas ovoides y aplanadas son numerosas, miden 1,5 a 2,0 cm y
presenta una coloración marrón oscuro a negro brillante.
Caracterización fisicoquímica

4. Hipótesis y variables
4.1 Hipótesis general
La hoja de Annona muricata L. presenta flavonoides
4.2 Hipótesis especifica
4.3 Identificación y relación de variables
4.3.1 Variable independiente
Extracto de la hoja de Annona muricata L.
4.3.2 Variable dependiente
La presencia de flavonoides con actividad antioxidante en la hoja de
Annona muricata L
5. Metodología
5.1 Tipo de investigación
De acuerdo con el alcance de la investigación descriptiva y
prospectivo empleando métodos de análisis aceptados por la
comunidad científica
5.2 Población y muestra de estudio

5.3 Técnicas de recolección de datos

5.4 Técnicas de procesamiento y análisis de datos que llevan a
resultados

Preparación y extracción de muestras

Las hojas de Annona muricata serán lavadas con agua, cortadas en
pequeños trozos para ser secadas a temperatura ambiente. Las
hojas en polvo se extraerán con etanol mediante la maceración y
calentamiento en una cocinilla.
Marcha de solubilidad
Del extracto crudo obtenido de la Annona muricata se toma
alícuotas de 50 mg en tubos de ensayos limpios y serán disueltos en
3 ml de cada disolvente, respectivamente de menor a mayor
polaridad (n-hexano, cloroformo, acetato de etilo, propanona,
butanol, etanol, metanol y agua).
Tamizaje fitoquímico
Colocar el extracto seco en el matraz y adiconar el disolvente
indicado e identificar por reacciones de coloración y precipitación.
Solución de cloroformo
 Liebermann – bourchard
 Borntrager
Solución metanólica
 Liebermann – bourchard
 Shinoda
 Dragendorff
 Mayer
 Sonnenschein
 Wagner
 Rosenheim
 Baljet
 Legal
 Reacción con hidróxido de amonio
 Gelatina
 Reacción con cloruro férrico
Solución ácida
 Dragendorff
 Mayer
 Sonnenchein
 Wagner
Solución acuosa
 Shinoda
 Espuma
 Gelatina
 Reacción con cloruro férrico
 Baljet
 Legal
 Borntrager
 Molish
 Fehling
 Rosenheim
 Fraccionamiento por reparto
Dispersar el extracto crudo en agua, luego extraer la fase acuosa en
tres porciones sucesivas de los disolventes seleccionados
Colectar las fracciones, adicionar el desecante y deja reposar
Filtrar y guardar en un frasco ámbar
Concentrar a presión reducida hasta sequedad, pesar las fracciones
Guardar las fracciones para finalmente realizar la cromatografía en
capa delgada.
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

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