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GUÍA DE TRABAJOS
PRÁCTICOS
5º QUÍMICA – 2009
BIOSEGURIDAD
Se denomina así al conjunto de operaciones y medidas de autoprotección que se deben
adoptar para evitar tomar contacto con materiales tóxicos y/o infecciosos que puedan dañar la
integridad física.
Toda medida de autoprotección debe constituir una conducta natural del personal de
laboratorio, ya que realizar tareas en el mismo implica exponerse a innumerables riesgos que
pueden ser prevenidos.
Existe una gran diversidad de elementos y equipos de autoprotección, como pueden ser:
Guantes de látex
Guardapolvo
Antiparras
Mascarillas
También deben cumplirse pautas de seguridad, que, al igual que los elementos de
bioseguridad, sirven para el resguardo personal.
FUEGO
COMBUSTIBLE CALOR
CALOR
COMBUSTIBLE
COMBURENTE
COMBURENTE
Si se eliminan cualquiera de estos componentes, será suficiente, para que el fuego no se inicie.
A través de experiencias y estudios posteriores se ha descubierto un cuarto factor: La Reacción
Química ante el Frente de Llama o Reacción en Cadena; este cuarto factor no resta validez al
proceso de iniciación del fuego, en cambio, es importante en el momento de seleccionar
métodos para la extinción de un fuego ya declarado.
Tipos de Fuego
CLASE A - Sólidos de Naturaleza orgánica
CLASE B - Combustibles líquidos
CLASE C - Las dos clases anteriores donde interviene la electricidad
CLASE D - Metales especiales
TIPO DE EXTINTORES
TIPO A - Matafuegos de Agua
TIPO B - Matafuegos de Polvo Químico Seco/ de Espuma
TIPO C - Matafuegos de Dióxido de Carbono
TIPO D - Matafuegos Polvo Químico Seco Presurizado
La piel de todos los animales homeotermos (de sangre caliente) es el mayor órgano del cuerpo
y tiene varias capas a saber:
La más interna se denomina HIPODERMIS (tejido subcutáneo) y por esta corren los vasos
sanguíneos de mayor calibre. Esta última capa se encuentra en contacto por debajo con
los órganos internos.
QUEMADURAS QUÍMICAS
Existen muchos productos químicos que pueden provocar quemaduras. Lo que diferencia a
éstas quemaduras de las térmicas es que el producto involucrado, al absorberse por la piel
causa además fallas en los órganos internos. Por otra parte en su forma volátil, al ser
inhalados provocan lesiones en las vías aéreas que pueden desencadenar en la obstrucción de
las vías aéreas o en el paro no obstructivo de la mecánica respiratoria.
IMPORTANTE
LOS GUANTES DE LÁTEX NO RESISTEN EL CONTACTO CON LOS ÁCIDOS Y ÁLCALIS
CONCENTRADOS.
GENERALIDADES
DEFINICIÓN Y CONCEPTOS RELACIONADOS
Intoxicación es el ingreso al cuerpo de toda sustancia que por sus características químicas o
biológicas puede comprometer seriamente la integridad del organismo o provocar la muerte de
la persona afectada; también se puede definir como el conjunto de manifestaciones producidas
por las reacciones nocivas de esta sustancia y capaces de exteriorizarse como enfermedad.
Un fármaco o droga es una sustancia que puede modificar una o más funciones del organismo
una vez introducido en él; un tóxico es toda aquella sustancia, incluidos los fármacos, que
pueden producir un daño en el organismo y un veneno es un tóxico muy potente, aunque se
utiliza como sinónimo de tóxico.
Sin embargo se debe tener en cuenta que "la dosis hace al veneno", con lo cuál los términos
descriptos anteriormente no son absolutos, sino que depende de que dosis se trate, se incluirán
en uno u otro concepto.
Por último, se indica genéricamente como antídoto a toda aquella sustancia que, por distintos
mecanismos y vías, puede prevenir o limitar la absorción de sustancias tóxicas, como así
también su efecto perjudicial sobre el organismo. Cabe destacar que los antídotos tienen una
acción muy específica con lo que su uso es casi exclusivamente intra hospitalario, ya que una
errónea prescripción puede ser contraproducente.
No puede hacerse una clasificación según la intensidad del tóxico debido a que esto está sujeto
a otras variables, y tampoco pueden clasificarse según su estructura química debido a la gran
variedad existente; pero sí pueden clasificarse en grupos potencialmente tóxicos para el
hombre, según su uso, función o procedencia.
( (
(Clase 1)SustanciasClase 2)Gases no(Clase 2) Gas venenoso Clase 2) Gases inflamables
explosivas inflamables
(
(Clase 3) Líquido(Clase 4) Sustancias(Clase 4) SólidoClase 4) Sólido peligroso
inflamable sólidas inflamables combustión espontánea en contacto con agua
( ( (
Clase 6) Sustancias(Clase 7) SustanciasClase 8) SustanciasClase 9) Sustancias varias
infecciosas radiactivas corrosivas
Materiales:
Trípode
Tela metálica
Mechero
Mortero
Cuchillo
Balanza
Estufa a 100 – 105 ºC
Cristalizador
Alimentos (verdura, pescado, carne, etc.)
Procedimiento:
- Pesar el cristalizador limpio y seco.
- Agregar las porciones de alimentos separadamente, previamente triturados o cortados
y pesar nuevamente.
- Calentar separadamente cada alimento sobre tela metálica en el mechero.
- Terminar el proceso con la estufa a 104 ºC (hasta sequedad).
- Enfriar la cápsula en desecador y volver a pesar. Repetir hasta constancia de peso.
- Calcular los % de agua en cada alimento.
Materiales y reactivos:
Sal de mesa
Huevos crudos
Solución de HCl 1:1
Vasos de precipitados
Procedimiento:
- Sumergir los huevos en la solución de HCl 1:1 para extraer la cáscara sin dañar el
resto. Dejar actuar hasta que se desprenda la cáscara.
- Una vez que queda la membrana sin cáscara, colocar un huevo en un vaso que
contenga agua destilada de manera que lo cubra totalmente.
- Realizar lo mismo con otro huevo en un vaso que contenga salmuera.
- Dejarlo hasta el final de la clase y observar.
Objetivo: separar una solución de NaCl y otra de almidón a través de una diálisis.
Materiales y reactivos:
Membrana de diálisis
Agitador magnético
Vaso de precipitados de 1 litro
Solución de NaCl
Solución de almidón
Solución de lugol
Solución de AgNO3
Agua destilada
Procedimiento:
o Colocar en un tubo, 1 mL de solución de NaCl + 1 mL de solución de AgNO 3.
Observar y registrar.
o Colocar en otro tubo, 1 mL de solución de lugol + 1 mL de solución de almidón.
Observar y registrar.
o Preparar un dializador con una membrana de diálisis o bolsa de celofán.
o Introducir dentro de la membrana la solución de NaCl y la solución de almidón.
o Cerrar la bolsa perfectamente en forma tal de anular toda pérdida.
o Introducir el dispositivo sostenido por un soporte dentro del vaso de precipitados
conteniendo agua destilada.
o Colocar 2 porciones del agua del vaso en dos tubos y ensayar con AgNO 3 y lugol.
Registrar.
o Dializar durante 1 hora (encender el agitador magnético).
o Colocar 2 porciones del agua del vaso en dos tubos y ensayar con AgNO 3 y lugol.
Registrar.
Observaciones:
Control previo: Pre diálisis Post diálisis
Tubo + AgNO3
NaCl + AgNO3:
Tubo + lugol
Almidón + lugol:
Método:
En un tubo de ensayo se vierten 2 ml de la solución de azúcar e igual volumen de NaOH 10%.
Luego de agitar, se agregan 10 gotas de la solución de CuSO 4. Se calienta a ebullición, siendo
la reacción positiva cuando se observa la aparición de un precipitado amarillo (CuOH) y luego
rojo (Cu2O).
2. Prueba de Molisch:
El ácido sulfúrico concentrado hidroliza enlaces glicosídicos para dar monosacáridos que
pueden ser luego deshidratados dando furfural y sus derivados. Estos productos se combinan
luego con a-naftol sulfonato originando un complejo púrpura. Esta reacción es general para los
hidratos de carbono pero algunos otros compuestos orgánicos dan también furfural con ácido
sulfúrico concentrado.
Reactivos:
- H2SO4 (c).
- -naftol (50 g/l en etanol, preparar fresco).
- Azúcares 1%: lactosa, glucosa, arabinosa, fructosa.
Método:
Agregue dos gotas de la solución de -naftol a 2 ml de la sustancia problema. Añada
cuidadosamente por las paredes del tubo aproximadamente 1 ml de H 2SO4 (c) hasta que se
formen dos capas. Observe cuidadosamente cualquier cambio de color en la interfase de los
dos líquidos.
3. Prueba de Benedict:
Reactivos:
- Reactivo de Benedict. Disuelva 173 g de citrato de sodio y 100 g de carbonato de sodio en
aproximadamente 800 ml de agua caliente. Filtre a través de papel de filtro en una probeta de
Método:
Agregue cinco gotas de la solución problema a 2 ml del reactivo de Benedict y coloque en un
baño de agua hirviendo por 5 minutos.
Reactivos:
- Reactivo de Bial. Disuelva 1,5 g de orcinol en 500 mL de HCl (c) y añada 20 gotas de solución
de FeCl3 100 g/L.
- Alcohol amílico.
- Azúcares 1%: fructosa, arabinosa, xilosa.
Método:
En un tubo de ensayo agregue aproximadamente 1 mL de la muestra a 2,5 mL de reactivo y
caliente hasta que empiece a hervir. La aparición de una coloración azul verdosa indica
resultados positivos. Enfríe el tubo, luego agregue 2 – 3 mL de alcohol amílico y agite.
Reactivos:
- Reactivo de Seliwanoff: (Resorcinol 0,5 g/l en HCl 3 M).
- Azúcares 1%: fructosa, sacarosa, lactosa.
Método:
A 2 ml del reactivo de Seliwanoff agregue dos gotas de solución de carbohidrato y caliente
durante 1 minuto en un baño de agua hirviendo. Observe la aparición de un color rojo intenso.
Reactivos:
- HCl (c).
- NaOH 5 M.
- Azúcares 1%: sacarosa, glucosa.
Método:
A 5 mL de solución de sacarosa agregue cinco gotas de HCl (c), caliente durante 5 minutos en
un baño de agua hirviendo, enfríe y agregue 10 gotas de NaOH hasta que la solución sea
neutra o débilmente alcalina. Con la solución hidrolizada realice las pruebas para azúcares
reductores y la de Seliwanoff.
Reactivos:
- Solución de lugol (5 mmol/L en KI (30 g/L) .
- Azúcares 1%: almidón, glucosa.
Método:
A 1 mL de solución agregue dos gotas de lugol y compare los colores obtenidos con los de
lugol en agua.
Reactivos:
- Sudán lll. Disolución al 0,2%: a 200 mg de Sudán lll se añaden a 100 ml de etanol 70%
calentado en un baño María, se mezcla y se deja en reposo durante 24 hs por lo
menos.
- Aceite vegetal.
- Manteca.
- Margarina.
- Agua destilada.
Método:
Sobre un vidrio de reloj se aplica una gota de aceite, se añade una gota de Sudán lll y se
mezcla. Se observa la aparición de una coloración naranja de la mezcla
Reactivos:
- Grasa animal (manteca, grasa vacuna).
- Aceite vegetal.
- KOH alcohólico (100 g/L).
- HCl (c).
- Fenolftaleína (10 g/l en alcohol).
- NaOH (0,1 M).
- NaCl ss.
Método:
Saponificación. En un tubo coloque grasa hasta una altura de aproximadamente 0,5 cm:
agregue KOH alcohólica para cubrir la grasa y deje hervir cuidadosamente por cerca de un
minuto. Agregue 10 mL de agua, hierva por 10 minutos más y enfríe. Agregue cuidadosamente
PARTE A. HARINA
Procedimiento:
Pesar aproximadamente 20 g de harina y colocarla en el centro de un trozo de tela de
algodón.
Tomar el lienzo por las puntas, encerrando la harina y mojarlo con agua de la canilla
para arrastrar el almidón contenido en la harina.
Abrir la bolsita y juntar el residuo de gluten (proteína) con ayuda de una espátula.
Pasar el residuo a un tubo de ensayo y agregar agua hasta 1 cm de altura.
PARTE B. GELATINA
Procedimiento:
Preparar gelatina sin sabor (seguir las instrucciones del envase).
Dejar enfriar.
Una vez solidificada pasar una porción de la gelatina a un tubo de ensayo.
Agregar agua hasta cubrirla y deshacerlo con una varilla.
PARTE C. HUEVO
Procedimiento:
Abrir un huevo y separar la clara de la yema.
Diluir la clara con 50 mL de agua destilada.
Transferir 1 mL de solución de clara a un tubo de ensayo.
Materiales y reactivos:
Tela de algodón.
Harina de trigo.
Tubos de ensayo.
Gelatina sin sabor.
Varilla de vidrio.
Observaciones:
Alimento Proteína principal Coloración con Biuret
Harina
Gelatina
Clara de huevo
Agua
Materiales:
Cromatofolios recubiertos con sílica gel.
Cuba cromatográfica.
Tubos capilares.
Papel de filtro.
Embudo.
Erlenmeyer.
Varillas de vidrio.
Procedimiento:
- Sembrar los patrones de aminoácidos realizando 5 a 10 toques.
- Exprimir una naranja y tomar 5 mL.
- Filtrar y agregar 15 mL de alcohol para precipitar las proteínas. Volver a filtrar.
- Sembrar en el cromatofolio con 3 a 4 toques.
- Siempre que se trabaje con aminoácidos hay que evitar tocar con los dedos la
superficie de las placas o del papel, puesto que la transpiración contiene aminoácidos.
- Realizar la corrida cromatográfica utilizando la fase móvil indicada.
- Revelado: pulverizar abundantemente con ninhidrina y colocar en estufa 5 minutos.
Procedimiento:
- Agregar a un vaso de precipitados 20 mL de agua oxigenada comercial.
- Agregar al vaso unos cristales de dióxido de manganeso.
- Realizar un blanco en otro vaso agregando 20 mL de agua destilada.
OBSERVACIONES
H2O2
H2O
Procedimiento:
- Cortar daditos pequeños de papa (de unos 0.5 cm de lado).
- Hervir algunos de ellos (NO TODOS!!!).
- En un tubo de ensayo agregar 1 mL de H2O2 y un dadito de papa cruda.
- En otro tubo de ensayo agregar 1 mL de H2O2 y un dadito de papa hervida.
OBSERVACIONES
PAPA CRUDA
PAPA HERVIDA
Procedimiento:
- Triturar un trocito de zanahoria junto con 5 mL de solución reguladora de pH 7 para
extraer la enzima del tejido vegetal.
- Filtrar y recoger el líquido obtenido.
- Tomar 3 tubos de ensayo y colocar:
TUBO
TUBO OBSERVACIONES
1
2
3
Solución reguladora pH 7:
50 mL de KH2PO4 0.1 M (13 g/L) + 29 mL de NaOH 0.1 M
- Agregar a cada tubo 3 gotas de reactivo de lugol y guardar los tubos en un sitio oscuro.
- Observar el aspecto de los tubos cada 5 minutos y registrar las diferencias de color y
justificar.
E2: Postre
Amilasas – Técnica:
- Tomar una porción de aproximadamente 50 g de un postre.
- Agregar una cucharada de jabón en polvo.
- Mezclar muy bien e incubar unas horas a temperatura ambiente.
1) Manzana – Técnica:
- Pelar una manzana y cortar 7 fetas.
- Tomar 2 fetas y colocarlas: una en estufa a 37°C y la otra en heladera a 4°C.
- Tomar 2 fetas y rociarlas con jugo de limón. Colocar una muestra en estufa a 37°C y la
otra en heladera a 4°C.
- Tomar 2 fetas y rociarlas con ácido acético al 5% (vinagre). Colocar una muestra en
estufa a 37°C y la otra en heladera a 4°C.
- Tomar una feta y calentarla a 100°C durante 5 minutos. Luego colocar en estufa a
37°C.
2) Banana – Técnica:
- Pelar una banana y cortar 7 fetas.
- Tomar 2 fetas y colocarlas: una en estufa a 37°C y la otra en heladera a 4°C.
- Tomar 2 fetas y rociarlas con jugo de limón. Colocar una muestra en estufa a 37°C y la
otra en heladera a 4°C.
- Tomar 2 fetas y rociarlas con ácido acético al 5% (vinagre). Colocar una muestra en
estufa a 37°C y la otra en heladera a 4°C.
- Tomar una feta y calentarla a 100°C durante 5 minutos. Luego colocar en estufa a
37°C.
Manzana
1) Catalasa – Técnica:
- Tomar con un palillo una colonia de Staphylococcus aureus y depositarla en un
portaobjetos.
- Realizar lo mismo con una colonia de Escherichia coli, depositándola en el
mismo portaobjetos.
- Agregar a cada una de las colonias una gota de H 2O2. Observar.
Introducción:
La sidra es una bebida elaborada y consumida desde hace cientos de años. Se obtiene a partir
de un jugo de manzana azucarado, el cual es fermentado por una levadura, Saccaromyces
cereviaciae. Este microorganismo fermenta los azúcares presentes en el jugo de manzana y
otros agregados artificialmente y como productos se obtiene etanol y CO 2. Es por esto que las
levaduras realizan fermentación alcohólica.
Objetivos:
- Fabricar sidra a partir de un jugo de manzana en presencia de levaduras.
- Evaluar las mejores condiciones para la obtención de sidra, en función de la cantida de
alcohol producido.
Técnica:
- Medir 250 mL de jugo de manzana y colocarlo en una botella.
- Pesar 1 g de levadura de cerveza y colocarlo en la botella.
- Agregar un sobrecito de azúcar (6 g).
- Cerrar la botella e incubar durante 5 días a 25° C.
- Otros grupos de trabajo deberán seguir el presente esquema:
Grupo Temperatura de Tiempo de Jugo de Azúcar Levaduras
incubación (°C) incubación (días) manzana
1 28 5 Sí Sí Sí
2 37 2 Sí Sí Sí
3 4 7 Sí Sí Sí
4 28 5 Sí No Sí
5 28 5 Sí No Sí
Técnica:
- Medir 200 mL de sidra en matraz aforado previamente enjuagado con la muestra.
- Verter el contenido del matraz en un tubo Kjeldahl, lavando el matraz con pequeñas
porciones de agua destilada.
- Neutralizar con NaOH 30% verificando con papel de pH.
Refractometría:
- Cargar el refractómetro con unas gotas del destilado.
- Leer el índice de refracción.
- Transformar el parámetro en ° Gay Lussac.
Introducción:
El yogur es un producto lácteo obtenido mediante la fermentación bacteriana de la leche. Si
bien se puede emplear cualquier tipo de leche, la producción actual usa predominantemente
leche de vaca. La fermentación de la lactosa (el azúcar de la leche) en ácido láctico es lo que
da al yogur su textura y sabor tan distintivo. A menudo se le añade fruta, vainilla, chocolate y
otros saborizantes, pero también puede elaborarse sin añadidos. Las bacterias lácticas que se
deben utilizar según el Código Alimentario Argentino son: Lactobacillus delbrueckii subsp.
bulgaricus y Streptococcus salivarius subsp. termophilus.
Técnica:
- Tomar una pequeña muestra de yogur comercial y realizar un extendido para
coloración de Gram.
- Medir 100 mL de leche fluida y calentar a 80°C durante 10 minutos. Este proceso se
denomina tyndalización.
- Enfriar la leche a 37°C.
- Agregar 4 g de leche en polvo.
- Agregar 6 g de azúcar y 10 g de yogur.
- Incubar a 44°C durante 3-4 horas.
Determinaciones de acidez:
- Tomar 10 mL de leche, agregar 2-3 gotas de fenolftaleína y titular con NaOH 0,1 N
hasta coloración rosada pálida que se mantenga más de 30 segundos.
- Tomar 10 mL de leche + 0.4 g de leche en polvo y proceder de igual forma.
- Tomar 10 mL de yogur comercial y proceder de igual forma.
- Una vez que se puso a incubar la leche, se deben tomar 10 mL de muestra cada 30
minutos y proceder de igual forma.
Microscopía:
Realizar sobre el extendido preparado una tinción de Gram. Los pasos son:
4°C
28°C
37°C
44°C
Introducción:
Las pruebas bioquímicas son muy importantes para la clasificación bacteriana. Estas pruebas
se basan en diferentes reacciones químicas que se realizan con el fin de clasificar las
bacterias. A pesar de su microscópico tamaño, las bacterias poseen una maquinaria metabólica
importante. Las pruebas bioquímicas permitirán diferenciar diferentes bacterias en función de
las diferencias metabólicas entre ellas.
Técnica:
- Se parte del cultivo realizado en ágar EMB de Levine, tomando como colonia
sospechosa la que tenga un fondo negro y presente brillo verde metálico característico.
- Tomar con un ansa una colonia sospechosa y sembrar en una placa de ágar nutritivo.
(OBTENCIÓN DEL CULTIVO PURO).
- Incubar 24-48 horas a 37 °C.
- A continuación se procederá a sembrar las diferentes pruebas bioquímicas:
1. Indol:
Principio: El indol es uno de los productos de degradación metabólica del triptofano.
Las bacterias que poseen la enzima triptofanasa son capaces de hidrolizar y deaminar
el triptofano con producción de indol, piruvato y amoníaco. La prueba de indol está
basada en la formación de un complejo color rojo cuando el indol reacciona con el
grupo aldehído del p-dimetilaminobenzaldehído. Este es el principio activo del reactivo
de Kovac. Se debe utilizar un medio rico en triptofano.
Técnica:
- Realizar una única punción en el centro del tubo de medio SIM, utilizando ansa recta.
- Incubar 24 horas a 37 °C.
- Transcurrido dicho lapso agregar 5 gotas de reactivo de Kovacs. Indol +: desarrollo de
color rojo fucsia vivo en la interfase luego de agregar el reactivo.
2. Rojo de metilo:
Principio: La prueba del rojo de metilo es cuantitativa para la producción de ácido y
requiere microorganismos positivos que produzcan ácidos fuertes (láctico, acético,
fórmico) a partir de glucosa, por la vía de la fermentación ácida mixta.
Técnica:
- Inocular en un caldo RMVP con un cultivo puro del microorganismo en estudio.
- Incubar 48-72 horas a 37 °C.
- Transcurrido dicho lapso, agregar 5 gotas de rojo de metilo. RM +: desarrollo de un
color rojo estable en la superficie del medio.
3. Prueba de Voges Proskauer:
Resultados:
Sulfuro Indol Motilidad RM VP Citrato
E. coli
Incógnita
Agar 15.0
Células: Leucocitos:
Piocitos: Hematíes:
Cristales: Cilindros:
Filamentos mucosos:
Células: