Experimento 10.

Determinación Del Perfil Lipidico.

I. Objetivos:

 Interpretar los valores de lípidos séricos obtenidos en el laboratorio luego de un ayuno de 12 a 14 horas.
 Interpretar correctamente los intervalos de los valores de los índices aterogénicos
 Reconocer los factores de riesgo de la aterosclerosis

DETERMINACIÓN DE TRIGLICÉRIDOS (TG)

lipoproteinlipasa
Triglicéridos + agua Glicerol + ácidos grasos

Glicerol quinasa
Glicerol + ATP Glicerol – 3P + ADP

Glicerolfosfato oxidasa
Glicerol 3P + O2 Dihidroxiacetona-P + H2O2

peroxidasa
H2O2 + 4-Aminofenazona + p-clorofenol Quinona + agua

La cantidad de esta quinona formada es proporcional a la concentración de triglicéridos.

Procedimiento:
Preparar los siguientes tubos de ensayo:

Tubo blanco Tubo patrón Tubo muestra

30 uL de agua destilada 30 uL del patrón de 30 uL de suero humano
triglicéridos
3 mL de reactivo de color 3 mL de reactivo de color 3 mL de reactivo de color
enzimático para TG enzimático para TG enzimático para TG

 Homogenizar las muestras e incubar a 37°C durante 5 minutos.

 Leer la absorbancia de patrón y muestras a 500 nm. El color permanece estable durante 30
minutos.

TRIGLICÉRIDOS (mg/dL): absorbancia de la muestra / absorbancia del patrón

(concentración del patrón)

Valores normales menores de 150 mg/dL

Valores sospechosos mayores de 150 mg/dL
Valores elevados mayores de 200 mg/Dl

DETERMINACIÓN DE COLESTEROL:

Colesterol esterasa
Esteres de colesterol colesterol + ácidos grasos

Colesterol oxidasa
Colesterol + O2 colest –4-en-3 ona + H2O2

Peroxidasa
H2O2 + 4 aminoantipirina + Fenol quinoneimina + 4 H 2O
Procedimento:
Preparar los siguientes tubos de ensayo:
Tubo blanco Tubo patrón Tubo muestra

30 uL de agua destilada
30 uL del patrón de 30 uL de suero humano,
colesterol plasma con heparina o
EDTA
3 mL de reactivo para 3 mL de reactivo para 3 mL de reactivo para
colesterol colesterol colesterol

 Homogenizar las muestras e incubar por 10 minutos a 37°C,

 Leer en el espectrofotómetro antes de 30 minutos a una longitud de onda de 500 nm.

Colesterol (mg/dL): absorbancia de la muestra / absorbancia del patrón (concentración

del patrón)

Valores normales menores de 200 mg/dL

Valores normales menores de 180 mg/dL para menores de 30 años.

DETRMINACION DE HDL – COLESTEROL

PROCEDIMIENTO:
 Adicionar en un tubo de centrífuga 200 uL suero (plasma con EDTA) y 500 uL de reactivo precipitante,
homogenizar la solución y centrifugar a 4000 rpm durante 10 minutos.
 Separe el sobrenadante claro y emplearlo para la determinación de HDL – Colesterol.

Preparar los siguientes tubos de ensayo:

Tubo blanco Tubo patrón Tubo muestra

300 uL de agua destilada 300 uL del patrón de HDL 300 uL de sobrenadante

– Colesterol
3 mL de reactivo para 3 mL de reactivo para 3 mL de reactivo para
colesterol colesterol colesterol

 Homogenizar e incubar durante 5 minutos a 37°C.

 Leer la absorbancia de la muestra frente al blanco a 500 nm.

CALCULAR:

HDL – Colesterol (mg/dL) = absorbancia de la muestra / absorbancia del patrón

(concentración del patrón) (3,5)

V. Actividades:
 Calcular los tg cuando estos son mayores de 400 mg/l
 Investigue los valores de referencia para colesterol total, colesterol hdl, colesterol ldl
 Indique la relacion ct/hdl ideal, aterogenesis, aterogenesis galopante.