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Q UÍMICA BIOLÓGICA

GUÍA DE TRABAJOS
PRÁCTICOS

ESCUELA TÉCNICA ORT

5º QUÍMICA – 2009

Profesor: Lautaro Kremenchuzky


TRABAJO PRÁCTICO Nº 0
SEGURIDAD EN EL LABORATORIO

BIOSEGURIDAD
Se denomina así al conjunto de operaciones y medidas de autoprotección que se deben
adoptar para evitar tomar contacto con materiales tóxicos y/o infecciosos que puedan dañar la
integridad física.
Toda medida de autoprotección debe constituir una conducta natural del personal de
laboratorio, ya que realizar tareas en el mismo implica exponerse a innumerables riesgos que
pueden ser prevenidos.
Existe una gran diversidad de elementos y equipos de autoprotección, como pueden ser:
 Guantes de látex
 Guardapolvo
 Antiparras
 Mascarillas

También deben cumplirse pautas de seguridad, que, al igual que los elementos de
bioseguridad, sirven para el resguardo personal.

 No se permitirá el ingreso al laboratorio sin guardapolvo.


 No se permitirá el consumo de comidas o bebidas dentro del
laboratorio.
 El cabello deberá estar siempre recogido.
 Se deberá evitar el uso de sandalias como calzado dentro del
laboratorio así como el uso de anillos, pulseras y relojes que puedan
interferir en el correcto manejo del material.
 Se deberá evitar la circulación innecesaria por el laboratorio
transportando sustancias químicas y/o biológicas.
 Durante la realización de los trabajos prácticos todos los elementos
personales deberán ser retirados de las mesadas de trabajo
 No se permitirá el ingreso de alumnos al pañol sin previa
autorización.

FUEGO

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El fuego es una reacción química, una oxidación. Para que se produzca, resulta necesario el
íntimo contacto de tres componentes, lo que constituye el Triángulo del Fuego. Combustible -
Calor – Comburente (Oxígeno).

COMBUSTIBLE CALOR
CALOR
COMBUSTIBLE

COMBURENTE
COMBURENTE
Si se eliminan cualquiera de estos componentes, será suficiente, para que el fuego no se inicie.
A través de experiencias y estudios posteriores se ha descubierto un cuarto factor: La Reacción
Química ante el Frente de Llama o Reacción en Cadena; este cuarto factor no resta validez al
proceso de iniciación del fuego, en cambio, es importante en el momento de seleccionar
métodos para la extinción de un fuego ya declarado.

Tipos de Fuego
CLASE A - Sólidos de Naturaleza orgánica
CLASE B - Combustibles líquidos
CLASE C - Las dos clases anteriores donde interviene la electricidad
CLASE D - Metales especiales

TIPO DE EXTINTORES
TIPO A - Matafuegos de Agua
TIPO B - Matafuegos de Polvo Químico Seco/ de Espuma
TIPO C - Matafuegos de Dióxido de Carbono
TIPO D - Matafuegos Polvo Químico Seco Presurizado

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QUEMADURAS
Conjunto de lesiones determinadas por la acción de agentes físicos, químicos o biológicos que
dan lugar a una serie de reacciones locales y generales como consecuencia de alteraciones
térmicas, cuya gravedad guarda relación con su extensión, ubicación y profundidad.

La piel de todos los animales homeotermos (de sangre caliente) es el mayor órgano del cuerpo
y tiene varias capas a saber:

 La más superficial se llama EPIDERMIS. Formando parte de ésta se encuentra la “capa


cornea” compuesta por células desgastadas y muertas que se desprenden continuamente
descascarándose, a los fines de su renovación.

 La que continúa hacia la profundidad es la llamada DERMIS. En ésta se encuentra la


mayor cantidad de terminaciones nerviosas y capilares, el enclave de los folículos pilosos
(pelos), las glándulas sudoríparas y las glándulas sebáceas.

 La más interna se denomina HIPODERMIS (tejido subcutáneo) y por esta corren los vasos
sanguíneos de mayor calibre. Esta última capa se encuentra en contacto por debajo con
los órganos internos.

CLASIFICACIÓN POR PROFUNDIDAD

QUEMADURAS TÉRMICAS POR CALOR


Se clasifican en tres grupos:

QUEMADURAS TIPO A (1º):

Afecta a la capa más superficial de la epidermis. Se caracteriza


por la edematización (hinchazón) y enrojecimiento de los tejidos
a causa de la acentuada vasodilatación local de la red vascular subcutánea. Presenta
también purito (picazón) y dolor como consecuencia de la irritación de los filetes
nerviosos. Luego de algunos días puede producirse el desprendimiento de la capa
cornea.

QUEMADURAS TIPO AB (2º)

Se subdividen en dos clases:

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AB-a (2º superficial): afecta a la epidermis en su totalidad y algunos
componentes de la dermis. Aquí la red vascular además de hallarse muy
dilatada, se encuentra también contusionada. Por otra parte se produce
una liberación de plasma que es el responsable de la formación de
flictenas (ampollas), llamadas “de base clara” por la presencia del mismo
en su interior. Asimismo el plasma se deposita también en la proximidad
de los tejidos, ocasionando la distensión y edematización de los mismos. A diferencia del
caso anterior las terminaciones nerviosas se encuentran más afectadas, lo que genera
mayor dolor e impotencia funcional.

AB-b (2º profunda): esta lesión compromete a la epidermis y a la


dermis. Hay destrucción de la red vascular por lo que se produce
liberación de sangre junto con el plasma, que se instala próximo a los
tejidos edematizándolos. Se observa la presencia de flictenas las
cuales, en este caso, se denominan “de base oscura” debido a la
presencia de sangre en su interior. Contrariamente al caso anterior, existe destrucción de
las terminales nerviosas lo que hace que esta lesión sea poco o nada dolorosa.

QUEMADURAS TIPO B (3º)

Se destruyen todos los elementos componentes de la dermis y la epidermis, razón por la


cual esta lesión es la más peligrosa de todas. Su aspecto es de “escara”, seca y de color
negruzco. Asimismo la total destrucción de las terminaciones nerviosas hace que en la
zona afectada no exista dolor.

QUEMADURAS QUÍMICAS
Existen muchos productos químicos que pueden provocar quemaduras. Lo que diferencia a
éstas quemaduras de las térmicas es que el producto involucrado, al absorberse por la piel
causa además fallas en los órganos internos. Por otra parte en su forma volátil, al ser
inhalados provocan lesiones en las vías aéreas que pueden desencadenar en la obstrucción de
las vías aéreas o en el paro no obstructivo de la mecánica respiratoria.

IMPORTANTE
LOS GUANTES DE LÁTEX NO RESISTEN EL CONTACTO CON LOS ÁCIDOS Y ÁLCALIS

CONCENTRADOS.

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INTOXICACIONES

GENERALIDADES
DEFINICIÓN Y CONCEPTOS RELACIONADOS

Intoxicación es el ingreso al cuerpo de toda sustancia que por sus características químicas o
biológicas puede comprometer seriamente la integridad del organismo o provocar la muerte de
la persona afectada; también se puede definir como el conjunto de manifestaciones producidas
por las reacciones nocivas de esta sustancia y capaces de exteriorizarse como enfermedad.
Un fármaco o droga es una sustancia que puede modificar una o más funciones del organismo
una vez introducido en él; un tóxico es toda aquella sustancia, incluidos los fármacos, que
pueden producir un daño en el organismo y un veneno es un tóxico muy potente, aunque se
utiliza como sinónimo de tóxico.
Sin embargo se debe tener en cuenta que "la dosis hace al veneno", con lo cuál los términos
descriptos anteriormente no son absolutos, sino que depende de que dosis se trate, se incluirán
en uno u otro concepto.
Por último, se indica genéricamente como antídoto a toda aquella sustancia que, por distintos
mecanismos y vías, puede prevenir o limitar la absorción de sustancias tóxicas, como así
también su efecto perjudicial sobre el organismo. Cabe destacar que los antídotos tienen una
acción muy específica con lo que su uso es casi exclusivamente intra hospitalario, ya que una
errónea prescripción puede ser contraproducente.

CLASIFICACIÓN DE LOS TÓXICOS

No puede hacerse una clasificación según la intensidad del tóxico debido a que esto está sujeto
a otras variables, y tampoco pueden clasificarse según su estructura química debido a la gran
variedad existente; pero sí pueden clasificarse en grupos potencialmente tóxicos para el
hombre, según su uso, función o procedencia.

ABSORCIÓN Y EXCRECIÓN DEL TÓXICO


El proceso de absorción es el pasaje del tóxico desde el exterior a la sangre por diferentes vías:
oral, dérmica, inhalatoria y a través de mordeduras, picaduras, inyecciones y heridas.

El mismo organismo es capaz de eliminarlo por: biotransformación o metabolización y por


excreción a través de la orina, vómitos, heces, sudoración, exhalación, pelo y leche materna.

NUNCA PROVOCAR EL VÓMITO CUANDO EL TÓXICO SEA UN ÁLCALIS, UN ÁCIDO O

DERIVADOS DEL PETRÓLEO.

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IDENTIFICACIÓN DE SUSTANCIAS QUÍMICAS
MODELOS DE ETIQUETAS DE RIESGO

( (
(Clase 1)SustanciasClase 2)Gases no(Clase 2) Gas venenoso Clase 2) Gases inflamables
explosivas inflamables

(
(Clase 3) Líquido(Clase 4) Sustancias(Clase 4) SólidoClase 4) Sólido peligroso
inflamable sólidas inflamables combustión espontánea en contacto con agua

(Clase 5) Comburente (Clase 5) Peróxido(Clase 6) Sustancias(Clase 6) Sustancias


orgánico venenosas nocivas

( ( (
Clase 6) Sustancias(Clase 7) SustanciasClase 8) SustanciasClase 9) Sustancias varias
infecciosas radiactivas corrosivas

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TRABAJO PRÁCTICO Nº 1
EXTRACTO SECO

Materiales:
 Trípode
 Tela metálica
 Mechero
 Mortero
 Cuchillo
 Balanza
 Estufa a 100 – 105 ºC
 Cristalizador
 Alimentos (verdura, pescado, carne, etc.)

Procedimiento:
- Pesar el cristalizador limpio y seco.
- Agregar las porciones de alimentos separadamente, previamente triturados o cortados
y pesar nuevamente.
- Calentar separadamente cada alimento sobre tela metálica en el mechero.
- Terminar el proceso con la estufa a 104 ºC (hasta sequedad).
- Enfriar la cápsula en desecador y volver a pesar. Repetir hasta constancia de peso.
- Calcular los % de agua en cada alimento.

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TRABAJO PRÁCTICO Nº 2
ÓSMOSIS

Materiales y reactivos:
 Sal de mesa
 Huevos crudos
 Solución de HCl 1:1
 Vasos de precipitados

Procedimiento:
- Sumergir los huevos en la solución de HCl 1:1 para extraer la cáscara sin dañar el
resto. Dejar actuar hasta que se desprenda la cáscara.
- Una vez que queda la membrana sin cáscara, colocar un huevo en un vaso que
contenga agua destilada de manera que lo cubra totalmente.
- Realizar lo mismo con otro huevo en un vaso que contenga salmuera.
- Dejarlo hasta el final de la clase y observar.

CaCO3 + 2 HCl  CaCl2 + CO2 + H2O

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TRABAJO PRÁCTICO Nº 3
DIÁLISIS

Objetivo: separar una solución de NaCl y otra de almidón a través de una diálisis.

Materiales y reactivos:
 Membrana de diálisis
 Agitador magnético
 Vaso de precipitados de 1 litro
 Solución de NaCl
 Solución de almidón
 Solución de lugol

 Solución de AgNO3

 Agua destilada

Procedimiento:
o Colocar en un tubo, 1 mL de solución de NaCl + 1 mL de solución de AgNO 3.
Observar y registrar.
o Colocar en otro tubo, 1 mL de solución de lugol + 1 mL de solución de almidón.
Observar y registrar.
o Preparar un dializador con una membrana de diálisis o bolsa de celofán.
o Introducir dentro de la membrana la solución de NaCl y la solución de almidón.
o Cerrar la bolsa perfectamente en forma tal de anular toda pérdida.
o Introducir el dispositivo sostenido por un soporte dentro del vaso de precipitados
conteniendo agua destilada.
o Colocar 2 porciones del agua del vaso en dos tubos y ensayar con AgNO 3 y lugol.
Registrar.
o Dializar durante 1 hora (encender el agitador magnético).
o Colocar 2 porciones del agua del vaso en dos tubos y ensayar con AgNO 3 y lugol.
Registrar.

Observaciones:
Control previo: Pre diálisis Post diálisis
Tubo + AgNO3
NaCl + AgNO3:
Tubo + lugol
Almidón + lugol:

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TRABAJO PRÁCTICO Nº 4
HIDRATOS DE CARBONO

PARTE A. REACCIONES DE RECONOCIMIENTO


1. Azúcares reductores
Reactivos:
- NaOH 10%.
- CuSO4 1%.
- Azúcares 1%: sacarosa, almidón, xilosa, lactosa.

Método:
En un tubo de ensayo se vierten 2 ml de la solución de azúcar e igual volumen de NaOH 10%.
Luego de agitar, se agregan 10 gotas de la solución de CuSO 4. Se calienta a ebullición, siendo
la reacción positiva cuando se observa la aparición de un precipitado amarillo (CuOH) y luego
rojo (Cu2O).

2. Prueba de Molisch:
El ácido sulfúrico concentrado hidroliza enlaces glicosídicos para dar monosacáridos que
pueden ser luego deshidratados dando furfural y sus derivados. Estos productos se combinan
luego con a-naftol sulfonato originando un complejo púrpura. Esta reacción es general para los
hidratos de carbono pero algunos otros compuestos orgánicos dan también furfural con ácido
sulfúrico concentrado.

Reactivos:
- H2SO4 (c).
- -naftol (50 g/l en etanol, preparar fresco).
- Azúcares 1%: lactosa, glucosa, arabinosa, fructosa.

Método:
Agregue dos gotas de la solución de -naftol a 2 ml de la sustancia problema. Añada
cuidadosamente por las paredes del tubo aproximadamente 1 ml de H 2SO4 (c) hasta que se
formen dos capas. Observe cuidadosamente cualquier cambio de color en la interfase de los
dos líquidos.

3. Prueba de Benedict:

Reactivos:
- Reactivo de Benedict. Disuelva 173 g de citrato de sodio y 100 g de carbonato de sodio en
aproximadamente 800 ml de agua caliente. Filtre a través de papel de filtro en una probeta de

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1000 ml y complete con agua hasta 850 ml. Mientras tanto, disuelva 17,3 g de sulfato de cobre
en aproximadamente 100 ml de agua y complete hasta 150 ml. Vierta la primera solución en un
vaso de precipitados de 2 litros y añada lentamente la solución de sulfato de cobre agitando
continuamente.
- Azúcares 1%: sacarosa, almidón, maltosa, galactosa.

Método:
Agregue cinco gotas de la solución problema a 2 ml del reactivo de Benedict y coloque en un
baño de agua hirviendo por 5 minutos.

4. Prueba de Bial para las pentosas:


Cuando se calientan pentosas con HCl (c) se forma furfural que se condensa con orcinol en
presencia de iones férricos para dar un color verde azul. La reacción no es absolutamente
específica para las pentosas, ya que el calentamiento prolongado de algunas hexosas produce
hidroximetil furfural que también reacciona con orcinol dando complejos coloreados.

Reactivos:
- Reactivo de Bial. Disuelva 1,5 g de orcinol en 500 mL de HCl (c) y añada 20 gotas de solución
de FeCl3 100 g/L.
- Alcohol amílico.
- Azúcares 1%: fructosa, arabinosa, xilosa.

Método:
En un tubo de ensayo agregue aproximadamente 1 mL de la muestra a 2,5 mL de reactivo y
caliente hasta que empiece a hervir. La aparición de una coloración azul verdosa indica
resultados positivos. Enfríe el tubo, luego agregue 2 – 3 mL de alcohol amílico y agite.

5. Prueba de Seliwanoff para las cetosas:


Las cetosas se deshidratan más rápidamente que las aldosas dando derivados de furfural que
se condensan con resorcinol para formar un complejo rojo; por lo tanto, debe evitarse un
calentamiento prolongado de la muestra que se esta estudiando.

Reactivos:
- Reactivo de Seliwanoff: (Resorcinol 0,5 g/l en HCl 3 M).
- Azúcares 1%: fructosa, sacarosa, lactosa.

Método:
A 2 ml del reactivo de Seliwanoff agregue dos gotas de solución de carbohidrato y caliente
durante 1 minuto en un baño de agua hirviendo. Observe la aparición de un color rojo intenso.

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6. Prueba para sacarosas:

Reactivos:
- HCl (c).
- NaOH 5 M.
- Azúcares 1%: sacarosa, glucosa.

Método:
A 5 mL de solución de sacarosa agregue cinco gotas de HCl (c), caliente durante 5 minutos en
un baño de agua hirviendo, enfríe y agregue 10 gotas de NaOH hasta que la solución sea
neutra o débilmente alcalina. Con la solución hidrolizada realice las pruebas para azúcares
reductores y la de Seliwanoff.

8. Prueba del yodo:

Reactivos:
- Solución de lugol (5 mmol/L en KI (30 g/L) .
- Azúcares 1%: almidón, glucosa.

Método:
A 1 mL de solución agregue dos gotas de lugol y compare los colores obtenidos con los de
lugol en agua.

PARTE B. CROMATOGRAFÍA DE AZÚCARES


Procedimiento:
1) Preparación de la cuba cromatográfica:
- Poner solvente de elución en la cuba hasta que alcance la altura de 1 cm.
- Dejarla tapada durante 30 minutos antes de efectuar la cromatografía.
2) Preparación de la cromatoplaca de sílica gel:
- Recortar una porción de cromatoplaca de sílica gel.
- Trazar una línea con lápiz a 1 cm de uno de los extremos de la placa.
- Marcar puntos distanciados 1 cm sobre la línea identificándolos con el nombre de la
muestra o patrón a sembrar escrito en lápiz.
3) Sembrado de las muestras:
- Con un tubo capilar tomar la muestra que se va a sembrar.
- Tocando con el capilar depositar una pequeña gota de líquido sobre una de las
marcas numeradas de la placa, cuidando que el diámetro de las manchas no supere
los 4-5 mm. (Practicar antes con un papel de filtro). Secar con secador de pelo.
- Repetir 3 veces la operación de siembra y secado sobre el mismo punto de la placa.

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- En cada punto de la placa se sembrará una muestra diferente usando un capilar
limpio para cada siembra.
4) Corrida cromatográfica:
- Introducir la placa en la cuba rápidamente de modo que queden las siembras del lado
de la fase móvil.
Solvente de elución: n-butanol:ácido acético:agua (2:1:1)
5) Revelado:
- Pulverizar, cubriendo todo el cromatograma con la niebla del revelador.
Revelador: 1 ml de anilina y 1 g de clorhidrato de difenilamina en 50 ml de acetona con
10% de ácido fosfórico (usar recientemente preparado).

Cálculo del Rf:


Rf = distancia recorrida por la muestra / distancia recorrida por la fase móvil.
En el ejemplo del dibujo, para la mancha N° 4, el Rf será b / a.

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TRABAJO PRÁCTICO Nº 5
LÍPIDOS

1. REACCIÓN CON EL SUDAN III

Reactivos:
- Sudán lll. Disolución al 0,2%: a 200 mg de Sudán lll se añaden a 100 ml de etanol 70%
calentado en un baño María, se mezcla y se deja en reposo durante 24 hs por lo
menos.
- Aceite vegetal.
- Manteca.
- Margarina.
- Agua destilada.

Método:
Sobre un vidrio de reloj se aplica una gota de aceite, se añade una gota de Sudán lll y se
mezcla. Se observa la aparición de una coloración naranja de la mezcla

2. PRUEBAS PARA ÁCIDOS GRASOS:


Saponificación. Cuando se calientan aceites o grasas en presencia de álcali, se liberan ácidos
grasos y glicerol en un proceso que se conoce como saponificación.
Formación del jabón. El exceso de álcali presente reacciona con el ácido liberado formando la
sal de sodio o potasio, dando a la solución una apariencia jabonosa característica. Los jabones
son solubles en agua pero se precipitan añadiendo exceso de NaCl. Las sales de magnesio y
calcio también son insolubles y originan la nata que se forma cuando el jabón se agita en agua
dura.

Reactivos:
- Grasa animal (manteca, grasa vacuna).
- Aceite vegetal.
- KOH alcohólico (100 g/L).
- HCl (c).
- Fenolftaleína (10 g/l en alcohol).
- NaOH (0,1 M).
- NaCl ss.

Método:
Saponificación. En un tubo coloque grasa hasta una altura de aproximadamente 0,5 cm:
agregue KOH alcohólica para cubrir la grasa y deje hervir cuidadosamente por cerca de un
minuto. Agregue 10 mL de agua, hierva por 10 minutos más y enfríe. Agregue cuidadosamente

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HCl (c) hasta que la solución sea ligeramente ácida y remueva la capa de ácidos grasos que
aparece sobre la superficie del líquido. Caliente el ácido graso con agua y agregue álcali
lentamente hasta que se obtenga una solución clara; utilice esta solución en los ensayos para
la formación del jabón.
a. Acidifique con HCl. ¿Qué observa?
b. Sature la solución con NaCl y observe la aparición del jabón de sodio.

3. AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE COLESTEROL:


Se parte de 5 gramos de cerebro desmenuzado y se mezclan con 6 gramos de yeso en un
mortero hasta formar una pasta uniforme. Se pasa a una placa de vidrio y se espera a que se
seque (si es necesario se lleva a estufa a 37º C). En forma cuidadosa, si es posible
asegurándose con un embudo, se pasa el material pulvurulento obtenido a un tubo de ensayos
y se adicionan 6 ml de cloroformo mezclando con vórtex para luego filtrar por algodón. Sobre el
filtrado se realizan las siguientes reacciones:

3.1 Reacción de Schiff:


Tomar 1 mL del extracto obtenido y agregar 1 mL de H2SO4 (c) por la pared del tubo.
Observar en la interfase la formación de un anillo rojo.

3.2 Reacción de Liebermann - Burkhardt:


A 2 mL del extracto agregar 10 gotas de anhídrido acético y 2 gotas de H 2SO4 (c). Mezclar y
observar la variación de colores: rojo  violeta  azul  verde.

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TRABAJO PRÁCTICO Nº 6
PROTEÍNAS

Objetivo: extraer proteínas a partir de alimentos y realizar reconocimiento.

PARTE A. HARINA
Procedimiento:
 Pesar aproximadamente 20 g de harina y colocarla en el centro de un trozo de tela de
algodón.
 Tomar el lienzo por las puntas, encerrando la harina y mojarlo con agua de la canilla
para arrastrar el almidón contenido en la harina.
 Abrir la bolsita y juntar el residuo de gluten (proteína) con ayuda de una espátula.
 Pasar el residuo a un tubo de ensayo y agregar agua hasta 1 cm de altura.

PARTE B. GELATINA
Procedimiento:
 Preparar gelatina sin sabor (seguir las instrucciones del envase).
 Dejar enfriar.
 Una vez solidificada pasar una porción de la gelatina a un tubo de ensayo.
 Agregar agua hasta cubrirla y deshacerlo con una varilla.

PARTE C. HUEVO
Procedimiento:
 Abrir un huevo y separar la clara de la yema.
 Diluir la clara con 50 mL de agua destilada.
 Transferir 1 mL de solución de clara a un tubo de ensayo.

PARTE D. ENSAYO DE BIURET


Procedimiento:
A cada tubo que contiene proteína (de las obtenidas en la las partes A, B y C) y a un tubo con 1
mL de agua destilada agregar 1 mL de solución de biuret.

Materiales y reactivos:
 Tela de algodón.
 Harina de trigo.
 Tubos de ensayo.
 Gelatina sin sabor.

 Varilla de vidrio.

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 Huevo.
 Solución de biuret.

Observaciones:
Alimento Proteína principal Coloración con Biuret
Harina
Gelatina
Clara de huevo
Agua

Complejo azul violáceo

PARTE E. COAGULACIÓN DE LAS PROTEÍNAS


Procedimiento:
 Romper un huevo de gallina y descartar la yema.
 Tomar 1 mL de clara y realizar los siguientes ensayos, observando lo que ocurre:
a) Agregar 1 mL de HCl concentrado.
b) Agregar 1 mL de alcohol etílico.
c) Agregar 1 mL de NaOH 40%.
d) Calentar a baño maría a 100ºC.

 Tomar 3 mL de leche y realizar los siguientes ensayos, observando lo que ocurre:


a) Agregar 1 mL de HCl concentrado.
b) Agregar 3 mL de alcohol etílico.
c) Agregar 1 mL de NaOH 40%.
d) Calentar a baño maría a 100ºC.

Alimento Proteína HCl Alcohol NaOH Calor

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Huevo
Leche nueva
Leche vieja

PARTE F. CROMATOGRAFÍA DE AMINOÁCIDOS


Patrones: aminoácidos (Asp, Asn, Glu, Gln, Ser, Pro, Ala, Arg) en concentración 0,25% en
isopropanol : agua (10:90).
Solvente de corrida: n-butanol:ácido acético glacial:agua (3:1:1).
Revelador: ninhidrina 0,2% en acetona, recientemente preparada.

Materiales:
 Cromatofolios recubiertos con sílica gel.
 Cuba cromatográfica.
 Tubos capilares.
 Papel de filtro.
 Embudo.
 Erlenmeyer.
 Varillas de vidrio.

Procedimiento:
- Sembrar los patrones de aminoácidos realizando 5 a 10 toques.
- Exprimir una naranja y tomar 5 mL.
- Filtrar y agregar 15 mL de alcohol para precipitar las proteínas. Volver a filtrar.
- Sembrar en el cromatofolio con 3 a 4 toques.
- Siempre que se trabaje con aminoácidos hay que evitar tocar con los dedos la
superficie de las placas o del papel, puesto que la transpiración contiene aminoácidos.
- Realizar la corrida cromatográfica utilizando la fase móvil indicada.
- Revelado: pulverizar abundantemente con ninhidrina y colocar en estufa 5 minutos.

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TRABAJO PRÁCTICO Nº 7
CATALIZADORES

PARTE A. DESCOMPOSICIÓN DE H2O2 CON CATALIZADOR


INORGÁNICO

Procedimiento:
- Agregar a un vaso de precipitados 20 mL de agua oxigenada comercial.
- Agregar al vaso unos cristales de dióxido de manganeso.
- Realizar un blanco en otro vaso agregando 20 mL de agua destilada.

OBSERVACIONES
H2O2
H2O

PARTE B. DESCOMPOSICIÓN DE H2O2 CON CATALIZADOR


BIOLÓGICO. MODIFICACIÓN DE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA POR LA
TEMPERATURA

Procedimiento:
- Cortar daditos pequeños de papa (de unos 0.5 cm de lado).
- Hervir algunos de ellos (NO TODOS!!!).
- En un tubo de ensayo agregar 1 mL de H2O2 y un dadito de papa cruda.
- En otro tubo de ensayo agregar 1 mL de H2O2 y un dadito de papa hervida.

OBSERVACIONES
PAPA CRUDA
PAPA HERVIDA

PARTE C. MODIFICACIÓN DE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA SEGÚN LA


ACIDEZ DEL MEDIO

Procedimiento:
- Triturar un trocito de zanahoria junto con 5 mL de solución reguladora de pH 7 para
extraer la enzima del tejido vegetal.
- Filtrar y recoger el líquido obtenido.
- Tomar 3 tubos de ensayo y colocar:
TUBO

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1 1 mL de filtrado + 1 mL de NaOH 0.1 M
2 1 mL de filtrado + 1 mL de HCl 0.1 M
3 2 mL de filtrado

- Luego agregar a cada uno de los tubos 3 mL de H2O2.

TUBO OBSERVACIONES
1
2
3

Solución reguladora pH 7:
50 mL de KH2PO4 0.1 M (13 g/L) + 29 mL de NaOH 0.1 M

PARTE D. ACCIÓN DEGRADADORA


Procedimiento:
- Poner a germinar unos granos de maíz durante algunos días (hasta que tengan
raicillas).
- Preparar una solución de almidón 1%.
- Hervir un grano de maíz durante 5 minutos.
- Tomar tres tubos de ensayo y colocar:
TUBO
1 3 mL de solución de almidón + grano de maíz hervido trozado
2 3 mL de solución de almidón + grano de maíz germinado trozado
3 3 mL de solución de almidón + grano de maíz sin germinar trozado

- Agregar a cada tubo 3 gotas de reactivo de lugol y guardar los tubos en un sitio oscuro.
- Observar el aspecto de los tubos cada 5 minutos y registrar las diferencias de color y
justificar.

PARTE E. ENZIMAS EN EL JABÓN PARA LAVAR LA ROPA


E1: Gelatina
Proteasas – Técnica:
- Preparar gelatina como indica el fabricante. Dejar que solidifique.
- Tomar una porción de la misma y agregar 10 mL de agua.
- Agregar 5g de jabón en polvo.
- Incubar 1 hora a temperatura ambiente.

E2: Postre
Amilasas – Técnica:
- Tomar una porción de aproximadamente 50 g de un postre.
- Agregar una cucharada de jabón en polvo.
- Mezclar muy bien e incubar unas horas a temperatura ambiente.

QUÍMICA BIOLÓGICA – GUÍA DE TRABAJOS PRÁCTICOS 2009 21


PARTE F. INHIBICIÓN ENZIMÁTICA
Introducción:
Los vegetales contienen compuestos fenólicos tales como el aminoácido tirosina. Estos fenoles
pueden transformarse en catecoles por acción de la enzima fenol hidroxilasa, en presencia de
O2. A su vez, los catecoles pueden oxidarse por acción de otra enzima, la polifenol oxidasa, a
orto quinonas. Por su parte, estas últimas polimerizan y dan lugar a compuestos de color
oscuro llamados melaninas. Ambas enzimas utilizan al Cu2+ como cofactor.

FENOL  CATECOL  ORTO QUINONA    MELANINAS


L-Tyr L-Dopa Dopaquinona

1) Manzana – Técnica:
- Pelar una manzana y cortar 7 fetas.
- Tomar 2 fetas y colocarlas: una en estufa a 37°C y la otra en heladera a 4°C.
- Tomar 2 fetas y rociarlas con jugo de limón. Colocar una muestra en estufa a 37°C y la
otra en heladera a 4°C.
- Tomar 2 fetas y rociarlas con ácido acético al 5% (vinagre). Colocar una muestra en
estufa a 37°C y la otra en heladera a 4°C.
- Tomar una feta y calentarla a 100°C durante 5 minutos. Luego colocar en estufa a
37°C.

2) Banana – Técnica:
- Pelar una banana y cortar 7 fetas.
- Tomar 2 fetas y colocarlas: una en estufa a 37°C y la otra en heladera a 4°C.
- Tomar 2 fetas y rociarlas con jugo de limón. Colocar una muestra en estufa a 37°C y la
otra en heladera a 4°C.
- Tomar 2 fetas y rociarlas con ácido acético al 5% (vinagre). Colocar una muestra en
estufa a 37°C y la otra en heladera a 4°C.
- Tomar una feta y calentarla a 100°C durante 5 minutos. Luego colocar en estufa a
37°C.

4°C 37°C Limón Limón Vinagre Vinagre Hervida


Fruta
4°C 37°C 4°C 37°C 37ºC

Manzana

QUÍMICA BIOLÓGICA – GUÍA DE TRABAJOS PRÁCTICOS 2009 22


Banana

PARTE G. ENZIMAS PRESENTES EN MICROORGANISMOS

1) Catalasa – Técnica:
- Tomar con un palillo una colonia de Staphylococcus aureus y depositarla en un
portaobjetos.
- Realizar lo mismo con una colonia de Escherichia coli, depositándola en el
mismo portaobjetos.
- Agregar a cada una de las colonias una gota de H 2O2. Observar.

2) Oxidasa: prueba utilizada para la detección de la enzima citocromo-c-oxidasa,


presente en los géneros Pseudomonas, Neisseria, Moraxella, Vibrio, Aeromonas, entre
otros.
Técnica:
- Sobre un portaobjetos colocar un disco de oxidasa y humedecer con una gota
de agua. Observar el color inicial.
- Luego colocar una colonia de Pseudomonas aeruginosa tomada de una placa
de petri con un palillo. Observar el color.

IMPORTANTE: LOS PALILLOS Y PORTAOBJETOS DEBERÁN


DESCARTARSE EN UN FRASCO CONTENIENDO SOLUCIÓN DE
HIPOCLORITO DE SODIO.

QUÍMICA BIOLÓGICA – GUÍA DE TRABAJOS PRÁCTICOS 2009 23


TRABAJO PRÁCTICO Nº 8
FERMENTACIÓN ALCOHÓLICA

Introducción:
La sidra es una bebida elaborada y consumida desde hace cientos de años. Se obtiene a partir
de un jugo de manzana azucarado, el cual es fermentado por una levadura, Saccaromyces
cereviaciae. Este microorganismo fermenta los azúcares presentes en el jugo de manzana y
otros agregados artificialmente y como productos se obtiene etanol y CO 2. Es por esto que las
levaduras realizan fermentación alcohólica.

Objetivos:
- Fabricar sidra a partir de un jugo de manzana en presencia de levaduras.
- Evaluar las mejores condiciones para la obtención de sidra, en función de la cantida de
alcohol producido.

Técnica:
- Medir 250 mL de jugo de manzana y colocarlo en una botella.
- Pesar 1 g de levadura de cerveza y colocarlo en la botella.
- Agregar un sobrecito de azúcar (6 g).
- Cerrar la botella e incubar durante 5 días a 25° C.
- Otros grupos de trabajo deberán seguir el presente esquema:
Grupo Temperatura de Tiempo de Jugo de Azúcar Levaduras
incubación (°C) incubación (días) manzana
1 28 5 Sí Sí Sí
2 37 2 Sí Sí Sí
3 4 7 Sí Sí Sí
4 28 5 Sí No Sí
5 28 5 Sí No Sí

Determinación de la graduación alcohólica:


Este método consiste en determinar el índice de refracción del destilado alcohólico mediante el
uso del refractómetro de Abbe y posterior transformación a ° Gay Lussac mediante el uso de
tablas. También se puede determinar el grado alcohólico mediante el uso de areómetros
graduados en grados y décimas de grados Gay Lussac.

Técnica:
- Medir 200 mL de sidra en matraz aforado previamente enjuagado con la muestra.
- Verter el contenido del matraz en un tubo Kjeldahl, lavando el matraz con pequeñas
porciones de agua destilada.
- Neutralizar con NaOH 30% verificando con papel de pH.

QUÍMICA BIOLÓGICA – GUÍA DE TRABAJOS PRÁCTICOS 2009 24


- Destilar hasta recoger 150 mL, sobre 5 mL de agua destilada. Llevar a volumen final de
200 mL. Homogeneizar perfectamente.

Refractometría:
- Cargar el refractómetro con unas gotas del destilado.
- Leer el índice de refracción.
- Transformar el parámetro en ° Gay Lussac.

Anexo I: Código Alimentario Argentino.


Artículo 1085. - (Res Conj. SPRyRS y SAGPyA 87 y 566/04)
“Sidra Base es la bebida que resulta exclusivamente de la fermentación alcohólica normal del
jugo recién obtenido de manzanas sanas y limpias, de uso industrial, con o sin la adición de
hasta un 10% de jugo de peras obtenido en idénticas condiciones que el jugo de manzana y
fermentado en forma conjunta o separada. Su graduación alcohólica mínima será de 4,5% en
Vol. ±0,3 a 20°C."
Artículo 1085 bis – (Res Conj. SPRyRS y SAGPyA 87 y 566/04)
“Sidra es la sidra base, endulzada y gasificada. Su graduación alcohólica mínima será de 4,0%
en Vol. ±0,3 a 20°C.”

Anexo II: tabla de conversión de índice de refracción a % v/v de alcohol.


n % v/v n % v/v n % v/v n % v/v
alcohol alcohol alcohol alcohol
1,3333 0,7 1,3381 11,7 1,3484 31,0 1,3621 71,0
1,3336 1,5 1,3384 12,4 1,3498 33,7 1,3626 73,6
1,3339 2,3 1,3388 13,1 1,3511 36,4 1,3630 76,1
1,3342 3,0 1,3392 13,8 1,3524 39,1 1,3634 78,7
1,3345 3,7 1,3395 14,5 1,3535 41,8 1,3638 81,2
1,3348 4,5 1,3403 15,9 1,3546 44,5 1,3641 83,6
1,3351 5,2 1,3410 17,3 1,3557 47,2 1,3644 86,1
1,3354 5,9 1,3417 18,7 1,3566 49,9 1,3647 88,5
1,3357 6,7 1,3425 20,0 1,3575 52,6 1,3650 90,9
1,3360 7,4 1,3432 21,4 1,3583 55,3 1,3652 93,3
1,3364 8,1 1,3440 22,8 1,3590 57,9 1,3654 95,7
1,3367 8,8 1,3447 24,2 1,3598 60,6 1,3655 98,0
1,3370 9,5 1,3455 25,5 1,3604 63,2 1,3657 100,3
1,3374 10,2 1,3462 26,9 1,3610 65,9
1,3377 11,0 1,3469 28,2 1,3616 68,5

QUÍMICA BIOLÓGICA – GUÍA DE TRABAJOS PRÁCTICOS 2009 25


TRABAJO PRÁCTICO Nº 9
FERMENTACIÓN LÁCTICA

Introducción:
El yogur es un producto lácteo obtenido mediante la fermentación bacteriana de la leche. Si
bien se puede emplear cualquier tipo de leche, la producción actual usa predominantemente
leche de vaca. La fermentación de la lactosa (el azúcar de la leche) en ácido láctico es lo que
da al yogur su textura y sabor tan distintivo. A menudo se le añade fruta, vainilla, chocolate y
otros saborizantes, pero también puede elaborarse sin añadidos. Las bacterias lácticas que se
deben utilizar según el Código Alimentario Argentino son: Lactobacillus delbrueckii subsp.
bulgaricus y Streptococcus salivarius subsp. termophilus.

Técnica:
- Tomar una pequeña muestra de yogur comercial y realizar un extendido para
coloración de Gram.
- Medir 100 mL de leche fluida y calentar a 80°C durante 10 minutos. Este proceso se
denomina tyndalización.
- Enfriar la leche a 37°C.
- Agregar 4 g de leche en polvo.
- Agregar 6 g de azúcar y 10 g de yogur.
- Incubar a 44°C durante 3-4 horas.

Determinaciones de acidez:
- Tomar 10 mL de leche, agregar 2-3 gotas de fenolftaleína y titular con NaOH 0,1 N
hasta coloración rosada pálida que se mantenga más de 30 segundos.
- Tomar 10 mL de leche + 0.4 g de leche en polvo y proceder de igual forma.
- Tomar 10 mL de yogur comercial y proceder de igual forma.
- Una vez que se puso a incubar la leche, se deben tomar 10 mL de muestra cada 30
minutos y proceder de igual forma.

Cálculo: V x N)NaOH = mEq ácido láctico


PEq ácido láctico = 90.08
1 º Dornic = 0.01 % p/v ácido láctico

Microscopía:
Realizar sobre el extendido preparado una tinción de Gram. Los pasos son:

QUÍMICA BIOLÓGICA – GUÍA DE TRABAJOS PRÁCTICOS 2009 26


Fijar por calor Violeta de genciana
Lugol Lavar c/ H2O

Lavar c/ H2O Safranina Lavar c/ H2O Decolorante


Temp. Leche Leche Yogur M1 M2 M3 M4 M5


Incubación fluida f+p

4°C

28°C

37°C

44°C

Nota: expresar los valores de acidez en ° Dornic.

En total, la división deberá traer para la realización del TP:


 2 litros de leche.
 100 gramos de leche en polvo.
 100 gramos de azúcar.
 2 yogures de 200 mL enteros, firmes de vainilla o sabor natural.

Anexo I: Código Alimentario Argentino.


Artículo 576 - (Res Conj. SPyRS y SAGPA N° 33/2006 y N° 563/2006)
“Se entiende por Yogur o Yoghurt o Iogurte, en adelante Yogur, el producto incluido en la
definición 1) cuya fermentación se realiza con cultivos protosimbióticos de Lactobacillus
delbrueckii subsp. bulgaricus y Streptococcus salivarius subsp. thermophilus a los que en forma
complementaria pueden acompañar otras bacterias acidolácticas que, por su actividad,
contribuyen a la determinación de las características del producto terminado.”

QUÍMICA BIOLÓGICA – GUÍA DE TRABAJOS PRÁCTICOS 2009 27


TRABAJO PRÁCTICO Nº 10
IDENTIFICACIÓN BIOQUÍMICA DE ESCHERICHIA COLI

Introducción:
Las pruebas bioquímicas son muy importantes para la clasificación bacteriana. Estas pruebas
se basan en diferentes reacciones químicas que se realizan con el fin de clasificar las
bacterias. A pesar de su microscópico tamaño, las bacterias poseen una maquinaria metabólica
importante. Las pruebas bioquímicas permitirán diferenciar diferentes bacterias en función de
las diferencias metabólicas entre ellas.

Técnica:
- Se parte del cultivo realizado en ágar EMB de Levine, tomando como colonia
sospechosa la que tenga un fondo negro y presente brillo verde metálico característico.
- Tomar con un ansa una colonia sospechosa y sembrar en una placa de ágar nutritivo.
(OBTENCIÓN DEL CULTIVO PURO).
- Incubar 24-48 horas a 37 °C.
- A continuación se procederá a sembrar las diferentes pruebas bioquímicas:
1. Indol:
 Principio: El indol es uno de los productos de degradación metabólica del triptofano.
Las bacterias que poseen la enzima triptofanasa son capaces de hidrolizar y deaminar
el triptofano con producción de indol, piruvato y amoníaco. La prueba de indol está
basada en la formación de un complejo color rojo cuando el indol reacciona con el
grupo aldehído del p-dimetilaminobenzaldehído. Este es el principio activo del reactivo
de Kovac. Se debe utilizar un medio rico en triptofano.
 Técnica:
- Realizar una única punción en el centro del tubo de medio SIM, utilizando ansa recta.
- Incubar 24 horas a 37 °C.
- Transcurrido dicho lapso agregar 5 gotas de reactivo de Kovacs. Indol +: desarrollo de
color rojo fucsia vivo en la interfase luego de agregar el reactivo.
2. Rojo de metilo:
 Principio: La prueba del rojo de metilo es cuantitativa para la producción de ácido y
requiere microorganismos positivos que produzcan ácidos fuertes (láctico, acético,
fórmico) a partir de glucosa, por la vía de la fermentación ácida mixta.
 Técnica:
- Inocular en un caldo RMVP con un cultivo puro del microorganismo en estudio.
- Incubar 48-72 horas a 37 °C.
- Transcurrido dicho lapso, agregar 5 gotas de rojo de metilo. RM +: desarrollo de un
color rojo estable en la superficie del medio.
3. Prueba de Voges Proskauer:

QUÍMICA BIOLÓGICA – GUÍA DE TRABAJOS PRÁCTICOS 2009 28


 Principio: El piruvato, componente fundamental formado en la degradación
fermentativa de la glucosa, es metabolizado luego a través de varias vías, de acuerdo
con los sistemas enzimáticos que poseen las diferentes bacterias. Una de dichas vías
lleva a la producción de acetoína (acetilmetilcarbinol), un subproducto de reacción
neutra. En presencia de oxígeno atmosférico y de hidróxido de potasio al 40%, la
acetoína se convierte en diacetilo y el -naftol actúa como catalizador para revelar un
complejo color rojo.
 Técnica:
- Inocular en un caldo RMVP con un cultivo puro del microorganismo en estudio.
- Incubar 24 horas a 37 °C.
- Transcurrido dicho lapso, agregar 0,6 mL de -naftol al 5% y 0,2 mL de KOH al 40%.
VP +: desarrollo de un color rojo estable en la superficie del medio.
4. Citrato:
 Principio: La utilización de citrato por una bacteria se detecta en un medio con citrato
mediante la formación de subproductos alcalinos. El medio incluye citrato de sodio, un
anión, como única fuente de carbono y fosfato de amonio como única fuente de
nitrógeno. Las bacterias que pueden utilizar citrato también pueden extraer nitrógeno
de la sal de amonio, con producción de amoníaco (NH3), llevando a la alcalinización del
medio.
 Técnica:
- Inocular en un caldo citrato de Koser con azul de bromotimol con un cultivo puro del
microorganismo en estudio.
- Incubar 24-48 horas a 37 °C.
- Transcurrido dicho lapso observar el color del tubo. Citrato +: coloración azul por
alcalinización del medio.

Resultados:
Sulfuro Indol Motilidad RM VP Citrato
E. coli
Incógnita

Composición de los medios de cultivo utilizados:


SIM Medio:

Fórmula (en gramos por litro) Instrucciones

Tripteína 20.0 Suspender 30 g del polvo por litro de agua destilada.


Mezclar hasta disolver; calentar agitando y hervir
durante un minuto. Distribuir unos 4 ml en tubos de
Peptona 6.1 hemólisis y esterilizar en autoclave a 121°C durante
15 minutos. Solidificar en posición vertical.

Sulfato de hierro y amonio 0.2

Tiosulfato de sodio 0.2

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Agar 3.5

pH final: 7.3 ± 0.2

QUÍMICA BIOLÓGICA – GUÍA DE TRABAJOS PRÁCTICOS 2009 30


MR-VP Medio:
Fórmula (en gramos por litro) Instrucciones
Pluripeptona 7.0 Suspender 17 g del polvo por litro de agua destilada.
Glucosa 5.0 Calentar suavemente agitando hasta disolver.
Distribuir y esterilizar en autoclave a 118-121°C
Fosfato dipotásico 5.0 durante 15 minutos.
pH final: 6.9 ± 0.2

Simmons Citrato Agar:

Fórmula (en gramos por litro) Instrucciones

Citrato de sodio 2.0

Cloruro de sodio 5.0

Suspender 24,2 g del medio deshidratado por litro de


Fosfato dipotásico 1.0 agua destilada. Dejar reposar 5 minutos y mezclar
calentando a ebullición durante 1 o 2 minutos.
Distribuir en tubos y esterilizar en autoclave a 121°C
Fosfato monoamónico 1.0 durante 15 minutos. Enfriar en posición inclinada.

Sulfato de magnesio 0.2

Azul de bromotimol 0.08

Agar 15.0

pH final: 6.9 ± 0.2

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TRABAJO PRÁCTICO Nº 11
ANÁLISIS DE ORINA COMPLETA

IMPORTANTE: EL ANÁLISIS DE ORINA COMPLETA SE DEBE REALIZAR CON LA


PRIMERA ORINA DE LA MAÑANA

Objetivo: realizar el análisis fisicoquímico y microscópico de la orina.

PARTE A: ANÁLISIS FISICOQUÍMICO


Procedimiento:
- Introducir la tira reactiva en el frasco de modo que se moje completamente con la
muestra de orina.
- Leer los parámetros medidos en los tiempos indicados.

PARTE B. ANÁLISIS MICROSCÓPICO


Procedimiento:
- Cargar cuidadosamente un tubo cónico para centrífuga con la muestra de orina.
- Introducir los tubos en la centrífuga de modo de que queden equilibrados (muy
importante).
- Encender el aparato y centrifugar las orinas durante 15 minutos a 2500-3000 rpm.
- Descartar el sobrenadante dejando unas gotas de líquido.
- Sobre un portaobjetos, volcar el contenido del tubo previamente homogeneizado y
cubrir con cubreobjetos.
- Mirar en el microscopio a 400x y 1000x.

PARÁMETRO VALOR PARÁMETRO VALOR


Color Bilirrubina
Aspecto Urobilinógeno
Densidad Leucocitos
pH Hemoglobina
Proteínas Nitritos
Glucosa Acetona

EXAMEN MICROSCÓPICO DEL SEDIMENTO

Células: Leucocitos:
Piocitos: Hematíes:
Cristales: Cilindros:
Filamentos mucosos:

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Cristales:

Células:

QUÍMICA BIOLÓGICA – GUÍA DE TRABAJOS PRÁCTICOS 2009 33

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