Laboratorio #1: “Extracción de ADN”

Integrantes: Marianna Zea, Ana Gabriela Escobar, Valentina Rojas, Claudia Veroy, Diego
Rodríguez, Diego Hernandez

12B

Biología

Prof. Nicanor Morales

Fecha de entrega: 12/4/2019

 Extracción de ADN
Materiales
1. Licuadora
2. Palillos
3. Cuchillo
4. Frutas o vegetales
5. Hígado de res o pollo
6. Detergente lavavajillas
7. Agua destilada
8. Sal (NaCl)
9. Zumo de papaya o piña
10. Alcohol de 96 grados muy frio
11. Vasos precipitados
12. Tubos de ensayo
13. Papel filtro

Procedimiento
1. Primero, elegimos las muestras de las cuales vamos a extraer el ADN. (cebolla,
papaya y piña).
2. Cortamos cada una uno de los ingredientes en pequeños trocitos.
3. En un vaso agregamos 3/4 de agua destilada, 3 cucharaditas de lavavajillas
(equivalente a 3 ml), más una cucharadita de sal.
4. Mezclamos esta solución con el material que vayamos a degradar.
5. Licuamos el conjunto en intervalos de 30 segundos consecutivos.
6. En un tubo de ensayo, colocamos un embudo con papel filtro y colocamos la mezcla
esperando a que traspase el extracto de la muestra en donde se encuentra el ADN,
con propiedades de la célula
7. Al tubo de ensayo con el extracto se le añaden 2 ml de jugo de piña, agitándolo por
30 segundos para mezclar bien.
8. Se añade un volumen de alcohol muy frío equivalente al volumen del extracto
filtrado de forma cuidadosa haciéndolo resbalar por las paredes del tubo de ensayo
para formar una capa de alcohol sobre el filtrado.
9. Dejar reposar por unos dos o tres minutos hasta observar que se forme una
mucosidad blanquecina en forma de espiral, esa mucosidad viene siendo el ADN.
10. Por último, con un palillo extraemos el ADN con un palillo y lo colocamos en un
papel.

Desarrollo de las preguntas

1. ¿Qué función tiene el NaCl en este procedimiento?

R/ Antes de licuar la mezcla, se le coloca sal (NaCl) al agua destilada con detergente, ya
que, esto hace posible la ruptura de la membrana plasmática, nuclear e incluso la pared
celular.

Químicamente, las hebras de ADN están hechas de cargas negativas, es decir, que se
repelen. La sal está compuesta de cargas negativas y positivas. Entonces, las cargas
negativas del ADN se unen a las cargas positivas de la sal reduciendo las posibilidades
de disminución del ADN.

2. ¿Qué función tiene el detergente en este procedimiento?

R/ El detergente posee lauril sulfato de sodio. Este químico permite limpiar las
sustancias en la solución, rompiendo moléculas de proteínas, lípidos y ARN. Este actúa
de la misma manera en el proceso de extracción de ADN, ya que se da la separación de
grasas y proteínas que constituyen las membranas que rodean la célula y el núcleo,
permitiendo que se libere el ADN.
3. Que función tiene el alcohol en este procedimiento?

R/ El ADN es una molécula muy larga y tiende a agruparse y de ahí viene la facilidad
para extraerla. Una vez se filtra la mezcla en el tubo de ensayo, se añade alcohol para
aislar el ADN de las enzimas que puedan dañarlo o disminuirlo. Por este motivo
nuestras hebras de ADN comienzan a hacerse visibles en la interfase entre la mezcla y
el alcohol, además de permitirnos distinguirlo, el alcohol separa el ADN de otros
componentes celulares, los cuales quedan en la solución acuosa.
4. ¿Por qué el ADN en solución se precipita en presencia de alcohol frio?

R/ Cuando el ADN se encuentra en presencia del alcohol frio, se desenrolla y se

precipita entre el alcohol y la mezcla filtrada (ya que el ADN se puede disolver en
agua). El alcohol permite visualizar de mejor manera el ADN y separarlo de otros
componentes celulares debido a que en la mezcla el alcohol frio es el componente
añadido que sube hacia la parte superior de la mezcla.
5. ¿Cuál es la función del jugo de piña?

R/ El jugo de pina contiene proteínas llamadas bromelaina y proteasas cuya función es

romper las proteínas que puedan dañar o degradar el ADN.

El zumo pina también contiene enzimas que, al igual que las bromealinas y proteasas,
atacan las proteínas de las células, lo que permite romperlas y separarlas del ADN.

6. ¿Es puro el ADN extraído en esta forma? Explique su respuesta.

R/ Si, debido a que la extracción del ADN se realizó con el detergente que posee el
químico lauril sulfato de sodio, el cual disuelve las grasas y contiene enzimas que
permiten la salida al ADN, de manera pura al exterior. Esto quiere decir que, la
extracción de ADN no se dará siempre de forma pura si no se agregan ciertas enzimas,
que en el caso de nuestro laboratorio, si utilizamos.
7. ¿Cómo podrías cuantificar la cantidad de ADN de tu muestra?

R/ el ADN puede cuantificarse de diversas técnicas entre las cuales podemos

mencionar:

 Análisis de la absorción UV: consiste en medir con un espectrofotómetro la

absorbencia de luz, es decir radiación electromagnética en una determinada
longitud de onda, la de 260 nm, una radiación completa dentro de la franja la luz
ultravioleta. Esta es proporcional a la cantidad de ADN presente en una muestra,
de esta manera se puede cuantificar el ADN y es una manera indirecta de
hacerlo.
 Técnica por gel de electroforesis: este es el el método más recomendable para
cuantificar la cantidad de ADN en una muestra mediante la visualización del gel
de electroforesis en el cual se colocan las muestras de ADN.
Este método consiste en la preparación de una cámara de electroforesis
colocando las muestras que se desean evaluar. En este método la estimación se
realiza contrastando intensidades de luz entre las muestras, realizándolo
visualmente con el apoyo de algún programa computacional que contraste
intensidades de color.

Análisis de absorción de UV

Técnica de gel de electroforesis