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ECOTOXICOLOGIA

DEFINICIONES:

 Es la ciencia que estudia los efectos tóxicos de sustancias químicas y agentes


físicos sobre los organismos vivos, especialmente sobre poblaciones y
comunidades dentro de ecosistemas definidos. Incluye el estudio de los caminos
de transferencia de estos agentes y sus interacciones con el ambiente (TRUHAUT,
1977; BUTLER, 1978)

 Es la ciencia que investiga los efectos de sustancias sobre los organismos. El


peligro sobre las poblaciones de animales y plantas puede ser determinado
mediante el uso de datos existentes, tomados del ambiente (Ecotoxicología
retrospectiva) o mediante el desarrollo de ensayos específicos (Ecotoxicología
prospectiva) (RUDOLPH and BOJE, 1986)

 Es la ciencia que se propone la la evaluación, el monitoreo y la predicción del


destino y efectos de xenobióticos en el ambiente (MORIARTY, 1988)

 Es la ciencia que intenta predecir los impactos de las sustancias químicas sobre
los ecosistemas (LEVIN et al., 1989)

 Es el estudio de los efectos adversos o dañinos sobre los ecosistemas (WALKER et


al., 1996)

ECOTOXICOLOGIA

OBJETIVOS:

 Se propone la evaluación, monitoreo y predicción del destino y los efectos de


xenobióticos en el ambiente (MORIARTY, 1988)

 Está motivada por el deseo de mantener las estructura y función naturales de los
ecosistemas INTEGRIDAD DEL ECOSISTEMA (HARRIS et al., 1990)
[Los ecosistemas son dinámicos; luego, puede resultar no natural mantener el
“status quo”]
 La investigación ecotoxicológica resulta ser también la investigación del
ecosistema (MATHES et al., 1991)

 Se propone proveer una base científica que permitirá que las sustancias sean
evaluadas con una cantidad razonable de esfuerzo y costo. La información
obtenida provee la base para evaluaciones que permitan determinar qué
sustancias podrán ser liberadas al ambiente, cuáles de ellas serán
ambientalmente tolerables y n qué cantidades (RÖMBKE and MOLTMANN, 1997)

ECOTOXICOLOGIA

Es el estudio de la relación dosis o concentración / efecto de tóxicos liberados al


ambiente sobre los sistemas bióticos incluyendo los niveles de organización
inferiores y superiores al nivel de organismos

DAÑO AL ECOSISTEMA

 Involucra tanto la estructura como la función del sistema


 La función sólo es posible si se considera la estructura
 La estructura y la función no pueden ser consideradas aisladamente
 Importancia de las relaciones tróficas (transferencia de energía y nutrientes)

TOXICOLOGIA Y ECOTOXICOLOGIA

TOXICOLOGIA:

 Introducción directa del tóxico en el organismo


 Focaliza su atención sobre una única especie, el hombre
 Dosis (DL, DE - tiempo)
ECOTOXICOLOGIA:

 Introducción del tóxico en el medio


 Focaliza su atención sobre toda la biota (estructura y función del ecosistema)
 Considera los procesos de:
 Transformación
 Degradación
 Secuestración
 Redistribución
 Bioacumulación
 Concentración (CL, CE - tiempo)

TOXICOLOGIA ECOTOXICOLOGIA

COMPUESTO A SER ENSAYADO

ADMINISTRACION

A través del ALIMENTO, INYECCION Introducción en el MEDIO


INHALACION (DOSIS) DE ENSAYO
(CONCENTRACION)

PARTICION
TRANSFORMACION
DEGRADACION en el medio

CAPTURA por organismos

TRANSPORTE - METABOLISMO
dentro de organismos

REACCION CON EL SITIO SENSIBLE O BLANCO


en organismos
EFECTOS

expresados por el ORGANISMO expresados por


ORGANISMOS

expresados por

POBLACION

expresados por
COMUNIDAD

expresados por
ECOSISTEMA

QUIMICA AMBIENTAL

La detección de una sustancia no es evidencia de sus efectos potenciales. Su


relevancia ecotoxicológica es sujeto de controversia.

 Aporta evidencia cuantitativa de la presencia de la sustancia potencialmente


tóxica = ANALISIS DE RESIDUOS

 Estudia los mecanismos y modelos de transporte, el destino final y el impacto de


los xenobióticos en el ambiente abiótico (KORTE, 1980, 1987)

Centra su atención en la sustancia química, su ingreso, presencia (concentración),


transporte, destino y procesos de transformación en el medio abiótico (BOURDEAU
et al., 1989)

Se centra más directamente en el destino de los productos químicos desde el


momento de su aplicación hasta que alcanzan a su receptor biológico (STEINEMANN
et al., 1990)

ECOTOXICOLOGIA (en sentido técnico):

 Estudia los efectos (a nivel infraindividual, individual, supraindividual),


mecanismos de acción y transporte, metabolismo y mecanismos de
detoxificación de los xenobióticos sobre el medio biótico
DEFINICIONES

ECOTOXICOLOGIA ACUATICA:

 Es el estudio cuali y cuantitativo de los efectos adversos de


xenobióticos sobre los ecosistemas acuáticos

CONTAMINANTE:

 Sustancia introducida en el ambiente como resultado, por lo menos en


forma parcial, de la actividad humana y que produce efectos adversos
no deseados sobre los organismos individuales y sobre el ecosistema

ECOTOXICOLOGIA

 ECOTOXICOLOGIA PROSPECTIVA O PREDICTIVA :


 Evaluación de la toxicidad antes de la producción y comercialización del
producto

 ECOTOXICOLOGIA RETROSPECTIVA :
 Evaluación de la toxicidad ante la indicación cierta o sospecha de que el
xenobiótico produce efectos adversos sobre el ecosistema

 OBJETIVOS DEL ENSAYO DE TOXICIDAD :

 Investigación básica
 Criterio de calidad de agua
 Evaluación del impacto ecotoxicológico o del riesgo
 Monitoreo de un cuerpo de agua

 IMPACTO ECOTOXICOLOGICO:
 Interacción entre el agente tóxico y el sistema biótico que conduce a la
interrupción de la función armónica del sistema
 Cadena causal: agente - receptor - efecto
 Se manifiesta cuando se exceden las variaciones normales de las funciones
del sistema

DEFINICIONES

TOXICIDAD:
 Es la capacidad de una sustancia de causar algún efecto nocivo sobre
organismos vivos

 Depende de:
 Cantidad administrada o absorbida
 Vía de ingreso al organismo
 Distribución a lo largo del tiempo después de su administración
 Naturaleza y severidad del daño producido
 Tiempo necesario para producir el efecto

RIESGO:
 Es la frecuencia esperable de efectos adversos como consecuencia de la
exposición al xenobiótico

SEGURIDAD:
 Se establece sobre la base del riesgo socialmente “aceptable”, considerando
las frecuencias esperadas de los efectos adversos y de su severidad sobre el
hombre y el ecosistema
Ecosistemas

Composición de la comunidad

Cambios en la población

Respuestas a nivel de organismo individual

Cambios fisiológicos

Cambios bioquímicos

Contaminante

Aumento del tiempo de respuesta

Aumento de la dificultad de vinculación a productos químicos específicos

Aumento de la importancia ecológica

Relaciones de vinculación entre respuestas de diferentes niveles de organización

NIVELES DE ORGANIZACION BIOLOGICOS


Características Estructurales y Funcionales

NIVEL ESTRUCTURA FUNCION

Descripción de formas en ciertos Evaluación durante un


segmentos de tiempo prolongado período de tiempo

CELULAS / Moléculas, membranas, tejidos, Crecimiento, metabolismo,


ORGANOS caminos metabólicos, tipos de conversión energética,
células, tipo de órganos detoxificación

ORGANISMO Especie, habitat, edad, estadío, Metabolismo, crecimiento y


sexo desarrollo, reproducción,
salud, mortalidad,
concentración en tejidos,
comportamiento

POBLACION Presencia, número de individuos, Fertilidad, reproducción,


densidad, dispersión, pirámide de eficiencia / producción
edades, relación de sexos

COMUNIDAD Número y composición de especies, Regulación, función


relaciones de dominancia

ECOSISTEMA Ubicación geográfica, clima, tipo, Resiliencia, estabilidad.


sucesión, equilibrio Degradación,, filtración,
producción primaria,
bioretención
TOXICO

 Es el agente que puede producir un efecto adverso


 Daño referido a la estructura y función del sistema
 La introducción puede ser:
 deliberada (efluentes)
 accidental (derrames)
 El sitio de liberación es:
 no puntual
 puntual
 La cantidad liberada debe superar un nivel umbral para que se manifieste el
efecto
 Se establece la relación concentración / respuesta
 Duración de la exposición
 Ensayos de toxicidad

TIPOS DE TOXICOS

 Según su modo de acción:

 No selectivos

 Selectivos
 Dificultad para establecer interpolaciones entre especies
 Mecanismos:
 Presencia o ausencia de sitios receptores
 Alteración en los procesos de distribución del tóxico
 Relaciones estructura / actividad (QSAR)
TIPOS DE CONTAMINANTES

● IONES INORGANICOS
● Metales pesados : no biodegradables
● Aniones: nitratos
● Fosfatos

● COMPUESTOS ORGANICOS
● Hidrocarburos
● Alcanos, alquenos, alquinos
● Aromáticos
● Bifenilos policlorados (PCBs)
● Dibenzodioxinas policloradas (PCDDs)
● Dibenzofuranos policlorados (PCDFs)
● Bifenilos polibrominados (PBBs)
● Plaguicidas
● Detergentes
● Clorofenoles

● COMPUESTOS ORGANOMETALICOS

● ISOTOPOS RADIOACTIVOS

● GASES
● Ozono
● Clorofluorocarbonos (CFCs)
● Oxidos de carbono: CO2
● Oxidos de nitrógeno: NO, NO2, NOX
● Oxidos de azufre: SO2
CLASIFICACION DE PLAGUICIDAS

● Según organismo blanco


PLAGUICIDA ORGANISMO BLANCO

Acaricidas Acaros y termitas

Algicidas Algas

Bactericidas Bacterias

Fungicidas Hongos

Herbicidas Plantas, usualmente malezas terrestres o acuáticas

Insecticidas Insectos

Molusquicidas Moluscos (caracoles y babosas)

Nematicidas Nematodes (parásitos externos)

Rodenticidas Roedores

Termiticidas Termitas

Según tipo de formulación


PLAGUICIDA CARACTERISTICAS

Sprays Insecticidas, herbicidas o fungicidas como concentrados


emulsificables, líquidos miscibles en agua, polvos solubles en
agua (mojables), soluciones oleosas

Polvos Insecticidas y fungicidas como agentes no diluídos,


aerosoles de polvos

Granulados Insecticidas, herbicidas y algicidas bajo la forma de un


“carrier” (transportador) inerte impregnado con el plaguicida

Coatings Insecticidas y fungicidas para tratamiento de semillas

Aerosoles Insecticidas. Repelentes y desinfectantes bajo la forma de


spray, para aplicación en interiores

Fumigantes Líquidos evaporables o gases para tratamiento de suelos y


control de plagas en almacenajes con efecto nematicida e
insecticida

Cebos Prácticamente, sin liberación del i.a. en el ambiente; el


tóxico es ingerido por el organismo blanco (insectos,
moluscos y roedores) atraído por el señuelo

Formulaciones de Insecticidas microencapsulados, lacas para pinturas y


liberación lenta bandas de resina para uso en interiores

● Según estructura química

INSECTICIDAS HERBICIDAS FUNGICIDAS

● Organoclorados Algunos criterios usados para la ● Inorgánicos


(hidrocarburos clorados) clasificación: (Sulfuro, cobre o
mercurio)
● Organofosforados ● En relación a la época de
(ésteres de ácido siembra del vegetal a ser ● Orgánicos
fosfórico) protegido (ditiocarbamatos)

● Carbamatos ● En relación al mecanismo de ● Sistémicos


exposición (vía suelo u hojas) (bencimidazoles)
● Piretroides naturales y
sintéticos ● En relación al modo de acción ● Antibióticos
(herbicidas de contacto,
● Dinitrofenoles sistémicos) (Existe gran
heterogeneidad
● Organotinas ● En relación a la estructura química)
química:
● Microbianos
● Acidos fenoxialifáticos

● Nitroanilinas

● Ureas sustituídas

● Carbamatos y tiocarbamatos

● Triazinas (heterocíclicos
nitrogenados)

● Derivados del fenol y


dinitrofenoles

BIODISPONIBILIDAD DE TOXICOS

 En solución

 Adsorbidos sobre:

 Sólidos en suspensión
 Sedimentos
 Biota

 Incorporados a la biota

CONCENTRACION DE TOXICOS EN EL AMBIENTE

Concentración TOXICO
Propiedades físicas
Transporte Propiedades
químicas
Fuentes
Tasa de ingreso

Transformación ECOSISTEMAS
Propiedades físicas
Destino Propiedades
químicas

TRANSPORTE
 Involucra, generalmente, múltiples medios: aire, agua, suelo
 Numerosos modelos, desde difusión simple a ecuaciones
multidimensionales complejas

 AGUA:

 Varios modelos distintos: físiscos, matemáticos, etc.

 Caracterizados por:
 Simulación de movimientos del agua,
 Concentración o tasa de carga del contaminante

 Dimensionalidad:
 una (mayoría)
 dos (algunos)
 tres o más (muy pocos)

MEDIOS Y COMPARTIMIENTOS AMBIENTALES

MEDIO COMPARTIMIENTOS

AIRE Atmósfera
● Partículas en aire
● Aerosoles
● Nubes (vapor)
● Biota

AGUA Aguas superficiales


(MEDIO ACUATICO) ● Sedimentos
● Sólidos en suspensión
● Agua subterránea
● Biota

● Ambiente marino
● Ambiente dulceacuícola
● Ambientes salobres

TIERRA Suelo
(MEDIO TERRESTRE) ● Agua retenida entre los poros del suelo
● Atmósfera del suelo
Vegetación superficial
● Biota del suelo

PRINCIPALES RUTAS DE INGRESO DE CONTAMINANTES ORGANICOS EN LOS


ORGANISMOS

TIPO DE RUTA DE INGRESO FUENTE DE CONTAMINANTES


ORGANISMO
Sistema digestivo Alimento y agua ingeridos
Vertebrados
Terrestres Piel Superficies contaminadas

Pulmones Aerosoles y partículas en aire


Vapor; gotas y partículas en aire
Invertebrado Tracto alimentario Alimento y agua
s terrestres
Cutícula (insectos) Superficies contaminadas
Paredes del cuerpo (lombrices) Ambiente contaminado (suelo)

Tráqueas (artrópodos), vías Gotas y partículas en aire


aéreas
Peces Branquias Contaminantes disueltos o
suspendidos en agua y
sedimentos

Sistema digestivo Alimento


Mamíferos Sistema digestivo Alimento
acuáticos y Cantidades pequeñas de agua
aves ambiental o agua ingerida (aves)

Anfibios Sistema digestivo Alimento


Cantidades pequeñas de agua
ingerida

Piel Contaminantes disueltos o


suspendidos en agua y
sedimentos
Invertebrado Tracto alimentario Alimento
s acuáticos Agua ingerida

Superficies respiratorias Contaminantes disueltos o


suspendidos en agua y
sedimentos
Plantas Hojas Contaminantes en gotas o
partículas
Vapores

Raíces Contaminantes disueltos en agua


del suelo
CRITERIOS PARA EL ESTABLECIMIENTO DE PRIORIDADES EN LA EVALUACION DE
TOXICOS

TIPOS DE XENOBIOTICOS:
 Consumidos directamente por el hombre
 Liberados directamente al ambiente
 Contaminantes de otros productos

CARACTERISTICAS:
 Indicación cierta o sospecha de alta toxicidad
 Alta persistencia en el ambiente
 Capacidad para inhibir mecanismos de detoxificación de organismos
vivos
 Acumulación potencial en la biota y en el ambiente
Tipo y tamaño de las poblaciones potencialmente

DEFINICIONES

 DOSIS: Es la cantidad de sustancia administrada a un organismos, expresada


como unidad / peso corporal

 CONCENTRACION: Es la cantidad de sustancia aplicada en el medio, expresada


como unidad de peso o volumen / volumen del medio

 EFECTO: Es el cambio biológico producido tanto en el nivel de organismo


individual como en niveles de organización inferiores o superiores al
individuo, asociado a la exposición al tóxico

 RESPUESTA: Proporción de la población expuesta al tóxico que manifiesta el


efecto definido

 EFECTO CUANTAL: No medible mediante una escala de intensidad o severidad


graduada; se expresa como “presente” o “no presente”

EFECTO NO CUANTAL: Medible mediante una escala de intensidad graduable


EFECTOS

AGUDO:
 Corto tiempo de exposición (horas, días)
 Severidad (mortalidad)
 Determinación de la concentración que causa la mortalidad del 50% de la
población expuesta (CL50)

CRONICO, SUBCRONICO:
 Exposición simple o exposiciones repetidas de largo tiempo de duración
 Tiempo de aparición de los efectos
 Efectos seleccionados:
 Letal o subletal
 Cambios en el comportamiento
 Cambios fisiológicos
 Cambios bioquímicos
 Cambios histológicos
 Reversible - irreversible (ensayos de recuperación)
 INTERACCION por exposición a mezclas de tóxicos

 EFECTO LETAL:
 Causa la muerte por acción directa como consecuencia de la exposición a
una determinada concentración del agente tóxico

 EFECTO SUBLETAL:
 Se produce por debajo del nivel que causa la muerte directamente, como
resultado de la exposición a una determinada concentración del agente
tóxico

EFECTOS

 CURVA CONCENTRACION-EFECTO:
 Expresa la relación entre concentración y magnitud de un efecto
determinado, tanto a nivel individual como poblacional

 CURVA CONCENTRACION-RESPUESTA:
 Expresa la relación entre concentración y proporción de individuos que
responden a un efecto determinado

MEZCLA DE AGENTES TOXICOS

La acción conjunta puede ser:


 ADITIVA:
 Magnitud del efecto o respuesta numéricamente igual a la suma de
los efectos o respuestas de tóxicos individuales
 COMBINADA:
 Los tóxicos producen efectos diferentes o tienen distintos modos de
acción
 MAYOR QUE LA ADITIVA - SINERGISMO:
 La toxicidad de la mezcla es mayor que la esperada por la simple
suma de la toxicidad de los tóxicos individuales
 MENOR QUE LA ADITIVA - ANTAGONISMO:
 La toxicidad de la mezcla es menor que la esperada por la simple
suma de la toxicidad de los tóxicos individuales

CRITERIO PARA LA SELECCION DE EFECTOS

 Inequívoco
 Relevante
 Rápidamente observable
 De fácil descripción
 Mensurable
 Biológicamente significativo
 Reproducible
 “Screening tests”: mortalidad
 Subletalidad:
 Crecimiento
 Reproducción
 Cualitativo
 Cuantitativo
 Se establecen como índices de toxicidad:
 CL50,CE50 - tiempo
TEMPORAL SCALE

100000 years CAMBIO


CLIMATICO
10000 years

1000 years ROUTINE ACID


EFFLUENT DEPOSITIO
S N
100 years

10 years

1 year PESTICIDE
USE
1 month SPILLS

1 day PESTICIDE APPLICATIO


N
1 second 1 μm 1 mm 1m 1 km 1000 km 10000 km

SPATIAL SCALE

ARRANGEMENT OF A VARIETY OF ANTHROPOGENIC HAZARDS ON SPATIAL AND TEMPORAL SCALES (Suter, 1994)
TEMPORAL SCALE

100000 years REGIONAL


DYNAMICS
10000 years ECOSYSTE
M
DYNAMICS
1000 years MICRO-
ORGANISM
POPULATIO
N
100 years

10 years

1 year POPULATIO
N DYNAMICS
1 month MACRO-
ORGANISM
PHYSIOLOGY
1 day MICRO-
ORGANISM
PHYSIOLOGY
1 second 1 μm 1 mm 1m 1 km 1000 km 10000 km
SPATIAL SCALE

ARRANGEMENT OF LEVELS OF BIOLOGICAL ORGANIZATION ON SPATIAL AND TEMPORAL SCALES (Suter, 1994)
DEFINICIONES

BIOENSAYO: Método para evaluar la potencia relativa de un agente sobre


organismos vivos, mediante la comparación del efecto del agente con el de una
solución patrón o “standard”

ENSAYO DE TOXICIDAD: Permite la detección y evaluación de la capacidad de un


agente de producir efectos tóxicos adversos sobre organismos vivos

ENSAYOS DE ECOTOXICIDAD

CARACTERISTICAS COMUNES:

 Exposición de grupos de organismos


 misma población
 en buenas condiciones de salud
 con aclimatación previa
 Mantenimiento de condiciones ambientales
constantes y estandarizadas
 Exposición a concentraciones graduadas del
agente
 Grupos control adecuados
 Observación de signos del efecto presentes
 Medición y registro detallado de efectos
biológicos en grupos control y tratados
 Observación patológica de grupos control y
tratados
 Análisis estadístico de resultados
TIPOS DE ENSAYOS

 DE LABORATORIO: Reproducción parcial de las condiciones reales del


ambiente

 DE CAMPO: Organismos mantenidos en contenedores adecuados


(limnocorrales) sometidos a las condiciones del medio

Según sea la renovación del medio:

 ESTATICO: Se establece la concentración del tóxico al principio del ensayo; el


medio no se renueva

 SEMIESTATICO: Renovación periódica del medio de ensayo y del tóxico

 FLUJO CONTINUO: Renovación contínua del medio de ensayo y tóxico

TIPOS DE ENSAYOS

Según el tiempo de exposición:

 AGUDO: Período de exposición corto en relación al tiempo de generación del


organismo de prueba

 SUBCRONICO: El período de exposición cubre, al menos, el 10% del tiempo de


generación del organismo de prueba

 CRONICO: El período de exposición cubre, al menos, una generación del


organismo de prueba

 DE REPRODUCCION: El período de exposición cubre, al menos, tres


generaciones del organismo de prueba

 DE RECUPERACION: El período de exposición es seguido por la transferencia y


observación en un medio no tóxico

METODOS DE ENSAYO (1)


 Concentración de efecto no observado (NOEC)
 Mínima concentración de observación de efecto (LOEC)

ENSAYOS DE TOXICIDAD AGUDA

 Peces: mortalidad
 Invertebrados: inmovilidad
 Microalgas: crecimiento
 Indices: CL50 - CE50 - tiempo
 Ensayo independiente del tiempo (TI) (CL50 - CE50 incipiente)

ENSAYOS DE TOXICIDAD CRONICA

 Ciclo de vida completo


 Ciclo de vida parcial
 Concentración máxima aceptable de tóxico (MATC)
 Valor crónico (VC)
 NOEC < VC < LOEC

METODOS DE ENSAYO (2)

ENSAYOS CON ESTADIOS TEMPRANOS DE VIDA

 Huevo - embrión - larva - alevino


 Duración: 1 ó 2 meses

ENSAYOS DE BIOACUMULACION

 Compuestos polares (hidrofílicos)


 Compuestos no polares (hidrofóbicos)
 Factor de bioacumulación (BCF)
 Coeficiente de partición n-octanol - agua
 Bioconcentración - biacumulación - biomagnificación
INCERTEZAS EN DISTINTOS NIVELES DE INVESTIGACION

TIPO DE ENSAYO / INCERTEZAS POSIBLES EN EXTRAPOLACION


FUENTE DE DATOS
ENSAYOS Influencia de condiciones ambientales sobre la función concentración - respuesta y el régimen de
MONOESPECIFICOSDE exposición
LABORATORIO Un cierto estadío del ciclo de vida como representativo del ciclo completo
Pocas especies seleccionadas por su facilidad de mantenimiento como representativas de la
comunidad natural
No se considera la relación con otras especies
Los efectos a nivel individual son aplicados a nivel poblacional sin mecanismos de compensación o
ajustes por comportamiento
MICROCOSMOS Relaciones artificiales entre especies
Se excluyen importantes relaciones tróficas
Los efectos de borde pueden causar alteraciones en resultados
No se considera la heterogeneidad espacial de los ecosistemas naturales en los que se toman las
muestras
El enfoque y la metodología se modifican sobre la base de su aplicabilidad y replicabilidad más que
en relación con su acercamiento a los efectos reales
Se excluyen factores climáticos naturales
MESOCOSMOS O Se considera un ecosistema específico como representativo de un tipo general de ecosistema
MANIPULACION DE El "stress" generado por la aplicación de una sustancia química determinada se supone
ECOSISTEMAS representativo del "stress" generado por sustancias no ensayadas
NATURALES No se consideran los efectos de condiciones físicas ambientales y climáticas ni de eventos históricos
sobre el comportamiento del ecosistema
Replicabilidad insuficiente
Dificultad en recopilar datos relevantes para la determinación de la relación concentración -
respuesta en el ecosistema
Prolongada duración del experimento, relacionado con el tiempo requerido por el ecosistema para
manifestar una reacción adecuada, medible y recuperable
MODELOS Formulaciones matemáticas imprecisas o incorrectas
Efectos basados en una poco uniforme distribución de los organismos en el campo (agregación)
Insuficientes bases de datos para la verificación del modelo
El modelo es aplicado a un nivel que excede el alcance de su capacidad a fin de obtener una
evaluación relevante
Sensibilidad de los resultados frente a la variación de los parámetros seleccionados o del diseño del
modelo.
DISEÑO DE ENSAYOS

 Acercamiento por fases (TIER)

 Ensayos simples de corto tiempo de exposición


 Ensayos más complejos

 Controles concurrentes

 Control de agua no tratada


 Ensayo de control de solventes
 Ensayo de referencia (producto químico de referencia)

CRITERIOS PARA LA SELECCION DE PROTOCOLOS DE ENSAYO

 Aceptación de la comunidad científica


 Capacidad de predicción de los efectos de un amplio rango de tóxicos sobre
diferentes organismos
 Base estadística - reproducibilidad
 Rango de concentración - duración de la exposición
 Datos obtenidos utilizables para la evaluación de riesgo
 Costo - eficiencia
 Sensibilidad - realismo
 Ensayos uniespecíficos
 Ensayos multiespecíficos
 Experimentos de laboratorio en condiciones controladas
 Experimentos de campo con un alto número de variables
 Validación
ESCALAS DE OBSERVACION EN ENSAYOS DE TOXICIDAD

Espacial Temporal Organizacional

Estructural Funcional

Ensayo de Horas - días Organismo Crecimiento


laboratorio Reproducción
uniespecífico
(cc - m2)

Microcosmos(cc- Días - meses Organismo Producción Ciclo de


m³) Población vida
Comunidad Cadena trófica

Ensayos de Días - años Idem Idem


campo

Monitoreo Años ídem Ídem


ambiental

MEDIO TERRESTRE - ENSAYOS

EXPOSI-CION ORGANISMO DE PRUEBA EFECTOS OBSERVADOS


Lombriz de tierra Mortalidad (CL50)
AGUDA
Ave (dosis oral única) Mortalidad (CL50)

Ave (dietaria) Mortalidad, peso corporal,


comportamiento, tasa de alimentación

Abejas (por contacto) Mortalidad (CL50)

Abejas (oral) Mortalidad (CL50)

Organismos benéficos Mortalidad, tasa de alimentación

Ave (reproducción) Mortalidad, tamaño al alcanzar el


CRONICA acoplamiento, cambios morfológicos de
huevos, efectos sobre crías

Microflora Actividad deshidrogenasa, respiración a


corto plazo, ciclo del nitrógeno

Lombriz de tierra Reproducción (NOEC)

Organismos benéficos Reproducción (NOEC)


MEDIO ACUATICO - ENSAYOS

EXPOSICION ORGANISMO DE PRUEBA EFECTOS OBSERVADOS

Dos especies diferentes de peces Mortalidad (CL50 – 96 hs)


dulceacuícolas,
Cnesterodon decemmaculatus, Poecilia
reticulata

AGUDA Microcrustáceo del zooplancton (Daphnia sp.), Inmovilidad (CE50 – 48 hs)


Daphnia magna, Daphnia spinulata

Alga dulceacuícola, Scenedesmus acutus, S. Inhibición del crecimiento (CI50 – 96 hs)


quadricauda, Selenastrum capricornutum

Crustáceo bentónico, Hyalella curvispina, Mortalidad o inmovilidad (CL50 – 10, 14 días, CE50)
Hyalella azteca
Pez dulceacuícola (estadíos Mortalidad de alevinos y juveniles, peso corporal, longitud del cuerpo, tasa
tempranos del ciclo de vida) de crecimiento

Pez dulceacuícola Mortalidad de adultos, mortalidad de alevinos, tiempo de puesta, éxito en la


(reproducción) eclosión, peso y longitud del cuerpo de adultos y alevinos, tasa de
crecimiento, comportamiento

CRONICA
Microcrustáceo del Inmovilidad de adultos, número de huevos / hembra, número de efipios /
zooplancton (ciclo de vida hembra, éxito en la eclosión, tiempo de eclosión, inmovilidad de nuevos
completo) ejemplares, tasa de reproducción, tasa de crecimiento, comportamiento

Crustáceo bentónico (ciclo de Inmovilidad de adultos, número de huevos / hembra, éxito en la eclosión,
vida completo) tiempo de eclosión, inmovilidad de nuevos ejemplares, tasa de
reproducción, tasa de crecimiento, comportamiento
CALCULATION METHODS

GRAPHICAL METHOD

LC50
Can be performed with 0 or 1 partial kill(s)
Subjective

BINOMIAL METHOD

LC50 (= 95% confidence intervals)


Can be performed with 0 or 1 partial kill(s)

MOVING AVERAGE ANGLE METHOD

LC50 + 95% confidence intervals


Can be performed with 0 or 1 partial kill(s)
Can be performed manually, but labor intensive

MODIFIED SPEARMAN-KARBER METHOD

LC50 + 95% confidence intervals


Can be performed with 0 or 1 partial kill(s)
The concentrations tested must cover the range 0% - 100% response

LICHFIELD AND WILCOXON METHOD

LC50 + 95% confidence intervals


At least 2 partial kills required
Can easily be performed manually
Subjective to a certain extend

PROBIT ANALYSIS

LC50 + 95% confidence intervals


At least 2 partial kills required
Is difficult to be performed manually
METODOS ESTADISTICOS RECOMENDADOS PARA ENSAYOS DE TOXICIDAD CRONICA

DATOS OBSERVADOS

ESTIMACION DE CE50 NORMALIDAD DE DATOS


Análisis Probit Test de Shapiro-Wilks

DISTRIBUCION NORMAL DISTRIBUCION NO NORMAL

HOMOGEINEIDAD DE VARIANZAS
Test de Bartlett

HOMOGENEIDAD HETEROGENEIDAD

IGUAL NUMERO DE IGUAL NUMERO DE


REPLICAS REPLICAS

NO SI SI NO

Test de t con Test de Dunnett Test de Steel Test de Wil--


ajuste de con ajuste (ranks) coxon (ranks)
Bonferroni de Bonferroni
FACTORES A CONSIDERAR EN EL DISEÑO DE ENSAYOS DE TOXICIDAD

 Propiedades físico-químicas del producto


 Pureza química
 Presencia de impurezas
 Selección del organismo de prueba
 Variables ambientales

PROPIEDADES FISICO-QUIMICAS DEL PRODUCTO

 Estructura química: grupos funcionales


 Estabilidad frente a distintos valores de pH
 Propiedades fotoquímicas
 Coeficiente de partición n-octanol/agua
 Naturaleza lipofílica
 Potencial de ionización
 Tamaño y forma de las partículas
 Densidad

EL ORGANISMO DE PRUEBA

 Diferencias en la sensibilidad entre las distintas especies


 Accesibilidad al tóxico
 Tasa y modelo de metabolismo y excreción
 Mayor sensibilidad de los individuos juveniles
 Influencia del estado salud / “stress” sobre la sensibilidad
CRITERIOS PARA LA SELECCION DEL ORGANISMO DE PRUEBA

 Amplio rango de sensibilidad (batería de ensayos con distintos organismos)


 Sensibilidad constante de la población utilizada
 Alta disponibilidad y abundancia (amplia distribución geográfica)
 Estabilidad genética y uniformidad de las poblaciones usadas en los ensayos
 Organismos autóctonos o representativos del ecosistema que se evalúa
 Conocimiento de su biología, fisiología y hábitos nutricionales
 Preferencia por especies de importancia recreacional, comercial o ecológica
 Disponibilidad de ejemplares a lo largo de todo el año
 Sencillo mantenimiento y cultivo en condiciones de laboratorio
 Preferencia por especies de tamaño reducido para facilitar la obtención de gran
número de datos
 Existe un limitado número de especies “standard”:
 algas fitoplanctónicas
 crustáceos: Daphnia, camarones, Artemia
 peces
 rotíferos
 anfípodos
 En ensayos de campo pueden utilizarse especies no estandarizadas
PROCEDIMIENTOS Y CONDICIONES PARA UNA BUENA PRACTICA DE
LABORATORIO

PERSONAL INSTALACIONES
-Calificación -Mantenimiento y manipu-
-Responsabilidades lación de organismos de
-Dirección prueba
-Funciones para garantizar -Manipulación y almacena-
la calidad miento de reactivos
-Espacio para el desarrollo
de los ensayos

EQUIPAMIENTO OPERACIONES TOXICO


DE LABORATORIO
-Localización -Procedimientos operacio- -Manipulación
-Mantenimiento nales para ensayos, man- y almacena-
-Calibración tenimiento de organismos miento
y preparación de solucio- -Caracteriza-
nes ción

REGISTRO DE DATOS

INFORME DE RESULTADOS
-Localización
-Recuperación
GOOD LABORATORY PRACTICE

OECD : Organisation for Economic Cooperation and Development, ISBN 92-


64-12367-9, Paris 1982.

U.S.A.: United States Environmental Protection Agency, Title 40 Code


of Federal Regulations Part 160 (FIFRA) Federal Register, 29
November 1983, and Subsequent Amendment Federal
Register 17 August 1989.

United States Environmental Protection Agency, U.S. EPA 2185, Good


Automated Laboratory Practices, 8 October 1995

Japan: Japan Ministry of Agriculture, Forestry and Fisheries, 59 NohSan,


Notification N 3850, Agricultural Production Bureau, 10 August 1984.

U.K.: Good Laboratory Practice, the United Kingdom Compliance


Program, Department of Health and Social Security 1986 and
Subsequent Revision,
Department of Health 1989.
INTERRELACIONES ENTRE LOS FACTORES QUE DETERMINAN LA SELECCION DE UN
PROTOCOLO DE ENSAYO

Mínimo
VALOR ECONOMICO

Costo

Duración

Equipamiento Entrenamiento del


personal
Costo, representa-
tividad, sensibili- Captura y mante-
dad nimiento de orga-
nismos.

PROTOCOLO DE ENSAYO

Elección del organismo Elección del criterio

Representatividad Sensibilidad
ecológica

Máximo VALOR BIOLOGICO


SECTION 12

REPORT PREPARATION

(Adapted from USEPA, 1989c)

The following general format and content are recommended for the report:

12.1 INTRODUCTION

1. Permit number
2. Toxicity testing requirements of permit
3. Plant location
4. Name of receiving water body
5. Contractor (if contracted)
a. Name of firm
b. Phone number
c. Adress

12.2 PLANT OPERATIONS

1. Product(s)
2. Raw materials
3. Operating schedule
4. Description of waste treatment
5. Schematic of waste treatment
6. Retention time (if applicable)
7. Volume of discharge (MGD, CFS, GPM)
8. Design flow of treatment facility at time of sampling

12.3 SOURCE OF EFFLUENT, RECEIVING WATER AND DILUTION WATER

1. Effluent samples
a. Sampling point
b. Sample collection method
c. Collection dates and times
d. Mean daily discharge on sample collection date
e. Lapsed time from sample collection to delivery
f. Sample temperature when received at the laboratory
g. Physical and chemical data

2. Receiving Water Samples


a. Sampling point
b. Sample collection method
c. Collection dates and times
d. Streamflow at time of sampling and 7Q10
e. Lapsed time from sample collection to delivery
f. Sample temperature when received at the laboratory
g. Physical and chemical data

3. Dilution Water Samples


a. Source
b. Collection date(s) and time(s) (when applicable)
c. Pretreatment
d. Physical and chemical characteristics (pH, hardness,
salinity, etc.)

12.4 TEST CONDITIONS

1. Toxicity test method used (title, number, source)


2. Endpoint(s) of test
3. Deviations from reference method, if any, and reason(s)
4. Date and time test started
5. Date and time test terminated
6. Type and volume of test chambers
7. Volume of solution used per chamber
8. Number of organisms per test chamber
9. Number of replicate test chambers per treatment
10. Feeding frequency, and amount and type of food
11. Acclimation temperature of test organisms (mean and range)
12. Test temperature (mean and range)

12. 5 TEST ORGANISMS

1. Scientific name
2. Age
3. Life stage
4. Mean lenght and weight (where applicable)
5. Source
6. Diseases and treatment (where applicable)

12.6 QUALITY ASSURANCE

1. Reference toxicant used routinely, source


2. Date and time of most recent reference toxicant test; test results
and current cusum chart
3. Dilution water used in reference toxicant test
4. Physical and chemical methods used

12.7 RESULTS

1. Provide raw toxicity data in tabular form, including daily records of


affected organisms in each concentration ( including controls)
2. Provide table of endpoints: LC50, NOEC, LOEC, etc.
3. Indicate statistical methods used to calculate endpoints
4. Provide summary table of physical and chemical data
5. Tabulate QA data

12.8 CONCLUSIONS AND RECOMMENDATIONS

1. Relationship between test endpoints and permit limits


2. Action to be taken
BIOMARCADOR

● Son las respuestas biológicas a los tóxicos ambientales los que dan una medida
de la exposición y, a veces, del efecto tóxico (WALKER et al., 1997)

● Pueden ser respuestas a nivel molecular, celular o del organismo entero.

● Representan una medida del efecto relacionado con la presencia de niveles


particulares de un contaminante. Proveen un medio de interpretar niveles
ambientales de contaminantes en términos biológicos.

BIOMARCADORES A DIFERENTES NIVELES DE ORGANIZACIÓN


NIVEL DE ORGANIZACIÓN EJEMPLO DE BIOMARCADOR

Molécula unida a un receptor  TCDD unido a un receptor acetilcolina


 Nonilfenoles unidos a un receptor de
estrógeno

Respuesta bioquímica  Inducción de monooxigenasas


 Inhibición de acetilcolinesterasas

Alteraciones fisiológicas  Grosor de la cáscara de huevo (aves)


 Feminización de embriones

Efectos a nivel del individuo  Cambios de comportamiento


 Crecimiento

EVALUACION DEL RIESGO

Proceso de estimación de la probabilidad de que ciertas actividades produzcan


determinados efectos adversos

SEGURIDAD Y SALUD HUMANAS ECOSISTEMAS


EVALUACION DEL RIESGO EVALUACION DEL RIESGO
HUMANO ECOLOGICO

EVALUACION DEL RIESGO GLOBAL

INVOLUCRA

EVALUACION DE LA EVALUACION DE LOS


EXPOSICION EFECTOS

Define el movimiento del agente Define el impacto asociado a


desde la fuente hasta su destino distintos niveles de “stress”.
final último.
Origen o fuente
Transporte
Destino final

EVALUACION DEL RIESGO RELATIVO

OBJETIVO: Desarrollo de indicadores del riesgo total, los que pueden ser
utilizados en el proceso de toma de decisiones.

 Es el paso más difícil en el proceso de Evaluación del riesgo


 Existe carencia de una metodología de evaluación sólida, ampliamente
aceptada

 Integración de los factores de riesgo con el costo económico y social de la


toma de decisión

 El apropiado balance entre estas dos clases de factores conduce a acuerdos


entre la comunidad científica y los organismos políticos encargados de la
toma de decisiones

EVALUACION DE EFECTOS ECOLOGICOS

Sobre la base de:

1. CLASIFICACION AMBIENTAL

 Ambiente urbano
 Ambiente productivo
 Ambiente natural
 Ambiente de uso múltiple
2. DESARROLLO DE FACTORES DE PESO

3. EVALUACION DE RECEPTOR/ES REPRESENTA-TIVOS

 Selección de especies representativas a nivel poblacional, de comunidad


y de procesos ecológicos

 Selección de indicadores apropiados de los efectos que se manifiestan


sobre los receptores representativos

4. EVALUACION DE LA FUNCION CONCENTRACION-RESPUESTA

 Recolección de datos, teniendo en cuenta:


 Tipo de efecto medido
 Condiciones de exposición
 Forma de experimentación

 Determinación de la potencial recuperación de poblaciones y procesos


expuestos

EL PROBLEMA DE LA EVALUACION DE LA RELACION CONCENTRACION - RESPUESTA

1. ENFOQUE DIRECTO

 Completa batería de ensayos


 Implementación simultánea
 Resultados altamente confiables
 Alto consumo de tiempo y elevado costo

2. ENFOQUE EN FASES O ETAPAS

 Secuencia de actividades de ensayo


 Utilización de los resultados de las etapas precedentes para el diseño de
cada fase subsiguiente

 FASE 1
 Exposición aguda
 Ensayos monoespecíficos
 Evaluación rápida y grosera del riesgo relativo

 FASE 2 Y SUBSIGUIENTES
 Exposiciones de mayor duración
 Ensayos multiespecíficos
 Mejor utilización de los recursos disponibles
 Rápido acercamiento a los problemas prioritarios
 Optima relación costo - efectividad
Potencialmente, resulta posible omitir aspectos importantes del
riesgo ecológico durante la FASE 1

3. ENFOQUE INTERMEDIO

 Acercamiento en FASES, incluyendo ensayos de mayor tiempo de


exposición durante la FASE 1
 Puede existir redundancia de información en la FASE 1

LEGISLACION NACIONAL Y PROVINCIAL

NACIONAL:

 Resolución No. 440/98 y modificación 2000 - Secretaría de Agricultura,


Ganadería, Pesca y Alimentación

 Ley 24051/92 - Decreto Reglamentario No. 831/93 -


Residuos Peligrosos

 Ley 17319/67 - Decretos y Disposiciones modificatorias - Disposición


52/97 - Hidrocarburos, Exploración, extracción, refinerías, construcción,
operación y abandono de oleoductos y poliductos - Protección ambiental.

PROVINCIA DE BUENOS AIRES:

 Ley 11720 y Decreto Reglamentario No. 806/97 - Residuos Especiales

 Resolución No. 601/98 - Secretaría de Política Ambiental - Residuos


tóxicos con prohibición de ingreso al territorio de la Provincia de Buenos Aires.
CLASE DE No. DE CODIGO CARACTERISTICAS
NACIONES (LEY 11720)
UNIDAS

6.1
H6.1 Tóxicos (venenos) agudos: Sustancias o desechos que pueden causar la
muerte o lesiones graves o daños a la salud humana, si se ingieren o
inhalan o entran en contacto con la piel.

9
H10 Liberación de gases tóxicos en contacto con el aire o el agua: Sustancia o
desechos que, por reacción con el aire o el agua, pueden emitir gases
tóxicos en cantidades peligrosas.-

9
H11 Sustancias tóxicas (con efectos retardados o crónicos): Sustancias o desechos
que, de ser aspirados o ingeridos o de penetrar en la piel pueden entrañar
efectos retardados o crónicos, incluso la carcinogenia.-

9
H12 Ecotóxicos: Sustancias o desechos que, si se liberan, tienen o pueden tener
efectos adversos inmediatos o retardados en el ambiente debido a la
bioacumulación o los efectos tóxicos en los sistemas bióticos.-

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