Tema: Métodos de control de crecimiento de microorganismos

Emerson Fernando Ávila Rodríguez

Cód. 201611220

Los efectos inhibidores de las nano partículas de plata, iones de plata, y coloides
cloruro de plata sobre el crecimiento microbiano

Autores: Okkyoung Choi, Kathy Kanjun Deng, Nam-Jung Kim, Louis Ross Jr., Rao Y.,
Surampalli, Zhiqiang Hu.
Objetivo: Evaluar el impacto de importantes especies de AG como los AG NPs, los iones AG+ y
los coloides de AgCl sobre el crecimiento heterotrófico y autótrofo.
Resumen:

Actualmente En la actualidad es muy poco lo que se sabe sobre los efectos negativos de las nano
partículas de plata (Ag NPs) en tratamientos de aguas y el medio ambiente. Se sabe, sin embargo,
que las nano partículas tienen una amplia gama de aplicaciones debido a sus propiedades
antimicrobianas eficaces, no obstante, es altamente toxico para una amplia variedad de organismos
incluyendo bacterias. Se cree que los iones de Ag afecta a la pared celular especialmente a las
bacterias ocasionando un daño en las enzimas celulares y posteriormente la muerte.

En los sistemas de tratamiento de aguas residuales los microorganismos autótrofos y heterótrofos

son muy importantes ya que son responsables de la nitrificación, la descomposición orgánica y de
nutrientes, es por ende que las investigaciones en torno a la inhibición del crecimiento microbiano
por Ag son de suma importancia.

Las nano partículas de Ag y coloides de AgCl se sintetizaron y se caracterizaron mediante

espectroscopia y microscopia electrónica. Los efectos inhibitorios sobre los microorganismos
autótrofos y heterótrofos se determinaron mediante microtitulación y ensayos respirométricos.
La microscopía electrónica de barrido ambiental (ESEM) se aplicó como una técnica
complementaria para examinar las interacciones microbiana / nanopartícula.
Se usó una solución de nitrato de plata como fuente de iones Ag+, para preparar los coloides de
cloruro de plata se mezcló a 700rpm 1ml de 14mM de nitrato de plata y cloruro de sodio 1ml de
18mM con 18ml de agua.

Las bacterias autótrofas, nitrificantes mixtas se cultivaron en un reactor de tanque agitado

alimentado con un medio inorgánico que contenía amonio como la única fuente de energía. Se
añadió carbonato de calcio para mantener el pH.
La bacteria heterótrofa fue la Escherichia coli PHL628-gfp. La cepa se cultivó durante la noche en
un agitador mecánico (200 rpm) en un medio rico en nutrientes.

El crecimiento autotrófico deducido de las tasas de captación de oxígeno debidas a la oxidación

del amoníaco se midió por triplicado mediante un ensayo respirométrico por lotes. En donde las
suspensiones bacterianas nitrificantes se modificaron con Ag Nps, Ag+ y AgCl y se airearon con
gas oxígeno puro. El grado de inhibición del crecimiento microbiano autótrofa se infiere de la
diferencia entre la velocidad medida específica de oxígeno la captación en ausencia y presencia de
la especie de Ag.
Para evaluar los efectos inhibitorios de las especies de Ag en el crecimiento heterótrofos, E. coli
PHL628-GFP se hizo crecer en caldo nutritivo (BBL) a temperatura ambiente. Para el ensayo de
fluorescencia de microtitulación fl, se pipetearon en ocho pocillos paralelos de 96 microplatos en
donde se añadieron las soluciones de Ag Nps, Ag+ y AgCl, posteriormente las células son
expuestas al aire ambiente para apoyar su crecimiento. El crecimiento microbiano depende del
tiempo asociado con la oxidación de sustratos orgánicos en los 96 microplatos.

La interacción microbiana / nanopartícula se visualizó usando la FEI Quanta 600F SEM en el

modo ambiental (ESEM) que permite a las muestras orgánicas para ser examinadas sin la
aplicación de un revestimiento conductor antes de la imagen.

Se comprobó que todas las especies de AG probadas, AG NPs presentó la mayor inhibición en el
crecimiento bacteriano nitrificante. Curiosamente, los coloides AgCl recién preparados con un
tamaño medio de 0,25 mm también inhibían la nitrificación tan eficazmente como el Ag+.

Consistente con los resultados del estudio de crecimiento autótrofo, AG NPs inhibió el crecimiento
de E. coli. Aunque no se observó inhibición en concentraciones de AG NP por debajo de 1,0 mM,
la tasa de crecimiento heterotrófico se redujo significativamente en un 55%, ya que las
concentraciones de AG NP aumentaron a 4,2 mM. Sorprendentemente, el ion plateado era la
especie más tóxica para inhibir el crecimiento heterotrófico.

El ensayo respirométrico desarrollado y el ensayo de micro titulación automática empleado en esta

investigación son adecuados para la evaluación de la toxicidad de nano materiales a los
microorganismos. Con estos métodos se comprobó en el artículo que altas concentraciones de Ag
Nps, Ag+ y AgCl inhiben fuertemente el crecimiento, atacando la pared celular de los
microorganismos y causándoles posteriormente la muerte.

Este articulo tiene una gran aplicación a la ingeniería ambiental debido a que es evidente que las
partículas de nanoplata llegan a ser considerablemente toxicas para microorganismos nitrificantes
esto ambientalmente supone un gran peligro para las PETAR. Hay que tener en cuenta que los
microorganismos nitrificantes son de soma importancia en los actuales sistemas modernos de aguas
residuales. También aporta en gran medida a nuestro tema de exposición debido a que es posible
controlar el crecimiento de microorganismos a través de nano partículas de plata y por ende puede
suponer un gran método de inhibición a la bacteria E. coli.